Name: induction of paralysis and visual system injury in mice by t cells specific for neuromyelitis optica autoantigen aquaporin-4
Uploaded: 2017-08-21T15:00:00
Duration: 9 min 29 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Induction of Paralysis and Visual System Injury in Mice by T Cells Specific for Neuromyelitis Optica Autoantigen Aquaporin-4 at JoVE.com

Se prestó apoyo a S.S.Z. por el Instituto Nacional de salud (AI073737 to1 y to1 NS092835-01), sociedad nacional de esclerosis múltiple (4768 RG y RG 5179 5180 RG), Fundación de Maisin y Jackson Guthy Charitable Foundation.

<ol>
	<li>Hardy, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atypical+inflammatory+demyelinating+syndromes+of+the+CNS.">Atypical inflammatory demyelinating syndromes of the CNS.</a> Lancet Neurol. 15 (9), 967-981 (2016).</li><li>Lennon, V. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+serum+autoantibody+marker+of+neuromyelitis+optica:+distinction+from+multiple+sclerosis.">A serum autoantibody marker of neuromyelitis optica: distinction from multiple sclerosis.</a> Lancet. 364 (9451), 2106-2112 (2004).</li><li>Lennon, V. A., Kryzer, T. J., Pittock, S. J., Verkman, A. S., Hinson, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IgG+marker+of+optic-spinal+multiple+sclerosis+binds+to+the+aquaporin-4+water+channel.">IgG marker of optic-spinal multiple sclerosis binds to the aquaporin-4 water channel.</a> J Exp Med. 202 (4), 473-477 (2005).</li><li>Zamvil, S. S., Slavin, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Does+MOG+Ig-positive+AQP4-seronegative+opticospinal+inflammatory+disease+justify+a+diagnosis+of+NMO+spectrum+disorder.">Does MOG Ig-positive AQP4-seronegative opticospinal inflammatory disease justify a diagnosis of NMO spectrum disorder.</a> Neurol Neuroimmunol Neuroinflamm. 2 (1), 62 (2015).</li><li>Bennett, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrathecal+pathogenic+anti-aquaporin-4+antibodies+in+early+neuromyelitis+optica.">Intrathecal pathogenic anti-aquaporin-4 antibodies in early neuromyelitis optica.</a> Ann Neurol. 66 (5), 617-629 (2009).</li><li>Bradl, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuromyelitis+optica:+pathogenicity+of+patient+immunoglobulin+in+vivo.">Neuromyelitis optica: pathogenicity of patient immunoglobulin in vivo.</a> Ann Neurol. 66 (5), 630-643 (2009).</li><li>Nurieva, R. I., Chung, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+the+development+and+function+of+T+follicular+helper+cells.">Understanding the development and function of T follicular helper cells.</a> Cell Mol Immunol. 7 (3), 190-197 (2010).</li><li>Lucchinetti, C. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pathology+of+an+autoimmune+astrocytopathy:+lessons+learned+from+neuromyelitis+optica.">The pathology of an autoimmune astrocytopathy: lessons learned from neuromyelitis optica.</a> Brain Pathol. 24 (1), 83-97 (2014).</li><li>Zekeridou, A., Lennon, V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aquaporin-4+autoimmunity.">Aquaporin-4 autoimmunity.</a> Neurol Neuroimmunol Neuroinflamm. 2 (4), 110 (2015).</li><li>Brum, D. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HLA-DRB+association+in+neuromyelitis+optica+is+different+from+that+observed+in+multiple+sclerosis.">HLA-DRB association in neuromyelitis optica is different from that observed in multiple sclerosis.</a> Mult Scler. 16 (1), 21-29 (2010).</li><li>Varrin-Doyer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aquaporin+4-specific+T+cells+in+neuromyelitis+optica+exhibit+a+Th17+bias+and+recognize+Clostridium+ABC+transporter.">Aquaporin 4-specific T cells in neuromyelitis optica exhibit a Th17 bias and recognize Clostridium ABC transporter.</a> Ann Neurol. 72 (1), 53-64 (2012).</li><li>Vaknin-Dembinsky, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T-cell+responses+to+distinct+AQP4+peptides+in+patients+with+neuromyelitis+optica+(NMO).">T-cell responses to distinct AQP4 peptides in patients with neuromyelitis optica (NMO).</a> Mult Scler Relat Disord. 6, 28-36 (2016).</li><li>Nelson, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunodominant+T+cell+determinants+of+aquaporin-4,+the+autoantigen+associated+with+neuromyelitis+optica.">Immunodominant T cell determinants of aquaporin-4, the autoantigen associated with neuromyelitis optica.</a> PLoS One. 5 (11), 15050 (2010).</li><li>Kalluri, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+characterization+of+aquaporin-4+specific+T+cells:+towards+a+model+for+neuromyelitis+optica.">Functional characterization of aquaporin-4 specific T cells: towards a model for neuromyelitis optica.</a> PLoS One. 6 (1), 16083 (2011).</li><li>Pohl, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenic+T+cell+responses+against+aquaporin+4.">Pathogenic T cell responses against aquaporin 4.</a> Acta Neuropathol. 122 (1), 21-34 (2011).</li><li>Zeka, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+encephalitogenic+aquaporin+4-specific+T+cells+and+NMO-IgG+jointly+orchestrate+lesion+location+and+tissue+damage+in+the+CNS.">Highly encephalitogenic aquaporin 4-specific T cells and NMO-IgG jointly orchestrate lesion location and tissue damage in the CNS.</a> Acta Neuropathol. 130 (6), 783-798 (2015).</li><li>Sagan, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tolerance+checkpoint+bypass+permits+emergence+of+pathogenic+T+cells+to+neuromyelitis+optica+autoantigen+aquaporin-4.">Tolerance checkpoint bypass permits emergence of pathogenic T cells to neuromyelitis optica autoantigen aquaporin-4.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 113 (51), 14781-14786 (2016).</li><li>Vita, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+immune+epitope+database+(IEDB)+3.0.">The immune epitope database (IEDB) 3.0.</a> Nucleic Acids Res. 43, 405-412 (2015).</li><li>Harrell, M. I., Iritani, B. M., Ruddell, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymph+node+mapping+in+the+mouse.">Lymph node mapping in the mouse.</a> J Immunol Methods. 332 (1-2), 170-174 (2008).</li><li>Ivanova, E., Toychiev, A. H., Yee, C. W., Sagdullaev, B. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+protocol+for+retinal+wholemount+preparation+for+imaging+and+immunohistochemistry.">Optimized protocol for retinal wholemount preparation for imaging and immunohistochemistry.</a> J Vis Exp. (82), e51018 (2013).</li><li>Cruz-Herranz, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+APOSTEL+recommendations+for+reporting+quantitative+optical+coherence+tomography+studies.">The APOSTEL recommendations for reporting quantitative optical coherence tomography studies.</a> Neurology. 86 (24), 2303-2309 (2016).</li><li>Mendel, I., Kerlero de Rosbo, N., Ben-Nun, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+myelin+oligodendrocyte+glycoprotein+peptide+induces+typical+chronic+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+in+H-2b+mice:+fine+specificity+and+T+cell+receptor+V+beta+expression+of+encephalitogenic+T+cells.">A myelin oligodendrocyte glycoprotein peptide induces typical chronic experimental autoimmune encephalomyelitis in H-2b mice: fine specificity and T cell receptor V beta expression of encephalitogenic T cells.</a> Eur J Immunol. 25 (7), 1951-1959 (1995).</li><li>Shetty, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunodominant+T-cell+epitopes+of+MOG+reside+in+its+transmembrane+and+cytoplasmic+domains+in+EAE.">Immunodominant T-cell epitopes of MOG reside in its transmembrane and cytoplasmic domains in EAE.</a> Neurol Neuroimmunol Neuroinflamm. 1 (2), 22 (2014).</li><li>Molnarfi, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MHC+class+II-dependent+B+cell+APC+function+is+required+for+induction+of+CNS+autoimmunity+independent+of+myelin-specific+antibodies.">MHC class II-dependent B cell APC function is required for induction of CNS autoimmunity independent of myelin-specific antibodies.</a> J Exp Med. 210 (13), 2921-2937 (2013).</li><li>Jones, M. V., Huang, H., Calabresi, P. A., Levy, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenic+aquaporin-4+reactive+T+cells+are+sufficient+to+induce+mouse+model+of+neuromyelitis+optica.">Pathogenic aquaporin-4 reactive T cells are sufficient to induce mouse model of neuromyelitis optica.</a> Acta Neuropathol Commun. 3, 28 (2015).</li><li>Oertel, F. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microstructural+visual+system+changes+in+AQP4-antiboby-seropositive+NMOSD.">Microstructural visual system changes in AQP4-antiboby-seropositive NMOSD.</a> Neurol. Neuroimmunol. Neuroinflamm. 4, 72 (2017).</li><li>Vogel, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deletional+tolerance+prevents+AQP4+directed+autoimmunity+in+mice.">Deletional tolerance prevents AQP4 directed autoimmunity in mice.</a> Eur J Immunol. , (2017).</li><li>Zhang, H., Verkman, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Longitudinally+extensive+NMO+spinal+cord+pathology+produced+by+passive+transfer+of+NMO-IgG+in+mice+lacking+complement+inhibitor+CD59.">Longitudinally extensive NMO spinal cord pathology produced by passive transfer of NMO-IgG in mice lacking complement inhibitor CD59.</a> J Autoimmun. 53, 67-77 (2014).</li><li>Zeka, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aquaporin+4-specific+T+cells+and+NMO-IgG+cause+primary+retinal+damage+in+experimental+NMO/SD.">Aquaporin 4-specific T cells and NMO-IgG cause primary retinal damage in experimental NMO/SD.</a> Acta Neuropathol Commun. 4 (1), 82 (2016).</li><li>Felix, C. M., Levin, M. H., Verkman, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complement-independent+retinal+pathology+produced+by+intravitreal+injection+of+neuromyelitis+optica+immunoglobulin+G.">Complement-independent retinal pathology produced by intravitreal injection of neuromyelitis optica immunoglobulin G.</a> J Neuroinflammation. 13 (1), 275 (2016).</li><li>Zamvil, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T-cell+clones+specific+for+myelin+basic+protein+induce+chronic+relapsing+paralysis+and+demyelination.">T-cell clones specific for myelin basic protein induce chronic relapsing paralysis and demyelination.</a> Nature. 317 (6035), 355-358 (1985).</li><li>Zamvil, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Encephalitogenic+T+cell+clones+specific+for+myelin+basic+protein.+An+unusual+bias+in+antigen+recognition.">Encephalitogenic T cell clones specific for myelin basic protein. An unusual bias in antigen recognition.</a> J Exp Med. 162 (6), 2107-2124 (1985).</li><li>Kuchroo, V. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=B7-1+and+B7-2+costimulatory+molecules+activate+differentially+the+Th1/Th2+developmental+pathways:+application+to+autoimmune+disease+therapy.">B7-1 and B7-2 costimulatory molecules activate differentially the Th1/Th2 developmental pathways: application to autoimmune disease therapy.</a> Cell. 80 (5), 707-718 (1995).</li><li>Bettelli, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reciprocal+developmental+pathways+for+the+generation+of+pathogenic+effector+TH17+and+regulatory+T+cells.">Reciprocal developmental pathways for the generation of pathogenic effector TH17 and regulatory T cells.</a> Nature. 441 (7090), 235-238 (2006).</li></ol>

Sagan S.A. A. Cruz-Herranz, C.M. Spencer, P.P. Ho, L. Steinman, A.J. Green y R.A. Sobel no informan revelaciones. S.S. Zamvil es Editor adjunto de Neurología, Neuroinmunología y neuroinflamación y es miembro del Comité Consultivo de la sociedad internacional de Neuroinmunología. Él ha servido en el Consejo Editorial de la Revista de investigación clínica, El diario de la inmunología y La revista de ciencias neurológicasy ha sido miembro del Comité de examen de beca de los institutos nacionales de Neuroinmunología clínica de la salud (NIH) y tumores de cerebro (CNBT) estudio de la sección y la sociedad nacional de esclerosis múltiple (NEM). Él ha servido como consultor y recibió honorarios de Biogen Idec, EMD Serono, Genzyme, Novartis, Roche/Genentech y Teva Pharmaceuticals, Inc., ha servido y sirve en tableros de control de seguridad datos de Lilly, BioMS, Teva y terapéutica de Opexa. Actualmente, Dr. Zamvil recibe apoyo de la beca de investigación de los NIH, NEM, la Fundación de Maisin, Biogen y Celgene.

AQP4 fue identificado como el objetivo principal de IgG de la NMO en 20053. Entonces, se reconoció que sería importante establecer un modelo animal de AQP4-dirigido de la autoinmunidad de la CNS. Tal modelo podría ser útil para investigar cómo las células T específicas de AQP4 y B participan en el desarrollo de la autoinmunidad de la CNS y prueba terapéutica de candidato para NMO. Aunque el reconocimiento específico de AQP4 T epítopos de tipo salvaje ratones primero fue divulgado en 201013, las células T en respuesta a los epitopos no causó enfermedad clínico o histológico14,17. La incapacidad para generar un modelo de autoinmunidad CNS basado en la reactividad inmune a AQP4 seguía siendo un enigma hasta 2015 cuando Jones, et al. 25 descubrió que el donante AQP4 p135-153-preparado las células T de ratones- / - AQP4 eran capaces de provocar signos clínicos e histologic de la autoinmunidad de la CNS en los ratones WT. De interés, AQP4 p135-153 se predice para MHC II (I-Ab) se unen con alta afinidad17. Solamente un otro AQP4 secuencia de aminoácidos, 201-220, se prevé enlazar-Ab con alta afinidad similar. De hecho, observamos AQP4 p135-153 y p201-220 ambos provocan proliferación sólida de AQP4- / -, pero no peso, ratones. Aquí, hemos mostrado cómo se puede aislar y ampliar encephalitogenic Th17 AQP4 p135-153 y p201-220-reactiva las células de T de los ratones- / - AQP4. Cuando transfieren a ratones receptores WT, las células Th17 AQP4 reactiva donante inducida por parálisis, que fue acompañada por la célula mononuclear infiltra en la médula espinal y del nervio óptico. Lesión del sistema visual aferente es bien conocido en pacientes con AQP4 seropositivos NMOSD26. Aquí, observamos que la inflamación del nervio óptico inducida por las células Th17 MOG-reactiva y AQP4 reactivo era distinta. Mientras que las células Th17 específicas AQP4 inducen perineuritis óptica, las células Th17 MOG-específicos inducidos por neuritis óptica severa. También hemos descrito las técnicas utilizadas para controlar la inflamación del nervio óptico inducida por células específicas de AQP4 y T MOG-específicos por OCT serial. Otros investigadores ahora deben ser capaces de aplicar los protocolos descritos aquí para avanzar en sus estudios se centró en los mecanismos patogénicos de ATCA.
Fácilmente uno puede evitar tres escollos potenciales en nuestro protocolo. Primera transferencia adoptiva de ATCA requiere uso AQP4 específicos de células de T de los ratones de AQP4- / - donante. En concreto, las células donantes WT AQP4 p135-153-específico T no causó ATCA en receptoras ratones WT. En segundo lugar, es importante realizar una "prueba de agua" con una gota de la emulsión de péptido/CFA antes de inmunización de AQP4- / - ratones (protocolo paso 1.5). La emulsión no debe dispersarse en agua cuando es conveniente para la inyección s.c.. Si la emulsión dispersa, uno debe mezclar la emulsión una vez más, descansar otra vez y repita la prueba de agua. Por último, las células de T del antígeno específico activado donantes CNS inducen autoinmunidad CNS más eficientemente que la reclinación de las células T. Uno debe inspeccionar visualmente las culturas bajo el microscopio de luz antes de la cosecha de las células de T del donante para la transferencia adoptiva. Rápidamente dividiendo las células puede formar racimos, que son fácilmente identificables. También, cuando las culturas contienen muchas células T activadas, los medios de comunicación pueden transición de color rosado naranja o amarillo, debido a la reducción en el pH. También se puede evaluar activación de las células de ganglio AQP4 preparado T donantes de proliferación por la incorporación de 3H-timidina, tal como se describe en el protocolo de paso 3.
El descubrimiento que los epitopos de células T AQP4 patógenos dos son (1) predice para MHC II se unen con alta afinidad y (2) provocar potentes respuestas proliferativas en AQP4- / -, pero no peso, ratones sugieren que las células T dirigidas a los determinantes son normalmente controlado por selección negativa tímica17. El repertorio TCR para reconocimiento de AQP4 p135-153 y p201-220 en ratones- / - AQP4 es únicas (Figura 2), que también es consistente con la canceladura clónica mediada por las células epiteliales medulares tímicas. Otros mecanismos de tolerogénicas normalmente pueden limitar inmunorespuestas a AQP4. Después de nuestro informe inicial17, otro grupo también demostró que la AQP4 p201-220 contiene un encephalitogenic determinante de la célula de T27. Cuando ratones α/β (TCRα- / -) deficiencia de la célula de T fueron reconstituidos con AQP4- / - CD4+ T las células fue posible provocar una respuesta de células T encephalitogenic AQP4 específicos, pero no una AQP4 específica respuesta humoral, lo que implica que en Los ratones WT respuestas de células B de AQP4 específicas, similares a respuestas de células T específicas de AQP4, son objeto de selección negativa. De hecho, la pérdida de axones de la médula espinal y RGCs, que no se observó en los ratones WT con ATCA inducida por las células T específicas de AQP4 solo, puede requerir participación de anticuerpos patógenos específicos de AQP4. Está claro que modelos murinos de autoinmunidad CNS dirigido AQP4 continuará evolucionando conforme aprendemos más sobre los mecanismos de tolerogénicas normalmente controlan AQP4 específicos de la célula T y célula de B de la inmunidad.
Otros modelos de autoinmunidad CNS dirigido AQP4 también están siendo desarrollados6,16,28,29,30. Cada uno puede ofrecer ventajas para el estudio de determinados aspectos que son relevantes para la patogenesia NMO. Se han identificado linfocitos T específicos de AQP4 en WT ratas6,16,29. Esas células T específicas de AQP4 causaron cambios histologic de la autoinmunidad de la CNS, pero similar a las observaciones en los ratones, las de células T específicas de AQP4 rata WT no causan señales significativas de enfermedad clínica. Por lo tanto, los mecanismos de tolerancia restringiendo la célula de T y células B específicas de AQP4 las respuestas inmunitarias en ratones WT funcionan también en ratas. A pesar de todo, uno no debe subestimar el poder en el uso de modelos de ratón para el estudio de mecanismos implicados en la patogenia de la enfermedad. La riqueza de knock-out, transgénico y ratones reportero puede ser ventajosa. También debe reconocerse que varios descubrimientos fundamentales en la autoinmunidad se hicieron usando modelos de ratón EAE. Por ejemplo, demostración que T cell clones específicos para un antígeno de uno mismo puede mediar enfermedad autoinmune31,32, identificación de la función de coestimulación de la célula de T en autoinmunidad33 y el descubrimiento de la Desarrollo vía de diferenciación Th1734 primero fueron descritos usando modelos de ratón EAE. Usando el modelo del ratón del ATCA que hemos desarrollado, uno ahora tiene los medios para estudiar el desarrollo y la regulación de patógenos específicos de AQP4 inmunorespuestas en vivo, que debe proporcionar penetraciones importantes relacionadas con la patogénesis de la NMO.

Neuromielitis óptica (NMO) es una enfermedad desmielinizante inflamatoria autoinmune de sistema nervioso central (SNC) que causa episodios recurrentes de parálisis y pérdida de la visión lleva a discapacidad neurológica permanente1. NMO es considerado sobre todo al ser una enfermedad autoinmune humoral2 se asocia con anticuerpos (Igs) contra Acuaporina-4 (AQP4), un canal de agua que se expresa abundantemente en los astrocitos3,4. Sin embargo, la inflamación del CNS es un prerrequisito para la entrada del CNS de AQP4 Ig5,6. Por lo tanto, no ha sido posible establecer un modelo de NMO por la transferencia de anti-AQP4 Igs solamente. Las conclusiones que (1) patógenos Igs específicas de AQP4 en pacientes NMO son IgG11,2, un Ig de dependiente de la célula de T en NMO lesiones8,9 (3) NMO se identifican células de T de subclase7 (2) se asocia con ciertos genes de MHC II (por ejemplo, HLA-DR17 (DRB1 * 0301))10y proinflamatorias (4) Dr. AQP4 reactiva-Th17 restringida que las células se expanden en la NMO pacientes11,12 todos indican que las células T específicas de AQP4 tienen un papel clave en la patogenia de la NMO. Por lo tanto, es importante desarrollar modelos animales para determinar cómo las células T específicas de AQP4 pueden contribuir a la patogenesia NMO.
Hace varios años, se identificaron múltiples epitopos de células T de AQP4 en wild-type (WT) ratones13,14 y ratas15. Mientras que se observó que las células T reactivas con AQP4 podrían inducir inflamación opticospinal en ingenuo receptor ratas15,16, no se observaron signos clínicos significativos de la enfermedad del CNS. Del mismo modo, dirigir la inmunización de los ratones WT con los péptidos que contienen AQP4 T célula epitopos14,17, o transferencia de células proinflamatorias T dirigidas a los determinantes17, no provocó signos clínicos o histologic evidencia de autoinmunidad de la CNS.
Recientemente, se observó que inmunización de ratones C57BL/6 AQP4-deficientes (AQP4- / -) con AQP4 péptido (p) 135-153 o p201-220, dos determinantes predijo a MHC II (I-Ab) se unen con alta afinidad18, sacó fuerte CD4 + De las respuestas de células T17. Por el contrario, estos dos péptidos produce solamente modestas respuestas proliferativas en ratones WT. Además, el repertorio de T cell receptor (TCR) utilizado para el reconocimiento de estos determinantes por las células T de ratones- / - AQP4 era único. Colectivamente, estos resultados indican que la célula de T reconocimiento de AQP4 es regulada por tímica selección negativa. AQP4 p135-153-p201-220-específicos o células Th17 de AQP4- / - ratones donantes inducida por parálisis en casi el 100% de ratones de peso receptoras ingenuo; Esto se asoció con opticospinal infiltrados de células T, linfocitos B y monocitos. Serie opticospinal tomografía de la coherencia (OCT) demostró la implicación del sistema visual dinámico. Ratones con autoinmunidad mediada por células T dirigida AQP4 CNS (ATCA) se recuperaron de la parálisis y lesión del sistema visual. En contraste con EAE inducida por myelin oligodendrocyte glicoproteína (MOG) p35-55-linfocitos T específicos, que condujo a la enfermedad clínica persistente, ATCA inducida por las células T sólo no se asoció con pérdida axonal o la reducción en las células ganglionares de la retina (RGCs). Nuestros resultados han demostrado claramente que hay determinantes patógenos múltiples de la célula T de AQP4. Este nuevo modelo de ATCA es útil para el estudio de mecanismos que controlan el desarrollo de patógenas específicos de AQP4 las células T, aprendiendo cómo las células inducen inflamación del CNS y cómo puede cooperar con las células B específicas de AQP4 y anticuerpos para promover la patogenesia de la NMO .
En el presente informe, se describen los protocolos utilizados para inducir y evaluar inducida por células T ATCA. Comenzamos con las técnicas utilizadas para que inmunización, cultivo de células de T y polarización Th17 para generar patógenas células T específicos de AQP4, análisis de citometría de flujo para confirmar la polarización y transferencia adoptiva de las células T. A continuación describimos los métodos utilizados para evaluar enfermedad clínica e histologic y el uso de OCT serial para controlar lesiones del sistema visual en los ratones receptores.

<table width="1066">
	<colgroup>
		<col style="width:246pt" width="328" />
		<col style="width:162pt" width="216" />
		<col style="width:104pt" width="139" />
		<col style="width:287pt" width="383" />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">M. tuberculosis H37Ra</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">BD Difco</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">231141</td>
			<td class="xl22" style="width:287pt" width="383">Dessicated, killed M. tuberculosis</td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">Incomplete Freund&#39;s Adjuvant</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">BD Difco</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">263910</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">AQP4 peptide p135-153</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">Genemed</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">Custom Synthesis</td>
			<td class="xl22">Peptide sequence: LVTPPSVVGGLGVTMVHGN</td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">AQP4 peptide p201-220</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">Genemed</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">Custom Synthesis</td>
			<td class="xl22">Peptide sequence: HLFAINYTGASMNPARSFGP</td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">MOG peptide p35-55</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">Genemed / Auspep</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">Custom Synthesis</td>
			<td class="xl22">Peptide sequence: MEVGWYRSPFSRVVHLYRNGK</td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">3-way Stopcock</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">Kimble</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">420163-4503</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">HyClone Fetal Bovine Serum (Characterized)</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">GE Healthcare Life Sciences</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">SH30071</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">Recombinant Mouse IL-23</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">R&#38;D Systems (BioTechne)</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">1887-ML</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">Recombinant Mouse IL-6</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">R&#38;D Systems (BioTechne)</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">406-ML</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">Recombinant Mouse IL-12</td>
			<td class="xl23" style="width:162pt" width="216">R&#38;D Systems (BioTechne)</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">419-ML</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="25" style="height:18.75pt">
			<td class="xl19" height="25" style="width:246pt;height:18.75pt" width="328">Thymidine [Methyl-3H]</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">PerkinElmer</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">NET027</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">Glass Fiber Filtermats</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">PerkinElmer</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">1450-421</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">Anti-mouse antibodies</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">eBioscience (Affymetrix)</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">[various]</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">Anti-mouse TCR V&#946; Screening Panel</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">BD Biosciences</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">557004</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">LIVE/DEAD Fixable Dead Cell Stain</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">ThermoFisher Scientific</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">[various]</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">Paraformaldehyde (16%)</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">Electron Microscopy Sciences</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">15710</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="42" style="height:31.5pt">
			<td class="xl19" height="42" style="width:246pt;height:31.5pt" width="328">Fixation/Permeabilization Solution Kit with GolgiPlug</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">BD Biosciences</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">555028</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA)</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">Sigma-Aldrich</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">P8139</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">Iomomycin (calcium salt)</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">Sigma-Aldrich</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">I0634</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">Pertussis Toxin from B. pertussis</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">List Biological Laboratories</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">181</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">10% Formalin</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">VWR</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">89370-094</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">Variable-Flow Peristaltic Pump</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">Fisher Scientific</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">13-876-2</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">Foam Biopsy Pads, Rectangular</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">Fisher Scientific</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">22-038-221</td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">Isothesia (isoflurane, USP)</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">Henry Schein Animal Health</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139">050033</td>
			<td class="xl22">NDC : 11695-0500-2</td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">Tropicamide Ophthalmic Solution, USP (1%)</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">Akorn</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139"></td>
			<td class="xl22">NDC: 17478-102-12</td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:246pt;height:15.75pt" width="328">Spectralis Diagnostic Imaging Platform</td>
			<td class="xl19" style="width:162pt" width="216">Heidelberg Engineering</td>
			<td class="xl24" style="width:104pt" width="139"></td>
			<td class="xl22"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

induction of paralysis and visual system injury in mice by t cells specific for neuromyelitis optica autoantigen aquaporin-4

Si bien se reconoce que Acuaporina-4 (AQP4)-anticuerpos y células T específicas participan en la patogenia de la Neuromielitis óptica (NMO), una enfermedad desmielinizante autoinmune humana del sistema nervioso central (SNC), creación de un modelo objetivo de AQP4 con ambos manifestaciones clínicas e histologic de la autoinmunidad de la CNS ha demostrado ser un reto. Inmunización de ratones de tipo salvaje (WT) con péptidos de AQP4 produce proliferación de células T, aunque esas células de T no podían transferir la enfermedad a ratones receptores ingenuos. Recientemente, novela dos epítopos de células T de AQP4, péptido (p) 135-153 p201-220, se identificaron y al estudiar las respuestas inmunitarias de AQP4 en ratones deficientes de AQP4 (AQP4- / -), sugiriendo la reactividad de células T a estos epitopos es normalmente controlada por Timo selección negativa. AQP4- / - Th17 polarizado células T cebadas p135-153 o p201-220 inducido parálisis en receptoras ratones WT, que se asoció con predominante leptomeningeal inflamación de la médula espinal y nervios ópticos. Inflamación circundante los nervios ópticos y la participación de las capas retinianas internas (IRL) se manifiestan por cambios en la tomografía de coherencia óptica serial (OCT). Aquí, nos ilustran los enfoques utilizados para crear este nuevo modelo en vivo de la autoinmunidad de la CNS dirigido AQP4 (ATCA), que ahora puede ser empleada para estudiar mecanismos que permitan el desarrollo de patógenas células T específicas de AQP4 y cómo puede cooperar con B células en la patogénesis de la NMO.

En este protocolo, se utilizaron células de un donante T de AQP4 C57BL/6- / - ratones. Vacunación subcutánea de estos ratones con AQP4 p135-153 o p201-220, que contienen epítopos de células T patógenas, generó respuestas fuertes proliferativa de la célula T en nodos de linfa de drenaje (figura 1), mientras que estos dos péptidos inducido mucho más débil de la célula T proliferación de ratones WT. En comparación, la inmunización con AQP4 p91-110, que contiene una no patógena AQP4 T célula determinante13, o MOG p35-55, un péptido de mielina que activa las células T que causar encefalomielitis autoinmune experimental (EAE)22,23 ,24, inducida por la magnitud de la proliferación de células T en ratones WT AQP4- / - y similar. Análisis de la utilización de TCR manchando flujo cytometry de Vβ individuales o familias Vβ, demostrado que p135-153 y p201-220-T células específicas de AQP4- / - ratones utilizaron único repertorio TCR. Hiper proliferación selectiva de AQP4 p135-153 y p201-220 en ratones- / - AQP4, así como la utilización única de TCR (figura 2), indica que las respuestas de células T patógenas a estos determinantes normalmente es regulada por negativo tímico selección, destacando la importancia para el uso de células de donante T de AQP4- / - en el presente Protocolo.
Antes de la transferencia adoptiva para la inducción de ATCA, las células del nodo de linfa de AQP4 péptido preparado ratones fueron cultivadas in vitro en condiciones de polarización Th17 o Th1 durante tres días. El grado de polarización de donantes CD4+ T las células fue confirmada por citoquinas intracelulares tinción (ICS) y medido por citometría de flujo (figura 3). Ingenuo receptoras ratones fueron inyectados por vía intravenosa con 2 x 107 donantes AQP4 péptidos específicos de células T. Después de aproximadamente seis días, casi 100% de los ratones receptores desarrollaron signos clínicos de enfermedad autoinmune de la CNS, incluyendo parálisis flácida de la cola y extremidades (figura 4). Células T específicas de AQP4 polarización Th17 inducidos por una enfermedad clínica más severa que las células T específicas de AQP4 polarización Th1. Un ratón representante Th17 AQP4-péptido-específico y había desarrollado completa extremidades parálisis (paraplejia) se muestra en el Video 1. En contraste con los ratones que EAE se convirtió después de la administración de células Th17 MOG-específicos, ratones receptores recuperaron de clínica de la enfermedad inducida por las células Th17 específicas AQP4. En cuanto a EAE inducida por las células Th17 MOG p35-55-específicas, clínica de la enfermedad inducido por la AQP4 p135-153-específicas o las células Th17 p201-220-específicas se asoció con infiltración de células mononucleares en el parénquima de la CNS y meninges (figura 5). Las lesiones fueron más abundantes en las meninges que en la parenquimia de autoinmunidad CNS inducida por las células Th17 específicas AQP4.
Implicación del nervio óptico fue demostrada por la evaluación histológica y por serial OCT. AQP4 específicos y Th17 MOG-específicos de las células tanto inflamación inducida del nervio óptico, que se caracterizó por la presencia de células mononucleares. Mientras que las células Th17 específicas AQP4 causaron perineuritis óptica, las células Th17 MOG-específicos inducidos por neuritis óptica severa (figura 5). Usando OCT serial, inflamación del nervio óptico fue evidente por la hinchazón y mayor espesor de la capa retiniana interna (IRL) para clínica de la enfermedad inducida por AQP4 específicos o células Th17 MOG-específicos (figura 6). Para autoinmunidad inducida por la AQP4 Th17 CNS, grueso IRL regresado a los valores basales como ratones recuperado de la enfermedad clínica. En cambio, la persistencia de EAE inducida por MOG-específicos Th17 correspondió con adelgazamiento de la IRL y, como hemos demostrado anteriormente17, se asoció con pérdida de células ganglionares de la retina.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56185/56185fig1.jpg"> 
Figura 1 : AQP4 p135-153 y p201-220 provocan proliferación de robusta célula de T en ratones- / - AQP4, pero no ratones WT. Ratones fueron inmunizados s.c. con los péptidos indicados en CFA. Once días más tarde, los nodos de linfa fueron quitados y entonces cultivados con o sin antígeno, o con el péptido que se utiliza para la inmunización. Proliferación se midió por la incorporación de 3H-timidina (media ± SEM, representativo de 5 experimentos). <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56185/56185fig1large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56185/56185fig2.jpg"> 
Figura 2 : Las células de T específicas AQP4 de AQP4- / - ratones utilizan repertorios TCR únicos. AQP4- / - y WT ratones fueron inmunizados con los péptidos indicados. Once días más tarde, los nodos de linfa fueron quitados y cultivados con el péptido que se utiliza para la inmunización. Las células se cosecharon. Utilización de TCR Vβ fue analizada por citometría de flujo (media ± SEM, n = 5). <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56185/56185fig2large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56185/56185fig3.jpg"> 
Figura 3 : Polarización proinflamatorias de las células donantes específicos AQP4 T. Once días después de la inmunización con AQP4 p135-153 o p201-220, las células del nodo de linfa fueron cosechadas y cultivadas con el péptido que se utiliza para la inmunización en condiciones de no polarización, las condiciones de polarización Th1 o Th17. Polarización Th17 o Th1 fue examinado por el ICS y flujo cytometry para IL-17 o IFN-γ, respectivamente. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56185/56185fig3large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56185/56185fig4.jpg"> 
Figura 4 : Las células T específicas de AQP4 polarización Th17 inducen parálisis en ratones receptores WT. Ratones receptores WT recibieron 2 x 107 donantes AQP4 polarización Th17 p135-153 o p201-220-específicos de células T de ratones- / - AQP4. Las células de T de MOG-específicos polarización Th17 sirven como control positivo. Resultados son representativos de 8 experimentos (n = 5/Grupo). * p &#60; 0.05, ** p &#60; 0.01, *** p &#60; 0.001. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56185/56185fig4large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56185/56185fig5.jpg"> 
Figura 5 : Las células Th17 específicas AQP4 inducen inflamación opticospinal en ratones WT. Receptoras ratones recibieron 2 x 107 donantes Th17 AQP4 p135-153 - o p201-220-cebada Th17 células de ratones- / - AQP4 o MOG Th17 p35-55-específico y se sacrificaron 10 días más tarde. Los tejidos de la médula espinal y del nervio óptico fueron preparados y teñidos con H &#38; E/LFB para evaluar evidencia de inflamación y desmielinización, respectivamente. Resultados son representativos de 5 ratones/grupo. Barra de escala = 50 μm. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56185/56185fig5large.jpg" target="_blank">haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56185/56185fig6.jpg"> 
Figura 6 : Inflamación del nervio óptico inducida por las células Th17 AQP4 específicos puede controlarse por octubre retinianos longitudinales PESO receptoras ratones recibieron 2 x 107 donantes AQP4 polarización Th17 p201-220-específico o MOG p35-55-específicos de células T en el día 0. Fueron examinados por OCT en el día 0 (antes de la administración de células T) y luego en los días 4, 7, 8, 9 10, 11 14 y 21. Espesor de la IRL fue medido (media ± SEM). Las estadísticas indican una comparación con el control de ingenuo. Resultados son representativos de 3 experimentos (5 ratones/grupo). * p &#60; 0.05, ** p &#60; 0.01, *** p &#60; 0.001. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56185/56185fig6large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Induction of Paralysis and Visual System Injury in Mice by T Cells Specific for Neuromyelitis Optica Autoantigen Aquaporin-4 at JoVE.com

Induction of Paralysis and Visual System Injury in Mice by T Cells Specific for Neuromyelitis Optica Autoantigen Aquaporin-4

Aquí, presentamos un protocolo para inducir inflamación parálisis y opticospinal por la transferencia de la Acuaporina-4 (AQP4)-células de T específicas de AQP4 ratones- / - en ratones WT. Además, se demuestra cómo utilizar la tomografía de coherencia óptica serial para controlar la disfunción del sistema visual.

Inducción de parálisis y lesión del sistema Visual en ratones por T las células específicas para el Optica del Neuromyelitis Autoantigen Acuaporina-4

While it is recognized that aquaporin-4 (AQP4)-specific T cells and antibodies participate in the pathogenesis of neuromyelitis optica (NMO), a human ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Retroviral Transduction of T-cell Receptors in Mouse T-cells

Transducción retroviral de receptores de células T en ratones las células T

T-cell receptors (TCRs) play a central role in the immune system. TCRs on T-cell surfaces can specifically recognize peptide antigens presented by antigen ...

Investigación

Inmunología e Infección

Induction of Alloantigen-specific Anergy in Human Peripheral Blood Mononuclear Cells by Alloantigen Stimulation with Co-stimulatory Signal Blockade

La inducción de anergia aloantígenos específicos en las células mononucleares de sangre periférica mediante estimulación aloantígeno con bloqueo de señales co-estimuladoras

Allogeneic hematopoietic stem cell transplantation (AHSCT) offers the best chance of cure for many patients with congenital and acquired hematologic ...

Determining Optimal Cytotoxic Activity of Human Her2neu Specific CD8 T cells by Comparing the Cr51 Release Assay to the xCELLigence System

La determinación óptima de la actividad citotóxica de las células T específicas Her2Neu CD8 Humanos comparando el Ensayo de liberación de Cr51 al Sistema xCELLigence

Cytotoxic CD8 T cells constitute a subgroup of T  cells that are capable of inducing the death of infected or malignant host  cells1. These cells express ...

piggyBac Transposon System Modification of Primary Human T Cells

piggyBac Transposon System Modification of Primary Human T Cells

piggyBac Transposón modificación del sistema de células T humanas primarias

The piggyBac transposon system is naturally active, originally derived from the cabbage looper moth1,2. This non-viral system is plasmid based, most ...

Peptide:MHC Tetramer-based Enrichment of Epitope-specific T cells

Péptido: MHC tetrámero basado en el enriquecimiento de células T específicos para el epítopo

A  basic necessity for researchers studying adaptive immunity with in vivo experimental models is an  ability to identify T cells based on their T cell ...

Accelerated Type 1 Diabetes Induction in Mice by Adoptive Transfer of Diabetogenic CD4+ T Cells

Tipo 1 Diabetes inducción acelerada en ratones por transferencia adoptiva de células CD4 + células T diabetogénico

The nonobese diabetic (NOD) mouse spontaneously develops autoimmune diabetes after 12 weeks of age and is the most extensively studied animal model of ...

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

La inducción de la inflamación intestinal murino por transferencia adoptiva de Efector CD4<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; Alta</sup&gt; T células en ratones inmunodeficientes

There are many different animal models available for studying the pathogenesis of human inflammatory bowel diseases (IBD), each with its own advantages ...

Automated Cell Enrichment of Cytomegalovirus-specific T cells for Clinical Applications using the Cytokine-capture System

Enriquecimiento de la célula automatizada de citomegalovirus células T específicas para aplicaciones clínicas utilizando el Sistema de citoquinas de captura

The adoptive transfer of pathogen-specific T cells can be used to prevent and treat opportunistic infections such as cytomegalovirus (CMV) infection ...

Analysis of Simian Immunodeficiency Virus-specific CD8+ T-cells in Rhesus Macaques by Peptide-MHC-I Tetramer Staining

Analysis of Simian Immunodeficiency Virus-specific CD8+ T-cells in Rhesus Macaques by Peptide-MHC-I Tetramer Staining

Análisis de Inmunodeficiencia CD8 Simian Virus-específica<sup&gt; +</sup&gt; Células T en macacos rhesus por el péptido-MHC-I de tetrámeros La tinción

Peptide-major histocompatibility complex class I (pMHC-I) tetramers have been an invaluable tool to study CD8+ T-cell responses. Because these reagents ...

Evaluation of Zika Virus-specific T-cell Responses in Immunoprivileged Organs of Infected Ifnar1-/- Mice

Evaluation of Zika Virus-specific T-cell Responses in Immunoprivileged Organs of Infected Ifnar1-/- Mice

Evaluación de respuestas de células T Zika Virus-específica en Immunoprivileged órganos de ratones- / - Ifnar1 infectados

The Zika virus (ZIKV) can induce inflammation in immunoprivileged organs (e.g., the brain and testis), leading to the Guillain-Barr&#233; syndrome and ...