Name: a flow cytometry-based cytotoxicity assay for the assessment of human nk cell activity
Uploaded: 2017-08-09T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Flow Cytometry-Based Cytotoxicity Assay for the Assessment of Human NK Cell Activity at JoVE.com

ברצוננו להודות ג'יל Narciso, UCLA מרכז Immunogenetics, על הסיוע עם הכנת כתב היד.

Samples were collected according to the ethical guidelines established by the UCLA Human Research Protection Program and IRB approved.
1. Preparation of reagents
NOTE: Unless otherwise stated, all reagents should be allowed to equilibrate at room temperature prior to use. All reagents must remain sterile.
<ol>
	<li>Prepare a 2x working solution of Tween-20 (i.e., 0.2%) by adding 10&#160;&#181;L of Tween-20 solution to 5 mL of phosphate-buffered saline (PBS) withou...

<ol>
	<li>Iannello, A., Debbeche, O., Samarani, S., Ahmad, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antiviral+NK+cell+responses+in+HIV+infection:+I.+NK+cell+receptor+genes+as+determinants+of+HIV+resistance+and+progression+to+AIDS.">Antiviral NK cell responses in HIV infection: I. NK cell receptor genes as determinants of HIV resistance and progression to AIDS.</a> J Leukoc Biol. 84 (1), 1-26 (2008).</li><li>Caligiuri, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+natural+killer+cells.">Human natural killer cells.</a> Blood. 112 (3), 461-469 (2008).</li><li>Topham, N. J., Hewitt, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Natural+killer+cell+cytotoxicity:+how+do+they+pull+the+trigger?.">Natural killer cell cytotoxicity: how do they pull the trigger?.</a> Immunology. 128 (1), 7-15 (2009).</li><li>Warren, H. S., Smyth, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NK+cells+and+apoptosis.">NK cells and apoptosis.</a> Immunol Cell Biol. 77 (1), 64-75 (1999).</li><li>Tognarelli, S., Jacobs, B., Staiger, N., Ullrich, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+Cytometry-based+Assay+for+the+Monitoring+of+NK+Cell+Functions.">Flow Cytometry-based Assay for the Monitoring of NK Cell Functions.</a> J Vis Exp. (116), (2016).</li><li>Somanchi, S. S., McCulley, K. J., Somanchi, A., Chan, L. L., Lee, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Novel+Method+for+Assessment+of+Natural+Killer+Cell+Cytotoxicity+Using+Image+Cytometry.">A Novel Method for Assessment of Natural Killer Cell Cytotoxicity Using Image Cytometry.</a> PLoS One. 10 (10), e0141074 (2015).</li><li>Alter, G., Malenfant, J. M., Altfeld, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD107a+as+a+functional+marker+for+the+identification+of+natural+killer+cell+activity.">CD107a as a functional marker for the identification of natural killer cell activity.</a> J Immunol Methods. 294 (1-2), 15-22 (2004).</li><li>Atkinson, E. A., Gerrard, J. M., Hildes, G. E., Greenberg, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+of+the+mechanism+of+natural+killer+(NK)+degranulation+and+cytotoxicity.">Studies of the mechanism of natural killer (NK) degranulation and cytotoxicity.</a> J Leukoc Biol. 47 (1), 39-48 (1990).</li><li>Kim, G. G., Donnenberg, V. S., Donnenberg, A. D., Gooding, W., Whiteside, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+multiparametric+flow+cytometry-based+cytotoxicity+assay+simultaneously+immunophenotypes+effector+cells:+comparisons+to+a+4+h+51Cr-release+assay.">A novel multiparametric flow cytometry-based cytotoxicity assay simultaneously immunophenotypes effector cells: comparisons to a 4 h 51Cr-release assay.</a> J Immunol Methods. 325 (1-2), 51-66 (2007).</li><li>Kane, K. L., Ashton, F. A., Schmitz, J. L., Folds, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+natural+killer+cell+function+by+flow+cytometry.">Determination of natural killer cell function by flow cytometry.</a> Clin Diagn Lab Immunol. 3 (3), 295-300 (1996).</li><li>Jang, Y. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+flow+cytometry-based+natural+killer+cytotoxicity+assay+involving+calcein+AM+staining+of+effector+cells.">An improved flow cytometry-based natural killer cytotoxicity assay involving calcein AM staining of effector cells.</a> Ann Clin Lab Sci. 42 (1), 42-49 (2012).</li><li>Korzeniewski, C., Callewaert, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+enzyme-release+assay+for+natural+cytotoxicity.">An enzyme-release assay for natural cytotoxicity.</a> J Immunol Methods. 64 (3), 313-320 (1983).</li><li>Karimi, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+cytotoxicity+by+bioluminescence+imaging+outperforms+the+standard+chromium-51+release+assay.">Measuring cytotoxicity by bioluminescence imaging outperforms the standard chromium-51 release assay.</a> PLoS One. 9 (2), e89357 (2014).</li><li>Oppenheim, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glyco-engineered+anti-EGFR+mAb+elicits+ADCC+by+NK+cells+from+colorectal+cancer+patients+irrespective+of+chemotherapy.">Glyco-engineered anti-EGFR mAb elicits ADCC by NK cells from colorectal cancer patients irrespective of chemotherapy.</a> Br J Cancer. 110 (5), 1221-1227 (2014).</li><li>West, W. H., Cannon, G. B., Kay, H. D., Bonnard, G. D., Herberman, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Natural+cytotoxic+reactivity+of+human+lymphocytes+against+a+myeloid+cell+line:+characterization+of+effector+cells.">Natural cytotoxic reactivity of human lymphocytes against a myeloid cell line: characterization of effector cells.</a> J Immunol. 118 (1), 355-361 (1977).</li><li>Jedema, I., van der Werff, N. M., Barge, R. M., Willemze, R., Falkenburg, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+CFSE-based+assay+to+determine+susceptibility+to+lysis+by+cytotoxic+T+cells+of+leukemic+precursor+cells+within+a+heterogeneous+target+cell+population.">New CFSE-based assay to determine susceptibility to lysis by cytotoxic T cells of leukemic precursor cells within a heterogeneous target cell population.</a> Blood. 103 (7), 2677-2682 (2004).</li><li>Lecoeur, H., Fevrier, M., Garcia, S., Riviere, Y., Gougeon, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+flow+cytometric+assay+for+quantitation+and+multiparametric+characterization+of+cell-mediated+cytotoxicity.">A novel flow cytometric assay for quantitation and multiparametric characterization of cell-mediated cytotoxicity.</a> J Immunol Methods. 253 (1-2), 177-187 (2001).</li><li>Carotta, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+NK+Cells+for+Anticancer+Immunotherapy:+Clinical+and+Preclinical+Approaches.">Targeting NK Cells for Anticancer Immunotherapy: Clinical and Preclinical Approaches.</a> Front Immunol. 7, 152 (2016).</li><li>Mandal, A., Viswanathan, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Natural+killer+cells:+In+health+and+disease.">Natural killer cells: In health and disease.</a> Hematol Oncol Stem Cell Ther. 8 (2), 47-55 (2015).</li><li>Rezvani, K., Rouce, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Application+of+Natural+Killer+Cell+Immunotherapy+for+the+Treatment+of+Cancer.">The Application of Natural Killer Cell Immunotherapy for the Treatment of Cancer.</a> Front Immunol. 6, 578 (2015).</li><li>Angelo, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Practical+NK+cell+phenotyping+and+variability+in+healthy+adults.">Practical NK cell phenotyping and variability in healthy adults.</a> Immunol Res. 62 (3), 341-356 (2015).</li><li>Zons, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+europium+and+chromium+release+assays:+cytotoxicity+in+healthy+individuals+and+patients+with+cervical+carcinoma.">Comparison of europium and chromium release assays: cytotoxicity in healthy individuals and patients with cervical carcinoma.</a> Clin Diagn Lab Immunol. 4 (2), 202-207 (1997).</li><li>Yovel, G., Shakhar, K., Ben-Eliyahu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+sex,+menstrual+cycle,+and+oral+contraceptives+on+the+number+and+activity+of+natural+killer+cells.">The effects of sex, menstrual cycle, and oral contraceptives on the number and activity of natural killer cells.</a> Gynecol Oncol. 81 (2), 254-262 (2001).</li><li>Laue, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+NK+cell+function+in+obese+healthy+humans.">Altered NK cell function in obese healthy humans.</a> BMC Obes. 2, 1 (2015).</li><li>Hazeldine, J., Lord, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+ageing+on+natural+killer+cell+function+and+potential+consequences+for+health+in+older+adults.">The impact of ageing on natural killer cell function and potential consequences for health in older adults.</a> Ageing Res Rev. 12 (4), 1069-1078 (2013).</li></ol>

השיטה המתוארת כאן מספק אלטרנטיבה פשוטה וחסכונית מסורתי 51Cr שחרור הנועד להעריך התא NK פעילות ציטוטוקסיות. בשיטה זו הוא רגיש, הדירים פחות זמן רב יותר בשיטות הרגילות הקודם, כמו CRA, יכול לשמש עבור שניהם קליני, מחקר יישומי.
בעוד וזמינותו עובד עם PBMCs הכולל וגם תאי NK מועשר, האפשר?...

תאים (NK) רוצח טבעי הם תת-קבוצה מתוחכם של לימפוציטים אנושיים מולדת אנושות מעורב חיסול של תאים נגועים לשווק, טרנספורמציה תאים אחרים איומים פתוגניים 1,2. תאי NK בגרגרים lytic בית חלבונים ציטוטוקסיות, כגון perforin ו- granzymes. בעת ההפעלה, תאי NK טופס באינטראקציה מורכבת עם המטרות שלהם הידוע בשם סינפסה חיסוניות, לפיה מולקולות cytolytic אלה מתפרסמים באופן מקומי, וכתוצאה מכך פירוק תא היעד הישיר אפופטוזיס, יחד עם שחרור ציטוקינים ו כימוקין, בסופו של דבר ב- אינדוקציה של דלקתיות המדינה 1,3,4.
הפעלת התא NK כרוך מחרוזת המורכבת של מפעיל, מעכבות האינטראקציות בין NK התא קולטנים ליגנדים באה לידי ביטוי על פני השטח של התאים היעד, ויוצרים מערכת מוסדרת בחוזקה. אחד המנגנונים הכי נחקרות של הפעלת תאי NK הוא חסר ה"עצמי". אכן, חוסר זיהוי של מחלקה שאני רס ן histocompatibility מורכבים (MHC), או מולקולות של אנטיגן (הלע) לויקוציטים אנושיים, על נגוע או טרנספורמציה המפעילים תאי NK תא cytotoxicity. גידול של תאים הנגועים בנגיף בדרך כלל downregulate אנטיגנים אלה כדי להימלט חסינות T תאית, וכך להפוך NK ראשי תא מטרות 1,3,4.
הערכה של תפקוד תאי NK היא בעיקר מחולקת degranulation או cytotoxicity מבחני. עם זאת, מבחני degranulation, כגון זרימת cytometric זיהוי של דה מרקר הקשורים degranulation CD107a, הם רק מעיד של הפעלת תאי NK ולא של תפקידם האולטימטיבי, ההרג הישיר של היעד תאים 5,6,7,8. לפיכך, מגבלה זו יש נמשך החוקרים מבחני cytotoxicity כתחליף לספר יותר, ישירה יותר.
ותיק "תקן הזהב" להערכת פעילות ציטוטוקסיות תאית של תאי T ו- NK היא וזמינותו שחרור כרום (CRA). CRA כרוך radioactively תיוג של התאים היעד עם 51Cr משותפת המקננת בהם עם תאים אפקטור. זה וזמינותו ספוגים העיקרון שהזה פירוק התא תוצאות במהדורה של חלבון מכורך 51Cr לתוך תגובת שיקוע, אשר נמדד על ידי סופר גמא. זה וזמינותו, בזמן יעיל, הוא בעייתי עבור מגוון סיבות: עלויות חומרים גבוה, טיפול, סילוק של רדיואקטיבי 51Cr, לשחרור ספונטני של 51Cr ו תקינה קשה - שהופך אותו לגמרי מעשי 9,10.
מאז פותחו מספר מבחני שאינו רדיואקטיבי, מעורבים תיוג פלורסנט, שחרור אנזים ו ביולומינסנציה אפילו, כחלופות CRA 11,12,13,14. נתאר כאן שיטה מבוססת cytometry זרימה למדידת NK תא ציטוטוקסיות פעילות התאים היעד K562 פשוט, רגיש, וניתן לשחזור. K562 תאים הם תא אנושי erythroleukemic קו עם ביטוי מופחתת של הכיתה הלע ביטוי מוגבר של ליגנדים עבור רצפטורים NK activatory, מה שהופך אותם רגישים במיוחד NK cytotoxicity תאית 15ואני. זה assay, K562 תאים מסומנים מראש עם אסתר succinimidyl diacetate carboxyfluorescein (CFSE) תרבותי משותף-יחסי שונים עם תאי תאי או דם היקפיים (PBMCs) או מטוהרים תאי NK 1. CFSE הוא צבע פלורסנט יציב, מחייב חלבון המאפשר אפליה של התאים היעד מ 16,של תאי NK אפקטור17. לאחר שיתוף הדגירה, כתם חומצת גרעין, במיוחד המגובש הקרום של תאים מתים, משמש לזיהוי תאי היעד נהרג (ראה טבלה של חומרים). הדגימות נרכשים ואז על cytometer זרימה כדי לקבוע את אחוז המלח (קרי, הכתם +) CFSE + התאים היעד.
Assay הזה יכול לשמש הקרנה אבחון שגרתי על פגמים monogenic להשפיע על תא התא NK, אשר יש כ 30 פגם ידוע גורם תפקודית או קלאסי NK תא מחסור, ועל lymphohistiocytosis hemophagocytic ראשית או משנית. זה שימושי גם לחקור את פעילות תאי NK בחולים עם זיהומים נגיפיים הרפס חוזרים ונשנים, חמור, כדי להעריך את שיחזור המערכת החיסונית לאחר השתלת תא hematopoietic או פוסט immunomodulatory טיפול 18,19,20, ועבור שורה של יישומי מחקר בסיסי.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Phosphate-buffered Saline (1x, w/o Ca2+ and Mg2+)</td>
			<td>Corning (Cellgro)</td>
			<td>21-040-CM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ficoll-Paque PLUS</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>17-1440-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween-20</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>BP337-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640 Media</td>
			<td>Corning (Cellgro)</td>
			<td>10-040-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heat-inactivated Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Omega Scientific</td>
			<td>FB-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin Streptomycin</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>15140-163</td>
			<td>Stock solution at 10,000 U/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IL-2</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>202-IL-050</td>
			<td>Lyophilized from a 0.2 &#956;m filtered solution in Acetonitrile and TFA with BSA as a carrier protein. Reconstitute with 500 ul at 100 &#956;g/mL in sterile 100 mM Acetic Acid containing at least 0.1% bovine serum albumin (2.1x10E6 IU/ml)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>K562 Cells</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CCL-243</td>
			<td>Cancer cell line&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T-75 cell culture flasks</td>
			<td>Corning</td>
			<td>431464</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CFSE cell proliferation kit</td>
			<td>Life Technologies (CellTrace)</td>
			<td>C34554</td>
			<td>Reconstitute I vial with 18 ul DMSO to prepare a 5mM stock solution. Do not freeze/thaw.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sytox Red</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>S34859</td>
			<td>Stock solution is provided at 5 &#956;M in 1 mL DMSO. The DMSO solution may be subjected to multiple freeze-thaw cycles without reagent degradation.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium/lithium heparin blood collection tubes</td>
			<td>BD</td>
			<td>02-687-95</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>U-bottom 96-well plate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>CLS3897</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serological pipettes</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polystyrene round-bottom tubes (5mL)</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>14959-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL polypropylene conical tube</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>352070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL polypropylene conical tube</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>352097</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagent reservoir</td>
			<td>USA Scientific</td>
			<td>2321-2230</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human NK cell enrichment cocktail</td>
			<td>StemCell Technologies (RosetteSep)</td>
			<td>15065</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a flow cytometry-based cytotoxicity assay for the assessment of human nk cell activity

בתוך מערכת החיסון המולדת, לימפוציטים המכונה תאים הטבעיים (NK) רוצח ממלאות תפקיד חיוני בהגנה מארח נגד תאי סוטה, במיוחד חיסול tumoral ו לשווק נגוע תאים. פגמים monogenic ידוע כ-30, יחד עם שורה של מצבים פתולוגיים אחרים, לגרום מחסור התא NK תפקודית או קלאסי, מתבטא ב מופחתת או נעדר ציטוטוקסיות פעילות. מבחינה היסטורית, cytotoxicity נחקר בשיטות רדיואקטיביות, אשר הם מסוכנים, מסורבל ויקר. מאמר זה מתאר שיטה מבוססת cytometry זרימה יעילה, ישים קלינית לכמת פעילות ציטוטוקסיות התא NK. זה assay, תאי תאי דם היקפיים (PBMCs) או מטוהרים ההכנות התא NK הם שיתוף incubated-יחסים שונים עם קו תא הגידול יעד ידוע להיות רגישים NK תאית cytotoxicity (NKCC). התאים היעד הם מראש עם תוויות עם הפלורסנט כדי לאפשר האפליה מתאי אפקטור (תאי NK). לאחר תקופת דגירה, התאים היעד ההרוגים מזוהים על ידי כתם חומצת גרעין, וחוקר במיוחד תאים מתים. שיטה זו היא נוטה גם אבחון המחקר והיישומים, הודות ליכולות פרמטר מרובה של cytometry זרימה, יש יתרון נוסף של פוטנציאל המאפשר ניתוח עמוק של פנוטיפ התא NK ותפקוד.

לפני הגדרת וזמינותו, מומלץ מאוד כי תוכן התא NK להידרש באוכלוסייה אפקטור של בחירה. איור 1 מציג צביעת CD56 טיפוסית לפני (תכלת) ואחרי העשרה התא NK (אדום). תאי NK מהווים עד 15% PBMCs, צריך להיות לפחות 80% טהור לאחר העשרה.
ניתוח תזרים cytometric ב a...

Watch this Scientific Journal Video about A Flow Cytometry-Based Cytotoxicity Assay for the Assessment of Human NK Cell Activity at JoVE.com

A Flow Cytometry-Based Cytotoxicity Assay for the Assessment of Human NK Cell Activity

שיטה מבוססת cytometry זרימה כדי לקבוע באופן כמותי את הפעילות ציטוטוקסיות של תאים אנושיים של הרוצח הטבעי מוצגים כאן.

וזמינותו Cytotoxicity מבוססי Cytometry זרימה להערכה של פעילות תאי NK אנושי

Within the innate immune system, effector lymphocytes known as natural killer (NK) cells play an essential role in host defense against aberrant cells, ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Expansion, Purification, and Functional Assessment of Human Peripheral Blood NK Cells

הרחבה, טיהור, והערכה תפקודית של האדם תאים דם היקפיים NK

Natural killer (NK) cells play an important role in immune surveillance against a variety of infectious microorganisms and tumors. Limited availability of ...

Human In Vitro Suppression as Screening Tool for the Recognition of an Early State of Immune Imbalance

Human In Vitro Suppression as Screening Tool for the Recognition of an Early State of Immune Imbalance

אנושי במבחנה דיכוי ככלי מיון עבור הכרה של מדינת מוקדם של חוסר איזון החיסון

Regulatory T cells (Tregs) are critical mediators of immune tolerance to self-antigens. In addition, they are crucial regulators of the immune response ...

Quantitative High-throughput Single-cell Cytotoxicity Assay For T Cells

Assay כמותית תפוקה גבוהה מתא בודד Cytotoxicity לתאי T

Cancer immunotherapy can harness the specificity of  immune response to target and eliminate tumors. Adoptive cell therapy (ACT)  based on the adoptive ...

Cell-based Flow Cytometry Assay to Measure Cytotoxic Activity

Cytolytic activity of CD8+ T cells is rarely evaluated. We describe here a new cell-based assay to measure the capacity of antigen-specific CD8+ T cells ...

Fast and Specific Assessment of the Halogenating Peroxidase Activity in Leukocyte-enriched Blood Samples

הערכה מהירה וספציפית של פעילות Halogenating Peroxidase בדגימות דם ליקוציט מועשר

In this paper a protocol for the quick and standardized enrichment of leukocytes from small whole blood samples is described. This procedure is based on ...

Flow Cytometry-based Assay for the Monitoring of NK Cell Functions

Flow Cytometry מבוסס Assay עבור הניטור של פונקציות תא NK

Natural killer (NK) cells are an important part of the human tumor immune surveillance system. NK cells are able to distinguish between healthy and ...

Assessing Retinal Microglial Phagocytic Function In Vivo Using a Flow Cytometry-based Assay

Assessing Retinal Microglial Phagocytic Function In Vivo Using a Flow Cytometry-based Assay

להערכת תפקוד רשתית microglial Phagocytic<em&gt; In vivo</em&gt; שימוש cytometry זרימה מבוסס Assay

Microglia are the tissue resident macrophages of the central nervous system (CNS) and they perform a variety of functions that support CNS homeostasis, ...

Flow Cytometric Analysis of Natural Killer Cell Lytic Activity in Human Whole Blood

ניתוח תזרים Cytometric של תא הטבעי Killer ממס פעילות דם מלא אנוש

NK cell cytotoxicity is a widely used measure to determine the effect of outside intervention on NK cell function. However, the accuracy and ...

Dextran Enhances the Lentiviral Transduction Efficiency of Murine and Human Primary NK Cells

לתוספי משפר את היעילות התמרה חושית Lentiviral של תאי NK העיקרי מאתר ואנושי

The efficient transduction of specific genes into natural killer (NK) cells has been a major challenge. Successful transductions are critical to defining ...

Generation of Knock-out Primary and Expanded Human NK Cells Using Cas9 Ribonucleoproteins

דור של תאים מעלף העיקרי ומורחבת NK האנושי באמצעות Cas9 Ribonucleoproteins

CRISPR/Cas9 technology is accelerating genome engineering in many cell types, but so far, gene delivery and stable gene modification have been challenging ...