Name: preparation steps for measurement of reactivity in mouse retinal arterioles ex vivo
Uploaded: 2018-05-08T12:30:00
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यह काम अर्नस्ट und Berta Grimmke Stiftung और ड्यूश Ophthalmologische Gesellschaft (डॉग) से अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था ।

इस अध्ययन की प्रायोगिक प्रक्रियाओं को Rhineland-Palatinate, जर्मनी की एनिमल केयर कमेटी ने मंजूरी दी थी । पशु देखभाल नेत्र और दृष्टि अनुसंधान में पशुओं के उपयोग के लिए संस्थागत दिशानिर्देशों और दृष्टि और नेत्र विज?...

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	<li>Toda, N., Nakanishi-Toda, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nitric+oxide:+ocular+blood+flow,+glaucoma,+and+diabetic+retinopathy.">Nitric oxide: ocular blood flow, glaucoma, and diabetic retinopathy.</a> Prog Retin Eye Res. 26 (3), 205-238 (2007).</li><li>Schuster, A. K., Fischer, J. E., Vossmerbaeumer, C., Vossmerbaeumer, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+coherence+tomography-based+retinal+vessel+analysis+for+the+evaluation+of+hypertensive+vasculopathy.">Optical coherence tomography-based retinal vessel analysis for the evaluation of hypertensive vasculopathy.</a> Acta Ophthalmol. 93 (2), e148-e153 (2015).</li><li>Cherecheanu, A. P., Garhofer, G., Schmidl, D., Werkmeister, R., Schmetterer, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ocular+perfusion+pressure+and+ocular+blood+flow+in+glaucoma.">Ocular perfusion pressure and ocular blood flow in glaucoma.</a> Curr Opin Pharmacol. 13 (1), 36-42 (2013).</li><li>Faraci, F. M., Sigmund, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+biology+in+genetically+altered+mice+:+smaller+vessels,+bigger+insight.">Vascular biology in genetically altered mice : smaller vessels, bigger insight.</a> Circ Res. 85 (12), 1214-1225 (1999).</li><li>Kornfield, T. E., Newman, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+Retinal+Blood+Flow+Using+Fluorescently+Labeled+Red+Blood+Cells.">Measurement of Retinal Blood Flow Using Fluorescently Labeled Red Blood Cells.</a> eNeuro. 2 (2), (2015).</li><li>Guevara-Torres, A., Joseph, A., Schallek, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Label+free+measurement+of+retinal+blood+cell+flux,+velocity,+hematocrit+and+capillary+width+in+the+living+mouse+eye.">Label free measurement of retinal blood cell flux, velocity, hematocrit and capillary width in the living mouse eye.</a> Biomed Opt Express. 7 (10), 4229-4249 (2016).</li><li>Schallek, J., Geng, Y., Nguyen, H., Williams, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphology+and+topography+of+retinal+pericytes+in+the+living+mouse+retina+using+in+vivo+adaptive+optics+imaging+and+ex+vivo+characterization.">Morphology and topography of retinal pericytes in the living mouse retina using in vivo adaptive optics imaging and ex vivo characterization.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 54 (13), 8237-8250 (2013).</li><li>Gericke, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+the+muscarinic+acetylcholine+receptor+subtype+mediating+cholinergic+vasodilation+in+murine+retinal+arterioles.">Identification of the muscarinic acetylcholine receptor subtype mediating cholinergic vasodilation in murine retinal arterioles.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 52 (10), 7479-7484 (2011).</li><li>Gericke, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+role+of+alpha1-adrenoceptor+subtypes+in+murine+ophthalmic+arteries.">Functional role of alpha1-adrenoceptor subtypes in murine ophthalmic arteries.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 52 (7), 4795-4799 (2011).</li><li>Bohmer, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+alpha(1)B+-adrenoceptor+subtype+mediates+adrenergic+vasoconstriction+in+mouse+retinal+arterioles+with+damaged+endothelium.">The alpha(1)B -adrenoceptor subtype mediates adrenergic vasoconstriction in mouse retinal arterioles with damaged endothelium.</a> Br J Pharmacol. 171 (16), 3858-3867 (2014).</li></ol>

माउस रेटिना में संवहनी प्रतिक्रियाओं की माप रेटिना रक्त वाहिकाओं के छोटे आकार के कारण चुनौतीपूर्ण है. प्रस्तुत तकनीक के साथ, रेटिना धमनियों प्रकाश माइक्रोस्कोपी प्रेषित द्वारा कल्पना कर रहे हैं. यह ?...

रेटिना छिड़काव में गड़बड़ी मधुमेह रेटिनोपैथी, ग्रस्त रेटिनोपैथी, और मोतियाबिंद1,2,3के रूप में विभिन्न नेत्र रोगों, के रोगजनन में फंसाया गया है. इस प्रकार, रेटिना में संवहनी जेट को मापने के उद्देश्य से अध्ययन इन रोगों के pathophysiology को समझने के लिए और नए उपचार दृष्टिकोण विकसित करने के लिए महत्वपूर्ण हैं.
murine जीनोम में जीन हेरफेर की संभावना के कारण, माउस हृदय प्रणाली4के अध्ययन के लिए एक व्यापक रूप से इस्तेमाल किया जानवर मॉडल बन गया है । हालांकि, रेटिना रक्त वाहिकाओं के छोटे आकार (≤ 30 µm) के कारण, माउस रेटिना में संवहनी जेट की माप चुनौतीपूर्ण है । उदाहरण के लिए, vivo माप में के लिए stereomicroscopic तकनीक उनके ऑप्टिकल संकल्प में सीमित है और इसलिए केवल वास्तव में व्यास या कम ≤ से 30 µm व्यास के छोटे रक्त में रक्त के प्रवाह में परिवर्तन का पता लगाने की अनुमति जब से सुसज्जित इस तरह के एक फोकल माइक्रोस्कोप फ्लोरोसेंट रंजक या अनुकूली प्रकाशिकी प्रकाश Ophthalmoscope5,6स्कैनिंग का उपयोग कर के रूप में अतिरिक्त परिष्कृत उपकरणों, । इसके अलावा, vivo में व्याख्या रेटिना रक्त वाहिकाओं में स्थानीय संकेतन तंत्र की पहचान करने के उद्देश्य से माप anaesthetics द्वारा, प्रणालीगत रक्तचाप में परिवर्तन और retrobulbar रक्त वाहिकाओं के प्रभाव को स्थापित किया जा सकता है ।
इसलिए, हम उच्च ऑप्टिक संकल्प पूर्व vivoके साथ माउस रेटिना रक्त वाहिकाओं के प्रतिक्रियाओं को मापने के लिए एक विधि विकसित की है । इस के साथ साथ प्रस्तुत तकनीक रेटिना धमनियों के माध्यम से प्रेषित प्रकाश माइक्रोस्कोपी के दृश्य की अनुमति देता है. इस विधि है, जो भी चूहों में इस्तेमाल किया जा सकता है, नेत्र संवहनी अनुसंधान में जीन लक्ष्यीकरण प्रौद्योगिकी के लाभ के लिए उपयोग प्रदान करता है ।

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Steel Scissors</td>
			<td>Carl Roth GmbH</td>
			<td>3576.1</td>
			<td>1x 140 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eye Scissors</td>
			<td>Geuder</td>
			<td>G-19390</td>
			<td>1x straight, 10.5 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precision tweezers, straight with fine tips</td>
			<td>Carl Roth GmbH</td>
			<td>LH68.1</td>
			<td>2x type 4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precision tweezers, straight with extra fine tips</td>
			<td>Carl Roth GmbH</td>
			<td>LH53.1</td>
			<td>2x type 5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas capsulotomy scissors</td>
			<td>Geuder</td>
			<td>19760</td>
			<td>1x straight, 77 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Student Vannas Spring Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>91501-09</td>
			<td>1x curved,</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Barraquer Needle Holder</td>
			<td>Geuder</td>
			<td>G-17500</td>
			<td>1x curved, 120 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle</td>
			<td>Becton, Dickinson and Company</td>
			<td>305128</td>
			<td>1x 30 G</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Capillaries (for producing micropipettes)</td>
			<td>Drummond Scientific Company</td>
			<td>9-000-1211</td>
			<td>1x (1.2 x 0.8 mm; outer/inner diameter)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nylon Suture</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>198001</td>
			<td>1x 10-0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunclon cell culture dish</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>153066</td>
			<td>1x 35 mm diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunclon cell culture dish</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>172931</td>
			<td>1x 100 mm diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Discofix C</td>
			<td>Braun</td>
			<td>16500C</td>
			<td>10 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histoacryl adhesive</td>
			<td>B. Braun Surgical, S.A.</td>
			<td>1050052</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pericyclic pump&#160; (CYCLO II)</td>
			<td>Carl Roth GmbH</td>
			<td>EP76.1</td>
			<td>1x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vertical Pipette Puller Model 700C</td>
			<td>David Kopf Instruments</td>
			<td></td>
			<td>1x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope (Vanox-T AH-2)</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td>1x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water immersion objective LUMPlanFL, 1.0 NA</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td>1x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital camera (TK-C1381)</td>
			<td>JVC</td>
			<td></td>
			<td>1x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Perfusion chamber</td>
			<td>self-made</td>
			<td></td>
			<td>1x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Drugs and Solutions</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Carl Roth GmbH</td>
			<td>K928.4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride dihydrate (CaCl2)</td>
			<td>Carl Roth GmbH</td>
			<td>5239.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kalium chloride (KCl)</td>
			<td>Carl Roth GmbH</td>
			<td>6781.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kalium dihydrogen phosphate (KH2PO4)</td>
			<td>Carl Roth GmbH</td>
			<td>3904.2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium sulphate (MgSO4)</td>
			<td>Carl Roth GmbH</td>
			<td>261.2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride (NaCl)</td>
			<td>Carl Roth GmbH</td>
			<td>9265.2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydrogen carbonate (NaHCO3)</td>
			<td>Carl Roth GmbH</td>
			<td>0965.3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#945;-(D)-(+)- Glucose monohydrate</td>
			<td>Carl Roth GmbH</td>
			<td>6780.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>9,11-dideoxy-9&#945;,11&#945;-methanoepoxy prostaglandin F2&#945; (U-46619)</td>
			<td>Cayman Chemical</td>
			<td>16450</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetylcholine chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A6625-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation steps for measurement of reactivity in mouse retinal arterioles ex vivo

संवहनी कमी और सामान्य रेटिना छिड़काव में परिवर्तन विभिन्न दृष्टि के रोगजनन के लिए प्रमुख कारकों में से हैं-इस तरह के मधुमेह रेटिनोपैथी, ग्रस्त रेटिनोपैथी, और संभवतः मोतियाबिंद के रूप में नेत्र रोगों, धमकी । इसलिए, रेटिना microvascular तैयारी शारीरिक और औषधीय अध्ययन के लिए अंतर्निहित pathophysiological तंत्र को चित्रित करने के लिए और रोगों के लिए चिकित्सा डिजाइन करने के लिए निर्णायक उपकरण हैं । नेत्र अनुसंधान में माउस मॉडल के व्यापक उपयोग के बावजूद, रेटिना संवहनी जेट पर अध्ययन इस प्रजाति में दुर्लभ हैं । इस विसंगति का एक प्रमुख कारण यह है कि इन रेटिना रक्त वाहिकाओं के छोटे आकार के कारण चुनौतीपूर्ण अलगाव की प्रक्रिया है, जो ~ चमकदार व्यास में ≤ 30 µm है । कार्यात्मक अध्ययन के लिए इन रेटिना microvessels के प्रत्यक्ष अलगाव की समस्या को दरकिनार करने के लिए, हम एक अलगाव और तैयारी तकनीक है कि सक्षम बनाता है की स्थापना की पूर्व vivo के अंतर्गत माउस रेटिना का अध्ययन vasoactivity के पास-शारीरिक स्थितियों . हालांकि वर्तमान प्रायोगिक तैयारी विशेष रूप से माउस रेटिना धमनियों का उल्लेख होगा, इस पद्धति को आसानी से चूहों से microvessels को नियोजित किया जा सकता है ।

U-४६६१९ उत्पादित एकाग्रता-निर्भर vasoconstrictor प्रतिक्रियाओं में रेटिना धमनियों से C57Bl/6J पृष्ठभूमि के जंगली प्रकार चूहों । 10-6 मीटर की एकाग्रता में, चमकदार व्यास में कमी ≈ व्यास से ५०% थी । <strong class="xfig"...

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Preparation Steps for Measurement of Reactivity in Mouse Retinal Arterioles Ex Vivo

कई दृष्टि धमकी नेत्र रोगों बेकार रेटिना microvessels के साथ जुड़े रहे हैं । इसलिए, रेटिना arteriole प्रतिक्रियाओं की माप अंतर्निहित pathophysiological तंत्र की जाँच करने के लिए महत्वपूर्ण है. यह आलेख वर्णन करता है कि माउस रेटिना arteriole आइसोलेशन और संवहनी व्यास पर vasoactive पदार्थों के प्रभाव का आकलन करने के लिए तैयारी के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल.

माउस रेटिना धमनियों में जेट की माप के लिए तैयारी चरण पूर्व Vivo

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Research

JoVE Journal

Medicine

Preparation Steps for Measurement of Reactivity in Mouse Retinal Arterioles Ex Vivo

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