Name: establishment of larval zebrafish as an animal model to investigate trypanosoma cruzi motility in vivo
Uploaded: 2017-09-30T15:00:00
Duration: 13 min 21 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Establishment of Larval Zebrafish as an Animal Model to Investigate Trypanosoma cruzi Motility In Vivo at JoVE.com

यह काम Vicerrectoría de Investigaciones de la Universidad de लॉस Andes, और यूएसएड अनुसंधान और नवाचार फैलोशिप कार्यक्रम से Convocatoria Interfacultades द्वारा समर्थित किया गया । हम मछली के रखरखाव और सहायता के लिए जुआन राफेल Buitrago और Yeferzon Ardila धंयवाद ।

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लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।

यह अध्ययन vivo मेंरोगज़नक़ व्यवहार के अध्ययन के लिए एक पशु मॉडल के रूप में zebrafish के लाभों पर प्रकाश डाला गया । विशेष रूप से, इस अध्ययन के लिए एक विधि अपने प्राकृतिक वातावरण में रोगज़नक़ cruzi कल्पना: hematic संचलन का प्रस्ताव है । मछली में संचार microenvironment के पर्यावरण स्तनधारियों की तुलना में है, और trypanosomatids यात्रा के लिए तंत्र विकसित किया है, प्रतिरक्षा प्रणाली से बच रहा है, और उस वातावरण में संक्रमण के लिए कोशिकाओं को संलग्न25। इस प्रोटोकॉल एक मानव सेल लाइन और फ्लोरोसेंट लेबलिंग के लिए flagellar रूपों के बाद अलगाव में cruzi की संस्कृति के लिए एक इष्टतम प्रक्रिया का वर्णन प्रदान करता है । यह तो बाद में बढ़ते और दृश्य LSFM का उपयोग करने के लिए पारदर्शी zebrafish में परजीवी के सफल इंजेक्शन के लिए उपयुक्त सेटिंग्स से पता चलता है । अंत में, इस प्रोटोकॉल LSFM का उपयोग संचलन में परजीवी स्थान और आंदोलन के vivo इमेजिंग में कुशल और प्रभावी के लिए सुझाव प्रदान करता है.
trypanosomes के flagellum अपने पीछे क्षेत्र से उभर, कोशिका शरीर से बह रही है, और जीव के पूर्वकाल भाग में मुक्त लटका26। T. cruzi शरीर के आगे flagellum को लहराते हुए खुद को बढाती है, जो परजीवी के पूरे शरीर को लहरदार करती है । Flagellar आंदोलन परजीवी गतिशीलता के लिए केवल अपरिहार्य नहीं है, के रूप में टी brucei27 (अफ्रीकी trypanosomiasis के प्रेरणा का एजेंट) के मामले में, लेकिन यह भी सेलुलर संक्रमण के लिए प्रयोग किया जाता है, के रूप में टी cruziमें प्रदर्शन किया गया है5 ,28. हालांकि zebrafish टी cruziके लिए प्राकृतिक मेजबान नहीं हैं, परजीवी गतिशीलता एक विकासशील हृदय संचलन प्रणाली में अध्ययन किया जा सकता है यहां वर्णित प्रोटोकॉल का उपयोग कर । इसके अतिरिक्त, trypanosomes प्रजातियां हैं जो cyprinids को संक्रमित कर रही हैं, zebrafish का वर्ग, जैसे कि टी. carassii और टी. borreli25. इन परजीवी प्रजातियों का वास्तविक समय में अध्ययन किया जा सकता है इन trypanosomatids के आंदोलनों और लगाव तंत्र; इस तरह के अध्ययन स्तनधारी सेल संक्रमण की प्रक्रिया में अंतर्दृष्टि उधार दे सकते हैं ।
इस अध्ययन में, इंजेक्शन gram cruzi परजीवी inoculated मछली के हृदय संचलन के माध्यम से यात्रा मनाया, अपारदर्शी एरिथ्रोसाइट्स के साथ घूम रहे थे, और हृदय प्रणाली की दीवारों में संरचनाओं का पालन । हम ०.२५ के एक संख्यात्मक एपर्चर के साथ प्रदीप्ति बांह के लिए एक 10x achromatic लंबे समय से काम कर दूरी हवा उद्देश्य (१७.६ mm) के साथ एक घर का निर्माण LSFM का इस्तेमाल किया । एक 40X apochromatic जल विसर्जन उद्देश्य ०.८ के एक संख्यात्मक एपर्चर और ३.५ mm की एक काम की दूरी के साथ पता लगाने के हाथ के लिए इस्तेमाल किया गया था । इसका पता लगाने के उद्देश्य से नमूना चैंबर में विसर्जित कर दिया गया, जबकि दीप्ति का मकसद चैंबर के बाहर था । कक्ष में एक coverslip और ऑप्टिकल गोंद रोशनी किरण के लिए अनुमति के लिए चैंबर में प्रवेश के साथ बंद चैंबर में एक बंदरगाह, के रूप में Lorenzo एट अल में दर्शाया गया है । 18 रोशनी के लिए, हम ४८८ एनएम जिसकी शक्ति एक Acousto ऑप्टिकल स्वरित्र फिल्टर द्वारा संग्राहक था पर एक ५० मेगावाट DPSS लेजर का इस्तेमाल किया । पता लगाने के रास्ते प्रयुक्त फिल्टर ग्रीन फ्लोरोसेंट प्रोटीन (GFP) या FITC के साथ संगत । एक हल्की चादर माइक्रोस्कोप एक केशिका नमूना धारक के साथ सुसज्जित (स्वचालित रोटेशन के साथ आदर्श) और नमूना चैंबर के तापमान नियंत्रण इस आवेदन के लिए उपयुक्त होना चाहिए. सूक्ष्मदर्शी को चाहिए कि यदि आवश्यक हो तो अधिग्रहण से पहले निर्माता के निर्देशों या उपयोगकर्ता के प्रयोगशाला मानक प्रोटोकॉल के अनुसार संरेखित और तुले हुए हों । इस प्रोटोकॉल में, हम SPIM सॉफ्टवेयर19का उपयोग कर माइक्रोस्कोप नियंत्रित.
यह नोट करने के लिए महत्वपूर्ण है कि zebrafish के संचलन में, लार्वा परजीवी लगाव प्रभावी है । कार्डिनल नस में, परजीवी कई मिनट तक के लिए संलग्न रहे; दिल में, वे वाल्व और दीवारों पर आयोजित, दिल संकुचन के साथ दोलन । आगे की पढ़ाई के क्रम में स्पष्ट है कि क्या cruzi बहते एरिथ्रोसाइट्स के साथ इंटरैक्ट करता है जो रक्त प्रवाह की दिशा में बहती है. पिछले इन विट्रो अध्ययनों से पता चला है कि ठोस संरचनाओं की उपस्थिति (यानी, रक्त कोशिकाओं), या तरल की वृद्धि हुई चिपचिपाहट इन विट्रो मेंरक्त की नकल करने के लिए, परजीवी के गतिशीलता और वेग पर एक महत्वपूर्ण प्रभाव पड़ता है 9.
वहां phagocytic कोशिकाओं, शुरू में संक्रमित सेल प्रकार29से बचने के amastigotes के बाद मनुष्यों में टी. cruzi के संक्रमण के पाठ्यक्रम के बारे में कई सवाल हैं । उदाहरण के लिए, कैसे वे अपने लक्ष्य अंगों के लिए पहुंचते हैं? ऐसे कार्डियक, पाचन, और केंद्रीय तंत्रिका तंत्र के रूप में पसंदीदा अंगों के लिए tropism के लिए तंत्र क्या हैं? दिलचस्प है, इस अध्ययन में परजीवी शुरू में दिल में छवि थी, क्योंकि यह परजीवी के उच्चतम घनत्व का स्थल था । हालांकि, CFSE संकेत बाद में 7 दिनों के बाद इंजेक्शन द्वारा विकासशील आंत में संचित । हालांकि मछली और स्तनधारियों के एनाटॉमी अलग है, इस अध्ययन के परिणाम tropism के एक फार्म का प्रदर्शन, के रूप में यह देखा गया था कि परजीवी जीव मतभेदों के बावजूद ज्ञात पसंदीदा लक्ष्य अंगों की ओर tropism का प्रदर्शन किया । इस अध्ययन की एक महत्वपूर्ण सीमा के प्रयोगों में इस्तेमाल तापमान की चिंताओं । पूरी प्रक्रिया के दौरान Zebrafish लार्वा को लगभग 28 डिग्रीसेल्सियस के आसपास रखा जाना चाहिए । हालांकि इस तापमान वेक्टर मेजबान (Triatominae उपपरिवार के कीड़े) के समान हो सकता है, यह गर्म खून स्तनधारियों कि अंतिम मेजबान (लगभग ३७ डिग्री सेल्सियस) शामिल से काफी अलग है । T. cruzi flagellar दोनों मेजबानों में रहने वाले रूपों के लिए जाना जाता है; हालांकि, यह ध्यान में रखना महत्वपूर्ण है कि इस कारक vivo मेंजानवर के व्यवहार में एक प्रभाव हो सकता है.
हालांकि मछली ´ एस अनुकूली प्रतिरक्षा प्रणाली है परिपक्व नहीं है जब तक 4 सप्ताह के बाद निषेचन, जंमजात प्रतिरक्षा प्रणाली के विकास में जल्दी सक्रिय है10। के रूप में जल्दी के रूप में ४८ या ९६ hpf, phagocytic कोशिकाओं को देखा गया trypanosomes लेबल घिरा (डेटा नहीं दिखाया गया है) । इस परजीवी के दृश्य के लिए समय की खिड़की सीमा । हालांकि, अगर एक अध्ययन के लिए मछली ´ एस प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया मूल्यांकन पर ध्यान केंद्रित किया गया था, बाद के चरणों में इंजेक्शन की सिफारिश की जा सकती है । इसके अलावा, लेबल मैक्रोफेज या प्रतिरक्षा प्रणाली के अन्य कोशिकाओं के साथ ट्रांसजेनिक मछली लाइनों में परजीवी के इंजेक्शन परजीवी लगाव और संभव endocytosis तंत्र का अध्ययन करने में उपयोगी हो सकता है । यह नोट करना महत्वपूर्ण है कि अगर परजीवी CFSE के साथ लेबल कर रहे हैं, ट्रांसजेनिक सेल लेबल GFP नहीं किया जाना चाहिए, और स्पेक्ट्रम के पीले या लाल अंत में एक मार्कर की आवश्यकता है ।
परजीवी आंदोलन की विस्तृत दिशा का आकलन करने के लिए, यह 3 आयामों (3 डी) में अपने पथ का पालन करने के लिए उपयोगी हो सकता है । 3 डी दृश्य और प्रक्रिया के पुनर्निर्माण के लिए, एक उच्च गति प्रणाली आवश्यक है । इस प्रोटोकॉल में इस्तेमाल किया उपकरणों के साथ, यह केवल एक विमान में परजीवी कल्पना करने के लिए संभव है । इस मामले में, हम परजीवी आंदोलन के दौरान फोकल विमान स्थिरता को बनाए रखने प्राथमिकता है, और एक विमान में अपनी गति रिकॉर्डिंग ।
यहां प्रस्तावित पद्धति हृदय संचलन में परजीवी व्यवहार की जांच करने का मार्ग प्रशस्त करती है । सारांश में, zebrafish लार्वा के अंदर इमेजिंग लाइव फ्लोरोसेंट परजीवी के लिए आवश्यक कदम हैं:(i) जल्दी रची भ्रूण का उपयोग (24-48 hpf) या लार्वा, या कोई रंजकता के साथ 72-96 hpf के बीच जानवरों इतना है कि वे पारदर्शी और इंजेक्षन करने के लिए आसान कर रहे हैं; (ii) phagocytic कोशिकाओं द्वारा परजीवी निकासी से बचने के लिए इंजेक्शन के बाद जितनी जल्दी हो सके छवि लार्वा; और (iii) LSFM को ब् याज की साइट (उदा., pericardial क्षेत्र) पर फ़ोकस करें और ध् यान बनाए रखें । यह उपंयास प्रक्रिया एक अपने प्राकृतिक संक्रमण आला करने के लिए तुलनीय वातावरण में trypomastigotes के दृश्य की अनुमति देता है, पहली बार के लिए एक जीवित जीव में टी cruzi अध्ययन संभावना प्रदान करते हैं ।

Chagas रोग प्रोटोजोआ परजीवी टी. cruzi के कारण होता है. दुनियाभर में लगभग ६ से ७,०००,००० लोग टी. cruziसे संक्रमित हैं. रोग मुख्य रूप से लैटिन अमेरिका में फैलता है, लेकिन संयुक्त राज्य, कनाडा में सूचित किया गया है, और कई यूरोपीय के रूप में के रूप में अच्छी तरह से कुछ पश्चिमी प्रशांत देशों, मुख्य रूप से संक्रमित व्यक्तियों के प्रवास के कारण1। Chagas मुख्यतः वेक्टर जनित है और Triatominae उपपरिवार में hematophagic कीड़ों के मल के साथ संपर्क द्वारा मनुष्यों को संचारित, सामांयतः "चुंबन कीड़े" के रूप में जाना जाता है । हालांकि, टी cruzi भी रक्त आधान के माध्यम से प्रेषित किया जा सकता है, मां से बच्चे को ऊर्ध्वाधर स्थानांतरण, या परजीवी के साथ प्रदूषित भोजन की घूस2। तीव्र चरण संक्रमण मुख्य रूप से स्पर्शोन्मुख या constitutively रोगसूचक है और 6 से 8 सप्ताह तक रहता है, जिसके बाद प्रतिरक्षा प्रणाली की सगाई परजीवी लोड नियंत्रण, लेकिन पूरी तरह से संक्रमण को खत्म नहीं करता है3. अधिकांश व्यक्तियों तो एक जीर्ण स्पर्शोन्मुख चरण में प्रवेश; हालांकि, रोगियों के लगभग 30% एक रोगसूचक जीर्ण चरण है, जिसमें हृदय प्रणाली और कम बार पाचन और तंत्रिका प्रणालियों के4समझौता कर रहे हैं विकसित. इस परिदृश्य रोग उपचार और नियंत्रण के लिए एक चुनौती प्रस्तुत करता है के बाद से वहां कोई टीके उपलब्ध हैं, और वहां केवल दो Chagas के लिए प्रभावी दवाओं: benznidazole और nifurtimox हैं । दोनों उपचार लंबे समय तक प्रशासन की आवश्यकता होती है और गंभीर साइड इफेक्ट2हो सकता है ।
vivo में टी cruzi व्यवहार के व्यवहार की वृद्धि हुई समझ परजीवी प्रवास, सेलुलर लगाव, और मेजबान के भीतर आक्रमण का निर्धारण करने के लिए महत्वपूर्ण है; vivo मॉडल में की कमी उपंयास चिकित्सीय दृष्टिकोण के विकास को सीमित करता है । टी cruzi संक्रमण के विट्रो में अध्ययन से पता चला है कि trypomastigotes के गतिशीलता सेल झिल्ली और बाद में सेलुलर आक्रमण5मेजबान के लिए बाध्यकारी के लिए महत्वपूर्ण है । एक अतिसंवेदनशील सेल लाइन के साथ सह-संस्कृति में trypomastigotes में ऊर्जा की कमी सेलुलर आक्रमण को कम करने के लिए दिखाया गया है6. दिलचस्प है, trypanosomatids में, flagellar आंदोलन भी परजीवी विशिष्ट एंटीबॉडी7के खिलाफ एक चोरी तंत्र के रूप में विशेषता किया गया है ।
Flagellar गतिशीलता बड़े पैमाने पर Trypanosoma brucei, एक निकट संबंधित परजीवी है कि अफ्रीकी Trypanosomiasis8कारणों में इन विट्रो में अध्ययन किया गया है । इन विट्रो में इन trypanosomes के गतिशीलता के अध्ययन से पता चला कि रक्त या शरीर के तरल पदार्थ की शर्तों का अनुकरण, चिपचिपापन सहित और रक्त कोशिकाओं के प्रतिनिधि बाधाओं की उपस्थिति, परजीवी आगे आंदोलन के लिए महत्वपूर्ण है9 . अभी तक यह संभव नहीं किया गया है कि vivo मेंखून में परजीवी के आंदोलन की कल्पना ।
Zebrafish लार्वा vivo मेंहोस्ट-रोगज़नक़ इंटरैक्शन का अध्ययन करने के लिए एक शक्तिशाली मॉडल हैं । वे छोटे, सस्ती, और अपेक्षाकृत आसान है जब Chagas रोग के लिए अंय स्थापित हड्डीवाला मॉडल के साथ तुलना में बढ़ा रहे हैं । Zebrafish सहज और अनुकूली प्रतिरक्षा प्रणाली मनुष्यों के समान है, लेकिन उनके अनुकूली प्रतिरक्षा प्रणाली के लिए 4 दिन में (dpf) निषेचन के बाद विकसित शुरू होता है और एक और कई हफ्तों के लिए परिपक्व नहीं है10। प्रारंभिक विकास के दौरान, जब केवल मैक्रोफेज मौजूद हैं, वहां तत्काल प्रतिरक्षा हस्तक्षेप के बिना परजीवी व्यवहार का अध्ययन करने के लिए एक बड़ी खिड़की है10। हालांकि, रोगज़नक़ व्यवहार के अध्ययन के लिए एक हड्डीवाला मॉडल के रूप में zebrafish लार्वा का उपयोग करने का सबसे बड़ा लाभ उनके ऑप्टिकल पारदर्शिता में निहित है, उंहें सूक्ष्म स्क्रीनिंग और इमेजिंग11के लिए उत्तरदायी बना । इसके अतिरिक्त, मछली आनुवंशिकी में हेरफेर करने के लिए कई उपकरण हैं । उदाहरण के लिए, कैस्पर तनाव कोई रंजकता के साथ zebrafish के एक उत्परिवर्ती लाइन है, जानवर पूरी तरह से पारदर्शी और व्यक्तिगत अंगों के दृश्य के लिए उपयोगी बनाने और इंजेक्शन कोशिकाओं के वास्तविक समय पर नज़र रखने के लिए12.
तेजी से रहने zebrafish में फोकल या epifluorescence माइक्रोस्कोपी का उपयोग करते हुए परजीवी के अनुदैर्ध्य अवलोकन की एक प्रमुख सीमा उच्च अधिग्रहण गति और अच्छी छवि गुणवत्ता और कम के साथ बड़ी पैठ गहराई पर इमेजिंग के असंभव में निहित है धूप का खतरा । लाइट शीट प्रतिदीप्ति micsroscopy (LSFM) एक उभरते इमेजिंग तकनीक है कि इन सीमाओं पर काबू पाने के लिए इन टिप्पणियों की अनुमति है । एक उद्देश्य का उपयोग करके प्रतिदीप्ति का पता लगाने और एक दूसरे ओर्थोगोनल रोशनी उद्देश्य है कि केवल पता लगाने के उद्देश्य के फोकल विमान रोशन, यह एक फोकल माइक्रोस्कोप के रूप में उच्च संकल्प ऑप्टिकल वर्गों को प्राप्त करने के लिए संभव है, लेकिन साथ काफी कम धूप, यहां तक कि epifluorescence माइक्रोस्कोपी के संबंध में13. यहां इस्तेमाल होने वाली LSFM तकनीक को सिंगल प्लेन दीप्ति माइक्रोस्कोपी (SPIM) कहा जाता है, जिसमें प्रकाश की एक पतली सी चादर zebrafish लार्वा के भीतर एक भी विमान को रोशन करती है ।
इस पद्धति का उद्देश्य vivo में cruzi गतिशीलता और संबंधित व्यवहार को समझने के लिए एक व्यवहार्य गैर-संक्रमण मॉडल के रूप में लार्वा zebrafish की स्थापना करना है । यह पूरा करने के लिए, हम फ्लोरोसेंट लेबल trypomastigotes के साथ पारदर्शी zebrafish लार्वा इंजेक्शन, सेलुलर फार्म मनुष्यों के संक्रमण के लिए जिंमेदार है, और zebrafish के हृदय संचलन में टी cruzi के आंदोलन की पहचान की LSFM का उपयोग कर ।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="653">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">0.5-10 &#956;L Micropipette</td>
			<td style="width:164px;">Fisherbrand</td>
			<td style="width:104px;">21-377-815</td>
			<td style="width:155px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Agarose RA</td>
			<td style="width:164px;">Amresco</td>
			<td style="width:104px;">N605</td>
			<td>Regular</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Agarose SFR</td>
			<td style="width:164px;">Amresco</td>
			<td style="width:104px;">J234</td>
			<td>Low Melting point</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Aquarium salt</td>
			<td style="width:164px;">Instant ocean</td>
			<td>SS15-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cell Count chamber</td>
			<td style="width:164px;">Boeco</td>
			<td>Neubauer&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cell culture flasks</td>
			<td style="width:164px;">Corning</td>
			<td>430639</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Centrifuge</td>
			<td style="width:164px;">Sorvall</td>
			<td style="width:104px;">Legend RT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CFSE</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>C34554</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Detection objective</td>
			<td style="width:164px;">Nikon 40x 0.8NA&#160;</td>
			<td style="width:104px;">40x CFI APO NIR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DMEM medium</td>
			<td style="width:164px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>D5648</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:41px;width:231px;">Dumont #5 fine forceps</td>
			<td style="width:164px;">World precision Instruments</td>
			<td style="width:104px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:231px;">Ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonate salt (Tricaine)</td>
			<td style="width:164px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:104px;">A5040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Fetal calf serum (FCS)</td>
			<td style="width:164px;">Eurobio</td>
			<td>CVFSVF00-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Filter</td>
			<td style="width:164px;">Chroma</td>
			<td style="width:104px;">ET-525/50M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glass capillaries for embryo mounting</td>
			<td style="width:164px;">Vitrez Medical</td>
			<td>160215</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glass capillaries for pulling needles</td>
			<td style="width:164px;">World precision instruments</td>
			<td>TW100-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glucose</td>
			<td style="width:164px;">Gibco</td>
			<td>A2494001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">HEPES</td>
			<td style="width:164px;">Gibco&#160;</td>
			<td>156300-80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Incubator</td>
			<td style="width:164px;">Thermo Corporation</td>
			<td>Revco</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Larval microinjection mold</td>
			<td>Adaptive Science Tools</td>
			<td>I-34</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Laser</td>
			<td style="width:164px;">Crystalaser</td>
			<td style="width:104px;">DL488-050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">L-glutamine</td>
			<td style="width:164px;">Gibco</td>
			<td>250300-81</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Methylene blue</td>
			<td>Albor Qu&#237;micos</td>
			<td>12223</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Micromanipulator&#160;</td>
			<td style="width:164px;">Narishige</td>
			<td>MN-153</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Micromanipulator system</td>
			<td style="width:164px;">Sutter Instrument</td>
			<td>MP-200</td>
			<td>For LSFM&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Micropipette puller device&#160;</td>
			<td>Narishige</td>
			<td style="width:104px;">PC-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Microscope&#160;</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>CX31</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Microscope (inverted)</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>CKX41</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Multipurpose microscope</td>
			<td style="width:164px;">Nikon</td>
			<td style="width:104px;">AZ100M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Neubauer counting chamber</td>
			<td style="width:164px;">Boeco Germany</td>
			<td style="width:104px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Penicillin-streptomycin</td>
			<td style="width:164px;">Gibco&#160;</td>
			<td>15140-163</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Petri dish 94x16</td>
			<td>Greiner bio-one</td>
			<td>633181</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Plastic pasteur pipette</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>11577722</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Rotation stage</td>
			<td>Newport</td>
			<td>CONEX-PR50CC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">RPMI-1640 medium</td>
			<td style="width:164px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:104px;">R4130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium pyruvate</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11360-070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Stereoscope</td>
			<td style="width:164px;">Nikon</td>
			<td>C-LEDS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Tricaine (MS-222)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>886-86-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">TRIS</td>
			<td style="width:164px;">Amresco</td>
			<td style="width:104px;">M151</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Trypsin-EDTA (0.25%)</td>
			<td style="width:164px;">Gibco</td>
			<td>R-001-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Tubes 15 ml</td>
			<td style="width:164px;">Corning</td>
			<td>05-527-90</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

establishment of larval zebrafish as an animal model to investigate trypanosoma cruzi motility in vivo

Chagas रोग एक परजीवी Trypanosoma cruzi, जिसका गतिशीलता न केवल स्थानीयकरण के लिए महत्वपूर्ण है की वजह से संक्रमण है, लेकिन यह भी सेलुलर बाध्यकारी और आक्रमण के लिए । cruzi के अध्ययन के लिए वर्तमान पशु मॉडल vivo में परजीवी के सीमित प्रेक्षण, मनुष्यों में संक्रमण के प्रारंभिक चरणों के दौरान परजीवी व्यवहार को समझने के लिए एक चुनौती का प्रतिनिधित्व करने की अनुमति देते हैं । इस प्रोटोजोआ में वेक्टर और स्तनधारी दोनों होस्टेस में flagellar स्टेज है, लेकिन vivo मेंइसके गतिशीलता का वर्णन करने वाले कोई भी अध् ययन नहीं हैं । इस परियोजना का उद्देश्य संवहनीय प्रणाली में टी. cruzi गतिशीलता का मूल्यांकन करने के लिए एक जीवित हड्डीवाला zebrafish मॉडल की स्थापना करना था. पारदर्शी zebrafish लार्वा फ्लोरोसेंट लेबल trypomastigotes के साथ इंजेक्शन थे और प्रकाश शीट प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी (LSFM), उच्च ऑप्टिकल संकल्प के साथ जीना जीवों कल्पना करने के लिए एक इनवेसिव विधि का उपयोग कर मनाया । परजीवी फोकल या epifluorescence माइक्रोस्कोपी की तुलना में धूप के इस तकनीक अपेक्षाकृत कम जोखिम के कारण समय की विस्तारित अवधि के लिए visualized किया जा सकता है । cruzi परजीवी रहते zebrafish के संचार प्रणाली में विभिंन आकार रक्त वाहिकाओं और जर्दी में यात्रा कर मनाया गया । वे भी जर्दी थैली दीवार से जुड़ी और मजबूत दिल संकुचन के साथ जुड़े बलों के बावजूद अलिंदनिलय वाल्व को देखा जा सकता है । LSFM ऑफ cruzi-inoculated zebrafish लार्वा एक मूल्यवान विधि है कि घूम परजीवी कल्पना और उनके tropism, प्रवास के पैटर्न का मूल्यांकन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है, और एक जीवित जानवर के हृदय प्रणाली के गतिशील वातावरण में गतिशीलता ।

इंजेक्शन के लिए इष्टतम स्थिति:
zebrafish लार्वा के समूह 24, ४८, ७२, ९६, और १२० hpf, विभिन्न संरचनात्मक स्थलों पर इंजेक्ट किए गए थे, और उनके अस्तित्व को हर दिन 5 दिनों के लिए जांच की गई थी । 5 दिनों के बाद इंजेक्शन, भ्रूण 24 hpf में इंजेक्शन ६.२५% (2/32) अस्तित्व था, जबकि ९५% (38/40) लार्वा के इंजेक्शन में ४८ hpf बच गया । एक नियंत्रण के रूप में, लार्वा 1x पंजाबियों के साथ एक वाहन के रूप में इंजेक्ट किया गया । वाहन के बीच अस्तित्व में कोई मतभेद नहीं थे इंजेक्शन और परजीवी इंजेक्शन लार्वा, मछली की उत्तरजीविता दर पर कोई परजीवी पर निर्भर प्रभाव का संकेत (पी = ०.०८). लार्वा 72-120 के बीच इंजेक्ट किया जाता है hpf लगातार इंजेक्शन मात्रा में ४८ hpf-इंजेक्शन लार्वा के लिए तुलना जीवित रहने की दर था । सभी प्रक्रियाओं के लिए यहां प्रस्तुत है, ४८ hpf लार्वा हेरफेर की उनकी आसानी और विकसित अंगों और आसानी से इंजेक्शन के बाद स्पष्ट क्षति के बिना penetrable त्वचा होने के कारण इस्तेमाल किया गया ।
लार्वा ४८ hpf में इंजेक्शन pericardial अंतरिक्ष, पूंछ मांसपेशी, hindbrain निलय, भड़काऊ पुटिका, notochord, और कुवियर की जर्दी थैली में डक्ट में थे । अलग संरचनात्मक साइटों पर इंजेक्शन लार्वा के अस्तित्व में कोई अंतर नहीं थे । हालांकि, सबसे तेज और आसान क्षेत्र इंजेक्षन करने के लिए कुवियर की जर्दी थैली के पूर्वकाल भाग में स्थित वाहिनी (चित्रा 1, फिल्म 1) था । उस साइट पर इंजेक्शन महत्वपूर्ण संरचनाओं के लिए चोट का एक कम जोखिम के साथ उच्च मात्रा की शुरूआत की अनुमति दी । इसके अतिरिक्त, 24-72 hpf के बीच, इस क्षेत्र को सीधे विकासशील vasculature और दिल11का उपयोग करने के लिए एक इष्टतम साइट है ।
LSFM का उपयोग कर परजीवी विज़ुअलाइज़ेशन:
कुवियर के डक्ट में टी cruzi के इंजेक्शन के बाद 8-10 मिनट के भीतर, परजीवी zebrafish उनके CFSE फ्लोरोसेंट संकेत और लार्वा की ऑप्टिकल पारदर्शिता के कारण LSFM का उपयोग कर लार्वा में पहचान की गई । टीका के बाद, परजीवी या तो संचार प्रणाली के आसपास की दीवारों का पालन या रक्त प्रवाह की दिशा में यात्रा (चित्रा 2, चित्रा 3) मनाया गया । जब एक परजीवी ऐसी अलिंदनिलय वाल्व के रूप में एक हृदय संरचना से जुड़ा रहता है, यह दिल के संकुचन के साथ झूलती है, यह दर्शाता है कि परजीवी के पालन के लिए आणविक तंत्र हमारे हड्डीवाला मॉडल में प्रभावी हो सकता है (फिल्म 2, फिल्म 3 , पूरक फिल्म 1). टी cruzi भी लार्वा जर्दी थैली ( चित्रा 2, फिल्म 2), एक संरचना है जो बाद में अवशोषित हो जाएगा और zebrafish आंत22का हिस्सा बनने की दीवारों का पालन किया । यह क्या संक्रमित मनुष्यों, जहां परजीवी cardiomyocytes में और पाचन तंत्रिका तंत्र23,24में पाए जाते है में जीर्ण रोग के दौर के दौरान होता है के समान हो सकता है । जब संलग्न नहीं है, परजीवी एरिथ्रोसाइट्स ( चित्रा 3, फिल्म 4) के रूप में एक ही दिशा में रक्त के प्रवाह के माध्यम से बहती है । परजीवी मछली के विभिंन आकार के जहाजों में देखा जा सकता है, लेकिन pericardial अंतरिक्ष में और अधिक प्रचुर मात्रा में थे और आसन्न जर्दी रक्त प्रवाह युक्त क्षेत्र में ( चित्रा 2, चित्रा 3, पूरक फिल्म 2) ।
10 मिनट के बाद इंजेक्शन में, यह अधिक vasculature के साथ उनके वितरण के कारण परजीवी के एकल रूपों हाजिर मुश्किल था, और एक असमर्थता जल्दी LSFM के दृश्य के एक सीमित क्षेत्र के कारण मछली के विभिंन संरचनात्मक साइटों को स्क्रीन करने के लिए (40X आवर्धन पर ). 24 एच पोस्ट इंजेक्शन (hpi) के बाद, CFSE संकेत विकासशील आंत (अनुपूरक चित्रा 1) के पास क्षेत्र में जमा करने के लिए शुरू होता है ।
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56238/56238fig1.jpg"> 
चित्र 1: इष्टतम इंजेक्शन साइट. (क) लार्वा की छवि ४८ hpf कुवियर की वाहिनी में इष्टतम इंजेक्शन साइट दिखा (पीला तीर) एक नियमित stereoscope का उपयोग कर । (ख) कुवियर की वाहिनी (पीला तीर) दिखाने में बॉक्स का बढ़ाया देखें । स्केल बार = २०० µm (A), ५० µm (B). <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56238/56238fig1large.jpg" target="_blank">कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56238/56238fig2.jpg"> 
चित्र 2: एक ४८ hpf लार्वा में एक स्थिर परजीवी की छवियों LSFM. टी cruzi परजीवी (पीले तीर) जर्दी थैली की दीवारों का पालन रहता है, समय चूक अनुक्रम (७.२ एस, १७.२ एस, और २७.२ एस), के बारे में ~ 15 मिनट के बाद परजीवी इंजेक्शन के दौरान । परजीवी की स्थिति में कोई परिवर्तन नहीं, Atrium के एक अधिग्रहण अवधि के दौरान मनाया जाता है; व्ही, निलय. स्केल बार = ५० µm. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56238/56238fig2large.jpg" target="_blank">इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56238/56238fig3.jpg"> 
चित्र 3: LSFM का उपयोग कर pericardial अंतरिक्ष में यात्रा एक परजीवी के पथ । cruzi परजीवी pericardial अंतरिक्ष (पुनश्च) में बहती है, जबकि (लाल रंग में दिखाया ट्रैक) के बारे में ~ 15 मिनट के बाद परजीवी इंजेक्शन के बाद रक्त प्रवाह की दिशा के बाद, ट्रैक किया जा सकता है । स्केल बार = ५० µm. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56238/56238fig3large.jpg" target="_blank">इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें.</a>
<img alt="Movie 1" src="/files/ftp_upload/56238/56238mov1.jpg"> 
फिल्म 1: रक्त परिसंचरण घाटी की जर्दी में एक लार्वा ४८ hpf । एक लार्वा की फिल्म ४८ hpf एक नियमित stereoscope का उपयोग कर रक्त परिसंचरण घाटी या कुवियर की वाहिनी दिखा । विभिंन क्षेत्रों के लिए वीडियो के दौरान ध्यान केंद्रित कर रहे है लाल रक्त नलिका में परिचालित कोशिकाओं को दिखाने के । पीला तीर इष्टतम इंजेक्शन साइट से पता चलता है । फिल्म परजीवी इंजेक्शन के बाद के बारे में 10-15 मिनट दर्ज किया गया था । <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56238/Movie_1.mp4" target="_blank">वीडियो डाउनलोड करने के लिए कृपया यहां क्लिक करें.</a>
<img alt="Movie 2" src="/files/ftp_upload/56238/56238mov2.jpg"> 
मूवी 2: cruzi जर्दी थैली की दीवारों से जुड़ी परजीवी । LSFM एक लार्वा की मूवी ४८ दिखा रहा है कि cruzi परजीवी परजीवी इंजेक्शन के बाद के बारे में 10-15 मिनट की जर्दी थैली का पालन रह hpf । परजीवी की स्थिति में कोई परिवर्तन नहीं किया गया था एक अधिग्रहण अवधि के दौरान मनाया गया कम से 30 एस. ए., Atrium; व्ही, निलय. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56238/Movie_2.mp4" target="_blank">वीडियो डाउनलोड करने के लिए कृपया यहां क्लिक करें.</a>
<img alt="Movie 3" src="/files/ftp_upload/56238/56238mov3.jpg"> 
मूवी 3: T. cruzi दिल की दीवारों से जुड़ी परजीवी । LSFM एक लार्वा की मूवी ४८ hpf दिखा रहा है कि cruzi परजीवी remain हृदय दीवार का पालन, मजबूत हृदय संकुचन के बावजूद के बारे में 10-15 मिनट परजीवी इंजेक्शन के बाद । एरिथ्रोसाइट्स काले गोल छाया के रूप में मनाया जा सकता है । <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56238/Movie_3.mp4" target="_blank">वीडियो डाउनलोड करने के लिए कृपया यहां क्लिक करें.</a>
<img alt="Movie 4" src="/files/ftp_upload/56238/56238mov4.jpg"> 
फिल्म 4: pericardial अंतरिक्ष में चलती परजीवी । एक लार्वा की LSFM मूवी ४८ hpf दिखा रहा है cruzi परजीवी pericardial अंतरिक्ष में बहती । दो परजीवी अलग समय अंक में पता लगाया जा सकता है (आईडी 1, लाल सर्कल में, और 2 आईडी पीले घेरे में), एक समान गति के बाद । फिल्म परजीवी इंजेक्शन के बाद के बारे में 10-15 मिनट दर्ज किया गया था । <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56238/Movie_4.mp4" target="_blank">वीडियो डाउनलोड करने के लिए कृपया यहां क्लिक करें.</a>
पूरक चित्रा 1: जर्दी में CFSE फ्लोरोसेंट संकेत का संचय । एक wildtype लार्वा के Stereoscope छवियों कुवियर की वाहिनी में ४८ hpf पर इंजेक्शन । CFSE फ्लोरोसेंट संकेत उत्तरोत्तर जर्दी में जमा, दो दिन पोस्ट इंजेक्शन (४८ hpi) के बाद । स्केल बार = ५०० µm. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56238/Supplemental_figure_1.tif" target="_blank">कृपया आंकड़ा डाउनलोड करने के लिए यहां क्लिक करें ।</a>
पूरक फिल्म 1: परजीवी दीवारों और संचार प्रणाली के वाल्व से जुड़ा. Stereoscope समय श्रृंखला एक जंगली प्रकार के लार्वा ४८ hpf में इंजेक्शन की छवियां । छवियों ०.२ एस पर कब्जा कर लिया है cruzi परजीवी अलिंदनिलय वाल्व पर हृदय की मांसपेशी संकुचन के साथ synchrony में बढ़ रहा है । फिल्म परजीवी इंजेक्शन के बाद के बारे में 30 मिनट दर्ज की गई । <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56238/Supplemental_movie_1.mp4" target="_blank">वीडियो डाउनलोड करने के लिए कृपया यहां क्लिक करें.</a>
पूरक फिल्म 2: चलती और periventricular अंतरिक्ष और जर्दी में परजीवी का पालन किया. LSFM एक लार्वा की मूवी ४८ hpf दिखा रहा है cruzi परजीवी बहती या pericardial अंतरिक्ष या जर्दी का पालन किया । पहली बार 5 एस के लिए एक संचारित प्रकाश दृश्य मनाया गया । प्रतिदीप्ति दृश्य 5.2-25.8 एस से मनाया गया । फिल्म परजीवी इंजेक्शन के बाद के बारे में 10-15 मिनट दर्ज किया गया था । <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56238/Supplemental_movie_2.mp4" target="_blank">वीडियो डाउनलोड करने के लिए कृपया यहां क्लिक करें.</a>

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Establishment of Larval Zebrafish as an Animal Model to Investigate Trypanosoma cruzi Motility In Vivo

इस प्रोटोकॉल में, फ्लोरोसेंट लेबल cruzi पारदर्शी zebrafish लार्वा में इंजेक्शन थे, और परजीवी गतिशीलता प्रकाश शीट प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी का उपयोग vivo में मनाया गया ।

वीवो में Trypanosoma cruzi गतिशीलता की जांच के लिए एक पशु मॉडल के रूप में लार्वा Zebrafish की स्थापना

Chagas disease is a parasitic infection caused by Trypanosoma cruzi, whose motility is not only important for localization, but also for cellular binding ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Establishment of Larval Zebrafish as an Animal Model to Investigate Trypanosoma cruzi Motility In Vivo

Live Imaging of Innate Immune and Preneoplastic Cell Interactions Using an Inducible Gal4/UAS Expression System in Larval Zebrafish Skin

लार्वा zebrafish त्वचा में एक inducible Gal4 / यूएएस अभिव्यक्ति प्रणाली का उपयोग करते हुए सहज प्रतिरक्षा और Preneoplastic सेल बातचीत का लाइव इमेजिंग

Here we describe a method to conditionally induce epithelial cell transformation by the use of the 4-Hydroxytamoxifen (4-OHT) inducible KalTA4-ERT2/UAS ...

Establishment of a Clinically Relevant Ex Vivo Mock Cataract Surgery Model for Investigating Epithelial Wound Repair in a Native Microenvironment

Establishment of a Clinically Relevant Ex Vivo Mock Cataract Surgery Model for Investigating Epithelial Wound Repair in a Native Microenvironment

एक नैदानिक ​​प्रासंगिक की स्थापना<em&gt; पूर्व vivo</emएक मूल निवासी Microenvironment में उपकला घाव मरम्मत की जांच के लिए&gt; मॉक मोतियाबिंद सर्जरी मॉडल

The major impediment to understanding how an epithelial tissue executes wound repair is the limited availability of models in which it is possible to ...

Loss- and Gain-of-function Approach to Investigate Early Cell Fate Determinants in Preimplantation Mouse Embryos

नुकसान और लाभ के समारोह दृष्टिकोण Preimplantation माउस भ्रूण के प्रारंभिक दिनों में सेल भाग्य अवधारक जांच

 Gene silencing and overexpression techniques are instrumental for the identification of genes involved in embryonic development. Direct target gene ...

Development of an Ethanol-induced Fibrotic Liver Model in Zebrafish to Study Progenitor Cell-mediated Hepatocyte Regeneration

Zebrafish में एक इथेनॉल प्रेरित fibrotic लिवर मॉडल के विकास का अध्ययन करने के पूर्वज सेल की मध्यस्थता Hepatocyte पुनर्जनन

Sustained liver fibrosis with continuation of extracellular matrix (ECM) protein build-up results in the loss of cellular competency of the liver, leading ...

Building Finite Element Models to Investigate Zebrafish Jaw Biomechanics

सीमित तत्व मॉडल के निर्माण Zebrafish जबड़ा बायोमैकेनिक्स जांच

Skeletal morphogenesis occurs through tightly regulated cell behaviors during development; many cell types alter their behavior in response to mechanical ...

Dissection of Larval Zebrafish Gonadal Tissue

लार्वा zebrafish जननांगों ऊतक के विच्छेदन

Although wild zebrafish possess a ZZ/ZW sex-determination system, domesticated zebrafish have lost the sex chromosome. They utilize a polygenic sex ...

Orthotopic Ovarian Transplantation Procedures to Investigate the Life- and Health-span Influence of Ovarian Senescence in Female Mice

Orthotopic डिम्बग्रंथि प्रत्यारोपण प्रक्रियाओं मादा चूहों में डिम्बग्रंथि वार्धक्य के जीवन और स्वास्थ्य अवधि के प्रभाव की जांच करने के लिए

Ovarian transplantation was first conducted at Utah State University in 1963. In more recent work, heterochronic transplantation of mammalian ovaries is ...

Electroretinogram Recording in Larval Zebrafish using A Novel Cone-Shaped Sponge-tip Electrode

Electroretinogram एक उपंयास शंकु के आकार का स्पंज-टिप इलेक्ट्रोड का उपयोग कर लारवल Zebrafish में रिकॉर्डिंग

The zebrafish (Danio rerio) is commonly used as a vertebrate model in developmental studies and is particularly suitable for visual neuroscience. For ...

Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C (UV-C) Damage

Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C UV-C Damage

पराबैंगनी-सी (यूवी-सी) क्षति के जवाब में प्राथमिक माउस नेत्र सतह कोशिकाओं/स्टेम सेल में ऑक्सीडेटिव क्षति का आकलन

The ocular surface is subjected to regular wear and tear due to various environmental factors. Exposure to UV-C radiation constitutes an occupational ...

An Ectopic Chemokine Expression Model for Testing Macrophage Recruitment In Vivo

विवो में मैक्रोफेज भर्ती के परीक्षण के लिए एक एटोपिक चेमोकिन अभिव्यक्ति मॉडल

Zebrafish are widely used in basic and biomedical research. Many zebrafish transgenic lines are currently available to label various types of cells. Owing ...