Name: establishment of larval zebrafish as an animal model to investigate trypanosoma cruzi motility in vivo
Uploaded: 2017-09-30T15:00:00
Duration: 13 min 21 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Establishment of Larval Zebrafish as an Animal Model to Investigate Trypanosoma cruzi Motility In Vivo at JoVE.com

وأيد هذا العمل إينتيرفاكولتاديس كونفوكاتوريا من البحوث de Vicerrectoría de la جامعة دي لوس إنديز، وبرنامج وكالة التنمية الدولية للبحث والابتكار الزمالة. ونحن نشكر خوان رافائيل Buitrago وييفيرزون ارديلا للحفاظ على الأسماك والمساعدة.

<ol>
	<li>Bern, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chagas's+Disease.">Chagas's Disease.</a> New England Journal of Medicine. 373 (5), 456-466 (2015).</li><li>Sosa Estani, S., Segura, E. L., Ruiz, A. M., Velazquez, E., Porcel, B. M., Yampotis, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficacy+of+chemotherapy+with+benznidazole+in+children+in+the+indeterminate+phase+of+Chagas&#8217;+disease.">Efficacy of chemotherapy with benznidazole in children in the indeterminate phase of Chagas&#8217; disease.</a> The American Journal of Tropical Medicine and Hygiene. 59 (4), 526-529 (1998).</li><li>Rosas, F., Roa, N., Cucunuba, Z. M., Cuellar, A., Gonzalez, J. M., Puerta, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chagasic+Cardiomyopathy.">Chagasic Cardiomyopathy.</a> Cardiomyopathies - From Basic Research to Clinical Management. , (2012).</li><li>Finkelsztein, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altering+the+motility+of+Trypanosoma+cruzi+with+rabbit+polyclonal+anti-peptide+antibodies+reduces+infection+to+susceptible+mammalian+cells.">Altering the motility of Trypanosoma cruzi with rabbit polyclonal anti-peptide antibodies reduces infection to susceptible mammalian cells.</a> Experimental Parasitology. 150, 36-43 (2015).</li><li>Martins, R. M., Covarrubias, C., Rojas, R. G., Silber, A. M., Yoshida, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+L-Proline+and+ATP+Production+by+Trypanosoma+cruzi+Metacyclic+Forms+as+Requirements+for+Host+Cell+Invasion.">Use of L-Proline and ATP Production by Trypanosoma cruzi Metacyclic Forms as Requirements for Host Cell Invasion.</a> Infection and Immunity. 77 (7), 3023-3032 (2009).</li><li>Engstler, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrodynamic+Flow-Mediated+Protein+Sorting+on+the+Cell+Surface+of+Trypanosomes.">Hydrodynamic Flow-Mediated Protein Sorting on the Cell Surface of Trypanosomes.</a> Cell. 131 (3), 505-515 (2007).</li><li>Uppaluri, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+Microscopic+Motility+on+the+Swimming+Behavior+of+Parasites:+Straighter+Trypanosomes+are+More+Directional.">Impact of Microscopic Motility on the Swimming Behavior of Parasites: Straighter Trypanosomes are More Directional.</a> PLoS Computational Biology. 7 (6), e1002058 (2011).</li><li>Heddergott, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trypanosome+Motion+Represents+an+Adaptation+to+the+Crowded+Environment+of+the+Vertebrate+Bloodstream.">Trypanosome Motion Represents an Adaptation to the Crowded Environment of the Vertebrate Bloodstream.</a> PLoS Pathogens. 8 (11), e1003023 (2012).</li><li>Gratacap, R. L., Wheeler, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Utilization+of+zebrafish+for+intravital+study+of+eukaryotic+pathogen&#8211;host+interactions.">Utilization of zebrafish for intravital study of eukaryotic pathogen&#8211;host interactions.</a> Developmental &amp; Comparative Immunology. 46 (1), 108-115 (2014).</li><li>Meijer, A. H., Spaink, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host-Pathogen+Interactions+Made+Transparent+with+the+Zebrafish+Model.">Host-Pathogen Interactions Made Transparent with the Zebrafish Model.</a> Current Drug Targets. 12 (7), 1000-1017 (2011).</li><li>White, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transparent+Adult+Zebrafish+as+a+Tool+for+In+Vivo+Transplantation+Analysis.">Transparent Adult Zebrafish as a Tool for In Vivo Transplantation Analysis.</a> Cell Stem Cell. 2 (2), 183-189 (2008).</li><li>Huisken, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Slicing+embryos+gently+with+laser+light+sheets.">Slicing embryos gently with laser light sheets.</a> BioEssays. 34 (5), 406-411 (2012).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The zebrafish book: A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio). , (2000).</li><li>Kimmel, C. B., Ballard, W. W., Kimmel, S. R., Ullmann, B., Schilling, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stages+of+embryonic+development+of+the+zebrafish.">Stages of embryonic development of the zebrafish.</a> Developmental Dynamics. 203 (3), 253-310 (1995).</li><li>Vargas-Zambrano, J. C., Lasso, P., Cuellar, A., Puerta, C. J., Gonz&#225;lez, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+human+astrocytoma+cell+line+is+highly+susceptible+to+infection+with+Trypanosoma+cruzi.">A human astrocytoma cell line is highly susceptible to infection with Trypanosoma cruzi.</a> Mem&#243;rias do Instituto Oswaldo Cruz. 108 (2), 212-219 (2013).</li><li>Rosen, J. N., Sweeney, M. F., Mably, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microinjection+of+Zebrafish+Embryos+to+Analyze+Gene+Function.">Microinjection of Zebrafish Embryos to Analyze Gene Function.</a> JoVE (Journal of Visualized Experiments). (25), e1115-e1115 (2009).</li><li>Lorenzo, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+cell+division+dynamics+monitoring+in+3D+large+spheroid+tumor+models+using+light+sheet+microscopy.">Live cell division dynamics monitoring in 3D large spheroid tumor models using light sheet microscopy.</a> Cell Division. 6, 22 (2011).</li><li>Edelstein, A. D., Tsuchida, M. A., Amodaj, N., Pinkard, H., Vale, R. D., Stuurman, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advanced+methods+of+microscope+control+using+&#956;Manager+software.">Advanced methods of microscope control using &#956;Manager software.</a> Journal of Biological Methods. 1 (2), e10 (2014).</li><li>Weber, M., Mickoleit, M., Huisken, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multilayer+Mounting+for+Long-term+Light+Sheet+Microscopy+of+Zebrafish.">Multilayer Mounting for Long-term Light Sheet Microscopy of Zebrafish.</a> Journal of Visualized Experiments. (84), (2014).</li><li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fiji:+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis.">Fiji: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nature Methods. 9 (7), 676-682 (2012).</li><li>Ng, A. N. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+the+digestive+system+in+zebrafish:+III.+Intestinal+epithelium+morphogenesis.">Formation of the digestive system in zebrafish: III. Intestinal epithelium morphogenesis.</a> Developmental Biology. 286 (1), 114-135 (2005).</li><li>Higuchi, M. D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correlation+between+Trypanosoma+cruzi+parasitism+and+myocardial+inflammatory+infiltrate+in+human+chronic+chagasic+myocarditis:+Light+microscopy+and+immunohistochemical+findings.">Correlation between Trypanosoma cruzi parasitism and myocardial inflammatory infiltrate in human chronic chagasic myocarditis: Light microscopy and immunohistochemical findings.</a> Cardiovascular Pathology: The Official Journal of the Society for Cardiovascular Pathology. 2 (2), 101-106 (1993).</li><li>Vago, A. R., Silva, D. M., Adad, S. J., Correa-Oliveira, R., d'Avila Reis, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+Chagas+disease:+presence+of+parasite+DNA+in+the+oesophagus+of+patients+without+megaoesophagus.">Chronic Chagas disease: presence of parasite DNA in the oesophagus of patients without megaoesophagus.</a> Transactions of the Royal Society of Tropical Medicine and Hygiene. 97 (3), 308-309 (2003).</li><li>Wiegertjes, G. F., Forlenza, M., Joerink, M., Scharsack, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parasite+infections+revisited.">Parasite infections revisited.</a> Developmental &amp; Comparative Immunology. 29 (9), 749-758 (2005).</li><li>De Souza, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basic+cell+biology+of+Trypanosoma+cruzi.">Basic cell biology of Trypanosoma cruzi.</a> Current Pharmaceutical Design. 8 (4), 269-285 (2002).</li><li>Langousis, G., Hill, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Motility+and+more:+the+flagellum+of+Trypanosoma+brucei.">Motility and more: the flagellum of Trypanosoma brucei.</a> Nature Reviews. Microbiology. 12 (7), 505-518 (2014).</li><li>Johnson, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+response+to+Trypanosoma+cruzi+infection+induces+secretion+of+defensin+&#945;-1,+which+damages+the+flagellum,+neutralizes+trypanosome+motility,+and+inhibits+infection.">Cellular response to Trypanosoma cruzi infection induces secretion of defensin &#945;-1, which damages the flagellum, neutralizes trypanosome motility, and inhibits infection.</a> Infection and Immunity. 81 (11), 4139-4148 (2013).</li><li>Magalh&#227;es, L. M. D., Viana, A., Chiari, E., Galv&#227;o, L. M. C., Gollob, K. J., Dutra, W. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+Activation+of+Human+Monocytes+and+Lymphocytes+by+Distinct+Strains+of+Trypanosoma+cruzi.">Differential Activation of Human Monocytes and Lymphocytes by Distinct Strains of Trypanosoma cruzi.</a> PLoS neglected tropical diseases. 9 (7), e0003816 (2015).</li></ol>

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

وتبرز هذه الدراسة مزايا الزرد كنموذج حيوان لدراسة العوامل الممرضة السلوك في فيفو. على وجه الخصوص، تقترح هذه الدراسة وسيلة لتصور الممرض الكروزية. ت. في بيئتها الطبيعية: تداول هيماتيك. البيئة المكروية الدورة الدموية في الأسماك مماثل للثدييات، وتريبانوسوماتيدس وقد تطورت آليات للسفر، والتهرب من النظام المناعي، وإرفاق إلى الخلايا للإصابة في تلك البيئة25. ويوفر هذا البروتوكول وصف إجراء الأمثل لثقافة الكروزية. ت. في خط الخلية البشرية والعزلة اللاحقة من أشكال فلاجلر لوسم الفلورسنت. ثم يظهر الإعدادات المناسبة لنجاح حقن الطفيليات في الزرد شفافة للتصور باستخدام لسفم وتصاعد في وقت لاحق. وأخيراً، يقدم هذا البروتوكول اقتراحات للتصوير بكفاءة وفعالية في فيفو موقع الطفيلي والحركة في الدورة الدموية باستخدام لسفم.
السوط مثقبيات ينبثق من منطقتها الخلفية، تتدفق من جسم الخلية، وتوقف مجاناً في الجزء الأمامي من الكائن الحي26. الكروزية T. يدفع نفسه بالتلويح بالسوط قبل الجسم، والذي أوندولاتيس الطفيليات الجسم بأكمله. فلاجلر حركة ليس فقط أمرا لا غنى عنه لحركة الطفيلي، على غرار البروسية ت.27 (المسبّب لداء المثقبيات الأفريقي)، ولكن أيضا استخدامه للعدوى الخلوية، كما ثبت في الكروزية. ت.5 ،28. على الرغم من الزرد ليست المضيفة الطبيعية الكروزية. ت.، يمكن دراسة حركية للطفيلي في نظام الدورة الدموية القلبية الوعائية نامية استخدام البروتوكولات المذكورة هنا. بالإضافة إلى ذلك، هناك مثقبيات الأنواع التي تصيب الكارب، فئة الزرد، مثل كراسي ت. و . ت. بوريلي25. يمكن استخدام هذه الأنواع الطفيليات للدراسة في الوقت الحقيقي الحركات وآليات مرفق لهذه تريبانوسوماتيدس؛ يمكن أن تقدم مثل هذه الدراسات نظرة ثاقبة عملية عدوى خلايا الثدييات.
وفي هذه الدراسة، حقن متحركة الكروزية ت. الطفيليات كانت السفر ملاحظتها من خلال تداول الأسماك الملقحين القلب والأوعية الدموية، وتتحرك جنبا إلى جنب مع الكريات الحمراء المعتمة، والتمسك بهياكل في جدران الأوعية الدموية. كنا الصنع مع 10 X متعامي طويلة المسافة العمل الهدف الجوي (17.6 ملم) للذراع الإضاءة مع فتحه عددية من 0.25. 40 × الهدف غمر المياه اللازيغيه مع فتحه عددية من 0.8 ومسافة عمل 3.5 مم استخدمت للكشف عن الذراع. كانت مغمورة هدف الكشف عن في قاعة عينة، بينما كان الهدف إنارة خارج الدائرة. منفذ في غرفة مغلقة مع ساترة والغراء البصرية يسمح لشعاع الإضاءة لدخول قاعة، كما هو مبين في لورنزو et al. 18 المستخدمة للإضاءة، ونحن ليزر والعسف 50 ميغاواط في 488 نانومتر السلطة التي تمت عن طريق عامل "تصفية الانضباطي بصري أكوستو" التضمين. مسار الكشف عن استخدام مرشحات متوافقة مع أخضر نيون البروتين (بروتينات فلورية خضراء) أو فيتك. مجهر ضوء ورقة مزودة بحامل عينة الشعرية (ومن الناحية المثالية مع التناوب الآلي) والتحكم في درجة الحرارة الدائرة عينة ينبغي أن تكون مناسبة لهذا التطبيق. وينبغي الانحياز المجهر ومعايرة وفقا لإرشادات الشركة المصنعة أو المستخدم مختبر البروتوكولات القياسية قبل حيازتها، إذا لزم الأمر. في هذا البروتوكول، تسيطر علينا المجهر استخدام البرمجيات SPIM19.
من المهم أن نلاحظ أن في تعميم الزرد، مرفق اليرقات الطفيلية فعالة. وفي السياق الكاردينال، الطفيليات ظلت المرفقة لتصل إلى عدة دقائق؛ في القلب، وعقدوا الصمامات والجدران، وتتأرجح مع تقلصات القلب. يبقى إجراء المزيد من الدراسات من أجل توضيح ما إذا كان ت الكروزية يتفاعل مع الكريات الحمراء تتدفق بالانجراف في اتجاه تدفق الدم. الدراسات السابقة في المختبر أظهرت أن وجود هياكل صلبة (أي، خلايا الدم)، أو زيادة لزوجة السائل لتقليد الدم في المختبر، وله تأثير كبير على الحركة والسرعة للطفيلي 9.
هناك العديد من الأسئلة المتعلقة بمسار العدوى الكروزية. ت. في البشر بعد الهروب amastigotes الخلايا البلعمية، ونوع الخلايا المصابة في البداية29. على سبيل المثال، كيف يصلون إلى الأجهزة المستهدفة؟ ما هي آليات انتحاء إلى الأجهزة المفضلة، مثل القلب والجهاز الهضمي والعصبي المركزي؟ من المثير للاهتمام، في هذه الدراسة الطفيليات كانت في البداية تصويرها في القلب لأنه كان موقع أعلى كثافة للطفيليات. ومع ذلك، إشارة كفسي لاحقاً المتراكمة في الأمعاء النامي خلال 7 أيام بعد الحقن. على الرغم من أن تشريح الأسماك والثدييات المختلفة، تظهر نتائج هذه الدراسة شكلاً من أشكال انتحاء، كما لوحظ أن الطفيليات معارضها انتحاء نحو الأجهزة الهدف المفضل المعروفة على الرغم من الاختلافات العضوي. حد كبير واحد من هذه الدراسة تتعلق بدرجة الحرارة المستخدمة في التجارب. ينبغي أن تظل اليرقات الزرد حوالي 28 درجةمئوية خلال الإجراء بأكمله. على الرغم من أن درجة الحرارة هذه قد تكون مشابهة لناقل المضيف (حشرات فصيلة Triatominae)، فإنه يختلف تماما عن الثدييات ذوات الدم الحار التي تتألف منها يستضيف النهائي (حوالي 37 درجة مئوية). الكروزية. ت. ومن المعروف أن أشكال المعيشة فلاجلر في كلا المضيفين؛ ومع ذلك، من المهم أن نضع في اعتبارنا أن هذا العامل قد يكون له أثر في سلوك الحيوانات في فيفو.
على الرغم من أن النظام المناعي التكيفي fish´s ليست ناضجة حتى 4 أسابيع بعد الإخصاب، تنشط نظام المناعة الفطرية المبكر في التنمية10. أقرب وقت هبف 48 أو 96، لوحظت خلايا متجولة وقد اجتاحت المسمى مثقبيات (البيانات لا تظهر). وهذا يحد من النافذة الزمنية للتصور للطفيلي. ومع ذلك، إذا تمت دراسة التركيز على تقييم الاستجابة المناعية fish´s، قد أوصت الحقن في مراحل لاحقة. أيضا، حقن الطفيليات في خطوط الأسماك المحورة وراثيا مع الضامة المسمى أو خلايا أخرى من الجهاز المناعي يمكن أن تكون مفيدة في دراسة مرفق الطفيلي والآليات الممكنة الالتقام. من المهم أن نلاحظ أنه في حالة الطفيليات المسماة مع كفسي وتسميات الخلايا المحورة وراثيا لا ينبغي أن تكون التجارة والنقل، وعلامة في نهاية الطيف الأصفر أو الأحمر مطلوب.
تقييم اتجاه مفصلة لحركة الطفيلي، قد يكون من المفيد اتباع مسار بهم في 3 الأبعاد (3D). 3D التصور والتعمير عملية، نظام عالي السرعة اللازمة. مع المعدات المستخدمة في هذا البروتوكول، فإنه من الممكن تصور الطفيليات في طائرة واحدة فقط. وفي هذه الحالة، نحن الأولوية للحفاظ على استقرار المستوى البؤري أثناء حركة الطفيلي، وتسجيل مساره في طائرة واحدة.
المنهجية المقترحة هنا يمهد الطريق مواصلة التحقيق في السلوك الطفيلي في الدورة الدموية في القلب والأوعية الدموية. وباختصار، خطوات ضرورية للتصوير الطفيليات الفلورسنت يعيش داخل يرقات الزرد:(ط) استخدام الأجنة مظلل في وقت مبكر (24-48 هبف) أو اليرقات أو الحيوانات بين 72-96 هبف مع لا تصبغ بحيث تكون شفافة وسهلة لحقن؛ (ثانيا) صورة يرقات وقت ممكن بعد الحقن لتجنب إزالة الطفيليات من الخلايا البلعمية؛ ويركز على الموقع للفائدة (مثلاً، منطقة التامور) (ثالثا) والحفاظ على التركيز. يسمح هذا الإجراء رواية تصور trypomastigotes في بيئة شبيهة بمكانته الطبيعية العدوى، توفير إمكانية دراسة الكروزية. ت. في حي للمرة الأولى.

هو سبب مرض شاغاس الطفيلي البرزي الكروزية ت. ما يقرب من 6 إلى 7 مليون شخص في العالم مصابون الكروزية. ت.. هذا المرض ينتقل أساسا في أمريكا اللاتينية، ولكن سجلت في الولايات المتحدة، وكندا، والأوروبي كثيرة، فضلا عن بعض بلدان "غرب المحيط الهادئ"، أساسا بسبب هجرة الأفراد المصابين1. داء شاغاس إلى حد كبير المنقولة والمنقولة إلى البشر عن طريق الاتصال مع براز الحشرات هيماتوفاجيك في الفصيلية Triatominae، تعرف عموما باسم "البق". ومع ذلك، الكروزية ت. يمكن أن ينتقل أيضا عن طريق نقل الدم، انتقال عمودي من الأم إلى الطفل، أو ابتلاع الأغذية الملوثة بالطفيليات2. المرحلة الحادة هي أساسا غير متناظرة أو مؤثرا أعراض العدوى ويستمر من 6 إلى 8 أسابيع، بعد الذي يتحكم تحميل الطفيلي المشاركة في الجهاز المناعي لكن لا يلغي تماما الإصابة3. معظم الأفراد ثم أدخل مرحلة أعراض مزمنة؛ ومع ذلك، تقريبا 30% مرضى تطوير مرحلة مزمن أعراض، التي هي نظام القلب وأقل تواترا في الجهاز الهضمي والعصبي الشبهة4. هذا السيناريو يمثل تحديا للعلاج من الأمراض والسيطرة حيث لا تتوفر أي لقاح، وهناك اثنان فقط من الأدوية الفعالة لداء شاغاس: بينزنيدازولي ونيفورتيموكس. كل العلاجات تتطلب إقامة مطولة وقد آثار جانبية شديدة2.
زيادة فهم سلوك الكروزية ت. السلوك في فيفو هو المفتاح لتحديد الهجرة الطفيلية، ومرفق الهاتف الخلوي، وغزو داخل البلد المضيف؛ نقص في فيفو نماذج يحد من تطوير نهج علاجية جديدة. وقد أظهرت الدراسات في المختبر T. الكروزية العدوى أن حركية trypomastigotes مهم لربط أغشية الخلايا المضيفة واجتياح الخلوي5. ثبت استنفاد الطاقة في trypomastigotes في ثقافة المشارك مع خط خلية عرضه للحد من غزو الخلوية6. من المثير للاهتمام، في تريبانوسوماتيدس، حركة فلاجلر كما اتسم كآلية تهرب ضد الأجسام المضادة الخاصة بالطفيل7.
وقد درس على نطاق واسع في المختبر في المثقبيات البروسية، وثيقة الصلة طفيلي الذي يسبب "داء المثقبيات الأفريقي"8فلاجلر حركية. أظهرت الدراسات في المختبر من الحركية من هذه المثقبيات أن محاكاة الظروف للدم أو سوائل الجسم، بما في ذلك اللزوجة ووجود عقبات تمثيلية من خلايا الدم، مهم للتحرك إلى الأمام الطفيلي9 . حتى أنه لم الممكن تصور الحركة للطفيليات في مجرى الدم في الجسم الحي.
الزرد يرقات نموذجا قويا لدراسة التفاعلات المضيف الممرض في فيفو. فصغيرة وغير مكلفة وسهلة نسبيا لزيادة بالمقارنة مع النماذج الفقاريات الأخرى المنشأة لمرض شاغاس. الزرد نظم المناعة الفطرية وتكيفية مماثلة للبشر ولكن على الجهاز المناعي التكيفي يبدأ وضع في 4 أيام بعد الإخصاب (إدارة الشرطة الاتحادية) وليست ناضجة ل أسابيع عدة أخرى10. أثناء المبكرة، عندما الضامة فقط موجودة، هناك نافذة كبيرة لدراسة السلوك الطفيلي دون التدخل الفوري محصنة ضد10. بيد أن أكبر ميزة لاستخدام اليرقات الزرد كنموذج فقاريات لدراسة سلوك الكائنات الممرضة يكمن في شفافيتها الضوئية، يجعلها قابلة للفحص المجهري والتصوير11. بالإضافة إلى ذلك، هناك العديد من الأدوات التعامل مع الأسماك علم الوراثة. على سبيل المثال، سلالة كاسبر خط متحولة من الزرد مع لا لون البشرة، مما يجعل الحيوان شفافة تماما ومفيداً للتصور الأجهزة الفردية وتتبع في الوقت الحقيقي لحقن الخلايا12.
حد رئيسية من المراقبة طولية للطفيليات تتحرك سريعاً في استخدام الزرد يعيش [كنفوكل] أو مجهرية ابيفلوريسسينسي يكمن في استحالة التصوير في سرعة اكتساب عالية وأعماق اختراق كبير مع نوعية صورة جيدة ومنخفضة خطر د. ورقة الضوء الفلورية ميكسروسكوبي () وهي تقنية تصوير ناشئة أن يتغلب على هذه القيود للسماح بهذه الملاحظات. باستخدام هدف واحد للكشف عن الأسفار وإضاءة متعامد هدف ثاني الذي ينير فقط المستوى البؤري للكشف عن الهدف، فإنه من الممكن الحصول على مقاطع بصرية عالية الدقة كما هو الحال في مجهر [كنفوكل]، ولكن مع إلى حد كبير انخفاض د، حتى فيما يتعلق ب الفحص المجهري ابيفلوريسسينسي13. لسفم التقنية المستخدمة هنا تسمى واحد الطائرة إضاءة مجهرية (SPIM)، الذي ينير ورقة رقيقة من الضوء طائرة واحدة داخل اليرقات الزرد.
والهدف من هذه المنهجية إنشاء الزرد اليرقات كنموذج العدوى غير قابلة للتطبيق لفهم حركية الكروزية. ت. والسلوك ذات الصلة في فيفو. لتحقيق هذا الهدف، ونحن تحقن اليرقات الزرد شفافة مع المسمى فلوريسسينتلي trypomastigotes، شكل الخلوية المسؤولة عن حالات العدوى للبشر، وحددت حركة الكروزية. ت. في القلب والأوعية الدموية تداول الزرد باستخدام لسفم.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="653">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">0.5-10 &#956;L Micropipette</td>
			<td style="width:164px;">Fisherbrand</td>
			<td style="width:104px;">21-377-815</td>
			<td style="width:155px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Agarose RA</td>
			<td style="width:164px;">Amresco</td>
			<td style="width:104px;">N605</td>
			<td>Regular</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Agarose SFR</td>
			<td style="width:164px;">Amresco</td>
			<td style="width:104px;">J234</td>
			<td>Low Melting point</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Aquarium salt</td>
			<td style="width:164px;">Instant ocean</td>
			<td>SS15-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cell Count chamber</td>
			<td style="width:164px;">Boeco</td>
			<td>Neubauer&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cell culture flasks</td>
			<td style="width:164px;">Corning</td>
			<td>430639</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Centrifuge</td>
			<td style="width:164px;">Sorvall</td>
			<td style="width:104px;">Legend RT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CFSE</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>C34554</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Detection objective</td>
			<td style="width:164px;">Nikon 40x 0.8NA&#160;</td>
			<td style="width:104px;">40x CFI APO NIR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DMEM medium</td>
			<td style="width:164px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>D5648</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:41px;width:231px;">Dumont #5 fine forceps</td>
			<td style="width:164px;">World precision Instruments</td>
			<td style="width:104px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:231px;">Ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonate salt (Tricaine)</td>
			<td style="width:164px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:104px;">A5040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Fetal calf serum (FCS)</td>
			<td style="width:164px;">Eurobio</td>
			<td>CVFSVF00-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Filter</td>
			<td style="width:164px;">Chroma</td>
			<td style="width:104px;">ET-525/50M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glass capillaries for embryo mounting</td>
			<td style="width:164px;">Vitrez Medical</td>
			<td>160215</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glass capillaries for pulling needles</td>
			<td style="width:164px;">World precision instruments</td>
			<td>TW100-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glucose</td>
			<td style="width:164px;">Gibco</td>
			<td>A2494001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">HEPES</td>
			<td style="width:164px;">Gibco&#160;</td>
			<td>156300-80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Incubator</td>
			<td style="width:164px;">Thermo Corporation</td>
			<td>Revco</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Larval microinjection mold</td>
			<td>Adaptive Science Tools</td>
			<td>I-34</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Laser</td>
			<td style="width:164px;">Crystalaser</td>
			<td style="width:104px;">DL488-050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">L-glutamine</td>
			<td style="width:164px;">Gibco</td>
			<td>250300-81</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Methylene blue</td>
			<td>Albor Qu&#237;micos</td>
			<td>12223</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Micromanipulator&#160;</td>
			<td style="width:164px;">Narishige</td>
			<td>MN-153</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Micromanipulator system</td>
			<td style="width:164px;">Sutter Instrument</td>
			<td>MP-200</td>
			<td>For LSFM&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Micropipette puller device&#160;</td>
			<td>Narishige</td>
			<td style="width:104px;">PC-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Microscope&#160;</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>CX31</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Microscope (inverted)</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>CKX41</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Multipurpose microscope</td>
			<td style="width:164px;">Nikon</td>
			<td style="width:104px;">AZ100M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Neubauer counting chamber</td>
			<td style="width:164px;">Boeco Germany</td>
			<td style="width:104px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Penicillin-streptomycin</td>
			<td style="width:164px;">Gibco&#160;</td>
			<td>15140-163</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Petri dish 94x16</td>
			<td>Greiner bio-one</td>
			<td>633181</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Plastic pasteur pipette</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>11577722</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Rotation stage</td>
			<td>Newport</td>
			<td>CONEX-PR50CC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">RPMI-1640 medium</td>
			<td style="width:164px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:104px;">R4130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium pyruvate</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11360-070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Stereoscope</td>
			<td style="width:164px;">Nikon</td>
			<td>C-LEDS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Tricaine (MS-222)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>886-86-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">TRIS</td>
			<td style="width:164px;">Amresco</td>
			<td style="width:104px;">M151</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Trypsin-EDTA (0.25%)</td>
			<td style="width:164px;">Gibco</td>
			<td>R-001-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Tubes 15 ml</td>
			<td style="width:164px;">Corning</td>
			<td>05-527-90</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

establishment of larval zebrafish as an animal model to investigate trypanosoma cruzi motility in vivo

وهو مرض شاغاس عدوى طفيلية الناجم عن المثقبيات الكروزية، الذين حركية ليس هاما للتعريب، بل أيضا لربط الخلوية والغزو. الحالي نماذج حيوانية لدراسة الكروزية ت. السماح بمراقبة محدودة للطفيليات المجراة، تمثل تحديا لفهم السلوك الطفيلي خلال المراحل الأولية للإصابة في البشر. هذا بروتوزوا مرحلة فلاجلر في ناقلات والمضيفين الثدييات، لكن لا توجد دراسات تصف به حركية في فيفو. وكان الهدف من هذا المشروع إلى إنشاء نموذج الزرد فقاريات حية لتقييم حركية الكروزية. ت. في نظام الأوعية الدموية. الزرد شفافة تم حقن اليرقات فلوريسسينتلي المسمى trypomastigotes ولاحظ استخدام الورقة الضوء الفلورية مجهرية ()، أسلوب موسع لتصور الكائنات الحية مع عالية الدقة البصرية. يمكن تصور الطفيليات لفترات طويلة من الوقت بسبب خطر هذا الأسلوب منخفضة نسبيا مقارنة مع [كنفوكل] د أو ابيفلوريسسينسي المجهري. ولوحظت الطفيليات الكروزية ت. السفر في الدورة الدموية الزرد يعيش في الأوعية الدموية مختلفة الأحجام وصفار البيض. أنها يمكن أيضا أن ينظر المرفقة للجدار كيس ألمح وصمام بي على الرغم من القوى القوية المرتبطة بتقلصات القلب. الكروزية. ت.-اليرقات الزرد الملقحين هو أسلوب قيمة التي يمكن استخدامها لوضع تصور تعميم الطفيليات وتقييم انتحاء، وأنماط الهجرة، وحركية في البيئة الحيوية لنظام القلب والأوعية الدموية الحيوانات الحية.

الظروف المثلى للحقن:
تم حقن مجموعات من الزرد اليرقات في 24، 48، 72 و 96 و 120 هبف، في مختلف المواقع التشريحية، والبقاء على قيد الحياة وقد درست كل يوم لمدة 5 أيام. بعد 5 أيام بعد الحقن، حقن الأجنة في 24 هبف قد 6.25 في المائة البقاء (2/32)، بينما نجا هبف 95% (38/40) يرقات حقنه في 48. كعنصر تحكم، تم حقن اليرقات 1 x برنامج تلفزيوني كوسيلة. لم تكن هناك اختلافات في البقاء على قيد الحياة بين اليرقات حقن المركبة وحقنها الطفيلي، تشير إلى أي آثار الطفيلية تعتمد على معدل البقاء على قيد الحياة من الأسماك (p = 0.08). وقد اليرقات حقن بين 72-120 هبف معدلات بقاء قابلة للمقارنة لليرقات حقن هبف 48 في حجم الحقن المستمر. واستخدمت 48 هبف اليرقات لجميع الإجراءات المعروضة هنا، نظراً لسهولة التلاعب، وبعد أن وضعت أجهزة وسهولة اختراق الجلد دون ضرر واضح بعد الحقن.
كانت هبف اليرقات حقنه في 48 حقنه في الفضاء التامور، ذيل العضلات والبطين هيندبرين وحويصله عتيق، نوتوتشورد وقناة كوفييه في كيس ألمح. لم تكن هناك فروق في بقاء اليرقات حقنه في المواقع التشريحية المختلفة. ومع ذلك، كان المنطقة الأسرع والأسهل لحقن قناة كوفييه الموجود في الجزء الأمامي من كيس ألمح (الشكل 1، 1 فيلم). الحقن في هذا الموقع يسمح بإدخال كميات أعلى مع انخفاض خطر الإصابة إلى الهياكل الحيوية. بالإضافة إلى ذلك، أن هذه المنطقة بين 24-72 هبف، موقع أمثل للوصول مباشرة إلى المفرج النامي والقلب11.
التصور الطفيلي باستخدام لسفم:
في 8-10 دقيقة بعد حقن الكروزية. ت. في مجرى هواء كوفييه، حددت الطفيليات في الزرد اليرقات باستخدام لسفم بسبب إشارة كفسي الفلورسنت والشفافية الضوئية لليرقات. ولوحظت الطفيليات بعد التطعيم، أما الالتزام بالجدران حول نظام الدورة الدموية أو السفر في اتجاه تدفق الدم (الشكل 2و الشكل 3). عندما يبقى طفيلي المرفقة إلى بنية القلب، مثل صمام بي، فإنه يتذبذب مع تقلصات القلب، مما يشير إلى أن الآليات الجزيئية لتمسك الطفيليات قد تكون فعالة في نموذجنا الفقاريات (فيلم 2، 3 فيلم ، فيلم تكميلية 1). كما تلتزم الكروزية ت. جدران الكيس صفار اليرقات ( الشكل 2، 2 فيلم)، بنية الذي سيتم في وقت لاحق إعادة استيعاب وتصبح جزءا من الأمعاء الزرد22. وهذا يمكن أن تكون مماثلة لما يحدث أثناء مرحلة المرض المزمن في البشر المصابين، حيث توجد الطفيليات في كارديوميوسيتيس، وفي الجهاز الهضمي العصبي23،24. عندما لم تعلق، جنحت الطفيليات من خلال تدفق الدم في نفس الاتجاه مثل الكريات الحمراء ( الشكل 3، 4 فيلم). الطفيليات يمكن ملاحظته في سفن مختلفة الحجم من الأسماك، ولكن كانت أكثر وفرة في المساحة التامور وفي المنطقة المتاخمة صفار البيض تحتوي على تدفق الدم ( الشكل 2، الرقم 3، فيلم تكميلي 2).
في 10 دقيقة بعد الحقن، كان من الصعب أكثر على بقعة واحدة أشكال الطفيلي نظراً لتوزيعها على طول المفرج، وعدم قدرة على سرعة الشاشة التشريحية مواقع مختلفة من الأسماك بسبب مجال رؤية محدودة من (في 40 X التكبير ). بعد 24 ساعة بعد الحقن (hpi)، ويبدأ إشارة كفسي تتراكم في المنطقة قرب الأمعاء النامي (تكميلية الشكل 1).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56238/56238fig1.jpg"> 
رقم 1: موقع الحقن الأمثل. (أ) صورة يرقة 48 هبف تبين مكان الحقن الأمثل في مجرى هواء كوفييه (السهم الأصفر) استخدام ستيريوسكوبي عادية. (ب) ماجنيفيد عرض مربع في عرض قناة كوفييه (السهم الأصفر). شريط المقياس = 200 ميكرومتر (A)، 50 ميكرومتر (ب). <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56238/56238fig1large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56238/56238fig2.jpg"> 
رقم 2: الصور لسفم للطفيلي ثابتة في يرقة هبف 48- ت. الكروزية الطفيلي (السهم الأصفر) يبقى الالتزام بها على الجدران من كيس ألمح، في جميع أنحاء التسلسل الزمني الفاصل (7.2 s، 17.2 s، و 27.2 s)، حوالي ~ 15 دقيقة بعد حقن الطفيليات. ويلاحظ أي تغيير في موقف الطفيل أثناء فترة الحصول على مالا يقل عن 30 س. أ، اتريوم؛ الخامس، بطين. شريط المقياس = 50 ميكرومتر. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56238/56238fig2large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56238/56238fig3.jpg"> 
الشكل 3: مسار طفيلي السفر في الفضاء التامور باستخدام لسفم- يمكن تعقب الطفيلي الكروزية ت. بينما الانجراف في الفضاء التامور (PS)، عقب اتجاه تدفق الدم (المسار المبين باللون الأحمر) حوالي ~ 15 دقيقة بعد حقن الطفيليات. شريط المقياس = 50 ميكرومتر. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56238/56238fig3large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="Movie 1" src="/files/ftp_upload/56238/56238mov1.jpg"> 
الفيلم 1: وادي دوران الدم من الصفار في يرقة 48 هبف. فيلم ليرقة 48 هبف عرض وادي دوران الدم أو مجرى الهواء من كوفييه استخدام ستيريوسكوبي عادية. وتتركز مناطق مختلفة خلال الفيديو لإظهار خلايا الدم الحمراء المتداولة في جميع أنحاء القناة. يظهر السهم الأصفر مكان الحقن الأمثل. تم تسجيل الفيلم حوالي 10-15 دقيقة بعد حقن الطفيليات. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56238/Movie_1.mp4" target="_blank">اضغط هنا لتحميل الفيديو.</a>
<img alt="Movie 2" src="/files/ftp_upload/56238/56238mov2.jpg"> 
فيلم 2: الطفيليات الكروزية ت تعلق على جدران الكيس صفار. فيلم لسفم لعرض هبف اليرقة 48 بقاء الطفيليات الكروزية T. التقيد بها كيس ألمح حوالي 10-15 دقيقة بعد حقن الطفيليات. أي تغيير في موقف الطفيلي لوحظ أثناء فترة الحصول على مالا يقل عن 30 س. أ، اتريوم؛ الخامس، بطين. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56238/Movie_2.mp4" target="_blank">اضغط هنا لتحميل الفيديو.</a>
<img alt="Movie 3" src="/files/ftp_upload/56238/56238mov3.jpg"> 
فيلم 3: الطفيليات الكروزية ت تعلق على جدران القلب. فيلم لسفم ليرقة 48 هبف تبين أن ريمي الطفيليات الكروزية ت. n الالتزام بالجدار القلب والأوعية الدموية، وعلى الرغم من انكماش القلب قوية حوالي 10-15 دقيقة بعد حقن الطفيليات. ويمكن ملاحظة الكريات الحمراء كالظلال السوداء مستدير الزوايا. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56238/Movie_3.mp4" target="_blank">اضغط هنا لتحميل الفيديو.</a>
<img alt="Movie 4" src="/files/ftp_upload/56238/56238mov4.jpg"> 
4 فيلم: الطفيليات التي تتحرك في الفضاء التامور. فيلم لسفم يرقة 48 هبف إظهار الكروزية ت. الطفيليات الانجراف في الفضاء التامور. يمكن تتبع الطفيليات اثنين في نقاط زمنية مختلفة (معرف 1، في دائرة حمراء، ومعرف 2 في دائرة صفراء)، بعد مسار مماثل. تم تسجيل الفيلم حوالي 10-15 دقيقة بعد حقن الطفيليات. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56238/Movie_4.mp4" target="_blank">اضغط هنا لتحميل الفيديو.</a>
تكميلية الشكل 1: إشارة "تراكم كفسي" الفلورية في الصفار. صور ستيريوسكوبي ليرقة wildtype حقنه في 48 هبف في مجرى هواء كوفييه. إشارة الفلورسنت كفسي تدريجيا يتراكم في صفار البيض، بعد يومين بعد الحقن (48 hpi). شريط المقياس = 500 ميكرومتر. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56238/Supplemental_figure_1.tif" target="_blank">الرجاء النقر هنا لتحميل الرقم.</a>
تكميلية الفيلم 1: الطفيليات تعلق على الجدران وصمامات الدموية. ستيريوسكوبي الوقت سلسلة الصور من نوع البرية يرقة حقنه في 48 هبف. يتم أخذ صور على 0.2 s فترات التقاط الطفيليات الكروزية ت نقل بالتزامن مع تقلصات عضلة القلب في صمام بي. تم تسجيل الفيلم حوالي 30 دقيقة بعد حقن الطفيليات. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56238/Supplemental_movie_1.mp4" target="_blank">اضغط هنا لتحميل الفيديو.</a>
تكميلية الفيلم 2: الطفيليات تتحرك والتقيد بها في الفضاء المحيط بالبطينات وصفار. فيلم لسفم يرقة 48 هبف إظهار الكروزية ت. الطفيليات الانجراف أو التقيد بالمساحة التامور أو صفار البيض. طريقة عرض خفيفة منقولة لوحظ لأول 5 s. وقد لوحظ رأي الأسفار من 5.2-25.8 s. تم تسجيل الفيلم حوالي 10-15 دقيقة بعد حقن الطفيليات. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56238/Supplemental_movie_2.mp4" target="_blank">اضغط هنا لتحميل الفيديو.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Establishment of Larval Zebrafish as an Animal Model to Investigate Trypanosoma cruzi Motility In Vivo at JoVE.com

Establishment of Larval Zebrafish as an Animal Model to Investigate Trypanosoma cruzi Motility In Vivo

في هذا البروتوكول، المسمى فلوريسسينتلي الكروزية ت تم حقن اليرقات الزرد شفافة، وحركية الطفيلي وقد لوحظ في فيفو استخدام الورقة الضوء الفلورية مجهرية.

إنشاء الزرد اليرقات "نموذج الحيوان" للتحقيق مثقبيه الكروزية حركية في فيفو

Chagas disease is a parasitic infection caused by Trypanosoma cruzi, whose motility is not only important for localization, but also for cellular binding ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Establishment of Larval Zebrafish as an Animal Model to Investigate Trypanosoma cruzi Motility In Vivo

Live Imaging of Innate Immune and Preneoplastic Cell Interactions Using an Inducible Gal4/UAS Expression System in Larval Zebrafish Skin

تصوير لايف الفطرية المناعي والتفاعلات سابق للورم الخلية باستخدام نظام التعبير / UAS محرض GAL4 في اليرقات الزرد الجلد

Here we describe a method to conditionally induce epithelial cell transformation by the use of the 4-Hydroxytamoxifen (4-OHT) inducible KalTA4-ERT2/UAS ...

Establishment of a Clinically Relevant Ex Vivo Mock Cataract Surgery Model for Investigating Epithelial Wound Repair in a Native Microenvironment

Establishment of a Clinically Relevant Ex Vivo Mock Cataract Surgery Model for Investigating Epithelial Wound Repair in a Native Microenvironment

إنشاء ذات الصلة سريريا<em&gt; السابقين فيفو</em&gt; موك الساد نموذج جراحة للتحقيق الظهارية إصلاح الجرح في المكروية الأم

The major impediment to understanding how an epithelial tissue executes wound repair is the limited availability of models in which it is possible to ...

Loss- and Gain-of-function Approach to Investigate Early Cell Fate Determinants in Preimplantation Mouse Embryos

Loss- ونهج كسب من وظيفة إلى التحقيق في خلية المبكر مصير محددات في سابق للانغراس أجنة الفئران

 Gene silencing and overexpression techniques are instrumental for the identification of genes involved in embryonic development. Direct target gene ...

Development of an Ethanol-induced Fibrotic Liver Model in Zebrafish to Study Progenitor Cell-mediated Hepatocyte Regeneration

تطوير متليفة الكبد نموذج الناجم عن الإيثانول في الزرد لدراسة السلف بوساطة الخلايا الكبدية التجديد

Sustained liver fibrosis with continuation of extracellular matrix (ECM) protein build-up results in the loss of cellular competency of the liver, leading ...

Building Finite Element Models to Investigate Zebrafish Jaw Biomechanics

بناء نماذج العناصر المحدودة المعنية بالتحقيق في الزرد الفك الميكانيكا الحيوية

Skeletal morphogenesis occurs through tightly regulated cell behaviors during development; many cell types alter their behavior in response to mechanical ...

Dissection of Larval Zebrafish Gonadal Tissue

تشريح اليرقات الزرد الغدد التناسلية الأنسجة

Although wild zebrafish possess a ZZ/ZW sex-determination system, domesticated zebrafish have lost the sex chromosome. They utilize a polygenic sex ...

Orthotopic Ovarian Transplantation Procedures to Investigate the Life- and Health-span Influence of Ovarian Senescence in Female Mice

أورثوتوبيك زرع المبيض إجراءات للتحقيق في تأثير الشيخوخة المبيض في الفئران الإناث مدى الحياة والصحة

Ovarian transplantation was first conducted at Utah State University in 1963. In more recent work, heterochronic transplantation of mammalian ovaries is ...

Electroretinogram Recording in Larval Zebrafish using A Novel Cone-Shaped Sponge-tip Electrode

تسجيل اليكتروريتينوجرام في "الزرد اليرقات" استخدام القطب نصيحة الأسفنج على شكل مخروط رواية A

The zebrafish (Danio rerio) is commonly used as a vertebrate model in developmental studies and is particularly suitable for visual neuroscience. For ...

Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C (UV-C) Damage

Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C UV-C Damage

تقييم الضرر التأكسدي في الخلايا السطحية الرئيسية للفأرة /الخلايا الجذعية استجابة للأضرار فوق البنفسجية-C (UV-C)

The ocular surface is subjected to regular wear and tear due to various environmental factors. Exposure to UV-C radiation constitutes an occupational ...

An Ectopic Chemokine Expression Model for Testing Macrophage Recruitment In Vivo

نموذج تعبير كيميائي خارج الرحم لاختبار توظيف الضامة في فيفو

Zebrafish are widely used in basic and biomedical research. Many zebrafish transgenic lines are currently available to label various types of cells. Owing ...