Name: induction of paralysis and visual system injury in mice by t cells specific for neuromyelitis optica autoantigen aquaporin-4
Uploaded: 2017-08-21T15:00:00
Duration: 9 min 29 s
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ガシーレンカージャパン ジャクソン慈善財団、Maisin 財団全国多発性硬化症協会 (RG 4768、RG 5179 と RG 5180) サポートは S.S.Z. に、国立衛生研究所 (RO1 AI073737、RO1 NS092835-01) によって提供されました。

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S. a. サガン、A. クルス エランス ・、c. m. スペンサー、PP の Ho、L. Steinman、A.J. グリーン、R.A. ソーベル開示報告なし。S. s. Zamvil は、神経学、神経免疫学、Neuroinflammationの副編集長で国際機関誌社会諮問委員会のメンバーであります。彼は臨床調査のジャーナル、免疫学ジャーナルおよび神経学的な科学のジャーナルの編集委員を務めて、国立衛生研究所の助成金審査委員会の創立会員をされています健康 (NIH) の臨床神経免疫と脳腫瘍 (CNBT) のセクションおよび国立多発性硬化症協会 (NMS) を検討します。彼はコンサルタントとして役立ったが、ビオゲン Idec、EMD Serono、ジェンザイム、ノバルティス、ジェネンテック/ロシュ、テバ製薬株式会社から謝礼金を受け取ったと務めてまたはデータ安全性モニタリング ・ ボードのリリー、BioMS、テバ、Opexa 治療を提供しています。現在、博士 Zamvil は、NIH、NMS、Maisin 財団、バイオジェンとセルジーンから研究助成金サポートを受け取ります。

AQP4 は、2005年3NMO IgG の主なターゲットとして識別されました。その後、中枢神経系の自己免疫の AQP4 対象動物モデルを確立することが重要になることが認められました。このようなモデルは、AQP4 固有 T および B 細胞が中枢神経系の自己免疫疾患の開発に参加する方法を調査して、NMO の治療薬候補をテストする役に立つかもしれません。ただし、野生型マウスのエピトープは 2010 年13、それらの抗原に応答する T 細胞で初めて報告されました AQP4 特異的 T 細胞の同定の臨床的または組織学的疾患14,17を発生していません。AQP4 に対する免疫反応に基づく中枢神経系の自己免疫疾患のモデルを生成することができないときに 2015年まで謎に残ったジョーンズら25は、AQP4-/-マウスからドナー AQP4 p135 先読み 153 T 細胞が WT マウスにおける中枢神経系の自己免疫疾患の臨床的および組織学的徴候を引き起こすことができることを発見しました。関心の AQP4 p135 153 は親和性が高い17MHC II (- Ab) をバインドと予測されます。1 つだけ他 AQP4 アミノ酸シーケンス、201-220 は、バインド - Abと同様の高い親和性と予測されます。確かに、その AQP4 の p135 153 ・ p201-220 両方引き出す AQP4-/-、しかしない WT、マウスで堅牢な増殖を観察しました。ここでは、我々 はどのように 1 つを分離でき、AQP4-/-マウスから encephalitogenic Th17 AQP4 p135 153 と p201-220-反応性 T 細胞の拡大を示しています。WT 受信者マウスに転送、ドナー AQP4 反応性 Th17 細胞誘導麻痺、脊髄と視神経の単核細胞浸潤を伴っていた。求心性の視覚システムの損傷は AQP4 抗体陽性 NMOSD26症例でよく知られています。ここでは、AQP4 反応やモグ反応性 Th17 細胞による視神経の炎症だったを見ました。AQP4 固有 Th17 細胞は、光 perineuritis を誘導に対しモグ固有 Th17 細胞は重症視神経炎を誘導しました。シリアル 10 月 AQP4 固有とモグ特異的 T 細胞による視神経の炎症を監視に使用する技術も説明しました。他の研究者は、ATCA の発症機構に焦点を当てた独自の研究を進めるためにはここで説明したプロトコルを適用することができるはずです。
1 つは簡単に我々 のプロトコルで 3 つの潜在的な落とし穴を回避できます。ATCA の最初、養子の転送には、AQP4-/-ドナーのマウスから AQP4 特異的 T 細胞の使用が必要です。具体的には、ドナー WT AQP4 p135 153 特異的 T 細胞では、受信者の WT マウスの ATCA は発生していません。第二に、AQP4-/-マウス (プロトコル手順 1.5) の予防接種前にペプチド/CFA エマルジョンのドロップで「水テスト」を実行することが重要です。乳剤はする必要がありますそれが皮下注射に適した水に分散されず。エマルジョンの分散は、エマルジョンをもう一度混ぜて、再び寒さ水テストを繰り返します必要があります 1 つ。最後に、中枢神経系活性ドナー抗原特異的 T 細胞は T 細胞を安静時よりもより効率的に中枢神経系の自己免疫疾患を誘発します。1 つは、視覚的に養子転送ドナー T 細胞を収穫する前に光の顕微鏡の下でそれらの文化を検査しました。急速に細胞分裂を容易に識別のクラスターを形成できます。また、文化には、活性化 T 細胞多くにはが含まれて、メディアはオレンジや黄色、pH の減少によるピンクから移行があります。プロトコルの手順 3 で説明した 1 つは3H-チミジン取り込みによってドナー AQP4 プライミング リンパ節 T 細胞増殖の活性化を評価することも。
我々 の発見は、2 つの病原性 AQP4 T 細胞エピトープ (1) 予測される高親和性 MHC II をバインドし、(2) AQP4-/-、ない WT でも強力な増殖反応を誘発する、マウスは、これらの要因を対象とする T 細胞は、通常を示唆しています。胸腺の負の淘汰17によって制御されます。AQP4 p135 153 と AQP4-/-マウスの p201 220 の認識のために利用する TCR レパートリーがユニーク (図 2) また、胸腺髄質上皮細胞によって仲介されたクローンの削除に一貫しています。他の免疫寛容のメカニズムは通常 AQP4 に対する免疫応答を抑制するかもしれない。私たちの最初の報告の17、それに続く別のグループは、AQP4 p201 220 に、encephalitogenic T 細胞決定27が含まれていることをまた示した。Α/β (TCRα-/-) T 細胞欠損マウスが AQP4-/- CD4 と再構成されたとき+ T 細胞、encephalitogenic AQP4 固有の T 細胞の応答では、しかしない、AQP4 固有体液性応答の意味を引き出すことはでしたWT マウス AQP4 特異 B 細胞応答、AQP4 固有の T 細胞の応答のようは、負の選択が適用されます。確かに、AQP4 特異的 T 細胞による ATCA と WT マウスで観察されなかった、脊髄軸索と、Rgc の損失は、病原性の特定の AQP4 抗体の関与を必要があります。それは明らか AQP4 をターゲットとした中枢神経系の自己免疫のマウス ・ モデルは通常 AQP4 特異的 T 細胞および B 細胞の免疫を制御する免疫寛容のメカニズムについての詳細を学ぶように進化をし続けます。
AQP4 をターゲットとした中枢神経系の自己免疫の他のモデルも開発6,16,をされている28,29,30。各は、NMO の病態に関連する特定の側面を勉強のための利点があります。AQP4 特異的 T 細胞は、WT ラット6,16,29で識別されています。それら AQP4 特異的 T 細胞が自己免疫の中枢神経系の組織学的変化を引き起こされるが、マウスの観察と同様に、WT ラット AQP4 特異的 T 細胞が発生しない臨床病気の重要なサイン。したがって、WT マウスの T 細胞と B 細胞の AQP4 固有免疫応答を制限する耐性のメカニズム、ラットの運用も。関係なく、1 つは病気の病因に関与するメカニズムを研究するためのマウスモデルを使用しての力を過小評価しないでください。ノックアウト、トランスジェニックとレポーター マウスの富を有利にすることができます。また、自己免疫疾患のいくつかの基本的な発見は EAE マウスモデルを使用して行われたことを認識すべき。デモその T 細胞クローンの自己抗原のための特定することができます自己免疫疾患31,32, T 細胞共刺激が引き起こす自己免疫33の役割との発見の同定を仲介するなど、th17 細胞分化34発達経路は最初マウス EAE モデルを使用して記述されていた。私たちが開発した ATCA のマウスモデルを使用して、1 つになりました生体内で病原性の AQP4 特定の免疫反応の発展と規制を検討するための手段 NMO の病態に重要な洞察力を提供する必要があります。

Optica 視神経脊髄炎 (NMO) は、中枢神経系 (CNS) 引き起こす自己免疫炎症性脱髄性疾患まひ状態および永続的な神経障害1につながる視覚的な損失の再発エピソードです。NMO は、2液性の自己免疫疾患をする抗体 (Igs) アクアポリン-4 (AQP4)、アストロ サイト3,4に豊富に発現水チャネルをターゲットに関連付けられている、主に現在考えられています。しかし、中枢神経系の炎症は AQP4 Ig5,6の CNS エントリーの前提条件です。したがって、それだけで抗 AQP4 Igs の譲渡による NMO のモデルを確立することはなかった。NMO 患者に (1) 病原性の AQP4 固有 Igs である IgG11,2所見、サブクラス7 (2) T 細胞が NMO 病変8,9 (3) NMO で識別される T 細胞依存性免疫グロブリンが関連付けられています。特定の MHC II 遺伝子を持つ (例えば HLA DR17 (DRB1 * 0301))10、および (4) 炎症性反応 AQP4 博士-制限 Th17 細胞が NMO 患者11,12すべての展開は AQP4 特異的 T 細胞が重要な役割であることを示すNMO の病態。したがって、AQP4 特異的 T 細胞 NMO の病態に貢献するかもしれない方法を決定するための動物モデルを開発することが重要です。
数年前、複数の AQP4 T 細胞エピトープは、野生型 (WT) マウス13,14とラット15で識別されました。AQP4 反応性 T 細胞が素朴な受信者ラット15,16opticospinal 炎症を引き起こすことができることがわかった中、CNS 疾患の重要な臨床症状は認められなかった。同様に、AQP4 T 細胞エピトープ14,17, を含むペプチドと WT マウスの免疫を直接、または炎症性 T 細胞それら要因17をターゲットの転送し、臨床症状が発生していない組織、または中枢神経系の自己免疫の証拠。
最近では、それは親和性の高い18AQP4 ペプチド (p) 135 153 または MHC II (- Ab) をバインドする予測 2 つの要因、p201 220 C57BL/6 AQP4 欠損 (AQP4-/-) マウスの予防接種を認め、強い CD4 を誘発+ T 細胞応答17。対照的に、これらの 2 つのペプチドは WT マウスでのみ控えめな反応を引き出した。さらに、AQP4-/-マウスの T 細胞によるこれらの要因の認識に使用される T 細胞受容体 (TCR) レパートリーはユニークだった。総称して、AQP4 の認識を T 細胞が胸腺の負の淘汰によって調節されていることが示唆されました。AQP4 p135 153 または p201-220-固有 AQP4-/-ドナーのマウスから Th17 細胞による素朴な受信者 WT マウス; のほぼ 100% で麻痺これは、T 細胞、B 細胞、単球の opticospinal 浸潤と関連付けられました。シリアル opticospinal コヒーレンストモグラフィ (OCT) は、動的視覚システムの関与を示した。AQP4 をターゲットとした CNS の T 細胞性自己免疫 (ATCA) を持つマウスは、麻痺とビジュアル系の傷害から回復しました。ミエリン オリゴデンドロ サイト糖タンパク質 (モグ) p35-55-特定の T 細胞による、永続的な臨床病気につながったフイブロネクチンと対照をなして単独で T 細胞による ATCA は軸索損失または網膜神経節細胞 (Rgc) の削減に関連付けられてでした。我々 の結果では、複数の病原性 AQP4 T 細胞決定があることが明らか。ATCA のこの新しいモデルはそれらの細胞が CNS の発火を誘発する方法と彼らが AQP4 特異 B 細胞と抗体 NMO の病態を促進するために協力する方法を学習、病原性の AQP4 特異的 T 細胞の開発を制御するメカニズムを調べる場合に役立ちます.
本報告を誘導し、T 細胞による ATCA を評価に使用するプロトコルについて述べる。まず、予防接種、培養 T 細胞、th17 細胞の分極のため病原性 AQP4 特異的 T 細胞、偏波とそれらの T 細胞の養子の転送を確認する流れフローサイトメトリー解析を生成するための技術に。私たちは、臨床的および組織学的病と受信者のマウスの視覚システム障害を監視するシリアル 10 月の使用を評価するために使用方法を説明します。

<table width="1066">
	<colgroup>
		<col style="width:246pt" width="328" />
		<col style="width:162pt" width="216" />
		<col style="width:104pt" width="139" />
		<col style="width:287pt" width="383" />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">M. tuberculosis H37Ra</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">BD Difco</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">231141</td>
			<td class="xl22" style="width:287pt" width="383">Dessicated, killed M. tuberculosis</td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">Incomplete Freund&#39;s Adjuvant</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">BD Difco</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">263910</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">AQP4 peptide p135-153</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">Genemed</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">Custom Synthesis</td>
			<td class="xl22">Peptide sequence: LVTPPSVVGGLGVTMVHGN</td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">AQP4 peptide p201-220</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">Genemed</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">Custom Synthesis</td>
			<td class="xl22">Peptide sequence: HLFAINYTGASMNPARSFGP</td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">MOG peptide p35-55</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">Genemed / Auspep</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">Custom Synthesis</td>
			<td class="xl22">Peptide sequence: MEVGWYRSPFSRVVHLYRNGK</td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">3-way Stopcock</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">Kimble</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">420163-4503</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">HyClone Fetal Bovine Serum (Characterized)</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">GE Healthcare Life Sciences</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">SH30071</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">Recombinant Mouse IL-23</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">R&#38;D Systems (BioTechne)</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">1887-ML</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">Recombinant Mouse IL-6</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">R&#38;D Systems (BioTechne)</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">406-ML</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">Recombinant Mouse IL-12</td>
			<td class="xl23" style="width:162pt" width="216">R&#38;D Systems (BioTechne)</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">419-ML</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="25" style="height:18.75pt">
			<td class="xl19" height="25" style="width:246pt;height:18.75pt" width="328">Thymidine [Methyl-3H]</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">PerkinElmer</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">NET027</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">Glass Fiber Filtermats</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">PerkinElmer</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">1450-421</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">Anti-mouse antibodies</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">eBioscience (Affymetrix)</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">[various]</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">Anti-mouse TCR V&#946; Screening Panel</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">BD Biosciences</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">557004</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">LIVE/DEAD Fixable Dead Cell Stain</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">ThermoFisher Scientific</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">[various]</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">Paraformaldehyde (16%)</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">Electron Microscopy Sciences</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">15710</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="42" style="height:31.5pt">
			<td class="xl19" height="42" style="width:246pt;height:31.5pt" width="328">Fixation/Permeabilization Solution Kit with GolgiPlug</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">BD Biosciences</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">555028</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA)</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">Sigma-Aldrich</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">P8139</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">Iomomycin (calcium salt)</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">Sigma-Aldrich</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">I0634</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">Pertussis Toxin from B. pertussis</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">List Biological Laboratories</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">181</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">10% Formalin</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">VWR</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">89370-094</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">Variable-Flow Peristaltic Pump</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">Fisher Scientific</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">13-876-2</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">Foam Biopsy Pads, Rectangular</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">Fisher Scientific</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">22-038-221</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">Isothesia (isoflurane, USP)</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">Henry Schein Animal Health</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">050033</td>
			<td class="xl22">NDC : 11695-0500-2</td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">Tropicamide Ophthalmic Solution, USP (1%)</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">Akorn</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139"></td>
			<td class="xl22">NDC: 17478-102-12</td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">Spectralis Diagnostic Imaging Platform</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">Heidelberg Engineering</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139"></td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

induction of paralysis and visual system injury in mice by t cells specific for neuromyelitis optica autoantigen aquaporin-4

それが認識される中、アクアポリン 4 の (AQP4)-特定の T 細胞と抗体に関与して発症オプティカ視神経脊髄炎 (NMO)、人間の中枢神経系 (CNS) 自己免疫性脱髄疾患、両方と AQP4 対象モデルの作成中枢神経系の自己免疫疾患の臨床的および組織学的症状は、挑戦的な証明されています。AQP4 ペプチド (WT) マウスを野生型の予防接種は、これらの T 細胞は、素朴な受信者マウスに病気を転送できませんでしたが T 細胞の増殖を誘発しました。胸腺によってコントロールされて AQP4 エピトープに対する T 細胞の反応性を示唆、AQP4 欠損 (AQP4-/-) マウスの免疫応答の勉強時に、p201-220、ペプチド (p) 135 153 2 つ小説 AQP4 T 細胞エピトープが指定された最近では、負の淘汰。AQP4-/- th17 細胞 T 細胞脊髄と視神経の主に髄膜炎症に関連付けられていた p135 153 または p201 220 受信者の WT マウスで麻痺誘導を仕掛ける円偏波。炎症周囲視神経と網膜内層 (IRL) の関与は、シリアル光コヒーレンストモグラフィ (OCT) の変化によって明示されました。ここで、我々 はモデルを作成するこの新しい生体内で病原性の AQP4 特異的 T 細胞と彼らが B に協力する方法の開発を可能にするメカニズムを研究することができますとり入れ AQP4 をターゲットとした中枢神経系自己免疫 (ATCA) の使用方法を説明します。NMO の病態のセルします。

このプロトコルでは、C57BL/6 AQP4-/-マウスからドナー T 細胞を使用しました。これら 2 つのペプチド誘導くらい弱い T 細胞に対し、病原性 T 細胞エピトープを含む、AQP4 p135 153 と p201-220、これらのマウスの皮下接種はドレイン リンパ節 (図 1)、強い増殖性 T 細胞反応を誘発WT マウスで増殖します。比較では、AQP4 p91-110、免疫非病原性 AQP4 T の細胞決定の13、またはモグ p35-55、実験的自己免疫性脳脊髄炎 (EAE)22,23 を引き起こす T 細胞を活性化するミエリン ペプチドを含む ,24, 誘発 AQP4-/-と WT マウスの T 細胞増殖の同じような大きさ。流れの cytometry の汚損によって TCR 使用率の分析の個々 の Vβ または Vβ の家族を示した AQP4-/-マウスから p135 153- と p201-220-特定の T 細胞がユニークな TCR レパートリーを利用します。選択的ハイパー増殖 AQP4 p135 153 と AQP4-/-マウスだけでなく、ユニークな TCR 使用率 (図 2)、p201 220 の胸腺負定め通常病原性 T 細胞応答これらの決定要因に、示されています。選択は、このプロトコルで AQP4-/-ドナー T 細胞を使用しての重要性を強調します。
ATCA の誘導の養子転送前に AQP4 ペプチドされたマウスからリンパ節細胞の体外培養 3 日間 th17 細胞や Th1 偏光条件で。程度ドナー CD4 の偏波+ T 細胞は細胞内サイトカイン染色 (ICS) によって確認され、フローサイトメトリー (図 3) を用いています。2 x 107ドナー AQP4 ペプチド特異的 T 細胞を静脈内注入した素朴な受信者マウス。約 6 日後ほぼ受信者マウスの 100% はぐったりの尾と後肢の麻痺 (図 4) を含む中枢神経系の自己免疫疾患の臨床徴候を開発しました。AQP4 特異的 T 細胞の th17 細胞偏極による Th1 偏光 AQP4 特異的 T 細胞よりもより厳しい臨床病。Th17 AQP4 ペプチド特異を受信し、完全な後肢麻痺 (麻痺) を開発した代表的なマウスは、ビデオ 1に表示されます。EAE を開発したモグ固有 Th17 細胞の投与後のマウスとは異なり受信者マウスは AQP4 固有 Th17 細胞による臨床病気から回復しました。モグ p35 固有 55 Th17 細胞による惹起、AQP4 p135 153 固有でによる臨床病や Th17 細胞 p201-220 CNS の実質および髄膜 (図 5) の単核細胞の浸潤と関連していた。豊かな AQP4 固有 Th17 細胞による中枢神経系の自己免疫の実質のより髄膜病変。
組織学的評価とシリアル 10 月 AQP4 特定によって視神経の関与を示したし、モグ固有 Th17 細胞は単核球細胞の存在によって特徴付けられた両方の引き起こされた視神経炎症。AQP4 固有 Th17 細胞は、光 perineuritis を引き起こされるに対し、MOG 固有 Th17 細胞誘導重症視神経炎 (図 5) です。シリアル OCT を使用すると、視神経の炎症腫脹によって明らかになった、AQP4 固有または特定のモグ Th17 細胞 (図 6) による臨床疾患の網膜内層 (IRL) 厚みが増加します。AQP4 th17 細胞による中枢神経系の自己免疫疾患、臨床病気から回復 IRL 厚さマウスとしてベースラインに返されます。対照的に、モグ固有 th17 細胞による EAE の永続性は IRL の菲薄化と対応し、先ほど我々 説明した17、網膜神経節細胞の損失と関連していた。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56185/56185fig1.jpg"> 
図 1: AQP4 p135 153 と p201 220 AQP4-/-マウスがなく、WT マウスで堅牢な T 細胞の増殖を引き出します。接種した sc の CFA で示されたペプチドです。11 日後、リンパ節の除去、ないのいずれかの抗原または予防接種用ペプチドを培養します。3H-チミジン取り込み (平均 ± 5 実験の代表的な SEM) によって増殖を測定しました。<a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56185/56185fig1large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56185/56185fig2.jpg"> 
図 2: AQP4-/-マウスから AQP4 特異的 T 細胞を利用一意の TCR レパートリー 。AQP4-/-と WT マウスは、示されたペプチドで免疫しました。11 日後、リンパ節除去し、予防接種に使用されるペプチドで培養されました。セルを収穫されました。TCR Vβ 利用したフローサイトメトリーで分析した (意味 ± SEM は、n = 5)。<a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56185/56185fig2large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56185/56185fig3.jpg"> 
図 3: ドナー AQP4 特異的 T 細胞の炎症性偏光。AQP4 p135 153 または p201-220、接種後 11 日間リンパ節細胞収穫, 非偏光条件、Th1 や Th17 偏光条件で予防接種に使用されるペプチドで培養された.Th17 細胞や th1 細胞の分極によって調べた ICS とフローサイトメトリー IL 17 の IFN-γ、それぞれ。<a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56185/56185fig3large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56185/56185fig4.jpg"> 
図 4: Th17 偏光 AQP4 特異的 T 細胞誘導 WT 受信者マウスで麻痺します。WT 受信者マウスは、AQP4-/-マウスから 2 x 107ドナー Th17 偏光 AQP4 p135 153 または p201 220 特異的 T 細胞を受け取った。モグ特異的 T 細胞の th17 細胞偏光はポジティブ コントロールとして提供しています。8 実験の結果が (n = 5/グループ)。* p &#60; 0.05 * * p &#60; 0.01 * * * p &#60; 0.001。<a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56185/56185fig4large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56185/56185fig5.jpg"> 
図 5: AQP4 固有 Th17 細胞は WT マウスで opticospinal 炎症を誘発する。受信者のマウスは 2 x 107ドナー Th17 AQP4 p135 153 または p201-220-先読み Th17 細胞 AQP4-/-マウスや Th17 モグ p35-55-特定の細胞を受け、10 日後が犠牲になった。脊髄と視神経組織が準備され、H に染まった &#38; E/LFB 炎症、脱髄の証拠を評価するには、それぞれ。結果は、5 マウス/グループの代表です。スケールバー = 50 μ m.<a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56185/56185fig5large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56185/56185fig6.jpg"> 
図 6: 縦断的網膜 10 月、AQP4 固有 Th17 細胞による視神経の炎症を監視できますWT 受信者マウスは、0 日目に 2 × 107ドナー Th17 偏光 AQP4 p201-220-特定やモグ p35-55-特定の T 細胞を受け取りました。10 月 0 日目 (T 細胞の管理) の前に検討されたとし、日 4、7、8、9 10 11 14 と 21。IRL の厚さは、測定 (平均 ± SEM) だった。統計は、単純なコントロールとの比較を示します。結果は、3 実験 (5 マウス/グループ) の代表です。* p &#60; 0.05 * * p &#60; 0.01 * * * p &#60; 0.001。<a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56185/56185fig6large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。

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Induction of Paralysis and Visual System Injury in Mice by T Cells Specific for Neuromyelitis Optica Autoantigen Aquaporin-4

ここでは、アクアポリン 4 (AQP4) 伝による麻痺と opticospinal の炎症を誘発するプロトコルを提案-WT マウスに AQP4-/-マウスから特定の T 細胞。さらに、シリアルの光干渉断層計を使用して視覚システムの機能不全を監視する方法を示します。

麻痺、視神経脊髄炎自己抗原アクアポリン 4 の T 細胞特定のマウスの視覚系障害の誘導

While it is recognized that aquaporin-4 (AQP4)-specific T cells and antibodies participate in the pathogenesis of neuromyelitis optica (NMO), a human ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Retroviral Transduction of T-cell Receptors in Mouse T-cells

マウスT細胞におけるT細胞受容体のレトロウイルス導入

T-cell receptors (TCRs) play a central role in the immune system. TCRs on T-cell surfaces can specifically recognize peptide antigens presented by antigen ...

Induction of Alloantigen-specific Anergy in Human Peripheral Blood Mononuclear Cells by Alloantigen Stimulation with Co-stimulatory Signal Blockade

共刺激シグナル遮断によるアロ抗原刺激によるヒト末梢血単核球のアロ抗原特異的アネルギーの誘導

Allogeneic hematopoietic stem cell transplantation (AHSCT) offers the best chance of cure for many patients with congenital and acquired hematologic ...

Determining Optimal Cytotoxic Activity of Human Her2neu Specific CD8 T cells by Comparing the Cr51 Release Assay to the xCELLigence System

xCELLigenceシステムにCR51リリースアッセイを比較することによって、人間Her2neu特異的CD8 T細胞の最適な細胞傷害活性を決定する

Cytotoxic CD8 T cells constitute a subgroup of T  cells that are capable of inducing the death of infected or malignant host  cells1. These cells express ...

piggyBac Transposon System Modification of Primary Human T Cells

piggyBac Transposon System Modification of Primary Human T Cells

プライマリーヒトT細胞のpiggyBacトランスポゾンシステムの変更

The piggyBac transposon system is naturally active, originally derived from the cabbage looper moth1,2. This non-viral system is plasmid based, most ...

Peptide:MHC Tetramer-based Enrichment of Epitope-specific T cells

ペプチドエピトープ特異的T細胞のMHCテトラマーベースの濃縮

A  basic necessity for researchers studying adaptive immunity with in vivo experimental models is an  ability to identify T cells based on their T cell ...

Accelerated Type 1 Diabetes Induction in Mice by Adoptive Transfer of Diabetogenic CD4+ T Cells

糖尿病CD4の養子移入+ T細胞によるマウスの加速された1型糖尿病の誘導

The nonobese diabetic (NOD) mouse spontaneously develops autoimmune diabetes after 12 weeks of age and is the most extensively studied animal model of ...

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

エフェクターCD4の養子移入によるマウス腸の炎症の誘導<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt;高い</sup&gt;免疫不全マウスへのT細胞

There are many different animal models available for studying the pathogenesis of human inflammatory bowel diseases (IBD), each with its own advantages ...

Automated Cell Enrichment of Cytomegalovirus-specific T cells for Clinical Applications using the Cytokine-capture System

サイトカインキャプチャシステムを用いた臨床応用のためのサイトメガロウイルス特異的T細胞の自動化された細胞濃縮

The adoptive transfer of pathogen-specific T cells can be used to prevent and treat opportunistic infections such as cytomegalovirus (CMV) infection ...

Analysis of Simian Immunodeficiency Virus-specific CD8+ T-cells in Rhesus Macaques by Peptide-MHC-I Tetramer Staining

Analysis of Simian Immunodeficiency Virus-specific CD8+ T-cells in Rhesus Macaques by Peptide-MHC-I Tetramer Staining

サル免疫不全ウイルス特異的CD8の分析<sup&gt; +</sup&gt;ペプチドMHC-I四量体染色によりアカゲザルにおけるT細胞

Peptide-major histocompatibility complex class I (pMHC-I) tetramers have been an invaluable tool to study CD8+ T-cell responses. Because these reagents ...

Evaluation of Zika Virus-specific T-cell Responses in Immunoprivileged Organs of Infected Ifnar1-/- Mice

Evaluation of Zika Virus-specific T-cell Responses in Immunoprivileged Organs of Infected Ifnar1-/- Mice

ジカ ウイルス特異 Immunoprivileged 臓器感染 Ifnar1-/-マウスの T 細胞応答の評価

The Zika virus (ZIKV) can induce inflammation in immunoprivileged organs (e.g., the brain and testis), leading to the Guillain-Barr&#233; syndrome and ...