Name: induction of paralysis and visual system injury in mice by t cells specific for neuromyelitis optica autoantigen aquaporin-4
Uploaded: 2017-08-21T15:00:00
Duration: 9 min 29 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Induction of Paralysis and Visual System Injury in Mice by T Cells Specific for Neuromyelitis Optica Autoantigen Aquaporin-4 at JoVE.com

Støtte ble gitt til S.S.Z. av National Institute of Health (RO1 AI073737 og RO1 NS092835-01), nasjonal multippel sklerose samfunnet (RG 4768, RG 5179 og RG 5180), Maisin Foundation og Guthy Jackson veldedige Foundation.

<ol>
	<li>Hardy, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atypical+inflammatory+demyelinating+syndromes+of+the+CNS.">Atypical inflammatory demyelinating syndromes of the CNS.</a> Lancet Neurol. 15 (9), 967-981 (2016).</li><li>Lennon, V. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+serum+autoantibody+marker+of+neuromyelitis+optica:+distinction+from+multiple+sclerosis.">A serum autoantibody marker of neuromyelitis optica: distinction from multiple sclerosis.</a> Lancet. 364 (9451), 2106-2112 (2004).</li><li>Lennon, V. A., Kryzer, T. J., Pittock, S. J., Verkman, A. S., Hinson, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IgG+marker+of+optic-spinal+multiple+sclerosis+binds+to+the+aquaporin-4+water+channel.">IgG marker of optic-spinal multiple sclerosis binds to the aquaporin-4 water channel.</a> J Exp Med. 202 (4), 473-477 (2005).</li><li>Zamvil, S. S., Slavin, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Does+MOG+Ig-positive+AQP4-seronegative+opticospinal+inflammatory+disease+justify+a+diagnosis+of+NMO+spectrum+disorder.">Does MOG Ig-positive AQP4-seronegative opticospinal inflammatory disease justify a diagnosis of NMO spectrum disorder.</a> Neurol Neuroimmunol Neuroinflamm. 2 (1), 62 (2015).</li><li>Bennett, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrathecal+pathogenic+anti-aquaporin-4+antibodies+in+early+neuromyelitis+optica.">Intrathecal pathogenic anti-aquaporin-4 antibodies in early neuromyelitis optica.</a> Ann Neurol. 66 (5), 617-629 (2009).</li><li>Bradl, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuromyelitis+optica:+pathogenicity+of+patient+immunoglobulin+in+vivo.">Neuromyelitis optica: pathogenicity of patient immunoglobulin in vivo.</a> Ann Neurol. 66 (5), 630-643 (2009).</li><li>Nurieva, R. I., Chung, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+the+development+and+function+of+T+follicular+helper+cells.">Understanding the development and function of T follicular helper cells.</a> Cell Mol Immunol. 7 (3), 190-197 (2010).</li><li>Lucchinetti, C. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pathology+of+an+autoimmune+astrocytopathy:+lessons+learned+from+neuromyelitis+optica.">The pathology of an autoimmune astrocytopathy: lessons learned from neuromyelitis optica.</a> Brain Pathol. 24 (1), 83-97 (2014).</li><li>Zekeridou, A., Lennon, V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aquaporin-4+autoimmunity.">Aquaporin-4 autoimmunity.</a> Neurol Neuroimmunol Neuroinflamm. 2 (4), 110 (2015).</li><li>Brum, D. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HLA-DRB+association+in+neuromyelitis+optica+is+different+from+that+observed+in+multiple+sclerosis.">HLA-DRB association in neuromyelitis optica is different from that observed in multiple sclerosis.</a> Mult Scler. 16 (1), 21-29 (2010).</li><li>Varrin-Doyer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aquaporin+4-specific+T+cells+in+neuromyelitis+optica+exhibit+a+Th17+bias+and+recognize+Clostridium+ABC+transporter.">Aquaporin 4-specific T cells in neuromyelitis optica exhibit a Th17 bias and recognize Clostridium ABC transporter.</a> Ann Neurol. 72 (1), 53-64 (2012).</li><li>Vaknin-Dembinsky, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T-cell+responses+to+distinct+AQP4+peptides+in+patients+with+neuromyelitis+optica+(NMO).">T-cell responses to distinct AQP4 peptides in patients with neuromyelitis optica (NMO).</a> Mult Scler Relat Disord. 6, 28-36 (2016).</li><li>Nelson, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunodominant+T+cell+determinants+of+aquaporin-4,+the+autoantigen+associated+with+neuromyelitis+optica.">Immunodominant T cell determinants of aquaporin-4, the autoantigen associated with neuromyelitis optica.</a> PLoS One. 5 (11), 15050 (2010).</li><li>Kalluri, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+characterization+of+aquaporin-4+specific+T+cells:+towards+a+model+for+neuromyelitis+optica.">Functional characterization of aquaporin-4 specific T cells: towards a model for neuromyelitis optica.</a> PLoS One. 6 (1), 16083 (2011).</li><li>Pohl, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenic+T+cell+responses+against+aquaporin+4.">Pathogenic T cell responses against aquaporin 4.</a> Acta Neuropathol. 122 (1), 21-34 (2011).</li><li>Zeka, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+encephalitogenic+aquaporin+4-specific+T+cells+and+NMO-IgG+jointly+orchestrate+lesion+location+and+tissue+damage+in+the+CNS.">Highly encephalitogenic aquaporin 4-specific T cells and NMO-IgG jointly orchestrate lesion location and tissue damage in the CNS.</a> Acta Neuropathol. 130 (6), 783-798 (2015).</li><li>Sagan, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tolerance+checkpoint+bypass+permits+emergence+of+pathogenic+T+cells+to+neuromyelitis+optica+autoantigen+aquaporin-4.">Tolerance checkpoint bypass permits emergence of pathogenic T cells to neuromyelitis optica autoantigen aquaporin-4.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 113 (51), 14781-14786 (2016).</li><li>Vita, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+immune+epitope+database+(IEDB)+3.0.">The immune epitope database (IEDB) 3.0.</a> Nucleic Acids Res. 43, 405-412 (2015).</li><li>Harrell, M. I., Iritani, B. M., Ruddell, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymph+node+mapping+in+the+mouse.">Lymph node mapping in the mouse.</a> J Immunol Methods. 332 (1-2), 170-174 (2008).</li><li>Ivanova, E., Toychiev, A. H., Yee, C. W., Sagdullaev, B. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+protocol+for+retinal+wholemount+preparation+for+imaging+and+immunohistochemistry.">Optimized protocol for retinal wholemount preparation for imaging and immunohistochemistry.</a> J Vis Exp. (82), e51018 (2013).</li><li>Cruz-Herranz, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+APOSTEL+recommendations+for+reporting+quantitative+optical+coherence+tomography+studies.">The APOSTEL recommendations for reporting quantitative optical coherence tomography studies.</a> Neurology. 86 (24), 2303-2309 (2016).</li><li>Mendel, I., Kerlero de Rosbo, N., Ben-Nun, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+myelin+oligodendrocyte+glycoprotein+peptide+induces+typical+chronic+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+in+H-2b+mice:+fine+specificity+and+T+cell+receptor+V+beta+expression+of+encephalitogenic+T+cells.">A myelin oligodendrocyte glycoprotein peptide induces typical chronic experimental autoimmune encephalomyelitis in H-2b mice: fine specificity and T cell receptor V beta expression of encephalitogenic T cells.</a> Eur J Immunol. 25 (7), 1951-1959 (1995).</li><li>Shetty, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunodominant+T-cell+epitopes+of+MOG+reside+in+its+transmembrane+and+cytoplasmic+domains+in+EAE.">Immunodominant T-cell epitopes of MOG reside in its transmembrane and cytoplasmic domains in EAE.</a> Neurol Neuroimmunol Neuroinflamm. 1 (2), 22 (2014).</li><li>Molnarfi, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MHC+class+II-dependent+B+cell+APC+function+is+required+for+induction+of+CNS+autoimmunity+independent+of+myelin-specific+antibodies.">MHC class II-dependent B cell APC function is required for induction of CNS autoimmunity independent of myelin-specific antibodies.</a> J Exp Med. 210 (13), 2921-2937 (2013).</li><li>Jones, M. V., Huang, H., Calabresi, P. A., Levy, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenic+aquaporin-4+reactive+T+cells+are+sufficient+to+induce+mouse+model+of+neuromyelitis+optica.">Pathogenic aquaporin-4 reactive T cells are sufficient to induce mouse model of neuromyelitis optica.</a> Acta Neuropathol Commun. 3, 28 (2015).</li><li>Oertel, F. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microstructural+visual+system+changes+in+AQP4-antiboby-seropositive+NMOSD.">Microstructural visual system changes in AQP4-antiboby-seropositive NMOSD.</a> Neurol. Neuroimmunol. Neuroinflamm. 4, 72 (2017).</li><li>Vogel, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deletional+tolerance+prevents+AQP4+directed+autoimmunity+in+mice.">Deletional tolerance prevents AQP4 directed autoimmunity in mice.</a> Eur J Immunol. , (2017).</li><li>Zhang, H., Verkman, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Longitudinally+extensive+NMO+spinal+cord+pathology+produced+by+passive+transfer+of+NMO-IgG+in+mice+lacking+complement+inhibitor+CD59.">Longitudinally extensive NMO spinal cord pathology produced by passive transfer of NMO-IgG in mice lacking complement inhibitor CD59.</a> J Autoimmun. 53, 67-77 (2014).</li><li>Zeka, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aquaporin+4-specific+T+cells+and+NMO-IgG+cause+primary+retinal+damage+in+experimental+NMO/SD.">Aquaporin 4-specific T cells and NMO-IgG cause primary retinal damage in experimental NMO/SD.</a> Acta Neuropathol Commun. 4 (1), 82 (2016).</li><li>Felix, C. M., Levin, M. H., Verkman, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complement-independent+retinal+pathology+produced+by+intravitreal+injection+of+neuromyelitis+optica+immunoglobulin+G.">Complement-independent retinal pathology produced by intravitreal injection of neuromyelitis optica immunoglobulin G.</a> J Neuroinflammation. 13 (1), 275 (2016).</li><li>Zamvil, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T-cell+clones+specific+for+myelin+basic+protein+induce+chronic+relapsing+paralysis+and+demyelination.">T-cell clones specific for myelin basic protein induce chronic relapsing paralysis and demyelination.</a> Nature. 317 (6035), 355-358 (1985).</li><li>Zamvil, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Encephalitogenic+T+cell+clones+specific+for+myelin+basic+protein.+An+unusual+bias+in+antigen+recognition.">Encephalitogenic T cell clones specific for myelin basic protein. An unusual bias in antigen recognition.</a> J Exp Med. 162 (6), 2107-2124 (1985).</li><li>Kuchroo, V. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=B7-1+and+B7-2+costimulatory+molecules+activate+differentially+the+Th1/Th2+developmental+pathways:+application+to+autoimmune+disease+therapy.">B7-1 and B7-2 costimulatory molecules activate differentially the Th1/Th2 developmental pathways: application to autoimmune disease therapy.</a> Cell. 80 (5), 707-718 (1995).</li><li>Bettelli, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reciprocal+developmental+pathways+for+the+generation+of+pathogenic+effector+TH17+and+regulatory+T+cells.">Reciprocal developmental pathways for the generation of pathogenic effector TH17 and regulatory T cells.</a> Nature. 441 (7090), 235-238 (2006).</li></ol>

S.A. Sagan, A. Cruz-Herranz, C.M. Spencer, P.P. Ho, L. Steinman, AJ Green og ra Sobel rapporterer ingen avsløringer. SS. Zamvil assisterende redaktør av nevrologi, Neuroimmunology og Neuroinflammation og er medlem av advisory board for det internasjonale samfunnet av Neuroimmunology. Han har vært i Journal of Clinical Investigation, The Journal for immunologi og The Journal av nevrologiske fag, og er et medlem av grant gjennomgangen komiteen for den nasjonale institutter Health (NIH) klinisk Neuroimmunology og hjernen svulster (CNBT) studie delen og nasjonal multippel sklerose samfunnet (NMSS). Han har som konsulent og fikk honoraria fra Biogen-Idec, EMD-Serono, Genzyme, Novartis, Roche/Genentech og Teva Pharmaceuticals, Inc., og har tjent eller serverer Data sikkerhet overvåking styrene til Lilly, BioMS, Teva og Opexa Therapeutics. For tiden mottar Dr. Zamvil forskning gi støtte fra NIH, NMSS, Maisin stiftelsen, Biogen og Celgene.

AQP4 ble identifisert som den primære målet i NMO IgG i 20053. Da ble det kjent at det ville være viktig å etablere en AQP4 målrettede dyr modell av CNS autoimmunitet. Slik modell kan være nyttig å undersøke hvordan AQP4-spesifikke T- og B-cellene delta i utviklingen av CNS autoimmunitet og teste kandidat therapeutics for NMO. Selv om identifikasjonen av AQP4-spesifikke T celle epitopes i vill-type mus ble først rapportert i 201013, T-celler som svarer til de epitopes ikke forårsake klinisk eller histologic14,17. Manglende evne til å generere en modell av CNS autoimmunitet basert på immun reaktivitet til AQP4 forble et mysterium inntil 2015 når Jones, et al. 25 oppdaget at giver AQP4 p135-153-primet T celler fra AQP4- / - mus var kan forårsake klinisk og histologic tegn på CNS autoimmunitet i WT mus. Av interesse spådd AQP4 p135-153 for å binde MHC-II (enb) med høy affinitet17. Bare en annen AQP4 aminosyresekvens, 201-220, er spådd for å binde enb med lignende høy affinitet. Faktisk observerte vi at AQP4 p135-153 og p201-220 både framprovosere robust spredning i AQP4- / -, men ikke WT, mus. Her har vi vist hvordan man kan isolere og utvide encephalitogenic Th17 AQP4 p135-153 - og p201-220-reaktive T celler fra AQP4- / - mus. Når overført til WT mottaker mus, induserte donor AQP4-reaktive Th17 cellene lammelse, som ble ledsaget av mononukleære celle infiltrerer i ryggmargen og synsnerven. Afferente visuelle systemet skade er kjent hos pasienter med AQP4-avrusningsenhetene NMOSD26. Her observerte vi at synsnerven betennelse forårsaket av AQP4-reaktive og MOG-reaktive Th17 cellene var tydelig. Mens AQP4-spesifikke Th17 celler indusert fiberoptisk perineuritis, forårsaket MOG-spesifikke Th17 celler alvorlig optisk nevritt. Vi har også beskrevet teknikker brukes til å overvåke synsnerven betennelse forårsaket av AQP4-spesifikke og MOG-spesifikke T celler av føljetong OCT. Andre etterforskere skal nå kunne bruke protokollene beskrevet her for å fremme sine egne studier fokuserte på patogene mekanismer for ATCA.
Man kan lett unngå tre potensielle fallgruver i våre protokollen. Første, adopsjon overføring av ATCA krever AQP4-spesifikke T celler fra AQP4- / - giver mus. Spesielt forårsake giver WT AQP4 p135-153-spesifikke T celler ikke ATCA i mottakerens WT mus. Dernest er det viktig å utføre en "vann-test" med en dråpe peptid/CFA emulsjonen før immunisering av AQP4- / - mus (protokollen trinn 1.5). Emulsjonen bør ikke spre i vann når det passer for SC injeksjon. Hvis emulsjonen fordeler, bør en blande emulsjonen igjen, chill igjen og gjenta vann-testen. Til slutt indusere aktivert donor CNS antigen-spesifikke T celler CNS autoimmunitet mer effektivt enn hvile T celler. En bør visuelt undersøke disse kulturer under lys mikroskopet før høsting donor T celler for adopsjon overføring. Hurtig deler celler kan danne sektorgrupper, som er lett identifiseres. Også når kulturer inneholder mange aktivert T-celler, kan media overgangen fra rosa til oransje eller til gul, på grunn av reduksjon i pH. Man kan også vurdere aktivering av donor AQP4-primet lymfeknute T celler for spredning av 3H-thymidine innlemmelse, som beskrevet i protokollen trinn 3.
Våre funn at to sykdomsfremkallende AQP4 T celle epitopes er (1) spådd å binde MHC-II med høy affinitet og (2) framprovosere potente proliferativ reaksjoner i AQP4- / -, men ikke WT, mus tyder på at T-celler som er rettet mot disse determinants er normalt kontrollert av thymic negative utvalg17. TCR repertoar benyttes for anerkjennelse av AQP4 p135-153 og p201-220 i AQP4- / - mus er unik (figur 2), som er også i overensstemmelse med klonal sletting formidlet av thymic medullær epitelceller. Andre tolerogenic mekanismer kan vanligvis hindre immunreaksjoner til AQP4. Etter vårt første rapport17viste en annen gruppe også at AQP4 p201-220 inneholder en encephalitogenic T celle determinant27. Når α/β (TCRα- / -) T celle-mangelfull mus ble rekonstituert med AQP4- / - CD4+ T celler, det var mulig å lokke fram en encephalitogenic AQP4-spesifikke T celle respons, men ikke en AQP4-spesifikke humoral respons, noe som i WT mus AQP4-spesifikke B celle svar, analog med AQP4-spesifikke T celle svar, kan negative utvalg. Faktisk, tap av ryggmargen axons og RGCs, ble ikke registrert i WT mus med ATCA av AQP4-spesifikke T celler alene, kan kreve deltakelse av sykdomsfremkallende AQP4-spesifikke antistoffer. Det er klart at musen modeller av AQP4 målrettede CNS autoimmunitet vil fortsette å utvikle seg som vi lærer mer om de tolerogenic mekanismene som vanligvis styrer AQP4-spesifikke T-celler og B-celle immunitet.
Andre modeller av AQP4 målrettede CNS autoimmunitet blir også utviklet6,16,28,29,30. Hver og en kan gi fordeler for å undersøke bestemte aspekter som er relevante for NMO patogenesen. AQP4-spesifikke T celler har blitt identifisert i WT rotter6,16,29. AQP4-spesifikke T celler forårsaket histologic endringer i CNS autoimmunitet, men ligner observasjoner i mus, WT rotte AQP4-spesifikke T celler forårsaker ikke betydelig underskriver av kliniske sykdommen. Mekanismer for toleranse begrenser T-celler og B-celle AQP4-spesifikke immunreaksjoner i WT mus er derfor også i rotter. Uansett, bør en ikke undervurdere kraften i å bruke musen modeller for å studere mekanismer involvert i patogenesen av sykdom. Vell av knock-out, transgene og reporter mus kan være fordelaktig. Det bør også anerkjent at flere grunnleggende funn i autoimmunitet ble gjort ved hjelp av musen EAE modeller. For eksempel demonstrasjon T cellen kloner bestemt en selv-antigen kan megle autoimmun sykdom31,32, identifikasjon av rollen T celle costimulation autoimmunitet33 og oppdagelsen av den utviklingsmessige veien for Th17 differensiering34 ble først beskrevet ved hjelp av musen EAE modeller. Bruker musemodell av ATCA som vi har utviklet, har en nå har midler til å studere utviklingen og regulering av sykdomsfremkallende AQP4-spesifikke immunreaksjoner i vivo, som skal gi viktig innsikt knyttet til NMO patogenesen.

Neuromyelitis optica (NMO) er en sentralnervesystemet (CNS) autoimmune inflammatoriske demyeliniserende sykdom som forårsaker tilbakevendende episoder av lammelse og synstap fører til nevrologiske invaliditet1. NMO regnes tiden primært en humoral autoimmun sykdom2 som det er forbundet med antistoffer (Igs) rettet mot aquaporin-4 (AQP4), en vann kanal uttrykt rikelig på astrocyttene3,4. CNS betennelse er imidlertid en forutsetning for CNS oppføringen AQP4 Ig5,6. Dermed har det ikke vært mulig å etablere en modell av NMO ved overføring av anti-AQP4 Igs alene. Funnene at (1) sykdomsfremkallende AQP4-spesifikke Igs i NMO pasienter er IgG11,2, en T celle-avhengige Ig underklasse7 (2) T-celler identifiseres i NMO lesjoner8,9 (3) NMO er tilknyttet med visse MHC-II gener (f.eks HLA-DR17 (DRB1 * 0301))10og (4) proinflammatory AQP4-reaktive DR-begrenset Th17 celler er utvidet i NMO pasienter11,12 alle indikerer at AQP4-spesifikke T celler har en nøkkelrolle i NMO patogenesen. Derfor er det viktig å utvikle dyr modeller for å bestemme hvordan AQP4-spesifikke T celler kan bidra til NMO patogenesen.
Flere år siden, ble flere AQP4 T celle epitopes identifisert i vill-type (WT) mus13,14 og rotter15. Mens det ble observert at AQP4-reaktive T celler kan indusere opticospinal betennelse i naiv mottaker rotter15,16, var betydelig klinisk underskriver av CNS sykdom ikke observert. Tilsvarende direkte immunisering av WT mus med peptider som inneholder AQP4 T celle epitopes14,17, eller overføre proinflammatory T-celler som er rettet mot de determinanter17, ikke forårsake kliniske tegn eller histologic bevis på CNS autoimmunitet.
Nylig det ble observert at immunisering for C57BL/6 AQP4 dårlig (AQP4- / -) mus AQP4 peptid (p) 135-153 eller p201-220, to determinanter spådd for å binde MHC-II (enb) med høy affinitet18, vakte sterke CD4 + T celle svar17. Disse to peptider vakte derimot bare beskjeden proliferativ svar i WT mus. Videre var T-celle reseptor (TCR) repertoaret brukes for anerkjennelse av disse determinanter av T-celler fra AQP4- / - mus unik. Samlet viser disse funnene at T celle anerkjennelse av AQP4 er regulert av thymic negative utvalg. AQP4 p135-153 - eller p201-220-spesifikk Th17 celler fra AQP4- / - giver mus indusert lammelse i nesten 100% av naiv mottaker WT mus; Dette var tilknyttet opticospinal infiltrerer T celler og B-celler monocytter. Føljetong opticospinal coherence tomografi (OCT) vist dynamiske visuelle filsystemet. Mus med T celle-mediert AQP4 målrettede CNS autoimmunitet (ATCA) utvinnes fra lammelse og visuelle systemet skade. I motsetning til EAE indusert av myelin oligodendrocyte glykoprotein (MOG) p35-55-spesifikke T celler, som førte til vedvarende klinisk sykdom, var ATCA av T-celler alene ikke tilknyttet axonal tap eller reduksjon i netthinnen ganglieceller (RGCs). Resultatene har vist at det er flere sykdomsfremkallende AQP4 T celle determinanter. Denne modellen av ATCA er nyttig for å studere mekanismer som styrer utviklingen av sykdomsfremkallende AQP4-spesifikke T-celler, lære hvordan cellene indusere CNS betennelse og hvordan de kan samarbeide med AQP4-spesifikke B celler og antistoffer å fremme NMO patogenesen .
Nåværende rapporten beskriver vi protokollene som brukes til å indusere og evaluere T celle-indusert ATCA. Vi begynner med teknikkene som brukes for immunisering, T cellekultur og Th17 polarisering generere sykdomsfremkallende AQP4-spesifikke T celler, flyt cytometri analyse å bekrefte polarisering og adopsjon overføring av disse T-celler. Vi beskriver metoder for å vurdere kliniske og histologic og bruk av føljetong OCT overvåke visuelle systemet skade i mottakerens mus.

<table width="1066">
	<colgroup>
		<col style="width:246pt" width="328" />
		<col style="width:162pt" width="216" />
		<col style="width:104pt" width="139" />
		<col style="width:287pt" width="383" />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">M. tuberculosis H37Ra</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">BD Difco</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">231141</td>
			<td class="xl22" style="width:287pt" width="383">Dessicated, killed M. tuberculosis</td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">Incomplete Freund&#39;s Adjuvant</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">BD Difco</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">263910</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">AQP4 peptide p135-153</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">Genemed</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">Custom Synthesis</td>
			<td class="xl22">Peptide sequence: LVTPPSVVGGLGVTMVHGN</td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">AQP4 peptide p201-220</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">Genemed</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">Custom Synthesis</td>
			<td class="xl22">Peptide sequence: HLFAINYTGASMNPARSFGP</td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">MOG peptide p35-55</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">Genemed / Auspep</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">Custom Synthesis</td>
			<td class="xl22">Peptide sequence: MEVGWYRSPFSRVVHLYRNGK</td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">3-way Stopcock</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">Kimble</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">420163-4503</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">HyClone Fetal Bovine Serum (Characterized)</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">GE Healthcare Life Sciences</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">SH30071</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">Recombinant Mouse IL-23</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">R&#38;D Systems (BioTechne)</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">1887-ML</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">Recombinant Mouse IL-6</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">R&#38;D Systems (BioTechne)</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">406-ML</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">Recombinant Mouse IL-12</td>
			<td class="xl23" style="width:162pt" width="216">R&#38;D Systems (BioTechne)</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">419-ML</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="25" style="height:18.75pt">
			<td class="xl19" height="25" style="width:246pt;height:18.75pt" width="328">Thymidine [Methyl-3H]</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">PerkinElmer</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">NET027</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">Glass Fiber Filtermats</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">PerkinElmer</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">1450-421</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">Anti-mouse antibodies</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">eBioscience (Affymetrix)</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">[various]</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">Anti-mouse TCR V&#946; Screening Panel</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">BD Biosciences</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">557004</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">LIVE/DEAD Fixable Dead Cell Stain</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">ThermoFisher Scientific</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">[various]</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">Paraformaldehyde (16%)</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">Electron Microscopy Sciences</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">15710</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="42" style="height:31.5pt">
			<td class="xl19" height="42" style="width:246pt;height:31.5pt" width="328">Fixation/Permeabilization Solution Kit with GolgiPlug</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">BD Biosciences</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">555028</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA)</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">Sigma-Aldrich</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">P8139</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">Iomomycin (calcium salt)</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">Sigma-Aldrich</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">I0634</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">Pertussis Toxin from B. pertussis</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">List Biological Laboratories</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">181</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">10% Formalin</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">VWR</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">89370-094</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">Variable-Flow Peristaltic Pump</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">Fisher Scientific</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">13-876-2</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">Foam Biopsy Pads, Rectangular</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">Fisher Scientific</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">22-038-221</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">Isothesia (isoflurane, USP)</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">Henry Schein Animal Health</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">050033</td>
			<td class="xl22">NDC : 11695-0500-2</td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">Tropicamide Ophthalmic Solution, USP (1%)</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">Akorn</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139"></td>
			<td class="xl22">NDC: 17478-102-12</td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">Spectralis Diagnostic Imaging Platform</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">Heidelberg Engineering</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139"></td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

induction of paralysis and visual system injury in mice by t cells specific for neuromyelitis optica autoantigen aquaporin-4

Mens det er anerkjent at aquaporin-4 (AQP4)-spesifikke T celler og antistoffer delta i patogenesen av neuromyelitis optica (NMO), en menneskelig sentralnervesystemet (CNS) autoimmune demyeliniserende sykdom, etableringen av en AQP4 målrettede modell med både klinisk og histologic manifestasjoner av CNS autoimmunitet har vist seg utfordrende. Immunisering av vill-type (WT) mus med AQP4 peptider vakte T celle spredning, selv om de T-cellene ikke kan overføre sykdom til naiv mottaker mus. Nylig ble to romanen AQP4 T celle epitopes, peptid (p) 135-153 og p201-220, identifisert når studere immunreaksjoner til AQP4 i AQP4-mangelfull (AQP4- / -) mus, tyder T celle reaktivitet til disse epitopes er vanligvis styrt av thymic negativ utvalg. AQP4- / - Th17 polarisert T celler primet å p135 153 eller p201-220 indusert lammelse i mottakerens WT mus, som var assosiert med overveiende leptomeningeal betennelse i ryggmargen og optiske nervene. Betennelse rundt optiske nervene og involvering av indre retinal lagene (IRL) ble manifestert ved endringer i seriell optical coherence tomografi (OCT). Her illustrere vi tilnærminger brukt til å lage denne nye i vivo modellen av AQP4 målrettede CNS autoimmunitet (ATCA), som kan nå brukes til å studere mekanismer som tillater utvikling av sykdomsfremkallende AQP4-spesifikke T-celler og hvordan de kan samarbeide med B cellene i NMO patogenesen.

I denne protokollen brukte vi giver T celler fra C57BL/6 AQP4- / - mus. Subkutan immunisering av disse musene AQP4 p135-153 eller p201-220, som inneholder sykdomsfremkallende T celle epitopes, vakte sterke proliferativ T celle svar i drenering lymfeknuter (figur 1), mens disse to peptider indusert mye svakere T-celle spredning i WT mus. Sammenligning immunisering med AQP4 p91-110, som inneholder en ikke-patogene AQP4 T celle determinant13eller MOG p35-55, en myelin peptid som aktiverer T-celler som forårsaker eksperimentelle autoimmune immunsviktvirus (EAE)22,23 ,24, indusert lignende omfanget av T celle spredning i AQP4- /- og WT mus. Analyse av TCR utnyttelse av flyt cytometri flekker for individuelle Vβ eller Vβ familier, vist at p135 til 153 - og p201-220-spesifikke T celler fra AQP4- / - mus utnyttet unike TCR repertoar. Selektiv hyper-spredning av AQP4 p135-153 og p201-220 AQP4- / - mus, så vel som unike TCR utnyttelse (figur 2), indikerte at sykdomsfremkallende T celle Svar å disse faktorer er normalt regulert av thymic negative utvalg, understreker viktigheten av å bruke AQP4- / - giver T celler i denne protokollen.
Før adopsjon overføring for induksjon av ATCA, ble lymfeknute celler fra AQP4 peptid-primet mus kultivert i vitro Th17 - eller Th1-polarisert forhold i tre dager. Omfanget av polarisering av donor CD4+ T celler ble bekreftet av intracellulær cytokin flekker (ICS) og målt ved flowcytometri (Figur 3). Naive mottaker musene ble injisert intravenøst med 2 x 107 donor AQP4 peptid-spesifikke T-celler. Etter ca seks dager utviklet nesten 100% av mottakeren mus klinisk underskriver av CNS autoimmune sykdommer, inkludert halte hale og hind lem lammelse (Figur 4). Th17-polarisert AQP4-spesifikke T celler forårsaket mer alvorlig kliniske sykdommen enn Th1 polarisert AQP4-spesifikke T celler. En representant mus som fikk Th17 AQP4-peptid-spesifikk og utviklet komplett hind lem lammelse (paraplegia) vises i Video 1. Kontrast mus som utviklet EAE etter administrasjon av MOG-spesifikke Th17 celler, mottaker mus utvinnes fra klinisk sykdommen forårsaket av AQP4-spesifikke Th17 celler. Som for EAE indusert av MOG p35-55-spesifikk Th17 celler, klinisk sykdommen forårsaket av AQP4 p135-153-spesifikke eller p201-220-spesifikk Th17 celler var assosiert med infiltrasjon av mononukleære celler i CNS parenchyma og meninges (figur 5). Leksjonen var mer rikelig i meninges enn i parenchyma for CNS autoimmunitet indusert av AQP4-spesifikke Th17 celler.
Synsnerven engasjement ble demonstrert av histologiske evaluering og av føljetong OCT. AQP4-spesifikke og MOG-spesifikke Th17 celler både indusert synsnerven betennelser, som ble preget av tilstedeværelsen av mononukleære celler. Mens AQP4-spesifikke Th17 celler forårsaket fiberoptisk perineuritis, forårsaket MOG-spesifikke Th17 celler alvorlig optisk nevritt (figur 5). Bruke serielle OCT, synsnerven betennelse var tydelig av hevelse og økt indre retinal laget (IRL) tykkelse for klinisk sykdommen forårsaket av AQP4-spesifikke eller MOG-spesifikke Th17 celler (figur 6). For AQP4 Th17-indusert CNS autoimmunitet, IRL tykkelse tilbake til opprinnelig som mus utvinnes fra kliniske sykdommen. Derimot utholdenhet av EAE indusert av MOG-spesifikke Th17 korresponderte med IRL tynning og, som vi viste tidligere17, var forbundet med tap av netthinnen ganglieceller.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56185/56185fig1.jpg"> 
Figur 1 : AQP4 p135-153 og p201-220 framprovosere robust T celle spredning i AQP4- / - mus, men ikke WT mus. Mus ble vaksinert SC med de angitte peptidene i CFA. Elleve dager senere, ble lymfeknuter fjernet, og så kultivert med enten ingen antigen eller peptid brukes for immunisering. Spredning ble målt ved 3H-thymidine inkorporering (gjennomsnittlig ± SEM, representant 5 eksperimenter). <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56185/56185fig1large.jpg" target="_blank">Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56185/56185fig2.jpg"> 
Figur 2 : AQP4-spesifikke T celler fra AQP4- / - mus utnytte unike TCR repertoar. AQP4- /- og WT mus ble vaksinert med de angitte peptidene. Elleve dager senere, ble lymfeknuter fjernet og kultivert med peptid brukes for immunisering. Cellene ble høstet. TCR Vβ utnyttelse ble analysert av flowcytometri (mener ± SEM, n = 5). <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56185/56185fig2large.jpg" target="_blank">Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56185/56185fig3.jpg"> 
Figur 3 : Proinflammatory polarisering av donor AQP4-spesifikke T celler. Elleve dager etter immunisering med AQP4 p135-153 eller p201-220, ble lymfeknute celler høstet og kultivert med peptid brukes for immunisering i ikke-polarisert forhold, Th1 - eller Th17-polarisert forhold. Th17 eller Th1 polarisering ble undersøkt av ICS og flyt cytometri IL-17 eller IFN-γ, henholdsvis. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56185/56185fig3large.jpg" target="_blank">Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56185/56185fig4.jpg"> 
Figur 4 : Th17-polarisert AQP4-spesifikke T celler indusere lammelse i WT mottaker mus. WT mottaker mus mottatt 2 x 107 donor Th17-polarisert AQP4 p135-153 eller p201-220-spesifikke T celler fra AQP4- / - mus. Th17-polarisert MOG-spesifikke T-cellene var en positiv kontroll. Resultatene er representant for 8 eksperimenter (n = 5/gruppe). * p &#60; 0,05, ** p &#60; 0.01, *** p &#60; 0,001. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56185/56185fig4large.jpg" target="_blank">Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56185/56185fig5.jpg"> 
Figur 5 : AQP4-spesifikke Th17 celler indusere opticospinal betennelse i WT mus. Mottaker mus fikk 2 x 107 donor Th17 AQP4 p135-153 - eller p201-220-fylt Th17 celler fra AQP4- / - mus eller Th17 MOG p35-55-spesifikk celler og ble ofret 10 dager senere. Ryggmargen og synsnerven vev var forberedt og farget med H &#38; E/LFB å vurdere for bevis for betennelse og demyelinisering, henholdsvis. Resultatene er representant for 5 mus/gruppe. Skala bar = 50 µm. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56185/56185fig5large.jpg" target="_blank">Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56185/56185fig6.jpg"> 
Figur 6 : Synsnerven betennelse forårsaket av AQP4-spesifikke Th17 celler kan overvåkes av langsgående retinal oktober WT mottaker mus mottatt 2 x 107 donor Th17-polarisert AQP4 p201-220-spesifikke eller MOG p35-55-spesifikke T-celler på dag 0. De ble undersøkt av OCT dagen 0 (før administrasjon av T-celler) og deretter på dager 4, 7, 8, 9 10, 11 14 og 21. IRL tykkelse ble målt (gjennomsnittlig ± SEM). Statistikken indikerer en sammenligning med naiv kontroll. Resultatene er representant for 3 eksperimenter (5 mus/gruppe). * p &#60; 0,05, ** p &#60; 0.01, *** p &#60; 0,001. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56185/56185fig6large.jpg" target="_blank">Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Induction of Paralysis and Visual System Injury in Mice by T Cells Specific for Neuromyelitis Optica Autoantigen Aquaporin-4 at JoVE.com

Induction of Paralysis and Visual System Injury in Mice by T Cells Specific for Neuromyelitis Optica Autoantigen Aquaporin-4

Her presenterer vi en protokoll for å indusere lammelse og opticospinal betennelse av overføring av aquaporin-4 (AQP4)-spesifikke T-celler fra AQP4- / - mus i WT mus. I tillegg viser vi hvordan du bruker serielle optical coherence tomografi overvåke visuelle systemet dysfunksjon.

Induksjon av lammelse og visuelle systemet skade i mus ved T-celler spesifikke for Neuromyelitis Optica Autoantigen Aquaporin-4

While it is recognized that aquaporin-4 (AQP4)-specific T cells and antibodies participate in the pathogenesis of neuromyelitis optica (NMO), a human ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Retroviral Transduction of T-cell Receptors in Mouse T-cells

T-cell receptors (TCRs) play a central role in the immune system. TCRs on T-cell surfaces can specifically recognize peptide antigens presented by antigen ...

Induction of Alloantigen-specific Anergy in Human Peripheral Blood Mononuclear Cells by Alloantigen Stimulation with Co-stimulatory Signal Blockade

Allogeneic hematopoietic stem cell transplantation (AHSCT) offers the best chance of cure for many patients with congenital and acquired hematologic ...

Determining Optimal Cytotoxic Activity of Human Her2neu Specific CD8 T cells by Comparing the Cr51 Release Assay to the xCELLigence System

Bestemme Optimal cytotoksisk aktivitet for Human Her2neu Spesifikke CD8 T-celler ved å sammenligne Cr51 Slipp analysen til xCELLigence System

Cytotoxic CD8 T cells constitute a subgroup of T  cells that are capable of inducing the death of infected or malignant host  cells1. These cells express ...

piggyBac Transposon System Modification of Primary Human T Cells

piggyBac Transposon System Modification of Primary Human T Cells

piggyBac transposon System Endring av primære humane T celler

The piggyBac transposon system is naturally active, originally derived from the cabbage looper moth1,2. This non-viral system is plasmid based, most ...

Peptide:MHC Tetramer-based Enrichment of Epitope-specific T cells

A  basic necessity for researchers studying adaptive immunity with in vivo experimental models is an  ability to identify T cells based on their T cell ...

Accelerated Type 1 Diabetes Induction in Mice by Adoptive Transfer of Diabetogenic CD4+ T Cells

Akselerert Type 1 Diabetes Induksjon i Mus ved Adoptive Overføring av diabetogenic CD4 + T celler

The nonobese diabetic (NOD) mouse spontaneously develops autoimmune diabetes after 12 weeks of age and is the most extensively studied animal model of ...

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Induksjon av murine tarmbetennelse etter adoptiv overføring av Effector CD4<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; Høy</sup&gt; T-celler i immundefekte mus

There are many different animal models available for studying the pathogenesis of human inflammatory bowel diseases (IBD), each with its own advantages ...

Automated Cell Enrichment of Cytomegalovirus-specific T cells for Clinical Applications using the Cytokine-capture System

Automatisert Cell anrikning av Cytomegalovirus-spesifikke T-celler for kliniske applikasjoner ved hjelp av cytokin-fangst System

The adoptive transfer of pathogen-specific T cells can be used to prevent and treat opportunistic infections such as cytomegalovirus (CMV) infection ...

Analysis of Simian Immunodeficiency Virus-specific CD8+ T-cells in Rhesus Macaques by Peptide-MHC-I Tetramer Staining

Analysis of Simian Immunodeficiency Virus-specific CD8+ T-cells in Rhesus Macaques by Peptide-MHC-I Tetramer Staining

Analyse av Simian Immunodeficiency Virus-spesifikke CD8<sup&gt; +</sup&gt; T-celler i rhesusape av Peptide-MHC-I Tetramer Farging

Peptide-major histocompatibility complex class I (pMHC-I) tetramers have been an invaluable tool to study CD8+ T-cell responses. Because these reagents ...

Evaluation of Zika Virus-specific T-cell Responses in Immunoprivileged Organs of Infected Ifnar1-/- Mice

Evaluation of Zika Virus-specific T-cell Responses in Immunoprivileged Organs of Infected Ifnar1-/- Mice

Evaluering av Zika Virus-spesifikke T-celle svar i Immunoprivileged organer av infiserte Ifnar1- / - mus

The Zika virus (ZIKV) can induce inflammation in immunoprivileged organs (e.g., the brain and testis), leading to the Guillain-Barr&#233; syndrome and ...