Name: multi-photon time lapse imaging to visualize development in real-time: visualization of migrating neural crest cells in zebrafish embryos
Uploaded: 2017-08-09T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Multi-Photon Time Lapse Imaging to Visualize Development in Real-time: Visualization of Migrating Neural Crest Cells in Zebrafish Embryos at JoVE.com

Авторы благодарят Томас Шиллинг за любезно дар рыбы Tg (sox10:eGFP) и Мэри Хэллоран для любезно дар Tg рыбы(foxd3:GFP) .

The protocol described here was performed in accordance with the guidelines for the humane treatment of laboratory animals established by the University of Michigan Committee on the Use and Care of Animals (UCUCA).
1. Embryo Collection for Time-lapse Imaging
<ol>
	<li>Between 3 and 9 pm, set up male and female adult Tg(sox10:EGFP) or Tg(foxd3:GFP) transgenic zebrafish in a divided breeding tank for pairwise mating. 
	NOTE: The Tg(sox10:EGFP) and Tg(foxd3:G...

<ol>
	<li>Barembaum, M., Bronner-Fraser, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+steps+in+neural+crest+specification.">Early steps in neural crest specification.</a> Sem Cell Dev Biol. 16, 642-646 (2005).</li><li>Gage, P. J., Rhoades, W., Prucka, S. K., Hjalt, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fate+maps+of+neural+crest+and+mesoderm+in+the+mammalian+eye.">Fate maps of neural crest and mesoderm in the mammalian eye.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 46 (11), 4200-4208 (2005).</li><li>Minoux, M., Rijli, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mechanisms+of+cranial+neural+crest+cell+migration+and+patterning+in+craniofacial+development.">Molecular mechanisms of cranial neural crest cell migration and patterning in craniofacial development.</a> Development. 137, 2605-2621 (2010).</li><li>Trainor, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specification+of+neural+crest+cell+formation+and+migration+in+mouse+embryos.">Specification of neural crest cell formation and migration in mouse embryos.</a> Sem Cell Dev Biol. 16, 683-693 (2005).</li><li>Johnston, M. C., Noden, D. M., Hazelton, R. D., Coulombre, J. L., Coulombre, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Origins+of+avian+ocular+and+periocular+tissues.">Origins of avian ocular and periocular tissues.</a> Exp Eye Res. 29, 27-43 (1979).</li><li>Bohnsack, B. L., Kahana, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thyroid+hormone+and+retinoic+acid+interact+to+regulate+zebrafish+craniofacial+neural+crest+development.">Thyroid hormone and retinoic acid interact to regulate zebrafish craniofacial neural crest development.</a> Dev Biol. 373, 300-309 (2013).</li><li>Chawla, B., Schley, E., Williams, A. L., Bohnsack, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinoic+acid+and+pitx2+regulate+early+neural+crest+survival+and+migration+in+craniofacial+and+ocular+development.">Retinoic acid and pitx2 regulate early neural crest survival and migration in craniofacial and ocular development.</a> Birth Defects Res B Dev Reprod Toxicol. , (2016).</li><li>Trainor, P. A., Tam, P. P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cranial+paraxial+mesoderm+and+neural+crest+cells+of+the+mouse+embryo-codistribution+in+the+craniofacial+mesenchyme+but+distinct+segregation+in+branchial+arches.">Cranial paraxial mesoderm and neural crest cells of the mouse embryo-codistribution in the craniofacial mesenchyme but distinct segregation in branchial arches.</a> Development. 121 (8), 2569-2582 (1995).</li><li>Hong, C. S., Saint-Jeannet, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sox+proteins+and+neural+crest+development.">Sox proteins and neural crest development.</a> Sem Cell Dev Biol. 16, 694-703 (2005).</li><li>Steventon, B., Carona-Fontaine, C., Mayor, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+network+during+neural+crest+induction:+from+cell+specification+to+cell+survival.">Genetic network during neural crest induction: from cell specification to cell survival.</a> Sem Cell Dev Biol. 16, 647-654 (2005).</li><li>Dressler, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dental+and+craniofacial+anomalies+associated+wth+Axenfeld-Rieger+syndrome+with+PITX2+mutation.">Dental and craniofacial anomalies associated wth Axenfeld-Rieger syndrome with PITX2 mutation.</a> Case Report Med. , 621984 (2010).</li><li>Ozeki, H., Shirai, S., Ikeda, K., Ogura, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anomalies+associated+with+Axenfeld-Rieger+syndrome.">Anomalies associated with Axenfeld-Rieger syndrome.</a> Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. 237 (9), 730-734 (1999).</li><li>Strungaru, M. H., Dinu, I., Walter, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genotype-phenotype+correlations+in+Axenfeld-Rieger+malformation+and+glaucoma+patients+with+FOXC1+and+PITX2+mutations.">Genotype-phenotype correlations in Axenfeld-Rieger malformation and glaucoma patients with FOXC1 and PITX2 mutations.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 48, 228-237 (2007).</li><li>Tumer, Z., Bach-Holm, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axenfeld-Rieger+syndrome+and+spectrum+of+Pitx2+and+Foxc1+mutations.">Axenfeld-Rieger syndrome and spectrum of Pitx2 and Foxc1 mutations.</a> Eur J Hum Genet. 17, 1527-1539 (2009).</li><li>Schoner, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrocephalus,+agenesis+of+the+corpus+callosum,+and+cleft+lip/palate+represent+frequent+associations+in+fetuses+with+Peters+plus+syndrome+and+B3GALTL+mutations.+Fetal+PPS+phenotypes,+expanded+by+Dandy+Walker+cyst+and+encephalocele.">Hydrocephalus, agenesis of the corpus callosum, and cleft lip/palate represent frequent associations in fetuses with Peters plus syndrome and B3GALTL mutations. Fetal PPS phenotypes, expanded by Dandy Walker cyst and encephalocele.</a> Prenat Diagn. 33 (1), 75-80 (2013).</li><li>Aliferis, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+nonsense+B3GALTL+mutation+confirms+Peters+plus+syndrome+in+a+patient+with+multiple+malformations+and+Peters+anomaly.">A novel nonsense B3GALTL mutation confirms Peters plus syndrome in a patient with multiple malformations and Peters anomaly.</a> Ophthalmic Genet. 31 (4), 205-208 (2010).</li><li>Lesnik Oberstein, ., S, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peters+Plus+syndrome+is+caused+by+mutations+in+B3GALTL,+a+putative+glycosyltransferase.">Peters Plus syndrome is caused by mutations in B3GALTL, a putative glycosyltransferase.</a> Am J Hum Genet. 79 (3), 562-566 (2006).</li><li>Brittijn, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+development+and+regeneration:+new+tools+for+biomedical+research.">Zebrafish development and regeneration: new tools for biomedical research.</a> Int J Dev Biol. 53, 835-850 (2009).</li><li>Bohnsack, B. L., Kasprick, D., Kish, P. E., Goldman, D., Kahana, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+zebrafish+model+of+Axenfeld-Rieger+Syndrome+reveals+that+pitx2+regulation+by+retinoic+acid+is+essential+for+ocular+and+craniofacial+development.">A zebrafish model of Axenfeld-Rieger Syndrome reveals that pitx2 regulation by retinoic acid is essential for ocular and craniofacial development.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 53 (1), 7-22 (2012).</li><li>Williams, A. L., Eason, J., Chawla, B., Bohnsack, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyp1b1+regulates+ocular+fissure+closure+through+a+retinoic+acid-independent+pathway.">Cyp1b1 regulates ocular fissure closure through a retinoic acid-independent pathway.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 58 (2), 1084-1097 (2017).</li><li>Curran, K., Raible, D. W., Lister, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Foxd3+controls+melanophore+specification+in+the+zebrafish+neual+crest+by+regulation+of+Mitf.">Foxd3 controls melanophore specification in the zebrafish neual crest by regulation of Mitf.</a> Dev Biol. 332 (2), 408-417 (2009).</li><li>Dutton, K., Dutton, J. R., Pauliny, A., Kelsh, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+morpholino+phenocopy+of+the+colourless+mutant.">A morpholino phenocopy of the colourless mutant.</a> Genesis. 30 (3), 188-189 (2001).</li><li>Dutton, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+colourless+encodes+sox10+and+specifies+non-ectomesenchymal+neural+crest+fates.">Zebrafish colourless encodes sox10 and specifies non-ectomesenchymal neural crest fates.</a> Development. 128 (21), 4113-4125 (2001).</li><li>Kucenas, S., Takada, N., Park, H. C., Woodruff, E., Broadie, K., Appel, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CNS-derived+glia+ensheath+peripheral+nerves+and+mediate+motor+root+development.">CNS-derived glia ensheath peripheral nerves and mediate motor root development.</a> Nat Neurosci. 11, 143-151 (2008).</li><li>Denk, W., Strickler, J., Webb, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-photon+laser+scanning+fluorescence+microscopy.">Two-photon laser scanning fluorescence microscopy.</a> Science. 248 (4951), 73-76 (1990).</li><li>Helmchen, F., Denk, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deep+tissue+two-photon+microscopy.">Deep tissue two-photon microscopy.</a> Nat Methods. 2 (12), 932-940 (2005).</li><li>Denk, W., Delaney, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anatomical+and+functional+imaging+of+neurons+using+2-photon+laser+scanning+microscopy.">Anatomical and functional imaging of neurons using 2-photon laser scanning microscopy.</a> J Neurosci Methods. 54 (2), 151-162 (1994).</li><li>Bohnsack, B. L., Gallina, D., Kahana, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenothiourea+sensitizes+zebrafish+cranial+neural+crest+and+extraocular+muscle+developmnt+to+changes+in+retinoic+acid+and+insulin-like+growth+factor+signaling.">Phenothiourea sensitizes zebrafish cranial neural crest and extraocular muscle developmnt to changes in retinoic acid and insulin-like growth factor signaling.</a> PLoS ONE. 6, e22991 (2011).</li><li>Gfrerer, L., Dougherty, M., Laio, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+of+craniofacial+development+in+the+sox10:kaede+transgenic+zebrafish+line+using+time-lapse+confocal+microscopy.">Visualization of craniofacial development in the sox10:kaede transgenic zebrafish line using time-lapse confocal microscopy.</a> J Vis Exp. (79), e50525 (2013).</li><li>Lopez, A. L. R., Garcai, M. D., Dickinson, M. E., Larina, I. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+confocal+microscopy+of+the+developing+mouse+embryonic+yolk+sac+vasculature.">Live confocal microscopy of the developing mouse embryonic yolk sac vasculature.</a> Methods Mol Biol. 1214, 163-172 (2015).</li><li>McGurk, P. D., Lovely, C. B., Eberhart, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analyzing+craniofacial+morphogenesis+in+zebrafish+using+4D+confocal+microscopy.">Analyzing craniofacial morphogenesis in zebrafish using 4D confocal microscopy.</a> J Vis Exp. (83), e51190 (2014).</li><li>Nowotschin, S., Ferrer-Vaquer, A., Hadjantonakis, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+mouse+development+with+confocal+time-lapse+microscopy.">Imaging mouse development with confocal time-lapse microscopy.</a> Methods Enzymol. 476, 351-377 (2010).</li></ol>

Мульти Фотон покадровой изображений позволяет отслеживать в естественных условиях переходных и мигрирующих клеточных популяций. Эта мощная техника может использоваться для исследования эмбриональных процессы в режиме реального времени, и в настоящем исследовании, результаты э...

Врожденных глазных болезней может привести к слепоте детство и часто из-за аномалий черепа нейронные крест. Гребень нейронные клетки являются переходные стволовые клетки, которые возникают от нервной трубки и образуют многочисленные тканях по всему телу. 1 , 2 , 3 , 4 , 5 гребень нейронные клетки, производный от переднего мозга и среднего мозга, привести к кости и хряща средней зоны лица и лобной области, Ирис, роговицы, Трабекулярная сеть, и склеры в переднего сегмента глаза. 4 , 6 , 7 , 8 гребень нейронные клетки от ромбовидный мозг форма, которую Фарингальные арки, челюсти и сердечной отток тракта. 1 , 3 , 4 , 9 , 10 исследования показали вклад нейронные крест для глазной и Периокулярная развития, подчеркивая важность этих клеток в развитии позвоночных глаз. Действительно нарушению миграции клеток нервной гребень и дифференциации привести к краниофациальных и глазные аномалии наблюдаются в Axenfeld Ригер синдром и синдром плюс Питерс. 11 , 12 , 13 , 14 , 15 , 16 , 17 таким образом, полное понимание миграции, пролиферации и дифференцировки клеток эти нейронные крест даст понимание сложностей, лежащих в основе врожденных глазных заболеваний.
Данио рерио представляет собой мощную модель организм для изучения развития глазной, как структуры глаза у рыбок данио похожи на млекопитающих их коллегами, и многие гены эволюционно консервируют между данио рерио и млекопитающих. 18 , 19 , 20 Кроме того, данио рерио эмбрионов являются транспарентными и яйцекладущие, облегчения визуализации развития глаз в режиме реального времени.
Расширение на ранее опубликованные работы,6,7,20 мигрирующих шаблон гребень нейронные клетки был описан с помощью нескольких Фотон флуоресценции покадровой изображений на линиях трансгенных данио рерио, помечены Зеленый флуоресцентный белок (ГПУП) под контролем transcriptional SRY (секс определение региона Y)-коробке 10 (sox10) или Forkhead поле D3 (foxd3) ген регулирования регионов. 21 , 22 , 23 , 24. несколько фотонных флуоресценции покадровой изображений является мощная техника, которая сочетает в себе передовые оптические технологии лазерной сканирующей микроскопии с длиной волны мульти Фотон флуоресценции возбуждения для захвата изображений с высоким разрешением, трехмерные образцов, отмеченных флуорофоров. 25 , 26 , 27 использование лазера мульти Фотон имеет явные преимущества над стандартным confocal микроскопии, в том числе рост тканей проникновения и снижение Флюорофор отбеливания.
С помощью этого метода, два отдельных популяций нейронные крест клеток разного времени миграции и миграционных путей были дискриминации, а именно foxd3-позитивных гребень нейронные клетки в Периокулярная Мезенхима и развивающихся глаз и нейронные крест sox10-положительных клеток в краниофациальных мезенхимы. С помощью этого метода вводится подход к визуализации миграции глазной и черепно-лицевых невральной гребень миграции в данио рерио, что делает его легко наблюдать регулируемых нейронные крест миграции в режиме реального времени во время разработки.
Этот протокол содержит сведения для создания покадровой видео во время раннего развития глаз в тг (sox10:EGFP) и трансгенных данио рерио тг (foxd3:GFP), в качестве примера. Этот протокол может применяться для высокого разрешения, трехмерные, в реальном времени визуализации на ранних стадиях развития любой глазной и краниофациальной структуры, производные от гребня нейронные клетки в данио рерио. Кроме того этот метод также может применяться для визуализации развития других тканей и органов в данио рерио и других животных моделях.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="919">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:251px;">Breeding Tanks with Dividers</td>
			<td style="width:175px;">Aquaneering</td>
			<td style="width:104px;">ZHCT100</td>
			<td style="width:391px;">Crossing Tank Set (1.0-liter) Clear Polycarbonate with Lid and Insert</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:251px;">M205 FA Combi-Scope</td>
			<td style="width:175px;">Leica Microsystems CMS GmbH</td>
			<td style="width:104px;"></td>
			<td style="width:391px;">Stereofluorescence Microscope - FusionOptics and TripleBeam</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:251px;">Sodium Chloride</td>
			<td style="width:175px;">Millipore (EMD)</td>
			<td style="width:104px;">7760-5KG</td>
			<td style="width:391px;">Double PE sack. CAS No. 7647-14-5, EC Number 231-598-3</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:251px;">Potassium Chloride</td>
			<td style="width:175px;">Millipore (EMD)</td>
			<td style="width:104px;">1049380500</td>
			<td style="width:391px;">Potassium chloride 99.999 Suprapur. CAS No. 7447-40-7, EC Number 231-211-8.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:251px;">Calcium Chloride Dihydrate</td>
			<td style="width:175px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:104px;">C79-500</td>
			<td style="width:391px;">Poly bottle; 500 g. CAS No. 10035-04-8</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:251px;">Magnesium Sulfate (Anhydrous)</td>
			<td style="width:175px;">Millipore (EMD)</td>
			<td style="width:104px;">MX0075-1</td>
			<td style="width:391px;">Poly bottle; 500 g. CAS No. 7487-88-9, EC Number 231-298-2</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:251px;">Methylene Blue</td>
			<td style="width:175px;">Millipore (EMD)</td>
			<td style="width:104px;">284-12</td>
			<td style="width:391px;">Glass bottle; 25 g. Powder, Certified Biological Stain</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:251px;">Sodium Bicarbonate</td>
			<td style="width:175px;">Millipore (EMD)</td>
			<td style="width:104px;">SX0320-1</td>
			<td style="width:391px;">Poly bottle; 500 g. Powder, GR ACS. CAS No. 144-55-8, EC Number 205-633-8</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:251px;">N-Phenylthiourea</td>
			<td style="width:175px;">Sigma</td>
			<td style="width:104px;">P7629-25G</td>
			<td style="width:391px;">&#62;98%. CAS Number 103-85-5, EC Number 203-151-2</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:251px;">Dimethylsulfoxide</td>
			<td style="width:175px;">Sigma</td>
			<td style="width:104px;">D8418-500ML</td>
			<td style="width:391px;">Molecular Biology grade. CAS Number 67-68-5, EC Number 200-664-3</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:251px;">Tricaine Methanesulfonate</td>
			<td style="width:175px;">Western Chemical Inc.</td>
			<td style="width:104px;">MS222</td>
			<td style="width:391px;">Tricaine-S</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:251px;">Low-Melt Agarose</td>
			<td style="width:175px;">ISC Bioexpress</td>
			<td style="width:104px;">E-3112-25</td>
			<td style="width:391px;">GeneMate Sieve GQA Low Melt Agarose, 25 g</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:251px;">Open Bath Chamber</td>
			<td style="width:175px;">Warner Instruments</td>
			<td style="width:104px;">RC-40HP</td>
			<td style="width:391px;">High Profile</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:251px;">Glass Coverslips</td>
			<td style="width:175px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:104px;">12-545-102</td>
			<td style="width:391px;">Circle cover glass. 25 mm diameter</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:251px;">High Vacuum Grease</td>
			<td style="width:175px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:104px;">14-635-5C</td>
			<td style="width:391px;">2.0-lb. tube. DOW CORNING CORPORATION 
			1658832</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:251px;">Quick Exchange Platform</td>
			<td style="width:175px;">Warner Instruments</td>
			<td style="width:104px;">QE-1</td>
			<td style="width:391px;">35 mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:251px;">Stage Adapter</td>
			<td style="width:175px;">Warner Instruments</td>
			<td style="width:104px;">SA-20LZ-AL</td>
			<td style="width:391px;">16.5 x 10 cm</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:251px;">TC SP5 MP multi-photon microscope</td>
			<td style="width:175px;">Leica Microsystems CMS GmbH</td>
			<td style="width:104px;"></td>
			<td style="width:391px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:251px;">Mai Tai DeepSee Ti-Sapphire Laser</td>
			<td style="width:175px;">SpectraPhysics</td>
			<td style="width:104px;"></td>
			<td style="width:391px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:251px;">Laser Safety Box</td>
			<td style="width:175px;">Leica Microsystems CMS GmbH</td>
			<td style="width:104px;"></td>
			<td style="width:391px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:251px;">Leica Application Suite X (LAS X)&#160; Software</td>
			<td style="width:175px;">Leica Microsystems CMS GmbH</td>
			<td style="width:104px;"></td>
			<td style="width:391px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:251px;">Photoshop CS 6 Version 13.0 x64 Software</td>
			<td style="width:175px;">Adobe</td>
			<td style="width:104px;"></td>
			<td style="width:391px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:251px;">iMovie Version 10.1.4 Software</td>
			<td style="width:175px;">Apple</td>
			<td style="width:104px;"></td>
			<td style="width:391px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

multi-photon time lapse imaging to visualize development in real-time: visualization of migrating neural crest cells in zebrafish embryos

Врождённая глаз и черепно-лицевых аномалий отражают сбои в нейронные крест, переходных населения мигрирующих стволовых клеток, которые порождают многочисленные типы клеток по всему телу. Понимание биологии нейронные крест был ограниченным, что отражает отсутствие генетически шансов справиться с возникающими моделей, которые могут быть изучены в естественных условиях и в режиме реального времени. Данио рерио представляет собой особо важное значение развития модель для изучения популяций мигрирующих клеток, например нейронные крест. Для изучения миграции нейронные крест в развивающихся глаз, сочетание передовых оптических методов лазерной сканирующей микроскопии с длиной волны возбуждения флуоресценции мульти ФОТОН был реализован для захвата видео с высоким разрешением, трехмерные, реальном времени развивающихся глаза в трансгенных данио рерио эмбрионов, а именно: Tg (sox10:EGFP) и тг (foxd3:GFP), как sox10 и foxd3 было показано в многочисленных животных моделей для регулирования раннего нейронные крест дифференциации и вероятно представляют маркеры для гребня нейронные клетки. Мульти Фотон покадровой изображения была использована для различить поведение и миграционные процессы двух нейронные крест клеточных популяций способствуют раннему развитию глаз. Этот протокол предоставляет информацию для создания покадровой видео во время миграции данио рерио нейронные крест, как, например и может применяться для визуализации раннего развития многих структур в данио рерио и других модельных организмов.

Мульти Фотон флуоресценции покадровой изображений создаются серию видеофильмов, которые показали миграционных черепной нейронные крест клеток, которые порождают черепно-лицевых структур и переднего сегмента глаза в Tg (sox10:EGFP) и тг (foxd3:GFP) у рыбок данио линии....

Watch this Scientific Journal Video about Multi-Photon Time Lapse Imaging to Visualize Development in Real-time: Visualization of Migrating Neural Crest Cells in Zebrafish Embryos at JoVE.com

Multi-Photon Time Lapse Imaging to Visualize Development in Real-time: Visualization of Migrating Neural Crest Cells in Zebrafish Embryos

Мульти Фотон время Замедленная съемка изображений для визуализации в режиме реального времени разработки: Визуализация миграции клеток нервной гребень в Zebrafish эмбриона

Сочетание передовых оптических методов лазерной сканирующей микроскопии с длинные волны возбуждения флуоресценции мульти ФОТОН был реализован для захвата изображений с высоким разрешением, трехмерные, реального времени нейронные крест миграции в Tg (sox10:EGFP) и тг (foxd3:GFP) zebrafish эмбриона.

Congenital eye and craniofacial anomalies reflect disruptions in the neural crest, a transient population of migratory stem cells that give rise to ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Analyzing In Vivo Cell Migration using Cell Transplantations and Time-lapse Imaging in Zebrafish Embryos

Analyzing In Vivo Cell Migration using Cell Transplantations and Time-lapse Imaging in Zebrafish Embryos

Анализ<em&gt; В Vivo</em&gt; Миграция клеток с использованием мобильных трансплантаций и время покадровой визуализации у эмбрионов данио рерио

Cell migration is key to many physiological and pathological conditions, including cancer metastasis. The cellular and molecular bases of cell migration ...

Analysis of Zebrafish Kidney Development with Time-lapse Imaging Using a Dissecting Microscope Equipped for Optical Sectioning

Анализ развития данио почки с течением времени покадровой визуализации Использование рассекает микроскопа, оборудованного для оптического секционирования

In order to understand organogenesis, the spatial and temporal alterations that occur during development of tissues need to be recorded. The method ...

Kinetic Measurement and Real Time Visualization of Somatic Reprogramming

Кинетическая измерения и в реальном времени Визуализация соматического Перепрограммирование

Somatic reprogramming has enabled the conversion of adult cells to induced pluripotent stem cells (iPSC) from diverse genetic backgrounds and disease ...

Induction of Hypoxia in Living Frog and Zebrafish Embryos

Индукция гипоксии у живых лягушек и эмбрионов рыбок данио

Here, we introduce a novel system for hypoxia induction, which we developed to study the effects of hypoxia in aquatic organisms such as frog and ...

Development of an In Vitro Assay to Quantitate Hematopoietic Stem and Progenitor Cells (HSPCs) in Developing Zebrafish Embryos

Development of an In Vitro Assay to Quantitate Hematopoietic Stem and Progenitor Cells HSPCs in Developing Zebrafish Embryos

Разработка в Vitro Assay чтобы Quantitate гемопоэтических стволовых и прогениторных клеток (HSPCs) в развитии эмбрионов у рыбок данио

Hematopoiesis is an essential cellular process in which hematopoietic stem and progenitor cells (HSPCs) differentiate into the multitude of different cell ...

Real-time Live-cell Flow Cytometry to Investigate Calcium Influx, Pore Formation, and Phagocytosis by P2X7 Receptors in Adult Neural Progenitor Cells

В реальном времени живой клетки проточной цитометрии расследовать приток кальция, порообразования и фагоцитоз, P2X7 рецепторы в клетках взрослых нейронных прародителя

Live-cell flow cytometry is increasingly used among cell biologists to quantify biological processes in a living cell culture. This protocol describes a ...

A Layered Mounting Method for Extended Time-Lapse Confocal Microscopy of Whole Zebrafish Embryos

Слойный монтаж Метод для расширенного времени Lapse Конфокальная микроскопия целых эмбрионов зебрафиш

Dynamics of development can be followed by confocal time-lapse microscopy of live transgenic zebrafish embryos expressing fluorescence in specific tissues ...

Real-time Bioluminescence Imaging of Notch Signaling Dynamics during Murine Neurogenesis

Биолюминесценция в режиме реального времени Визуализация динамики сигнализации во время Нейрогенеза Murine

Notch signaling regulates the maintenance of neural stem/progenitor cells by cell-cell interactions. The components of Notch signaling exhibit dynamic ...

Isolation, Culture, and Adipogenic Induction of Neural Crest Original Adipose-Derived Stem Cells from Periaortic Adipose Tissue

Изоляция, Культура и адипогенная индукция нейронных Креста Оригинальные жировые стволовые клетки из периаортных жировой ткани

An excessive amount of adipose tissue surrounding the blood vessels (perivascular adipose tissue, also known as PVAT) is associated with a high risk of ...