Name: technique of minimally invasive transverse aortic constriction in mice for induction of left ventricular hypertrophy
Uploaded: 2017-09-25T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Technique of Minimally Invasive Transverse Aortic Constriction in Mice for Induction of Left Ventricular Hypertrophy at JoVE.com

Ce travail a été soutenu par une subvention (N ° 32016) de la Fondation Suisse cardiovasculaire RT.

souris mâles C57BL/6J (10 semaines, 25 à 30g, n = 60) sont utilisés dans le présent protocole. Animaux reçoit des soins compatissants conformément aux directives formulées par le Ministère Français de l’Agriculture et de l’enseignement supérieur et de la recherche, et toutes les procédures sont effectuées conformément à la Directive européenne du Conseil communautaire du 24 novembre 1986 () 86/609/CEE) et les lois Français. Le protocole a été approuvé par le &#34; Comité régional d’éthique po...

<ol>
	<li>Molinari, F., Malara, N., Mollace, V., Rosano, G., Ferraro, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+cardiac+cachexia.">Animal models of cardiac cachexia.</a> Int. J. Cardiol. 219 (15), 105-110 (2016).</li><li>Tarnavski, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+surgical+models+in+cardiovascular+research.">Mouse surgical models in cardiovascular research.</a> Methods. Mol. Biol. 573, 115-137 (2009).</li><li>Verma, S. K., Krishnamurthy, P., Kishore, R., Ardehali, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transverse+aortic+constriction:+a+model+to+study+heart+failure+in+small+animals.">Transverse aortic constriction: a model to study heart failure in small animals.</a> Manual of Research Techniques in Cardiovascular Medicine. , 164-169 (2014).</li><li>Patten, R. D., Hall-Porter, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Small+animal+models+of+heart+failure.+Development+of+novel+therapies,+past+and+present.">Small animal models of heart failure. Development of novel therapies, past and present.</a> Circ. Heart Fail. 2 (2), 138-144 (2009).</li><li>Rockman, H. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Segregation+of+atrial-specific+and+inducible+expression+of+an+atrial+natriuretic+factor+transgene+in+an+in+vivo+murine+model+of+cardiac+hypertrophy.">Segregation of atrial-specific and inducible expression of an atrial natriuretic factor transgene in an in vivo murine model of cardiac hypertrophy.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 88 (18), 8277-8281 (1991).</li><li>Barrick, C. J., Rojas, M., Schoonhoven, R., Smyth, S. S., Threadgill, D. 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Thorac. Cardiovasc. Surg. 141 (2), 492-500 (2011).</li><li>Andersen, N. M., Tang, R., Li, L., Javan, H., Zhang, X. Q., Selzman, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IKK-&#946;+inhibition+prevents+adaptive+left+ventricular+hypertrophy.">IKK-&#946; inhibition prevents adaptive left ventricular hypertrophy.</a> J. Surg. Res. 178 (1), 105-109 (2012).</li><li>Nemska, S., Monassier, L., Gassmann, M., Frossard, N., Tavakoli, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinetic+mRNA+profiling+in+a+rat+model+of+left+ventricular+hypertrophy+reveals+early+expression+of+chemokines+and+their+receptors.">Kinetic mRNA profiling in a rat model of left ventricular hypertrophy reveals early expression of chemokines and their receptors.</a> PLoS ONE. 11 (8), 0161273 (2016).</li><li>Liao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Echocardiographic+assessment+of+LV+hypertrophy+and+function+in+aortic-banded+mice:+necropsy+validation.">Echocardiographic assessment of LV hypertrophy and function in aortic-banded mice: necropsy validation.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 282 (5), 1703-1708 (2002).</li><li>Stansfield, W. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+a+model+to+independently+study+regression+of+ventricular+hypertrophy.">Characterization of a model to independently study regression of ventricular hypertrophy.</a> J. Surg. Res. 142 (2), 387-393 (2007).</li><li>Beetz, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ablation+of+biglycan+attenuates+cardiac+hypertrophy+and+fibrosis+after+left+ventricular+pressure+overload.">Ablation of biglycan attenuates cardiac hypertrophy and fibrosis after left ventricular pressure overload.</a> J. Mol. Cell. Cardiol. 101, 145-155 (2016).</li></ol>

Le but du présent protocole est de présenter une illustration étape par étape de la technique chirurgicale pour la constriction aortique transversale peu invasive chez les souris. Description technique détaillée du transverse constriction aortique chez la souris a été signalée par d’autres auteurs2,8. Toutefois, ces enquêteurs opérer après intubation et ventilation des animaux. L’utilisation d’une étape supplémentaire d’intubation-ventilatio...

Durant les dernières années, l’étude de l’insuffisance cardiaque a été menée dans animal viable les modèles1. Par rapport aux grands modèles animaux de l’insuffisance cardiaque, petits modèles animaux ont de nombreux avantages potentiels. À côté de la réduction des coûts du logement et de la maintenance, petits modèles animaux sont accessibles à davantage de chercheurs en raison de la moins complexe d’installations nécessaires2.
Insuffisance cardiaque murin offre bon nombre des mêmes avantages que les modèles de rat. En outre, réduit à un logement coûte3, souris modèles bénéficient de la disponibilité des souches de le pertinents transgéniques et knock-out (KO). La possibilité de cellule spécifique au type, inductible KO ou stratégies transgéniques font la souris un outil précieux pour l’étude de la pathogenèse de l’insuffisance cardiaque et de tenter d’identifier les nouveaux régimes thérapeutiques3.
Chez la souris de l’insuffisance cardiaque, les modèles actuellement utilisés4, constriction aortique transversale (TAC), qui a été décrite par Rockman5 est le modèle préféré pour générer la pression induite par la surcharge hypertrophie ventriculaire gauche (HVG)1 , 3. le plus grand avantage de ce modèle est la capacité de permettre la stratification de l’HVG2, bien que le ventricule gauche transformant en réponse au TAC est variable chez les souches de souris différents. En particulier, des souris C57BL/6 développent une dilatation rapide LV après un TAC qui ne peut pas se produire avec d’autres souches4,6,7.
L’apparition soudaine de l’hypertension artérielle atteint avec TAC causes un environ augmentation de 50 % en masse de LV dans les 2 semaines, ce qui permet d’examiner rapidement l’activité des interventions pharmacologiques ou moléculaires visant à moduler le développement de l’HVG4. L’induction aiguë d’hypertension artérielle sévère par la TAC ne reproduit pas exactement l’hypertrophie ventriculaire gauche progressiste et remodelage observés en milieu clinique de sténose aortique ou hypertension artérielle. Néanmoins, ce modèle est utilisé par de nombreux chercheurs pour identifier et modifier les nouvelles cibles thérapeutiques dans l’insuffisance cardiaque4.
TAC chez les souris requiert une plus grande expertise chirurgicale que celle requise pour les autres techniques utilisées pour induire l’HVG et ultérieures insuffisance cardiaque2. La plupart des auteurs exécutez cette procédure d’intubation et la ventilation de l’animal2,8, qui rend cette procédure plus exigeants et chronophage et ajoute à la charge chirurgicale de l’animal. Seulement quelques chercheurs ont utilisé des TAC minimalement invasive dans leur étude avec une brève référence à l’intervention chirurgicale9,10,11.
Le but du présent protocole est de décrire étape par étape une technique simplifiée et facile à utiliser de mini-invasive transversale constriction aortique chez les souris, mettant en évidence les étapes cruciales de la procédure. En suivant ces étapes clés, on peut facilement réaliser cette technique.

<table width="556">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="width:216px;height:20px;">Surgical microscope</td>
			<td style="width:108px;">Olympus</td>
			<td style="width:171px;">SZX2-TR30</td>
			<td style="width:63px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Razor</td>
			<td>Rowenta</td>
			<td>Nomad TN3650FO</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="width:495px;height:20px;">Sutures:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Polypropylene 7/0</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>BV-1X</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Polypropylene 6/0</td>
			<td>BBraun</td>
			<td>C0862061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Silk 6/0 ligature&#160;</td>
			<td>FST</td>
			<td>18020-60</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Polypropylene 4/0</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>8683</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Polypropylene 5/0</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>Z303</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="width:495px;height:20px;">Drugs:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Ketamin</td>
			<td>Merial</td>
			<td>Imalg&#232;ne 1000, LBM154AD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Xylazine</td>
			<td>Bayer</td>
			<td>Rompun 2%, KP09PPC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Buprenorphine</td>
			<td>Ceva</td>
			<td>Vetergesic, 072013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="width:495px;height:20px;">Instruments:&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Bone nippers</td>
			<td>Fine Surgical Tools</td>
			<td>16101-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Ligation aid</td>
			<td>Fine Surgical Tools</td>
			<td>18062-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Tying forceps</td>
			<td>Fine Surgical Tools</td>
			<td>18026-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Needle holder Crile-Wood</td>
			<td>Fine Surgical Tools</td>
			<td>12003-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Microsurgery forceps&#160;</td>
			<td>Fine Surgical Tools</td>
			<td>11003-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Microsurgery forceps&#160;</td>
			<td>Fine Surgical Tools</td>
			<td>11002-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Tissue forceps</td>
			<td>Fine Surgical Tools</td>
			<td>11021-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Microsurgery needle holder</td>
			<td>Fine Surgical Tools</td>
			<td>12076-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Microsurgery scissors</td>
			<td>Fine Surgical Tools</td>
			<td>91501-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Mayo scissors</td>
			<td>Fine Surgical Tools</td>
			<td>14511-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">11-blade knife</td>
			<td>Fine Surgical Tools</td>
			<td>10011-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="width:495px;height:20px;">RNA extraction and qPCR:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">TriReagent</td>
			<td>Euromedex</td>
			<td>TR-118-200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Rneasy Mini kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>74704</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Qubit Fluorimetric RNA assay</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>10034622</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">RNA 6000 Nano kit</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>5067-1511</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">High Capacity cDNA kit</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>10400745</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Taqman Master Mix</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>10157154</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Taqman BNP primers</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>Mm01255770_g1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="width:216px;height:20px;">Taqman ANP primers</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>Mm01255747_g1&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Taqman ACE primers</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>Mm00802048_m1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Taqman Col1a1 primers&#160;</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>Mm00801666_g1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Taqman TGFb primers</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>Mm01178820_m1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Taqman Gapdh primers</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>Mm99999915_g1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">ABIPrism&#160; Thermocycler</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td>7000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="width:495px;height:20px;">Software:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">GraphPad Prism</td>
			<td>GraphPad</td>
			<td>Prism 7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="width:495px;height:20px;">Animal food</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="width:216px;height:27px;">Complete diet for adult rats/mice</td>
			<td style="width:108px;">Safe</td>
			<td style="width:171px;">UB220610R</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

technique of minimally invasive transverse aortic constriction in mice for induction of left ventricular hypertrophy

Constriction aortique transversale (TAC) chez la souris est l’un, des techniques chirurgicales plus couramment utilisés pour l’étude expérimentale de la pression induite par la surcharge laissé hypertrophie ventriculaire (HVG) et sa progression de l’insuffisance cardiaque. Dans la plupart des études rapportées, cette procédure est exécutée avec intubation et ventilation de l’animal qui le rend exigeante et beaucoup de temps et ajoute à la charge chirurgicale de l’animal. Ce protocole vise à décrire une technique simplifiée de TAC mini-invasive sans intubation et ventilation des souris. Les étapes critiques de la technique sont privilégiés afin d’atteindre une mortalité faible et une grande efficacité dans l’induction de HVG.
Les souris C57BL/6 mâles (âgés de 10 semaines, 25 à 30 g, n = 60) ont été anesthésiés avec une seule injection intrapéritonéale d’un mélange de kétamine et de xylazine. Dans une respiration spontanée animal suivant une sternotomie partielle supérieure de 3 à 4 mm, un segment de suture de soie 6/0 enfilée à travers le œil d’une prothèse de la ligature a été passa sous l’arc aortique et rattacher sur une aiguille de calibre 27 émoussée. Les animaux opérés ont subi la même préparation chirurgicale mais sans rétrécissement aortique. L’efficacité de la procédure dans l’induction de LVH est attestée par une augmentation significative du ratio de poids du coeur/corps. Ce ratio est obtenu au jour 3, 7, 14 et 28 après chirurgie (n = 6-10 dans chaque groupe et chaque point dans le temps). Grâce à notre technique, LVH est observée chez TAC par rapport aux animaux de l’imposture du jour 7 au jour 28. Du dispositif et à la fin (plus de 28 jours) mortalités sont tous les deux très bas à 1,7 %.
En conclusion, notre technique rentable du TAC minimalement invasive chez les souris porte très faible mortalité opératoire et post-opératoire et est très efficace pour induire l’HVG. Il simplifie l’intervention chirurgicale et réduit l’exercée sur l’animal. Elle peut être facilement réalisée en suivant les étapes essentielles décrites dans le présent protocole.

Survie du dispositif et à la fin La survie du dispositif était très élevée, 98,3 % (59 sur 60) pour toute la série (TAC et animaux opérés). La mort du seul dispositif était due à une complication hémorragique chez une souris rabotée pour une opération fictive. La survie postopératoire durant la période d’observation de 28 jours était aussi excellente, de 98,3 % (58 sur 59). Le décès post-opératoires seulement tardif est survenu chez une souris de T...

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Technique of Minimally Invasive Transverse Aortic Constriction in Mice for Induction of Left Ventricular Hypertrophy

Le but du présent protocole est de décrire étape par étape la technique de constriction aortique transversale peu invasive (TAC) chez la souris. Par élimination d’intubation et ventilation obligatoires pour la procédure standard couramment utilisée, TAC minimalement invasive simplifie l’intervention chirurgicale et réduit l’exercée sur l’animal.

Technique mini-Invasive transversal constriction aortique chez les souris pour l’Induction de l’hypertrophie ventriculaire gauche

Transverse aortic constriction (TAC) in mice is one of the most commonly used surgical techniques for experimental investigation of pressure ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Ascending Aortic Constriction in Rats for Creation of Pressure Overload Cardiac Hypertrophy Model

Aortique ascendant constriction chez les rats pour la création de la surcharge de pression hypertrophie cardiaque Modèle

Ascending aortic constriction is the most common and successful surgical model for creating pressure overload induced cardiac hypertrophy and heart ...

Recherche

Médecine

Assessment of Cardiac Morphological and Functional Changes in Mouse Model of Transverse Aortic Constriction by Echocardiographic Imaging

Évaluation des cardiaques morphologiques et fonctionnelles changements dans le modèle de souris de Transverse Aortic Constriction par échocardiographie Imaging

Transverse aortic constriction (TAC) in mice has been used as a valuable model to study mechanisms of cardiac hypertrophy and heart failure1. A reliable ...

Minimally Invasive Transverse Aortic Constriction in Mice

Minimalement invasive Transverse Aortic constriction chez la souris

Minimally invasive transverse aortic constriction (MTAC) is a more desirable method for the constriction of the transverse aorta in mice than standard ...

A Minimally Invasive Model to Analyze Endochondral Fracture Healing in Mice Under Standardized Biomechanical Conditions

Un modèle mini-Invasive pour analyser Endochondral Fracture de guérison chez des souris dans des Conditions biomécaniques

Bone healing models are necessary to analyze the complex mechanisms of fracture healing to improve clinical fracture treatment. During the last decade, an ...

A Closed-chest Model to Induce Transverse Aortic Constriction in Mice

Un modèle à thorax fermé pour induire la Constriction de l’aorte transversale chez les souris

Research on cardiac hypertrophy and heart failure is frequently based on pressure overload mouse models induced by TAC. The standard procedure is to ...

Studying Left Ventricular Reverse Remodeling by Aortic Debanding in Rodents

Étude du remodelage inverse ventriculaire gauche par débandage aortique chez les rongeurs

To better understand the left ventricular (LV) reverse remodeling (RR), we describe a rodent model wherein, after aortic banding-induced LV remodeling, ...

Invasive Hemodynamic Assessment for the Right Ventricular System and Hypoxia-Induced Pulmonary Arterial Hypertension in Mice

Évaluation hémodynamique invasive pour le système ventriculaire droit et l'hypertension artérielle pulmonaire induite par l'hypoxie chez les souris

Pulmonary arterial hypertension (PAH) is a chronic and severe cardiopulmonary disorder. Mice are a popular animal model used to mimic this disease. ...

A Pre-clinical Rat Model for the Study of Ischemia-reperfusion Injury in Reconstructive Microsurgery

Un modèle préclinique de rat pour l'étude des dommages d'ischémie-réperfusion dans la microchirurgie reconstructive

Ischemia-reperfusion injury is the main cause of flap failure in reconstructive microsurgery. The rat is the preferred preclinical animal model in many ...

Operating Transverse Aortic Constriction with Absorbable Suture to Obtain Transient Myocardial Hypertrophy

Exploitation de la constriction aortique transversale avec suture absorbable pour obtenir une hypertrophie myocardique transitoire

Based on twice transverse aortic constrictions (TACs) in mice, it is proved that myocardial hypertrophic preconditioning (MHP) could attenuate ...

Echocardiographic Characterization of Left Ventricular Structure, Function, and Coronary Flow in Neonate Mice

Echocardiography is a non-invasive procedure that enables the evaluation of structural and functional parameters in animal models of cardiovascular ...