Name: visualization and live imaging of oligodendrocyte organelles in organotypic brain slices using adeno-associated virus and confocal microscopy
Uploaded: 2017-10-23T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Visualization and Live Imaging of Oligodendrocyte Organelles in Organotypic Brain Slices Using Adeno-associated Virus and Confocal Microscopy at JoVE.com

우리는 린다 Hildegard Bergersen 및 액세스 Magnar Bjørås 세포 실험실 및 장비, 플라스 미드와 바이러스 생산 Janelia 분자 생물학 공유 리소스 직원 및 공원 Vervaeke 레이저 파워 측정에 대해 감사 합니다. 이 작품은 노르웨이 건강 협회, 노르웨이 연구 위원회와 현미경 장비 Norbrain에 의해 투자 되었다.

여기에 설명 된 절차 노르웨이 동물 연구 기관에 의해 승인 되었습니다. 공급 업체 및 카탈로그 번호 소모품 및 기타 필요한 장비는 문서의 끝에 재료 목록에서 사용할 수 있습니다.
 1. 준비의 Organotypic 조각 참고:이 제조 법 두 마우스 강아지를 사용 하 여 산 후 하루에 7-9 (p 7-9), 두 개의 6-잘 문화 접시에 나누어 24 organotypic 슬라이스를 따르. 살 균 후드에?...

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	<li>Barry, C., Pearson, C., Barbarese, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+organization+of+oligodendrocyte+processes+during+development+in+culture+and+in+vivo.">Morphological organization of oligodendrocyte processes during development in culture and in vivo.</a> Dev. Neursosci. 18, 233-242 (1996).</li><li>Simpson, P. B., Mehotra, S., Lange, G. D., Russell, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+density+distribution+of+endoplasmic+reticulum+proteins+and+mitochondria+at+specialized+Ca2++release+sites+in+oligodendrocyte+processes.">High density distribution of endoplasmic reticulum proteins and mitochondria at specialized Ca2+ release sites in oligodendrocyte processes.</a> J. Biol. Chem. 272, 22654-22661 (1997).</li><li>Sterky, F. 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E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+oligodendrocyte+development+and+myelination+by+glucose+and+lactate.">Regulation of oligodendrocyte development and myelination by glucose and lactate.</a> J. Neurosci. 31, 538-548 (2011).</li><li>Davison, A. N., Dobbing, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myelination+as+a+vulnerable+period+in+brain+development.">Myelination as a vulnerable period in brain development.</a> Br. Med. Bull. 22, 40-44 (1966).</li><li>Humpel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organotypic+brain+slice+cultures:+A+review.">Organotypic brain slice cultures: A review.</a> Neuroscience. 305, 86-98 (2015).</li><li>Noraberg, J., Kristensen, B. 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Neurosci. 30, 6171-6177 (2010).</li><li>Pignataro, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adeno-Associated+Viral+Vectors+Serotype+8+for+Cell-Specific+Delivery+of+Therapeutic+Genes+in+the+Central+Nervous+System.">Adeno-Associated Viral Vectors Serotype 8 for Cell-Specific Delivery of Therapeutic Genes in the Central Nervous System.</a> Front. Neuroanat. 11 (2), (2017).</li><li>Hutson, T. H., Verhaagen, J., Yanez-Munoz, R. J., Moon, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Corticospinal+tract+transduction:+a+comparison+of+seven+adeno-associated+viral+vector+serotypes+and+a+non-integrating+lentiviral+vector.">Corticospinal tract transduction: a comparison of seven adeno-associated viral vector serotypes and a non-integrating lentiviral vector.</a> Gene Ther. 19, 49-60 (2012).</li><li>Neumann, S., Campbell, G. E., Szpankowski, L., Goldstein, L. S. B., Encalada, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterizing+the+composition+of+molecular+motors+on+moving+axonal+cargo+using+cargo+mapping+analysis.">Characterizing the composition of molecular motors on moving axonal cargo using cargo mapping analysis.</a> J. Vis. Exp. (92), e52029 (2014).</li></ol>

여기서 설명 하는 organotypic 문화를 만들기 위한 프로토콜 드 Simoni와 유 (2006 년)5설명 하는 프로토콜의 수정된 버전18 이다. 가장 중요 한 변화는 아래 설명 된 했습니다. Tris 버퍼 문화 매체, 바이러스 성 변환 동안 인큐베이터 밖 때 조각의 생존과 셀 매체의 변화를 향상에 추가 됩니다. 색종이 대 한 살 균 절차 또한 변경 됩니다. 다른 프로토콜 압력가 마로 소독 ...

뇌의 백색 질은 신경 세포 축 삭은 수 초, oligodendrocytes에 의해 형성 된 특수 확장된 원형질 막에에서 싸여 구성 되어있습니다. Myelin는 신속 하 고 안정적인 활동 전위 전파 및 myelinated 축 삭의 장기 생존을 위한 필요 그리고 myelin의 손실 신경 장애를 일으킬 수 있습니다. 그들의 중요성에도 불구 하 고 oligodendrocytes의 속성은 덜 알려진 비교 신경와 이다. 따라서, 적은 도구 oligodendrocytes 공부에 대 한 개발 되었습니다.
라이브 셀 세포의 영상 같은 미토 콘 드리 아, endoplasmatic 그물 (응급실) 또는 다른 기공을 구조 유용할 수 있습니다 시간이 지남에 세포에서 동적인 변화를 공부 하. 전통적으로, 생활 oligodendrocytes의 이미징 monocultures1,2에서 수행 되었습니다. 그러나, 단에 oligodendrocytes 소형 myelin, 표시 되지 않습니다 그리고 organotypic 또는 급성 뇌 조각 있을 수 있습니다, 따라서, 더 나은 옵션 지역화 및 세포의 움직임을 공부 하는 경우. 작은 세포 myelin 칼 집에 있는 단백질의 지역화는 myelinated 축 삭과 주변 myelin 칼 집 사이 짧은 거리 때문에 전하실 수 있습니다. 따라서, 가벼운 현미경 immunostaining 절차 혼자 myelinated 축 삭에 myelin 칼 집에 세포 사이 차별을 공간 해상도 있지 않습니다. 이 셀 형식 관련 발기인에 의해 구동 세포 기관이 대상 형광 단백질을 위한 유전자와 바이러스 성 변환에 의해 해결 될 수 있습니다. 이점은 셀 및 스파스 식 세포 기관이 현지화 및 역학의 정확한 평가 가능 하 게 있다. 유전자 변형 동물 같은 한 세포 기관이 대상 셀 특정 식3을 달성 하기 위해 사용할 수 있습니다. 그러나, 생산 및 유전자 변형 동물의 유지 보수 비용이 이며 일반적으로 바이러스 성 방법으로 얻을 수 있는 스파스 식 제공 하지 않습니다.
설명 하는 방법을 여기 미토 콘 드 리아-타겟 형광 성 단백질 (dsred 또는 녹색 형광 단백질, GFP)와 oligodendrocytes (MBP-미토-dsred 또는 MBP-미토-GFP) 시각화를 myelin 기본적인 단백질 발기인에 의해 구동의 바이러스 성 변환 사용 organotypic에 있는 oligodendrocyte 미토 콘 드리 아 두뇌 조각. 또한, 다른 형광 단백질 (GFP 미토-dsred 함께 사용 또는 tdtomato 미토 GFP를 사용한) 세포질에서의 표현 myelin 칼 집의 세포질 구획을 포함 하 여 세포 형태학의 시각화를 가능 하 게 하는 데 사용 됩니다. 프로토콜은 organotypic 뇌 조각 (드 Simoni와 유, 20064,5설명 하는 프로토콜의 수정된 버전)를 만들기 위한 절차를 포함 됩니다. 우리는 다음 미토 콘 드 리아 운동 공부 시간 경과 이미징 절차를 설명 합니다. 이 절차는 영상 매체, 영상 중 마약 또는 다른 중간 변경의 쉬운 응용 프로그램을 가능 하 게 설정의 지속적인 교류와 직 립 confocal 현미경을 사용 합니다. 시간 경과 화상 진 찰 절차는 아래에 설명 된 살아있는 조각을 유지 하기 위한 몇 가지 여분의 장비와 함께 어떤 confocal 현미경에 수행할 수 있습니다. 프로토콜에는 이미지를 최적화 하 고 phototoxicity를 줄일 여러 팁을 포함 되어 있습니다.
마지막으로, 반사율 Confocal 현미경 검사 법 (코어)으로 흠 없는 수 초를 시각화 하는 빠르고 간단한 방법을 설명 합니다. 이 라이브 이미징 동안 myelin 칼 집을 식별 하려면 유용할 수 있습니다. 최근 몇 년 동안, 여러 기술을 어떤 얼룩 필요 없이 이미지 myelin를 개발 되었습니다 하지만 대부분의 필요 특정 장비 및 전문6,,78. 여기에 설명 된 절차 myelin 칼 집의 반사 속성을 사용 하 여 고 스펙트럼 Confocal 반사율 현미경의 단순화 된 단일 여기 파장 버전 (점수, 있는 몇몇 파장 레이저 결합 되어 수 초를 시각화) 9. 코어 488 nm 레이저와 470-500 nm 대역 방출 필터 또는 가변 배기 필터 어떤 confocal 현미경에서 할 수 있습니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="600">
	<tbody>
		<tr height="36">
			<td height="36" style="height:36px;width:167px;">Agarose&#160;</td>
			<td style="width:139px;">Sigma&#160;</td>
			<td style="width:125px;">A9539</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="54">
			<td height="54" style="height:54px;width:167px;">BD Microlance 19G</td>
			<td style="width:139px;">BD</td>
			<td style="width:125px;">301500</td>
			<td style="width:171px;">Needles used for in- and outlet of bath</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:167px;">Bioxide gas</td>
			<td style="width:139px;">AGA</td>
			<td style="width:125px;">105701</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="31">
			<td height="31" style="height:31px;width:167px;">Brand pipette bulbs</td>
			<td style="width:139px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:125px;">Z615927</td>
			<td style="width:171px;">Pipette bulbs</td>
		</tr>
		<tr height="50">
			<td height="50" style="height:50px;width:167px;">Bunsen burner (Liquid propane burner)</td>
			<td style="width:139px;">VWR</td>
			<td style="width:125px;">89038-530</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="56">
			<td height="56" style="height:56px;width:167px;">Cable assembly for heater controllers</td>
			<td style="width:139px;">Warner Instruments</td>
			<td style="width:125px;">64-0106&#160;</td>
			<td style="width:171px;">Temperature controller - thermometer part</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:167px;">CaCl2</td>
			<td style="width:139px;">Fluka</td>
			<td style="width:125px;">21100</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="31">
			<td height="31" style="height:31px;width:167px;">CO2&#160;</td>
			<td style="width:139px;">AGA</td>
			<td style="width:125px;">100309</td>
			<td style="width:171px;">CO2 for incubator</td>
		</tr>
		<tr height="89">
			<td height="89" style="height:89px;width:167px;">Cover glass, square Corning</td>
			<td style="width:139px;">Thermo&#160; Fischer Scientific</td>
			<td style="width:125px;">13206778</td>
			<td style="width:171px;">To attach under bath for live imaging. Seal with glue or petrolium jelly.</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:167px;">D-(+)-Glucose</td>
			<td style="width:139px;">Sigma</td>
			<td style="width:125px;">G7021</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:167px;">Delicate forceps</td>
			<td style="width:139px;">Finescience</td>
			<td style="width:125px;">11063-07</td>
			<td style="width:171px;">For dissection</td>
		</tr>
		<tr height="30">
			<td height="30" style="height:30px;width:167px;">Diamond scriber pen</td>
			<td style="width:139px;">Ted Pella Inc.</td>
			<td style="width:125px;">54463</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="73">
			<td height="73" style="height:73px;width:167px;">Disposable Glass Pasteur Pipettes 230 mm</td>
			<td style="width:139px;">VWR</td>
			<td style="width:125px;">612-1702</td>
			<td style="width:171px;">Glass pipettes</td>
		</tr>
		<tr height="70">
			<td height="70" style="height:70px;width:167px;">Double edge stainless steel razor blade</td>
			<td style="width:139px;">Electron Microscopy Sciences</td>
			<td style="width:125px;">#7200</td>
			<td style="width:171px;">Razor blade for vibratome</td>
		</tr>
		<tr height="52">
			<td height="52" style="height:52px;width:167px;">Earle&#39;s Balanced Salt Solution (EBSS)</td>
			<td style="width:139px;">Gibco-Invitrogen</td>
			<td style="width:125px;">24010-043</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="70">
			<td height="70" style="height:70px;width:167px;">Filter paper circles</td>
			<td style="width:139px;">Schleicher &#38; Schuell</td>
			<td style="width:125px;">300,220</td>
			<td style="width:171px;">Filter paper used for filtration of PFA</td>
		</tr>
		<tr height="70">
			<td height="70" style="height:70px;width:167px;">Fun tack</td>
			<td style="width:139px;">Loctite</td>
			<td style="width:125px;">1270884</td>
			<td style="width:171px;">Use to connect/adjust position of in- and outlets in bath</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:167px;">Hand towel C-Fold 2</td>
			<td style="width:139px;">Katrin</td>
			<td style="width:125px;">344388</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="121">
			<td height="121" style="height:121px;width:167px;">Harp, Flat for RC-41 Chamber,</td>
			<td style="width:139px;">Warner Instruments</td>
			<td style="width:125px;">&#160;64-1418</td>
			<td style="width:171px;">Harp to hold down confetti in bath. Cut off strings before use with organotypic slices. 1.5 mm, 13mm, SHD-41/15</td>
		</tr>
		<tr height="30">
			<td height="30" style="height:30px;width:167px;">HEPES, FW: 260.3</td>
			<td style="width:139px;">Sigma</td>
			<td style="width:125px;">H-7006</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="55">
			<td height="55" style="height:55px;width:167px;">Holten LaminAir, Model 1.2</td>
			<td style="width:139px;">Heto-Holten</td>
			<td style="width:125px;">96004000M</td>
			<td style="width:171px;">Laminar flow hood</td>
		</tr>
		<tr height="56">
			<td height="56" style="height:56px;width:167px;">Horse serum, heat inactivated</td>
			<td style="width:139px;">Gibco-Invitrogen</td>
			<td style="width:125px;">26050-088</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:167px;">KCl</td>
			<td style="width:139px;">Sigma</td>
			<td style="width:125px;">P9541</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:167px;">LCR Membrane, PTFE,&#160;</td>
			<td style="width:139px;">Millipore</td>
			<td style="width:125px;">FHLC0130</td>
			<td style="width:171px;">Confetti&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="36">
			<td height="36" style="height:36px;width:167px;">Leica VT1200</td>
			<td style="width:139px;">Leica</td>
			<td style="width:125px;">14048142065</td>
			<td style="width:171px;">Vibratome</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:167px;">MEM-Glutamax with HEPES</td>
			<td style="width:139px;">Thermo&#160; Fischer Scientific</td>
			<td style="width:125px;">42360024</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:167px;">MgCl2</td>
			<td style="width:139px;">R.P. Normapur</td>
			<td style="width:125px;">25 108.295</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="70">
			<td height="70" style="height:70px;width:167px;">Micro Spoon Heyman Type B</td>
			<td style="width:139px;">Electron Microscopy Sciences</td>
			<td style="width:125px;">62411-B</td>
			<td style="width:171px;">Small, rounded spatula with sharpened end for dissection</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:167px;">Millex-GP filter unit</td>
			<td style="width:139px;">Millipore</td>
			<td style="width:125px;">SLGPM33RA</td>
			<td style="width:171px;">Syringe filter unit</td>
		</tr>
		<tr height="59">
			<td height="59" style="height:59px;width:167px;">Millicell cell culture insert, 30 mm</td>
			<td style="width:139px;">Millipore</td>
			<td style="width:125px;">PICM03050</td>
			<td style="width:171px;">Cell culture inserts</td>
		</tr>
		<tr height="90">
			<td height="90" style="height:90px;width:167px;">Minipuls 3 Speed Control Module</td>
			<td style="width:139px;">GILSON</td>
			<td style="width:125px;">F155001</td>
			<td style="width:171px;">Peristaltic pump for live imaging - Control module part (connect to two-cannel head)</td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:167px;">Na2HPO4</td>
			<td style="width:139px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:125px;">S7907</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="31">
			<td height="31" style="height:31px;width:167px;">NaCl</td>
			<td style="width:139px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:125px;">S9888</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:167px;">NaH2PO4</td>
			<td style="width:139px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:125px;">S8282</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="36">
			<td height="36" style="height:36px;width:167px;">NaHCO3</td>
			<td style="width:139px;">Fluka</td>
			<td style="width:125px;">71628</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="52">
			<td height="52" style="height:52px;width:167px;">Nunclon Delta Surface</td>
			<td style="width:139px;">Thermo&#160; Fischer Scientific</td>
			<td style="width:125px;">140675</td>
			<td style="width:171px;">Culture plate</td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:167px;">Nystatin Suspension</td>
			<td style="width:139px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:125px;">N1638</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="93">
			<td height="93" style="height:93px;width:167px;">Objective W &#34;Plan-Apochromat&#34; 40x/1.0 DIC&#160;</td>
			<td style="width:139px;">Zeiss</td>
			<td style="width:125px;">441452-9900-000&#160;</td>
			<td style="width:171px;">Water immersion objective used for live imaging. (WD=2.5mm), VIS-IR</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:167px;">Parafilm</td>
			<td style="width:139px;">VWR</td>
			<td style="width:125px;">291-1211</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="70">
			<td height="70" style="height:70px;width:167px;">Paraformaldehyde, granular</td>
			<td style="width:139px;">Electron Microscopy Sciences</td>
			<td style="width:125px;">#19208</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="49">
			<td height="49" style="height:49px;width:167px;">PC-R perfusion chamber</td>
			<td style="width:139px;">SiSkiYou</td>
			<td style="width:125px;">&#160;15280000E</td>
			<td style="width:171px;">Bath for live imaging</td>
		</tr>
		<tr height="57">
			<td height="57" style="height:57px;width:167px;">Penicillin-Streptomycin, liquid</td>
			<td style="width:139px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:125px;">15070-063</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:167px;">Petri dish 140 mm&#160;</td>
			<td style="width:139px;">Heger</td>
			<td style="width:125px;">1075</td>
			<td style="width:171px;">Large Petri dish&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:167px;">Petri dish 92x16 mm&#160;</td>
			<td style="width:139px;">Sarstedt&#160;</td>
			<td style="width:125px;">82.1473</td>
			<td style="width:171px;">Medium Petri dish&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:167px;">Petridish 55x14,2 mm</td>
			<td style="width:139px;">VWR</td>
			<td style="width:125px;">391-0868</td>
			<td style="width:171px;">Small Petri dish</td>
		</tr>
		<tr height="57">
			<td height="57" style="height:57px;width:167px;">Phosphate buffered saline (PBS)</td>
			<td style="width:139px;">Sigma</td>
			<td style="width:125px;">P4417</td>
			<td style="width:171px;">PBS tablets</td>
		</tr>
		<tr height="70">
			<td height="70" style="height:70px;width:167px;">R2 Two Channel Head&#160;</td>
			<td style="width:139px;">GILSON</td>
			<td style="width:125px;">F117800</td>
			<td style="width:171px;">Peristaltic pump for live imaging - Two channel head part (requires control module)</td>
		</tr>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;width:167px;">Round/Flat Spatulas, Stainless Steel</td>
			<td style="width:139px;">VWR</td>
			<td style="width:125px;">82027-528</td>
			<td style="width:171px;">Large spatula for dissection</td>
		</tr>
		<tr height="70">
			<td height="70" style="height:70px;width:167px;">Sand paper</td>
			<td style="width:139px;">VWR</td>
			<td style="width:125px;">MMMA63119</td>
			<td style="width:171px;">Optional, for smoothing broken glass pipettes</td>
		</tr>
		<tr height="70">
			<td height="70" style="height:70px;width:167px;">Scissors,&#160; 17,5 cm</td>
			<td style="width:139px;">Finescience</td>
			<td style="width:125px;">14130-17</td>
			<td style="width:171px;">Large scissors for dissection</td>
		</tr>
		<tr height="70">
			<td height="70" style="height:70px;width:167px;">Scissors, 8,5&#160;</td>
			<td style="width:139px;">Finescience</td>
			<td style="width:125px;">14084-08</td>
			<td style="width:171px;">Small, sharp scissors for&#160; dissection</td>
		</tr>
		<tr height="70">
			<td height="70" style="height:70px;width:167px;">Single edge, gem blade</td>
			<td style="width:139px;">Electron Microscopy Sciences</td>
			<td style="width:125px;">#71972</td>
			<td style="width:171px;">Single edge razor blade</td>
		</tr>
		<tr height="59">
			<td height="59" style="height:59px;width:167px;">Single inline solution heater SH-27B</td>
			<td style="width:139px;">Warner Instruments</td>
			<td style="width:125px;">64-0102</td>
			<td style="width:171px;">Temperature controller - heater part</td>
		</tr>
		<tr height="57">
			<td height="57" style="height:57px;width:167px;">Steritop-GP Filter unit, 500 ml , 45mm</td>
			<td style="width:139px;">Millipore</td>
			<td style="width:125px;">SCGPT05RE</td>
			<td style="width:171px;">Filter to sterilize solutions</td>
		</tr>
		<tr height="37">
			<td height="37" style="height:37px;width:167px;">Super glue precision</td>
			<td style="width:139px;">Loctite</td>
			<td style="width:125px;">1577386</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="56">
			<td height="56" style="height:56px;width:167px;">Surgical scalpel blade no. 22</td>
			<td style="width:139px;">Swann Morton Ltd.</td>
			<td style="width:125px;">209</td>
			<td style="width:171px;">Rounded scalpel blade</td>
		</tr>
		<tr height="113">
			<td height="113" style="height:113px;width:167px;">Temperature controller TC324B</td>
			<td style="width:139px;">Warner Instruments</td>
			<td style="width:125px;">64-0100</td>
			<td style="width:171px;">Temperature controller for live imaging (requires solution heater and cable assembly)</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:167px;">Trizma base</td>
			<td style="width:139px;">Sigma&#160;</td>
			<td style="width:125px;">T1503</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="36">
			<td height="36" style="height:36px;width:167px;">Trizma HCl</td>
			<td style="width:139px;">Sigma</td>
			<td style="width:125px;">T3253</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="62">
			<td height="62" style="height:62px;width:167px;">Water jacketed incubator series II</td>
			<td style="width:139px;">Forma Scientific</td>
			<td style="width:125px;">78653-2882</td>
			<td style="width:171px;">Incubator</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

visualization and live imaging of oligodendrocyte organelles in organotypic brain slices using adeno-associated virus and confocal microscopy

전기 절연 및 myelinating oligodendrocytes의 영양 지원에 의존 하는 신경. Oligodendrocytes의 중요성에도 불구 하 고 현재 뉴런, 공부 하는 데 사용 하는 고급 도구 oligodendrocyte 연구원 촬영 부분적으로 있다. 셀 형식-특정 바이러스 성 변환에 의해 얼룩 라이브 세포 기관이 역학을 공부 하는 유용한 접근 이다. 이 문서 변환 adeno 관련 바이러스 (AAV)의 transcriptional 통제 미토 콘 드 리아 타겟된 형광 단백질을 위한 유전자를 나르는 여 organotypic 뇌 조각에서 oligodendrocyte 미토 콘 드리 아를 시각화에 대 한 프로토콜 설명 myelin 기본적인 단백질 발기인입니다. Organotypic 코로나 마우스 뇌 조각을 만들기 위한 프로토콜을 포함 합니다. 다음에 미토 콘 드리 아의 시간 경과 영상에 대 한 절차는 다음과 같습니다. 이러한 메서드는 다른 세포로 옮겨질 수 있다 그리고 세포 myelin 칼 집에서 공부 하는 데 특히 유용 수 있습니다. 마지막으로, 반사율 Confocal 현미경 검사 법 (코어)에 의해 생활 조각에 흠 없는 myelin의 시각화에 대 한 쉽게 사용할 수 있는 기술을 설명합니다. 코어 불필요 한 장비를 필요 하며 라이브 이미징 동안 myelin 칼 집을 식별 하려면 유용할 수 있습니다.

경작 하 고 위에서 설명한 대로 불리고 Organotypic 뇌 조각 대뇌 피 질의 oligodendrocytes mito_dsred와 GFP의 스파스 배포를 보였다. Olig2와 MBP에 대하여 항 체와 Immunostaining 확인 식 oligodendrocytes (그림 1)를 특정 했다.
라이브 이미징, 불리고 oligodendrocytes 병렬 (그림 1 및 그림 2A</...

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Visualization and Live Imaging of Oligodendrocyte Organelles in Organotypic Brain Slices Using Adeno-associated Virus and Confocal Microscopy

Myelinating oligodendrocytes는 급속 한 활동 전위 전파 및 신경 생존을 촉진합니다. 여기에 설명 된은 organotypic에 형광 단백질의 oligodendrocyte 특정 식에 대 한 프로토콜 후속 시간 경과 화상 진 찰과 뇌 조각입니다. 또한, 흠 없는 수 초를 시각화에 대 한 간단한 절차 제공 됩니다.

시각화 및 Adeno 관련 바이러스 및 Confocal 현미경 검사 법을 사용 하 여 Organotypic 뇌 조각에서 Oligodendrocyte 세포의 라이브 영상

Neurons rely on the electric insulation and trophic support of myelinating oligodendrocytes. Despite the importance of oligodendrocytes, the advanced ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Functional Neuroimaging Using Ultrasonic Blood-brain Barrier Disruption and Manganese-enhanced MRI

초음파 혈액 - 뇌 장벽 파괴 및 망간 향상된 MRI를 사용하여 기능성 Neuroimaging

Although mice are the dominant model system for studying the genetic and molecular underpinnings of neuroscience, functional neuroimaging in mice remains ...

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신경과학

Visualization and Genetic Manipulation of Dendrites and Spines in the Mouse Cerebral Cortex and Hippocampus using In utero Electroporation

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사용하는 마우스 대뇌 피질과 해마의 시각화 및 Dendrites와 쪽이의 유전자 조작<em&gt; utero에서</em&gt; Electroporation

In utero electroporation (IUE) has become a powerful technique to study the development of different regions of the embryonic nervous system 1-5. To date ...

Organotypic Slice Cultures to Study Oligodendrocyte Dynamics and Myelination

Organotypic 슬라이스는 문화 희소 돌기 아교 세포 역학 및 수초화을 공부하기

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Regioselective Biolistic Targeting in Organotypic Brain Slices Using a Modified Gene Gun

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배아 마우스 두뇌의 organotypic 슬라이스 문화에서 마이 그 레이션 뉴런의 저속 공 촛점 이미징<em&gt; Utero에서</em&gt; 일렉트로 포 레이션

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Imaging of Intracellular ATP in Organotypic Tissue Slices of the Mouse Brain using the FRET-based Sensor ATeam1.03YEMK

Imaging of Intracellular ATP in Organotypic Tissue Slices of the Mouse Brain using the FRET-based Sensor ATeam1.03YEMK

FRET 기반 센서 ATeam1.03YEMK를 사용하여 마우스 뇌의 오르가노티픽 조직 슬라이스에서 세포 내 ATP 이미징

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