Name: induction of paralysis and visual system injury in mice by t cells specific for neuromyelitis optica autoantigen aquaporin-4
Uploaded: 2017-08-21T15:00:00
Duration: 9 min 29 s
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Apoiaram-S.S.Z. pelo Instituto Nacional de saúde (RO1 AI073737 e RO1 NS092835-01), sociedade nacional de esclerose múltipla (4768 RG, RG 5179 e RG 5180), Fundação Maisin e Guthy Jackson Charitable Foundation.

<ol>
	<li>Hardy, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atypical+inflammatory+demyelinating+syndromes+of+the+CNS.">Atypical inflammatory demyelinating syndromes of the CNS.</a> Lancet Neurol. 15 (9), 967-981 (2016).</li><li>Lennon, V. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+serum+autoantibody+marker+of+neuromyelitis+optica:+distinction+from+multiple+sclerosis.">A serum autoantibody marker of neuromyelitis optica: distinction from multiple sclerosis.</a> Lancet. 364 (9451), 2106-2112 (2004).</li><li>Lennon, V. A., Kryzer, T. J., Pittock, S. J., Verkman, A. S., Hinson, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IgG+marker+of+optic-spinal+multiple+sclerosis+binds+to+the+aquaporin-4+water+channel.">IgG marker of optic-spinal multiple sclerosis binds to the aquaporin-4 water channel.</a> J Exp Med. 202 (4), 473-477 (2005).</li><li>Zamvil, S. S., Slavin, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Does+MOG+Ig-positive+AQP4-seronegative+opticospinal+inflammatory+disease+justify+a+diagnosis+of+NMO+spectrum+disorder.">Does MOG Ig-positive AQP4-seronegative opticospinal inflammatory disease justify a diagnosis of NMO spectrum disorder.</a> Neurol Neuroimmunol Neuroinflamm. 2 (1), 62 (2015).</li><li>Bennett, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrathecal+pathogenic+anti-aquaporin-4+antibodies+in+early+neuromyelitis+optica.">Intrathecal pathogenic anti-aquaporin-4 antibodies in early neuromyelitis optica.</a> Ann Neurol. 66 (5), 617-629 (2009).</li><li>Bradl, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuromyelitis+optica:+pathogenicity+of+patient+immunoglobulin+in+vivo.">Neuromyelitis optica: pathogenicity of patient immunoglobulin in vivo.</a> Ann Neurol. 66 (5), 630-643 (2009).</li><li>Nurieva, R. I., Chung, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+the+development+and+function+of+T+follicular+helper+cells.">Understanding the development and function of T follicular helper cells.</a> Cell Mol Immunol. 7 (3), 190-197 (2010).</li><li>Lucchinetti, C. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pathology+of+an+autoimmune+astrocytopathy:+lessons+learned+from+neuromyelitis+optica.">The pathology of an autoimmune astrocytopathy: lessons learned from neuromyelitis optica.</a> Brain Pathol. 24 (1), 83-97 (2014).</li><li>Zekeridou, A., Lennon, V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aquaporin-4+autoimmunity.">Aquaporin-4 autoimmunity.</a> Neurol Neuroimmunol Neuroinflamm. 2 (4), 110 (2015).</li><li>Brum, D. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HLA-DRB+association+in+neuromyelitis+optica+is+different+from+that+observed+in+multiple+sclerosis.">HLA-DRB association in neuromyelitis optica is different from that observed in multiple sclerosis.</a> Mult Scler. 16 (1), 21-29 (2010).</li><li>Varrin-Doyer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aquaporin+4-specific+T+cells+in+neuromyelitis+optica+exhibit+a+Th17+bias+and+recognize+Clostridium+ABC+transporter.">Aquaporin 4-specific T cells in neuromyelitis optica exhibit a Th17 bias and recognize Clostridium ABC transporter.</a> Ann Neurol. 72 (1), 53-64 (2012).</li><li>Vaknin-Dembinsky, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T-cell+responses+to+distinct+AQP4+peptides+in+patients+with+neuromyelitis+optica+(NMO).">T-cell responses to distinct AQP4 peptides in patients with neuromyelitis optica (NMO).</a> Mult Scler Relat Disord. 6, 28-36 (2016).</li><li>Nelson, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunodominant+T+cell+determinants+of+aquaporin-4,+the+autoantigen+associated+with+neuromyelitis+optica.">Immunodominant T cell determinants of aquaporin-4, the autoantigen associated with neuromyelitis optica.</a> PLoS One. 5 (11), 15050 (2010).</li><li>Kalluri, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+characterization+of+aquaporin-4+specific+T+cells:+towards+a+model+for+neuromyelitis+optica.">Functional characterization of aquaporin-4 specific T cells: towards a model for neuromyelitis optica.</a> PLoS One. 6 (1), 16083 (2011).</li><li>Pohl, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenic+T+cell+responses+against+aquaporin+4.">Pathogenic T cell responses against aquaporin 4.</a> Acta Neuropathol. 122 (1), 21-34 (2011).</li><li>Zeka, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+encephalitogenic+aquaporin+4-specific+T+cells+and+NMO-IgG+jointly+orchestrate+lesion+location+and+tissue+damage+in+the+CNS.">Highly encephalitogenic aquaporin 4-specific T cells and NMO-IgG jointly orchestrate lesion location and tissue damage in the CNS.</a> Acta Neuropathol. 130 (6), 783-798 (2015).</li><li>Sagan, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tolerance+checkpoint+bypass+permits+emergence+of+pathogenic+T+cells+to+neuromyelitis+optica+autoantigen+aquaporin-4.">Tolerance checkpoint bypass permits emergence of pathogenic T cells to neuromyelitis optica autoantigen aquaporin-4.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 113 (51), 14781-14786 (2016).</li><li>Vita, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+immune+epitope+database+(IEDB)+3.0.">The immune epitope database (IEDB) 3.0.</a> Nucleic Acids Res. 43, 405-412 (2015).</li><li>Harrell, M. I., Iritani, B. M., Ruddell, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymph+node+mapping+in+the+mouse.">Lymph node mapping in the mouse.</a> J Immunol Methods. 332 (1-2), 170-174 (2008).</li><li>Ivanova, E., Toychiev, A. H., Yee, C. W., Sagdullaev, B. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+protocol+for+retinal+wholemount+preparation+for+imaging+and+immunohistochemistry.">Optimized protocol for retinal wholemount preparation for imaging and immunohistochemistry.</a> J Vis Exp. (82), e51018 (2013).</li><li>Cruz-Herranz, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+APOSTEL+recommendations+for+reporting+quantitative+optical+coherence+tomography+studies.">The APOSTEL recommendations for reporting quantitative optical coherence tomography studies.</a> Neurology. 86 (24), 2303-2309 (2016).</li><li>Mendel, I., Kerlero de Rosbo, N., Ben-Nun, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+myelin+oligodendrocyte+glycoprotein+peptide+induces+typical+chronic+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+in+H-2b+mice:+fine+specificity+and+T+cell+receptor+V+beta+expression+of+encephalitogenic+T+cells.">A myelin oligodendrocyte glycoprotein peptide induces typical chronic experimental autoimmune encephalomyelitis in H-2b mice: fine specificity and T cell receptor V beta expression of encephalitogenic T cells.</a> Eur J Immunol. 25 (7), 1951-1959 (1995).</li><li>Shetty, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunodominant+T-cell+epitopes+of+MOG+reside+in+its+transmembrane+and+cytoplasmic+domains+in+EAE.">Immunodominant T-cell epitopes of MOG reside in its transmembrane and cytoplasmic domains in EAE.</a> Neurol Neuroimmunol Neuroinflamm. 1 (2), 22 (2014).</li><li>Molnarfi, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MHC+class+II-dependent+B+cell+APC+function+is+required+for+induction+of+CNS+autoimmunity+independent+of+myelin-specific+antibodies.">MHC class II-dependent B cell APC function is required for induction of CNS autoimmunity independent of myelin-specific antibodies.</a> J Exp Med. 210 (13), 2921-2937 (2013).</li><li>Jones, M. V., Huang, H., Calabresi, P. A., Levy, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenic+aquaporin-4+reactive+T+cells+are+sufficient+to+induce+mouse+model+of+neuromyelitis+optica.">Pathogenic aquaporin-4 reactive T cells are sufficient to induce mouse model of neuromyelitis optica.</a> Acta Neuropathol Commun. 3, 28 (2015).</li><li>Oertel, F. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microstructural+visual+system+changes+in+AQP4-antiboby-seropositive+NMOSD.">Microstructural visual system changes in AQP4-antiboby-seropositive NMOSD.</a> Neurol. Neuroimmunol. Neuroinflamm. 4, 72 (2017).</li><li>Vogel, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deletional+tolerance+prevents+AQP4+directed+autoimmunity+in+mice.">Deletional tolerance prevents AQP4 directed autoimmunity in mice.</a> Eur J Immunol. , (2017).</li><li>Zhang, H., Verkman, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Longitudinally+extensive+NMO+spinal+cord+pathology+produced+by+passive+transfer+of+NMO-IgG+in+mice+lacking+complement+inhibitor+CD59.">Longitudinally extensive NMO spinal cord pathology produced by passive transfer of NMO-IgG in mice lacking complement inhibitor CD59.</a> J Autoimmun. 53, 67-77 (2014).</li><li>Zeka, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aquaporin+4-specific+T+cells+and+NMO-IgG+cause+primary+retinal+damage+in+experimental+NMO/SD.">Aquaporin 4-specific T cells and NMO-IgG cause primary retinal damage in experimental NMO/SD.</a> Acta Neuropathol Commun. 4 (1), 82 (2016).</li><li>Felix, C. M., Levin, M. H., Verkman, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complement-independent+retinal+pathology+produced+by+intravitreal+injection+of+neuromyelitis+optica+immunoglobulin+G.">Complement-independent retinal pathology produced by intravitreal injection of neuromyelitis optica immunoglobulin G.</a> J Neuroinflammation. 13 (1), 275 (2016).</li><li>Zamvil, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T-cell+clones+specific+for+myelin+basic+protein+induce+chronic+relapsing+paralysis+and+demyelination.">T-cell clones specific for myelin basic protein induce chronic relapsing paralysis and demyelination.</a> Nature. 317 (6035), 355-358 (1985).</li><li>Zamvil, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Encephalitogenic+T+cell+clones+specific+for+myelin+basic+protein.+An+unusual+bias+in+antigen+recognition.">Encephalitogenic T cell clones specific for myelin basic protein. An unusual bias in antigen recognition.</a> J Exp Med. 162 (6), 2107-2124 (1985).</li><li>Kuchroo, V. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=B7-1+and+B7-2+costimulatory+molecules+activate+differentially+the+Th1/Th2+developmental+pathways:+application+to+autoimmune+disease+therapy.">B7-1 and B7-2 costimulatory molecules activate differentially the Th1/Th2 developmental pathways: application to autoimmune disease therapy.</a> Cell. 80 (5), 707-718 (1995).</li><li>Bettelli, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reciprocal+developmental+pathways+for+the+generation+of+pathogenic+effector+TH17+and+regulatory+T+cells.">Reciprocal developmental pathways for the generation of pathogenic effector TH17 and regulatory T cells.</a> Nature. 441 (7090), 235-238 (2006).</li></ol>

Sagan S.A., A. Cruz-Herranz, C.M. Spencer, P.P. Ho, L. Steinman, AJ Green e R.A. Sobel relatam sem divulgações. S.S. Zamvil é Editor-adjunto de Neurologia, neuroimunologia e Neuroinflammation e é membro do Conselho Consultivo para a sociedade internacional de Neuroimunologia. Ele serviu no Conselho Editorial do Journal of Clinical Investigation, The Journal de Imunologia e O jornal de ciências neurológicase tem sido um membro do Comité de revisão de concessão para os institutos nacionais de de Neuroimunologia clínicas de saúde (NIH) e tumores cerebrais (CNBT) estude a seção e a sociedade nacional de esclerose múltipla (NMSS). Ele tem servido como um consultor e recebeu honorários da Biogen Idec, EMD Serono, Genzyme, Novartis, Roche/Genentech e Teva Pharmaceuticals, Inc. e serviu ou serve nas placas de monitoramento de segurança de dados para Lilly, BioMS, Teva e Opexa Therapeutics. Atualmente, Dr. Zamvil recebe apoio de bolsa de pesquisa do NIH, NMSS, Fundação Maisin, Biogen e Celgene.

AQP4 foi identificado como o principal alvo no OMN IgG em 20053. Então, reconheceu-se que seria importante estabelecer um modelo animal AQP4-alvo de auto-imunidade CNS. Esse modelo pode ser útil para investigar como células específicas AQP4 T e B participarem no desenvolvimento de auto-imunidade CNS e para testar terapêutica candidato OMN. Embora a identificação da célula de T AQP4 específico epitopes em ratos do selvagem-tipo foi primeiramente relatada em 201013, respondendo a esses resumos de células T não causou doença clínica ou histológica14,17. A incapacidade de gerar um modelo de auto-imunidade CNS com base na reatividade imune a AQP4 permanecido um enigma até 2015, quando Jones, et al 25 descobriu que o doador AQP4 p135-153-carregado as pilhas de T do AQP4- / - ratos foram capazes de causar sinais clínicos e histológicos de auto-imunidade CNS em camundongos WT. De interesse, prevê-se para vincular MHC II (-Ab) com alta afinidade17AQP4 p135-153. Apenas um outra AQP4 sequência de aminoácidos, 201-220, prevê-se que vincule-Ab com afinidade elevada similar. Com efeito, observamos que AQP4 p135-153 e p201-220 ambos provocam proliferação robusta em AQP4- / -, mas não WT, ratos. Aqui, mostramos como pode isolar-se e expandir encephalitogenic Th17 AQP4 p135-153 - e p201-220-reativa as células T de AQP4- / - ratos. Quando transferidos para destinatários camundongos WT, células Th17 AQP4-reativo de doador induzida por paralisia, que foi acompanhada por infiltrações de células mononucleares de medula espinhal e o nervo óptico. Lesão do sistema visual aferente é bem conhecido em pacientes com NMOSD AQP4-seropositivos26. Aqui, observamos que a inflamação do nervo óptico induzida pelas células AQP4-reativo e Th17 MOG-reativa era distinta. Considerando que células Th17 AQP4 específicas induzidas perineuritis óptica, células Th17 MOG específicas induziram grave neurite óptica. Também descrevemos as técnicas usadas para monitorar a inflamação do nervo óptico induzida por células T MOG específicos e específicos AQP4 out serial. Outros investigadores agora devem ser capazes de aplicar os protocolos descritos aqui para avançar seus próprios estudos centrados-se mecanismos de patogenicidade de ATCA.
Um pode facilmente evitar três possíveis armadilhas em nosso protocolo. Primeira, adotiva transferência de ATCA requer o uso de células T específicas AQP4 de ratos de doador- / - AQP4. Especificamente, as células do doador WT AQP4 p135-153-específico T não causa ATCA no destinatários camundongos WT. Em segundo lugar, é importante realizar um "água-teste" com uma gota da emulsão CFA/peptídeo antes de imunização das AQP4- / - ratos (protocolo passo 1.5). A emulsão não deve dispersar na água quando é apropriado para a injeção s.c.. Se a emulsão dispersa, um deve misturar a emulsão mais uma vez, relaxar novamente e repita o teste de água. Por último, as pilhas de T antígeno-específicos registrados doador CNS induzem auto-imunidade CNS mais eficientemente do que as células T a descansar. Um deve Inspecione visualmente essas culturas sob o microscópio de luz antes da colheita as pilhas de T do doador para transferência adotiva. Dividir-se rapidamente as células pode formar clusters, que são facilmente identificados. Também, quando culturas contêm muitas células T ativadas, a mídia pode transição do rosa ao laranja ou até mesmo para o amarelo, devido à diminuição do pH. Um pode também avaliar ativação de células de doador AQP4-aprontadas linfonodo T para proliferação por 3H-timidina incorporação, conforme descrito na etapa 3 de protocolo.
Nossa descoberta de que o dois epitopos de célula AQP4 T patogênicos são (1) previu vincular MHC II com alta afinidade e (2) eliciar respostas proliferativas potentes em AQP4- / -, mas não WT, ratos sugerem que células T alvejando aqueles determinantes são normalmente controlada pela seleção negativa do Timo17. Os repertórios TCR utilizados para reconhecimento das AQP4 p135-153 e p201-220 em AQP4- / - ratos são exclusivos (Figura 2), que também é consistente com deleção clonal mediada por células epiteliais medulares do timo. Outros mecanismos de tolerogenic normalmente podem conter respostas imunes para AQP4. Na sequência do nosso relatório inicial17, outro grupo também demonstrou que AQP4 p201-220 contém um encephalitogenic determinante de célula T27. Quando ratos de célula T-deficiente α/β (TCRα- / -) foram reconstituídos com AQP4- / - CD4+ T células, foi possível eliciar uma resposta de célula T encephalitogenic AQP4 específicos, mas não uma específico AQP4 resposta humoral, que implica que, em Camundongos WT respostas de células B AQP4 específicas, semelhantes a respostas de célula T AQP4 específicos, estão sujeitos a seleção negativa. Na verdade, perda de axônios de medula espinhal e RGCs, que não foi observada em camundongos WT com ATCA induzida por células T específicas AQP4 sozinhos, pode exigir participação de patogenicidade anticorpos específicos AQP4. É claro que modelos de rato de auto-imunidade CNS AQP4-alvo continuará a evoluir à medida que aprendemos mais sobre os mecanismos de tolerogenic normalmente controla a imunidade específica AQP4 T cell e células B.
Outros modelos de auto-imunidade CNS AQP4-alvo também estão sendo desenvolvidos6,16,28,29,30. Cada um pode oferecer vantagens para estudar aspectos particulares que são relevantes para a patogênese OMN. As células T AQP4 específicas foram identificadas em WT ratos6,16,29. Essas células T específicas AQP4 causaram mudanças histológicas de auto-imunidade CNS mas, semelhante às observações em camundongos, pilhas de T AQP4 específicas do rato WT não causam sinais significativos da doença clínica. Portanto, os mecanismos de tolerância restringindo células T e células B respostas imunes específicas AQP4 em camundongos WT também são operacionais em ratos. Independentemente disso, um não deve subestimar o poder em usando modelos de rato para estudar os mecanismos envolvidos na patogênese da doença. A riqueza de mata-mata, transgênico e repórter ratos pode ser vantajosa. Deve-se reconhecer também que várias descobertas fundamentais em auto-imunidade foram feitas utilizando modelos EAE de rato. Por exemplo, a demonstração de que a célula T clones específicos para um autoantígeno pode mediar doença auto-imune31,32, identificação do papel das células T costimulation em auto-imunidade33 e a descoberta do caminho do desenvolvimento para a diferenciação de Th1734 foi primeiramente descrito usando modelos EAE de rato. Usando o modelo do rato de ATCA que temos desenvolvido, um agora tem os meios para estudar o desenvolvimento e regulamentação dos patogénicos específicos AQP4 respostas imunes in vivo, que deve fornecer importantes visões relacionadas à patogênese OMN.

Neuromielite Óptica (NMO) é uma sistema nervoso central (SNC) inflamatória desmielinizante doença auto-imune que provoca episódios recorrentes de paralisia e perda visual, levando a incapacidade neurológica permanente1. NMO é atualmente considerada principalmente uma doença auto-imune humoral2 está associada com anticorpos (Igs) segmentação aquaporina 4 (AQP4), um canal de água abundantemente expressado em astrócitos3,4. No entanto, inflamação do CNS é um pré-requisito para a entrada de CNS de AQP4 Ig5,6. Assim, não foi possível estabelecer um modelo de NMO por transferência de anti-AQP4 Igs sozinho. As conclusões que (1) patogénicos específicos AQP4 Igs em pacientes OMN são IgG11,2, um Ig de célula T-dependente subclasse7 (2) T células são identificadas no OMN lesões8,9 (3) NMO é associado com determinados genes MHC II (por exemplo, HLA-DR17 (DRB1 * 0301))10e (4) proinflammatory DR AQP4-reativa-restrito Th17 células são expandidas no OMN pacientes11,12 todos indicam que células T AQP4 específicos têm um papel fundamental na patogênese da OMN. Assim, é importante desenvolver modelos animais para determinar como as células T específicas AQP4 poderão contribuir para a patogênese OMN.
Há vários anos, múltiplos epitopos de célula T AQP4 foram identificados no selvagem-tipo (WT) ratos13,14 e ratos15. Enquanto observou-se que as células T reativas-AQP4 podem induzir inflamação opticospinal em ingênuo ratos destinatário15,16, significativos sinais clínicos de doença do CNS não foram observados. Da mesma forma, direcionar a imunização de camundongos WT com peptídeos contendo AQP4 T célula epitopos14,17, ou transferência de células proinflammatory T alvejando aqueles determinantes17, não causar sinais clínicos ou histológicos evidências de auto-imunidade CNS.
Recentemente, ele observou-a imunização de camundongos C57BL/6 AQP4 deficiente (AQP4- / -) com AQP4 peptídeo (p) 135-153 ou p201-220, dois determinantes previstos para vincular MHC II (-Ab) com alta afinidade18, suscitou forte CD4 + De respostas de células T17. Em contrapartida, estes dois peptídeos suscitou apenas modestas respostas proliferativas em camundongos WT. Além disso, o repertório de células T do receptor (TCR) usado para reconhecimento destes determinantes por pilhas de T do AQP4- / - ratos era único. Coletivamente, esses achados indicam que células T reconhecimento das AQP4 é regulamentado pela seleção negativa do timo. AQP4 p135-153-p201-220-específico ou células Th17 de ratos de doador- / - AQP4 induzida por paralisia em quase 100% dos ratos WT destinatários ingênuo; Isto foi associado com opticospinal infiltrados de células T, células B e monócitos. Serial opticospinal tomografia de coerência (OCT) demonstrou o envolvimento do sistema visual dinâmico. Ratos com autoimunidade mediada por células T CNS AQP4-alvo (ATCA) recuperaram de paralisia e lesão do sistema visual. Em contraste com a EAE induzida pela mielina oligodendrocyte glicoproteína (MOG) p35-55-T células específicas, que levaram à doença clínica persistente, ATCA induzida por células T sozinhos não esteve associada a perda axonal ou redução nas células ganglionares da retina (RGCs). Nossos resultados demonstraram claramente que existem múltiplos determinantes de célula T AQP4 patogénicos. Este novo modelo de ATCA é útil para estudar os mecanismos para controlar o desenvolvimento de patogénicos específicos AQP4 T células, aprendendo como essas células induzem inflamação CNS e como eles podem cooperar com células específicas AQP4 B e anticorpos para promover a patogênese OMN .
No presente relatório, nós descrevemos os protocolos usados para induzir e avaliar ATCA induzida por células T. Começamos com as técnicas utilizadas para imunização, cultura de células T e Th17 polarização para gerar patogénicos específicos AQP4 T células, análise de citometria de fluxo para confirmar a polarização e transferência adoptiva essas células T. Em seguida descreveremos métodos utilizados para avaliação clínica e histológica da doença e o uso da OCT serial para monitorar a lesão do sistema visual em ratos do destinatários.

<table width="1066">
	<colgroup>
		<col style="width:246pt" width="328" />
		<col style="width:162pt" width="216" />
		<col style="width:104pt" width="139" />
		<col style="width:287pt" width="383" />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">M. tuberculosis H37Ra</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">BD Difco</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">231141</td>
			<td class="xl22" style="width:287pt" width="383">Dessicated, killed M. tuberculosis</td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">Incomplete Freund&#39;s Adjuvant</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">BD Difco</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">263910</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">AQP4 peptide p135-153</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">Genemed</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">Custom Synthesis</td>
			<td class="xl22">Peptide sequence: LVTPPSVVGGLGVTMVHGN</td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">AQP4 peptide p201-220</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">Genemed</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">Custom Synthesis</td>
			<td class="xl22">Peptide sequence: HLFAINYTGASMNPARSFGP</td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">MOG peptide p35-55</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">Genemed / Auspep</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">Custom Synthesis</td>
			<td class="xl22">Peptide sequence: MEVGWYRSPFSRVVHLYRNGK</td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">3-way Stopcock</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">Kimble</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">420163-4503</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">HyClone Fetal Bovine Serum (Characterized)</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">GE Healthcare Life Sciences</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">SH30071</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">Recombinant Mouse IL-23</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">R&#38;D Systems (BioTechne)</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">1887-ML</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">Recombinant Mouse IL-6</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">R&#38;D Systems (BioTechne)</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">406-ML</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">Recombinant Mouse IL-12</td>
			<td class="xl23" style="width:162pt" width="216">R&#38;D Systems (BioTechne)</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">419-ML</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="25" style="height:18.75pt">
			<td class="xl19" height="25" style="width:246pt;height:18.75pt" width="328">Thymidine [Methyl-3H]</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">PerkinElmer</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">NET027</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">Glass Fiber Filtermats</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">PerkinElmer</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">1450-421</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">Anti-mouse antibodies</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">eBioscience (Affymetrix)</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">[various]</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">Anti-mouse TCR V&#946; Screening Panel</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">BD Biosciences</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">557004</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">LIVE/DEAD Fixable Dead Cell Stain</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">ThermoFisher Scientific</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">[various]</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">Paraformaldehyde (16%)</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">Electron Microscopy Sciences</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">15710</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="42" style="height:31.5pt">
			<td class="xl19" height="42" style="width:246pt;height:31.5pt" width="328">Fixation/Permeabilization Solution Kit with GolgiPlug</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">BD Biosciences</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">555028</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA)</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">Sigma-Aldrich</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">P8139</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">Iomomycin (calcium salt)</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">Sigma-Aldrich</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">I0634</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">Pertussis Toxin from B. pertussis</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">List Biological Laboratories</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">181</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">10% Formalin</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">VWR</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">89370-094</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">Variable-Flow Peristaltic Pump</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">Fisher Scientific</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">13-876-2</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">Foam Biopsy Pads, Rectangular</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">Fisher Scientific</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">22-038-221</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">Isothesia (isoflurane, USP)</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">Henry Schein Animal Health</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">050033</td>
			<td class="xl22">NDC : 11695-0500-2</td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">Tropicamide Ophthalmic Solution, USP (1%)</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">Akorn</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139"></td>
			<td class="xl22">NDC: 17478-102-12</td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">Spectralis Diagnostic Imaging Platform</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">Heidelberg Engineering</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139"></td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

induction of paralysis and visual system injury in mice by t cells specific for neuromyelitis optica autoantigen aquaporin-4

Enquanto é reconhecido que aquaporina-4 (AQP4)-células T e anticorpos específicos participarem na patogênese da Neuromielite Óptica (NMO), uma doença desmielinizante autoimune do sistema nervoso central humano (CNS), a criação de um modelo AQP4-alvo com ambos manifestações clínicas e histológicas de auto-imunidade CNS provou-se um desafio. Imunização de camundongos (WT) de tipo selvagem com peptídeos AQP4 suscitou a proliferação de células T, embora essas células T não poderiam transferir a doença aos ratos destinatário ingênuo. Recentemente, dois romance epitopos de célula T AQP4, peptídeo (p) 135-153 p201-220, foram identificadas e quando estudar respostas imunes para AQP4 em camundongos deficientes em AQP4 (AQP4- / -), sugerindo a reatividade de células T para estes resumos é normalmente controlado pelo tímicos seleção negativa. AQP4- / - Th17 polarizadas células T aprontadas para paralisia induzida p135-153 ou p201-220 em destinatários camundongos WT, que foi associada predominantemente leptomeníngeo inflamação da medula espinhal e nervos ópticos. Nervos ópticos circundantes de inflamação e envolvimento das camadas internas da retina (IRL) foram manifestados por alterações na tomografia de coerência óptica serial (OCT). Aqui, podemos ilustrar as abordagens usadas para criar este modelo novo na vivo de auto-imunidade CNS AQP4-alvo (ATCA), que agora pode ser empregada para estudar os mecanismos que permitem o desenvolvimento de patogénicos específicos AQP4 T células e como eles podem cooperar com B células na patogênese OMN.

Neste protocolo, usamos células de doador T de AQP4 C57BL/6- / - ratos. Imunização subcutânea destes ratos com AQP4 p135-153 ou p201-220, que contêm resumos de patogenicidade de célula T, suscitou respostas proliferativas forte T cell na drenagem dos gânglios linfáticos (Figura 1), Considerando que estes dois peptídeos induzido muito mais fraca célula T proliferação em camundongos WT. Em comparação, a imunização com AQP4 p91-110, que contém um não-patogênicas AQP4 T célula determinante13, ou MOG p35-55, um peptídeo de mielina que ativa as células T que causam encefalomielite auto-imune experimental (EAE)22,23 ,24, induzidas pelo semelhante magnitude da proliferação de células T em AQP4- / - e camundongos WT. Análise da utilização de TCR pela coloração de citometria de fluxo do Vβ individuais ou famílias Vβ, demonstrou que células p135-153-p201-220-específicas e T de AQP4- / - ratos utilizaram exclusivos repertórios TCR. Hiperproliferação seletiva de AQP4 p135-153 e p201-220 em AQP4- / - ratos, bem como a utilização exclusiva de TCR (Figura 2), indicado que patogenicidade de célula T respostas a estes determinantes normalmente é regulada pela negativa do Timo seleção, ressaltando a importância para o uso de células de doador T- / - AQP4 neste protocolo.
Antes da transferência adoptiva para indução de ATCA, linfonodo células de ratos de peptídeo-aprontadas AQP4 foram cultivadas in vitro em condições Th17 - ou de polarização Th1 para três dias. O grau de polarização do doador CD4+ T células foi confirmada por citocinas intracelulares coloração (ICS) e medida por citometria de fluxo (Figura 3). Ingênua destinatários ratos foram injetados por via intravenosa com 2 x 107 doador AQP4 peptídeo específico as células T. Depois de aproximadamente seis dias, quase 100% dos ratos destinatários desenvolvido sinais clínicos de doença auto-imune do CNS, incluindo paralisia flácida de cauda e membro posterior (Figura 4). Th17 polarizado as células T AQP4 específicas induzidas por doença clínica mais grave do que as células Th1-polarizada AQP4 específico T. Um rato representativo que recebeu Th17 AQP4-peptídeo específico e desenvolvido paralisia completa dos membros de hind (paraplegia) é mostrado no vídeo 1. Em contraste com os ratos que desenvolveram EAE após a administração de células Th17 MOG específicos, ratos destinatários recuperaram de doença clínica induzida pelas células Th17 AQP4 específicos. Quanto EAE induzida pelas células de Th17 MOG p35-55-específico, doença clínica induzida por AQP4 p135-153-específicos ou células de Th17 p201-220-específico foi associado com a infiltração de células mononucleares no parênquima do CNS e meninges (Figura 5). As lesões foram mais abundantes em meninges do que no parênquima para auto-imunidade CNS induzida pelas células Th17 AQP4 específicos.
Envolvimento do nervo óptico foi demonstrado pela avaliação histológica e pelo serial OCT. AQP4 específicos e Th17 MOG específicas células ambos inflamação induzida nervo óptico, que foi caracterizado pela presença de células mononucleares. Considerando que células Th17 AQP4 específicos causaram perineuritis óptica, células Th17 MOG específicas induziram grave neurite óptica (Figura 5). Usando a OCT serial, inflamação do nervo óptico era evidente por inchaço e aumento da espessura da camada interna da retina (IRL) para doença clínica induzida por AQP4 específicos ou células Th17 MOG específico (Figura 6). Para auto-imunidade induzida por AQP4 Th17 CNS, espessura IRL retornada à linha de base como ratos recuperou de doença clínica. Em contraste, persistência da EAE induzida por MOG específicos Th17 correspondia com IRL afinamento e, como temos demonstrado anteriormente17, foi associada com a perda de células ganglionares da retina.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56185/56185fig1.jpg"> 
Figura 1 : AQP4 p135-153 e p201-220 eliciam robusto T cell proliferação em AQP4- / - ratos, mas não os ratos WT. Os ratos foram imunizados s.c. com os peptídeos indicados no CFA. Onze dias depois, gânglios linfáticos foram removidos e então cultivados com ou sem antígeno, ou com o peptídeo usado para a imunização. Proliferação foi medida pela incorporação de 3H-timidina (média ± SEM, representativa de 5 experiências). <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56185/56185fig1large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56185/56185fig2.jpg"> 
Figura 2 : Células T específicas AQP4 de AQP4- / - ratos utilizam exclusivos repertórios TCR. AQP4- / - e WT ratos foram imunizados com os peptídeos indicados. Onze dias depois, linfonodos foram removidos e cultivados com peptídeo usado para a imunização. As células foram colhidas. Utilização de TCR Vβ foi analisada por citometria de fluxo (quer dizer SEM ±, n = 5). <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56185/56185fig2large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56185/56185fig3.jpg"> 
Figura 3 : Proinflammatory polarização das células do doador específico AQP4 T. Onze dias após a imunização com AQP4 p135-153 ou p201-220, células do linfonodo foram colhidas e cultivadas com o peptídeo usado para imunização em condições não-polarização, condições de polarização Th1 ou Th17. Polarização de Th17 ou Th1 foi examinada por citometria de fluxo e ICS para IL-17 ou IFN-γ, respectivamente. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56185/56185fig3large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56185/56185fig4.jpg"> 
Figura 4 : Células Th17 polarizado AQP4 específico T induzem paralisia em camundongos destinatários WT. Destinatários camundongos WT receberam 2 x 107 doador polarizado Th17 AQP4 p135-153 ou as células T específicas p201-220 AQP4- / - ratos. Th17 polarizado pilhas de T de MOG específicos serviram como controle positivo. Os resultados são representativos de 8 experimentos (n = 5/grupo). * p &#60; 0.05, * * p &#60; 0,01, * * * p &#60; 0.001. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56185/56185fig4large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56185/56185fig5.jpg"> 
Figura 5 : Células Th17 AQP4 específicos induzem inflamação opticospinal em camundongos WT. Ratos de destinatários receberam 2 x 107 doador Th17 AQP4 p135-153 - ou p201-220-aprontadas Th17 nas células de AQP4- / - ratos ou Th17 MOG p35-55-específicos e sacrificaram-se 10 dias depois. Tecidos da medula espinhal e do nervo óptico foram preparados e corados com H &#38; E/LFB para a evidência de inflamação e desmielinização, respectivamente. Os resultados são representativos de 5 ratos/grupo. Barra de escala = 50 µm. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56185/56185fig5large.jpg" target="_blank">clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56185/56185fig6.jpg"> 
Figura 6 : Inflamação do nervo óptico induzida pelas células Th17 AQP4 específicas pode ser monitorizada por Oct da retina longitudinal Destinatários camundongos WT receberam 2 x 107 doador polarizado Th17 AQP4 p201-220-específicos ou pilhas de T do MOG p35-55-específicos no dia 0. Eles foram examinados pelo OCT no dia 0 (antes da administração de células T) e em seguida nos dias 4, 7, 8, 9, 10, 11 14 e 21. Espessura da IRL foi medido (média ± SEM). As estatísticas indicam uma comparação com controle de ingênuo. Os resultados são representativos de 3 experimentos (5 ratos/grupo). * p &#60; 0.05, * * p &#60; 0,01, * * * p &#60; 0.001. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56185/56185fig6large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>

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Induction of Paralysis and Visual System Injury in Mice by T Cells Specific for Neuromyelitis Optica Autoantigen Aquaporin-4

Aqui, apresentamos um protocolo para induzir paralisia e opticospinal inflamação por transferência da aquaporina 4 (AQP4)-células T específicas de AQP4- / - ratos em camundongos WT. Além disso, demonstramos como usar a tomografia de coerência óptica serial para monitorar a disfunção do sistema visual.

Indução de paralisia e lesão do sistema Visual em camundongos por específicos de células T para Neuromielite Óptica Autoantigen Aquaporin-4

While it is recognized that aquaporin-4 (AQP4)-specific T cells and antibodies participate in the pathogenesis of neuromyelitis optica (NMO), a human ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Retroviral Transduction of T-cell Receptors in Mouse T-cells

Transdução retroviral de receptor de células T no rato células T

T-cell receptors (TCRs) play a central role in the immune system. TCRs on T-cell surfaces can specifically recognize peptide antigens presented by antigen ...

Imunologia e Infecção

Induction of Alloantigen-specific Anergy in Human Peripheral Blood Mononuclear Cells by Alloantigen Stimulation with Co-stimulatory Signal Blockade

Indução de aloantígenos específicos de anergia em células mononucleares do sangue periférico por Estimulação com aloantígenos Co-estimulatórias bloqueio de sinal

Allogeneic hematopoietic stem cell transplantation (AHSCT) offers the best chance of cure for many patients with congenital and acquired hematologic ...

Determining Optimal Cytotoxic Activity of Human Her2neu Specific CD8 T cells by Comparing the Cr51 Release Assay to the xCELLigence System

Determinando a atividade citotóxica Optimal específicos de células CD8 Her2neu Humanos T, comparando a Cr51 Ensaio de Libertação do Sistema xCELLigence

Cytotoxic CD8 T cells constitute a subgroup of T  cells that are capable of inducing the death of infected or malignant host  cells1. These cells express ...

piggyBac Transposon System Modification of Primary Human T Cells

piggyBac Transposon System Modification of Primary Human T Cells

piggyBac modificação do sistema Transposon de células T primárias Humanos

The piggyBac transposon system is naturally active, originally derived from the cabbage looper moth1,2. This non-viral system is plasmid based, most ...

Peptide:MHC Tetramer-based Enrichment of Epitope-specific T cells

Péptido: Enriquecimento tetrâmero com base MHC das células T específicas para epitopos

A  basic necessity for researchers studying adaptive immunity with in vivo experimental models is an  ability to identify T cells based on their T cell ...

Accelerated Type 1 Diabetes Induction in Mice by Adoptive Transfer of Diabetogenic CD4+ T Cells

Accelerated Diabetes Tipo 1 Indução em Ratos por transferência adotiva de diabetogênicos TCD4 +

The nonobese diabetic (NOD) mouse spontaneously develops autoimmune diabetes after 12 weeks of age and is the most extensively studied animal model of ...

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Indução de Murino inflamação intestinal por transferência adotiva de Effector CD4<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; Alta</sup&gt; Células T em imunodeficientes Mice

There are many different animal models available for studying the pathogenesis of human inflammatory bowel diseases (IBD), each with its own advantages ...

Automated Cell Enrichment of Cytomegalovirus-specific T cells for Clinical Applications using the Cytokine-capture System

As células T de enriquecimento de células automatizado de citomegalovírus específico-para aplicações clínicas usando o Sistema de captura de citocinas

The adoptive transfer of pathogen-specific T cells can be used to prevent and treat opportunistic infections such as cytomegalovirus (CMV) infection ...

Analysis of Simian Immunodeficiency Virus-specific CD8+ T-cells in Rhesus Macaques by Peptide-MHC-I Tetramer Staining

Analysis of Simian Immunodeficiency Virus-specific CD8+ T-cells in Rhesus Macaques by Peptide-MHC-I Tetramer Staining

Análise de células T CD8 específicas do vírus da imunodeficiência símia<sup&gt; +</sup&gt; Células-T em Rhesus Macaques por Peptide-MHC-I tetrâmero coloração

Peptide-major histocompatibility complex class I (pMHC-I) tetramers have been an invaluable tool to study CD8+ T-cell responses. Because these reagents ...

Evaluation of Zika Virus-specific T-cell Responses in Immunoprivileged Organs of Infected Ifnar1-/- Mice

Evaluation of Zika Virus-specific T-cell Responses in Immunoprivileged Organs of Infected Ifnar1-/- Mice

Avaliação das respostas de células T Zika vírus específicos em órgãos Immunoprivileged de infectados Ifnar1- / - ratos

The Zika virus (ZIKV) can induce inflammation in immunoprivileged organs (e.g., the brain and testis), leading to the Guillain-Barr&#233; syndrome and ...