Name: establishment of larval zebrafish as an animal model to investigate trypanosoma cruzi motility in vivo
Uploaded: 2017-09-30T15:00:00
Duration: 13 min 21 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Establishment of Larval Zebrafish as an Animal Model to Investigate Trypanosoma cruzi Motility In Vivo at JoVE.com

Эта работа была поддержана Convocatoria Interfacultades из Vicerrectoría de Investigaciones de la Универсидад де Лос Андеси программы USAID исследований и инноваций стипендий. Мы благодарим Хуан Рафаэль Буитраго и Yeferzon Ardila за рыба обслуживания и помощи.

<ol>
	<li>Bern, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chagas's+Disease.">Chagas's Disease.</a> New England Journal of Medicine. 373 (5), 456-466 (2015).</li><li>Sosa Estani, S., Segura, E. L., Ruiz, A. M., Velazquez, E., Porcel, B. M., Yampotis, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficacy+of+chemotherapy+with+benznidazole+in+children+in+the+indeterminate+phase+of+Chagas&#8217;+disease.">Efficacy of chemotherapy with benznidazole in children in the indeterminate phase of Chagas&#8217; disease.</a> The American Journal of Tropical Medicine and Hygiene. 59 (4), 526-529 (1998).</li><li>Rosas, F., Roa, N., Cucunuba, Z. M., Cuellar, A., Gonzalez, J. M., Puerta, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chagasic+Cardiomyopathy.">Chagasic Cardiomyopathy.</a> Cardiomyopathies - From Basic Research to Clinical Management. , (2012).</li><li>Finkelsztein, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altering+the+motility+of+Trypanosoma+cruzi+with+rabbit+polyclonal+anti-peptide+antibodies+reduces+infection+to+susceptible+mammalian+cells.">Altering the motility of Trypanosoma cruzi with rabbit polyclonal anti-peptide antibodies reduces infection to susceptible mammalian cells.</a> Experimental Parasitology. 150, 36-43 (2015).</li><li>Martins, R. M., Covarrubias, C., Rojas, R. G., Silber, A. M., Yoshida, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+L-Proline+and+ATP+Production+by+Trypanosoma+cruzi+Metacyclic+Forms+as+Requirements+for+Host+Cell+Invasion.">Use of L-Proline and ATP Production by Trypanosoma cruzi Metacyclic Forms as Requirements for Host Cell Invasion.</a> Infection and Immunity. 77 (7), 3023-3032 (2009).</li><li>Engstler, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrodynamic+Flow-Mediated+Protein+Sorting+on+the+Cell+Surface+of+Trypanosomes.">Hydrodynamic Flow-Mediated Protein Sorting on the Cell Surface of Trypanosomes.</a> Cell. 131 (3), 505-515 (2007).</li><li>Uppaluri, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+Microscopic+Motility+on+the+Swimming+Behavior+of+Parasites:+Straighter+Trypanosomes+are+More+Directional.">Impact of Microscopic Motility on the Swimming Behavior of Parasites: Straighter Trypanosomes are More Directional.</a> PLoS Computational Biology. 7 (6), e1002058 (2011).</li><li>Heddergott, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trypanosome+Motion+Represents+an+Adaptation+to+the+Crowded+Environment+of+the+Vertebrate+Bloodstream.">Trypanosome Motion Represents an Adaptation to the Crowded Environment of the Vertebrate Bloodstream.</a> PLoS Pathogens. 8 (11), e1003023 (2012).</li><li>Gratacap, R. L., Wheeler, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Utilization+of+zebrafish+for+intravital+study+of+eukaryotic+pathogen&#8211;host+interactions.">Utilization of zebrafish for intravital study of eukaryotic pathogen&#8211;host interactions.</a> Developmental &amp; Comparative Immunology. 46 (1), 108-115 (2014).</li><li>Meijer, A. H., Spaink, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host-Pathogen+Interactions+Made+Transparent+with+the+Zebrafish+Model.">Host-Pathogen Interactions Made Transparent with the Zebrafish Model.</a> Current Drug Targets. 12 (7), 1000-1017 (2011).</li><li>White, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transparent+Adult+Zebrafish+as+a+Tool+for+In+Vivo+Transplantation+Analysis.">Transparent Adult Zebrafish as a Tool for In Vivo Transplantation Analysis.</a> Cell Stem Cell. 2 (2), 183-189 (2008).</li><li>Huisken, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Slicing+embryos+gently+with+laser+light+sheets.">Slicing embryos gently with laser light sheets.</a> BioEssays. 34 (5), 406-411 (2012).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The zebrafish book: A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio). , (2000).</li><li>Kimmel, C. B., Ballard, W. W., Kimmel, S. R., Ullmann, B., Schilling, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stages+of+embryonic+development+of+the+zebrafish.">Stages of embryonic development of the zebrafish.</a> Developmental Dynamics. 203 (3), 253-310 (1995).</li><li>Vargas-Zambrano, J. C., Lasso, P., Cuellar, A., Puerta, C. J., Gonz&#225;lez, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+human+astrocytoma+cell+line+is+highly+susceptible+to+infection+with+Trypanosoma+cruzi.">A human astrocytoma cell line is highly susceptible to infection with Trypanosoma cruzi.</a> Mem&#243;rias do Instituto Oswaldo Cruz. 108 (2), 212-219 (2013).</li><li>Rosen, J. N., Sweeney, M. F., Mably, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microinjection+of+Zebrafish+Embryos+to+Analyze+Gene+Function.">Microinjection of Zebrafish Embryos to Analyze Gene Function.</a> JoVE (Journal of Visualized Experiments). (25), e1115-e1115 (2009).</li><li>Lorenzo, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+cell+division+dynamics+monitoring+in+3D+large+spheroid+tumor+models+using+light+sheet+microscopy.">Live cell division dynamics monitoring in 3D large spheroid tumor models using light sheet microscopy.</a> Cell Division. 6, 22 (2011).</li><li>Edelstein, A. D., Tsuchida, M. A., Amodaj, N., Pinkard, H., Vale, R. D., Stuurman, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advanced+methods+of+microscope+control+using+&#956;Manager+software.">Advanced methods of microscope control using &#956;Manager software.</a> Journal of Biological Methods. 1 (2), e10 (2014).</li><li>Weber, M., Mickoleit, M., Huisken, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multilayer+Mounting+for+Long-term+Light+Sheet+Microscopy+of+Zebrafish.">Multilayer Mounting for Long-term Light Sheet Microscopy of Zebrafish.</a> Journal of Visualized Experiments. (84), (2014).</li><li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fiji:+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis.">Fiji: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nature Methods. 9 (7), 676-682 (2012).</li><li>Ng, A. N. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+the+digestive+system+in+zebrafish:+III.+Intestinal+epithelium+morphogenesis.">Formation of the digestive system in zebrafish: III. Intestinal epithelium morphogenesis.</a> Developmental Biology. 286 (1), 114-135 (2005).</li><li>Higuchi, M. D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correlation+between+Trypanosoma+cruzi+parasitism+and+myocardial+inflammatory+infiltrate+in+human+chronic+chagasic+myocarditis:+Light+microscopy+and+immunohistochemical+findings.">Correlation between Trypanosoma cruzi parasitism and myocardial inflammatory infiltrate in human chronic chagasic myocarditis: Light microscopy and immunohistochemical findings.</a> Cardiovascular Pathology: The Official Journal of the Society for Cardiovascular Pathology. 2 (2), 101-106 (1993).</li><li>Vago, A. R., Silva, D. M., Adad, S. J., Correa-Oliveira, R., d'Avila Reis, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+Chagas+disease:+presence+of+parasite+DNA+in+the+oesophagus+of+patients+without+megaoesophagus.">Chronic Chagas disease: presence of parasite DNA in the oesophagus of patients without megaoesophagus.</a> Transactions of the Royal Society of Tropical Medicine and Hygiene. 97 (3), 308-309 (2003).</li><li>Wiegertjes, G. F., Forlenza, M., Joerink, M., Scharsack, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parasite+infections+revisited.">Parasite infections revisited.</a> Developmental &amp; Comparative Immunology. 29 (9), 749-758 (2005).</li><li>De Souza, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basic+cell+biology+of+Trypanosoma+cruzi.">Basic cell biology of Trypanosoma cruzi.</a> Current Pharmaceutical Design. 8 (4), 269-285 (2002).</li><li>Langousis, G., Hill, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Motility+and+more:+the+flagellum+of+Trypanosoma+brucei.">Motility and more: the flagellum of Trypanosoma brucei.</a> Nature Reviews. Microbiology. 12 (7), 505-518 (2014).</li><li>Johnson, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+response+to+Trypanosoma+cruzi+infection+induces+secretion+of+defensin+&#945;-1,+which+damages+the+flagellum,+neutralizes+trypanosome+motility,+and+inhibits+infection.">Cellular response to Trypanosoma cruzi infection induces secretion of defensin &#945;-1, which damages the flagellum, neutralizes trypanosome motility, and inhibits infection.</a> Infection and Immunity. 81 (11), 4139-4148 (2013).</li><li>Magalh&#227;es, L. M. D., Viana, A., Chiari, E., Galv&#227;o, L. M. C., Gollob, K. J., Dutra, W. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+Activation+of+Human+Monocytes+and+Lymphocytes+by+Distinct+Strains+of+Trypanosoma+cruzi.">Differential Activation of Human Monocytes and Lymphocytes by Distinct Strains of Trypanosoma cruzi.</a> PLoS neglected tropical diseases. 9 (7), e0003816 (2015).</li></ol>

Авторы не имеют ничего сообщать.

Это исследование подчеркивает преимущества данио рерио, как животной модели для изучения возбудителя поведения в естественных условиях. В частности, это исследование предлагает метод для визуализации патогенный т. cruzi в своей естественной среде: кровяной циркуляции. Окружающей среды кровообращения микроокружения рыб сопоставима с млекопитающих, и trypanosomatids были разработаны механизмы для путешествий, уклонение от иммунной системы и присоединение к клеткам для инфекции в этой среде25. Этот протокол предоставляет описание оптимальные процедуры для культуры т. cruzi в линию клеток человека и последующая изоляция flagellar форм для люминесцентные маркировки. Затем он показывает соответствующие параметры для успешного введения паразитов в прозрачной данио рерио позднее монтажа и визуализация с помощью LSFM. Наконец этот протокол предложений для эффективной и действенной в vivo визуализации движения в обращении с помощью LSFM и расположение паразита.
Жгутика трипаносом вытекает из его задней региона, вытекающих из тела клетки, и висит бесплатно на передней части организма26. Т. cruzi продвигает себя, размахивая жгутика впереди тела, которое ползёт паразита всего тела. Flagellar движения необходима не только для подвижность паразит, как и в случае brucei т.27 (возбудитель Африканский трипаносомоз), но он также используется для сотовых инфекции, как было продемонстрировано в т. cruzi5 ,28. Хотя данио рерио не естественный принимающей страны т. cruzi, паразита сократительной способности могут быть изучены в развивающейся сердечно-сосудистой системы циркуляции системы, используя протоколы, описанные здесь. Кроме того существуют виды трипаносом, заразить карповые, класс данио рерио, например т. carassii и т. borreliв25. Эти виды паразитов могут быть использованы для изучения в режиме реального времени движения и механизмы крепления этих trypanosomatids; такие исследования могут оказать понимание процесса инфекции клеток млекопитающих.
В этом исследовании, вводят подвижные cruzi т. паразиты были наблюдаемых путешествие через сердечно-сосудистой системы циркуляции привитых рыбы, перемещаясь вместе с непрозрачной эритроцитов и придерживаясь структуры в стенах сердечно-сосудистой системы. Мы использовали LSFM построенный дом с 10 X ахроматические рабочим расстоянием воздуха цель (17,6 мм) для освещения руку с числовой апертуры 0.25. 40 X цель погружения apochromatic воды с числовой апертуры 0,8 и рабочее расстояние 3,5 мм был использован для обнаружения руку. Цель обнаружения был погружен в палате образец, в то время как цель освещения был вне камеры. Порт в камере, запечатанный с coverslip и оптические клея допускается для освещения пучка войти в камеру, как показано в Лоренцо et al. 18 для освещения, мы использовали 50 МВт DPSS лазера на 488 нм, мощность которого был модулированные Акусто оптический перестраиваемый фильтр. Обнаружения пути используются фильтры совместим с зеленого флуоресцентного белка (ГПУП) или FITC. Микроскопом света лист с держатель образца капиллярной (в идеале с автоматической ротации) и контроля температуры образца камеры должны быть пригодны для этого приложения. Микроскоп следует согласовать и калибровать согласно инструкциям производителя или пользователя Лаборатория стандартные протоколы до приобретения, в случае необходимости. В этом протоколе мы под контролем микроскопа с помощью программного обеспечения SPIM19.
Важно отметить, что в обращении данио рерио, личинок паразитических вложений является эффективным. В кардинал Вен паразиты оставался прилагаемый для до нескольких минут; в сердце они провели клапаны и стены, колеблющимся с сокращениями сердца. Дальнейшие исследования остаются с целью выяснения ли т. cruzi взаимодействует с течет эритроцитов, которые дрейф в направлении потока крови. Предыдущий в vitro исследования показали, что наличие твердых структур (например, клетки крови), или увеличению вязкости жидкости для имитации крови в пробирке, имеет значительное влияние на подвижность и скорость паразита 9.
Есть много вопросов относительно курса инфекции T. cruzi в организме человека после amastigotes побег фагоцитирующих клеток, первоначально инфицированной клетки типа29. К примеру как они приходят, чтобы их органы-мишени? Какие существуют механизмы для тропизм к предпочтительным органов, таких как инфаркт, пищеварительной и центральной нервной системы? Интересно, что в этом исследовании паразиты были изначально отображаемого в самом сердце потому, что это был сайт наивысшую плотность паразитов. Однако CFSE сигнал впоследствии накопленных в развивающихся кишечника путем инъекций пост 7 дней. Хотя анатомии рыб и млекопитающих отличается, результаты этого исследования демонстрируют формы тропизма, как было отмечено, что паразиты выставлены тропизм к органов известно предпочитаемая несмотря на научные разногласия. Одно существенное ограничение этого исследования касается температуры, используемых в экспериментах. Данио рерио личинки должны храниться около 28 °C в течение всей процедуры. Хотя эта температура может быть похож на узел вектор (насекомые Триатомовые клопы подсемейства), это сильно отличается от теплокровных млекопитающих, которые составляют окончательный хостов (около 37 ° C). Т. cruzi , как известно, имеют flagellar живых форм в обоих узлов; Однако важно иметь в виду, что этот фактор может иметь эффект в поведении животных в естественных условиях.
Хотя fish´s адаптивной иммунной системы не пожилые до 4 недель после оплодотворения, врожденная иммунная система активна в начале развития10. 48 или 96 hpf, в кратчайшие сроки фагоцитирующих клеток были замечены, что охватил помечены трипаносом (данные не показаны). Это ограничивает окно времени для визуализации паразита. Однако если исследование должно было сосредоточить внимание на оценке fish´s иммунный ответ, может быть рекомендовано инъекций на более поздних этапах. Кроме того инъекции паразитов в трансгенной рыбы строки с метками макрофаги или другие клетки иммунной системы может быть полезным при изучении паразита привязанность и эндоцитоз возможных механизмов. Важно отметить, что если паразитов помечены CFSE, трансгенными ячейку метки не должно быть GFP и маркер в желтого или красного конца спектра не требуется.
Для оценки подробных направление движения паразита, может быть полезно следовать их траектории в трех измерениях (3D). Для 3D визуализации и реконструкции процесса необходим высокоскоростной системы. С оборудование, используемое в настоящем Протоколе это возможно только для визуализации паразитов в одной плоскости. В этом случае мы и приоритетными для поддержания стабильности фокальной плоскости во время движения паразита, записи траектории в одной плоскости.
Методология, предложенная здесь прокладывает путь для дальнейшего расследования поведения паразита в сердечно-сосудистой системы циркуляции. Таким образом существенные шаги для визуализации живой флуоресцентный паразитов внутри данио рерио личинки являются:(i) использование раннего вылупившиеся эмбрионы (24-48 hpf) или личинок или животных между 72-96 hpf с без пигментации так, что они являются прозрачными и легко придать; (ii) изображения личинки как можно скорее после инъекции, чтобы избежать паразита фагоцитирующих клеток; и (iii) основное внимание LSFM на сайте интерес (например, перикарда район) и поддерживать фокус. Эта новая процедура позволяет визуализировать trypomastigotes в среде сопоставимы с ее природные инфекции нишу, обеспечивая для в первый раз возможность изучить т. cruzi в живом организме.

Болезнь Шагаса вызвано простейших паразитов т. cruzi. Примерно 6-7 миллионов человек во всем мире инфицированы т. cruzi. Заболевание передается главным образом в Латинской Америке, но уже сообщалось в Соединенные Штаты, Канада и многие европейские, а также некоторых стран Западной части Тихого океана, главным образом из-за миграции инфицированных лиц1. Шагаса в значительной степени трансмиссивных и переданы для людей контакта с калом hematophagic насекомых Триатомовые клопы подсемейства, широко известный как «целовать ошибок». Однако т. cruzi может также передаваться через переливание крови, вертикальная передача от матери ребенку, или употребление в пищу продуктов питания, загрязненных паразитов2. Острой фазе инфекции главным образом бессимптомно или конститутивно симптоматическая и длится от 6 до 8 недель, после чего участия иммунной системы контролирует паразита нагрузки, но не полностью устранить инфекции3. Большинство людей введите хронической бессимптомной фазы; Однако почти 30% больных разработать симптомом хронической фазы, в котором сердечно-сосудистой системы и реже пищеварительной и нервной систем, нарушенной4. Этот сценарий представляет собой проблему для лечения заболеваний и управления, поскольку Есть нет вакцины, и есть только два эффективных препаратов для Шагаса: benznidazole и нифуртимокс. Обе процедуры требуют длительного администрирования и может иметь серьезные побочные эффекты2.
Возросшее понимание поведения т. cruzi поведения в естественных условиях является ключом к определению паразитарные миграции, сотовой вложения и вторжения в пределах принимающей страны; отсутствие в vivo моделей ограничивает развитие новых терапевтических подходов. В vitro исследования т. cruzi инфекции показали, что подвижность trypomastigotes имеет важное значение для привязки к принимающей клеточных мембран и последующих клеточных вторжения5. Энергии истощения в trypomastigotes в культуре совместно с линией клеток восприимчивых было показано, уменьшить сотовой вторжения6. Интересно, что в trypanosomatids, flagellar движение также характеризуется как уклонение механизм против паразитов специфические антитела7.
Flagellar подвижность был широко изучены в пробирке в Trypanosoma brucei, тесно связанных паразита, который вызывает Африканский трипаносомоз8. В vitro исследования моторики этих трипаносом показал, что моделирование условий кровью или жидкостями организма, в том числе вязкость и наличие препятствий, представитель клеток крови, имеет важное значение для паразита движение вперед9 . Как еще он не удалось визуализировать движение паразитов в крови в естественных условиях.
Данио рерио личинки являются мощной модели для изучения хост возбудитель взаимодействий в естественных условиях. Они являются небольшими, недорогой и относительно легко поднять по сравнению с другими установленными позвоночных моделями для болезни Шагаса. Данио рерио имеют врожденного и адаптивного иммунитета похожи на людей, но их адаптивной иммунной системы начинает развиваться на 4 дня пост оплодотворение (dpf) и не созрели для еще несколько недель10. Во время раннего развития когда присутствуют только макрофагов, есть большое окно для изучения поведения паразита без немедленного вмешательства иммунной10. Однако самое главное преимущество использования данио рерио личинки как позвоночных модель для изучения поведения возбудителя заключается в их оптической прозрачности, что делает их поддаются микроскопических скрининг и изображений11. Кроме того есть несколько инструментов для обработки рыбы генетики. К примеру Каспер штамм — мутант линия данио рерио с без пигментации, что делает животное полностью транспарентным и полезным для визуализации отдельных органов и для слежение в реальном времени вводили клетки12.
Основным ограничением продольных наблюдения быстро движущихся паразитов в живой данио рерио с помощью конфокальной или микроскопия помощью эпифлуоресцентного заключается в невозможности изображений на приобретение высокой скорости и глубины проникновения больших с хорошим качеством изображения и низкой риск повреждений. Легкие лист флуоресценции micsroscopy (LSFM) является формирующейся Тепловизионная техника, которая преодолевает эти ограничения разрешить эти замечания. С помощью одной цели для обнаружения флуоресценции и вторая цель ортогональных освещения, что только освещает фокальной плоскости обнаружения цели, это возможность получения высокого разрешения оптического разделы как Конфокальный микроскоп, но с значительно сниженным фотоповреждения, даже в том, что касается эпифлуоресцентного микроскопии13. LSFM техника, используемая здесь называют одной плоскости освещения микроскопии (SPIM), в которой тонкий лист света освещает одной плоскости в пределах данио рерио личинки.
Цель этой методологии является установить личиночной данио рерио как жизнеспособной модели-инфекции для понимания т. cruzi подвижности и связанное с ним поведение в естественных условиях. Для этого, мы вводили прозрачный данио рерио личинки дневно обозначенные trypomastigotes, сотовых форме ответственность за заражение людей и определили движение т. cruzi в сердечно-сосудистой системы циркуляции данио рерио с помощью LSFM.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="653">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">0.5-10 &#956;L Micropipette</td>
			<td style="width:164px;">Fisherbrand</td>
			<td style="width:104px;">21-377-815</td>
			<td style="width:155px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Agarose RA</td>
			<td style="width:164px;">Amresco</td>
			<td style="width:104px;">N605</td>
			<td>Regular</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Agarose SFR</td>
			<td style="width:164px;">Amresco</td>
			<td style="width:104px;">J234</td>
			<td>Low Melting point</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Aquarium salt</td>
			<td style="width:164px;">Instant ocean</td>
			<td>SS15-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cell Count chamber</td>
			<td style="width:164px;">Boeco</td>
			<td>Neubauer&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cell culture flasks</td>
			<td style="width:164px;">Corning</td>
			<td>430639</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Centrifuge</td>
			<td style="width:164px;">Sorvall</td>
			<td style="width:104px;">Legend RT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CFSE</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>C34554</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Detection objective</td>
			<td style="width:164px;">Nikon 40x 0.8NA&#160;</td>
			<td style="width:104px;">40x CFI APO NIR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DMEM medium</td>
			<td style="width:164px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>D5648</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:41px;width:231px;">Dumont #5 fine forceps</td>
			<td style="width:164px;">World precision Instruments</td>
			<td style="width:104px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:231px;">Ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonate salt (Tricaine)</td>
			<td style="width:164px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:104px;">A5040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Fetal calf serum (FCS)</td>
			<td style="width:164px;">Eurobio</td>
			<td>CVFSVF00-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Filter</td>
			<td style="width:164px;">Chroma</td>
			<td style="width:104px;">ET-525/50M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glass capillaries for embryo mounting</td>
			<td style="width:164px;">Vitrez Medical</td>
			<td>160215</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glass capillaries for pulling needles</td>
			<td style="width:164px;">World precision instruments</td>
			<td>TW100-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glucose</td>
			<td style="width:164px;">Gibco</td>
			<td>A2494001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">HEPES</td>
			<td style="width:164px;">Gibco&#160;</td>
			<td>156300-80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Incubator</td>
			<td style="width:164px;">Thermo Corporation</td>
			<td>Revco</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Larval microinjection mold</td>
			<td>Adaptive Science Tools</td>
			<td>I-34</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Laser</td>
			<td style="width:164px;">Crystalaser</td>
			<td style="width:104px;">DL488-050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">L-glutamine</td>
			<td style="width:164px;">Gibco</td>
			<td>250300-81</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Methylene blue</td>
			<td>Albor Qu&#237;micos</td>
			<td>12223</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Micromanipulator&#160;</td>
			<td style="width:164px;">Narishige</td>
			<td>MN-153</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Micromanipulator system</td>
			<td style="width:164px;">Sutter Instrument</td>
			<td>MP-200</td>
			<td>For LSFM&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Micropipette puller device&#160;</td>
			<td>Narishige</td>
			<td style="width:104px;">PC-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Microscope&#160;</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>CX31</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Microscope (inverted)</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>CKX41</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Multipurpose microscope</td>
			<td style="width:164px;">Nikon</td>
			<td style="width:104px;">AZ100M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Neubauer counting chamber</td>
			<td style="width:164px;">Boeco Germany</td>
			<td style="width:104px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Penicillin-streptomycin</td>
			<td style="width:164px;">Gibco&#160;</td>
			<td>15140-163</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Petri dish 94x16</td>
			<td>Greiner bio-one</td>
			<td>633181</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Plastic pasteur pipette</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>11577722</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Rotation stage</td>
			<td>Newport</td>
			<td>CONEX-PR50CC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">RPMI-1640 medium</td>
			<td style="width:164px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:104px;">R4130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium pyruvate</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11360-070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Stereoscope</td>
			<td style="width:164px;">Nikon</td>
			<td>C-LEDS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Tricaine (MS-222)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>886-86-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">TRIS</td>
			<td style="width:164px;">Amresco</td>
			<td style="width:104px;">M151</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Trypsin-EDTA (0.25%)</td>
			<td style="width:164px;">Gibco</td>
			<td>R-001-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Tubes 15 ml</td>
			<td style="width:164px;">Corning</td>
			<td>05-527-90</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

establishment of larval zebrafish as an animal model to investigate trypanosoma cruzi motility in vivo

Болезнь Шагаса это паразитические инфекции, вызванные Trypanosoma cruzi, чьи моторики важно не только для локализации, но и для сотовых привязки и вторжения. Текущий животных моделей для исследования т. cruzi разрешить ограниченное наблюдение паразитов в естественных условиях, представляющий вызов для понимания поведения паразита на начальных этапах инфекции в организме человека. Этот простейших flagellar этап в вектор и млекопитающих хостов, но Есть никаких исследований, описывающих его подвижность в естественных условиях. Целью данного проекта было создать живой позвоночных zebrafish модель для оценки подвижности т. cruzi в сердечно-сосудистой системы. Прозрачные данио рерио, личинки вводили с дневно помечены trypomastigotes и наблюдается с помощью микроскопии флуоресцирования света листа (LSFM), неинвазивный метод визуализации живых организмов с высоким оптическим разрешением. Паразиты могут быть визуализированы для длительных периодов времени из-за этот метод относительно низкий риск по сравнению с конфокальный фотоповреждения или микроскопия помощью эпифлуоресцентного. Т. cruzi паразитов были замечены, путешествуя в системе кровообращения, живые рыбки данио рерио в разных размеров кровеносных сосудов и желток. Они могут также рассматриваться прилагаемый к стенке желточного мешка и предсердно клапан несмотря на мощные силы, связанные с сокращениями сердца. LSFM т. cruzi-привитых данио рерио личинок-это ценный метод, который может использоваться для визуализации, распространение паразитов и оценивать их тропизма, миграции и подвижности в динамической среде сердечно-сосудистой системы живых животных.

Оптимальные условия для инъекций:
Группы данио рерио личинок вводили на 24, 48, 72, 96 и 120 hpf, на различных анатомических участках и их выживание был рассмотрен каждый день в течение 5 дней. Через 5 дней после инъекции, эмбрионы вводят в 24 hpf имел 6,25% выживания (2/32), тогда как 95% (38/40) личинок, вводят в 48 hpf выжил. Как элемент управления личинки вводили с ПБС как транспортное средство. Не было выявлено различий в выживаемости между вводили транспортного средства и вводят паразита личинок, указывающее не зависящих от паразитических влияния на выживаемость рыбы (p = 0,08). Личинки, вводят между 72-120 hpf у постоянных инъекций объем сопоставимых выживаемости до 48 вводят hpf личинок. Для всех процедур, представленные здесь 48 hpf личинки были использованы из-за их легкости манипулирования и разработав органов и легко проницаемые кожи без очевидной повреждения после инъекции.
Личинки, вводят в 48 hpf были вводят в пространстве перикарда, хвост мышц, задний мозг желудочка, слуховой пузырек, Хорда и канальные Кювье в желточного мешка. Не наблюдалось разницы в выживании личинок, вводят на различных анатомических участках. Однако быстрый и простой региона придать был протока Кювье, расположенный в передней части желточного мешка (рис. 1, 1 кино). Инъекции в этом месте допускается введение более высоких объемах с более низкий риск травмы для жизненно важных структур. Кроме того между 24-72 hpf, этот регион является оптимальным сайт для прямого доступа к развивающихся сосудистую и сердце11.
Паразит визуализации с помощью LSFM:
В течение 8-10 мин после инъекции т. cruzi в протока Кювье паразиты были определены в zebrafish личинки, с помощью LSFM из-за их CFSE флуоресцентного сигнала и оптической прозрачности личинки. После прививки паразиты были замечены что либо придерживаться стен вокруг системы кровообращения или путешествие в направлении потока крови (рис. 2, рис. 3). Когда паразита остается прикрепленным к сердечной структуры, например предсердно клапан, она колеблется с сокращениями сердца, указав, что молекулярные механизмы для соблюдения паразитов может быть эффективным в нашей позвоночных модели (2 фильм, кино 3 Дополнительная кино 1). Т. cruzi также придерживаться стен личинок желточный мешок ( рис. 2, фильм 2), структура, которая будет впоследствии реабсорбируется и стать частью данио рерио кишечника22. Это может быть похож на то, что происходит на этапе хронических болезней в зараженных людей, где паразиты находятся в cardiomyocytes и пищеварительной системы нервной23,24. Когда не прилагается, паразиты дрейфовал через поток крови в том же направлении эритроцитов ( рис. 3, 4 кино). Паразитов можно наблюдать в различных судов размера рыбы, но были более обильны в пространство перикарда и в регионе рядом желток, содержащий поток крови ( рис. 2, рис. 3, Дополнительные фильм 2).
В 10 мин пост инъекций было более трудно пятно одиночные формы паразита из-за их распределение вдоль сосудистую и неспособность быстро экрана различных анатомических сайты рыбы из-за ограниченного поля зрения LSFM (на 40 кратном ). После 24 часов пост инъекции (hpi), CFSE сигнал начинает накапливаться в регионе рядом развивающихся кишечника (дополнительная цифра 1).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56238/56238fig1.jpg"> 
Рисунок 1: Оптимальные укола. (A) образ личинка 48 hpf показаны оптимальный укола на воздуховод Кювье (желтая стрелка) с помощью регулярных стереоскоп. (B) Magnified вид коробки в показаны протока Кювье (желтая стрелка). Шкалы бар = 200 мкм (A), 50 мкм (B). <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56238/56238fig1large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56238/56238fig2.jpg"> 
Рисунок 2: LSFM изображения статических паразита в 48 личинка hpf. Т. cruzi паразит (желтая стрелка) по-прежнему соблюдать стенок желточного мешка, на протяжении всего покадровой последовательности (7.2 s, 17,2 s и 27,2 s), около ~ 15 мин после инъекции паразита. Никаких изменений в позиции паразитов наблюдается в период приобретения по крайней мере 30 s. а, атриум; v, желудочка. Шкалы бар = 50 µm. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56238/56238fig2large.jpg" target="_blank">пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56238/56238fig3.jpg"> 
Рисунок 3: Траектории паразита путешествие в пространстве перикарда, используя LSFM. Т. cruzi паразит может отслеживаться во время дрейфа в пространстве перикарда (PS), после направления потока крови (трек, отображаются в красном цвете) около ~ 15 мин после инъекции паразита. Шкалы бар = 50 µm. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56238/56238fig3large.jpg" target="_blank">пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.</a>
<img alt="Movie 1" src="/files/ftp_upload/56238/56238mov1.jpg"> 
Фильм 1: Долина циркуляции крови желток в личинки 48 hpf. Кино личинки 48 hpf показаны Долина циркуляцию крови или протока Кювье, с помощью регулярного стереоскоп. Различных регионах сосредоточены во время видео, чтобы показать красных кровяных клеток, обеспечивая циркуляцию повсеместно в воздуховоде. Желтая стрелка показывает оптимальную укола. Фильм был записан около 10-15 мин после инъекции паразита. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56238/Movie_1.mp4" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы скачать видео,.</a>
<img alt="Movie 2" src="/files/ftp_upload/56238/56238mov2.jpg"> 
Фильм 2: Т. cruzi паразитов прилагается к стенам желточного мешка. LSFM фильм личинка 48 hpf показаны, что паразиты т. cruzi по-прежнему соблюдать желточного мешка около 10-15 мин после инъекции паразита. Никаких изменений в позиции паразита наблюдалось в период приобретения по крайней мере 30 s. а, атриум; v, желудочка. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56238/Movie_2.mp4" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы скачать видео,.</a>
<img alt="Movie 3" src="/files/ftp_upload/56238/56238mov3.jpg"> 
Фильм 3: Т. cruzi паразитов прилагается к стенкам сердца. Фильм LSFM личинки 48 hpf показаны remai паразитов, т. cruzi n присоединились к стенке сердечно-сосудистой системы, несмотря на сильное сердце схватки около 10-15 мин после инъекции паразита. Эритроцитов может наблюдаться как черный округлые тени. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56238/Movie_3.mp4" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы скачать видео,.</a>
<img alt="Movie 4" src="/files/ftp_upload/56238/56238mov4.jpg"> 
Фильм 4: паразитов, перемещение в пространстве перикарда. Фильм LSFM личинка 48 hpf показаны т. cruzi паразитов, дрейфующих в пространстве перикарда. Два паразитов могут быть прослежены в разное время точках (ID 1, красный круг, и ID 2 в желтом круге), после схожей траектории. Фильм был записан около 10-15 мин после инъекции паразита. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56238/Movie_4.mp4" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы скачать видео,.</a>
Дополнительные рисунок 1: накопление CFSE флуоресцентного сигнала в желтке. Стереоскоп изображения larva wildtype вводят в 48 hpf на воздуховод Кювье. CFSE флуоресцентного сигнала постепенно накапливается в желтке, через два дня после инъекции (48 hpi). Шкалы бар = 500 мкм. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56238/Supplemental_figure_1.tif" target="_blank">пожалуйста, нажмите здесь, чтобы скачать рисунок.</a>
Дополнительные фильм 1: паразитов прикреплены к стенам и клапаны системы кровообращения. Стереоскоп время серии изображений дикого типа личинки вводят в 48 hpf. Изображения взяты интервалом 0.2 s захвата т. cruzi паразитов в синхронности с сокращениями сердечной мышцы в предсердно клапан. Фильм был записан около 30 мин после инъекции паразита. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56238/Supplemental_movie_1.mp4" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы скачать видео,.</a>
Дополнительные фильм 2: перемещение и придерживался паразитов в перивентрикулярной пространстве и желток. Фильм LSFM личинка 48 hpf показаны т. cruzi паразитов дрейфующих или придерживаться перикарда пространства или желток. Представление передачи света было отмечено за первые 5 s. Флуоресценции мнение было отмечено с 5,2-25,8 s. Фильм был записан около 10-15 мин после инъекции паразита. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56238/Supplemental_movie_2.mp4" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы скачать видео,.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Establishment of Larval Zebrafish as an Animal Model to Investigate Trypanosoma cruzi Motility In Vivo at JoVE.com

Establishment of Larval Zebrafish as an Animal Model to Investigate Trypanosoma cruzi Motility In Vivo

В настоящем Протоколе дневно обозначенных т. cruzi вводили в прозрачной данио рерио личинки, а паразит подвижности наблюдалось в естественных условиях с помощью микроскопии флуоресцирования света листа.

Создание личиночной данио рерио как модель животного к расследованию Trypanosoma cruzi подвижности In Vivo

Chagas disease is a parasitic infection caused by Trypanosoma cruzi, whose motility is not only important for localization, but also for cellular binding ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Establishment of Larval Zebrafish as an Animal Model to Investigate Trypanosoma cruzi Motility In Vivo

Live Imaging of Innate Immune and Preneoplastic Cell Interactions Using an Inducible Gal4/UAS Expression System in Larval Zebrafish Skin

Живая съемка врожденной иммунной и предраковых межклеточного взаимодействия, используя / UAS Expression System Индуцибельная Gal4 на личиночной данио рерио кожи

Here we describe a method to conditionally induce epithelial cell transformation by the use of the 4-Hydroxytamoxifen (4-OHT) inducible KalTA4-ERT2/UAS ...

Establishment of a Clinically Relevant Ex Vivo Mock Cataract Surgery Model for Investigating Epithelial Wound Repair in a Native Microenvironment

Establishment of a Clinically Relevant Ex Vivo Mock Cataract Surgery Model for Investigating Epithelial Wound Repair in a Native Microenvironment

Создание клинически значимых<em&gt; Экс Vivo</em&gt; Мок хирургии катаракты модель для исследования Эпителиальный заживления раны в родной микроокружения

The major impediment to understanding how an epithelial tissue executes wound repair is the limited availability of models in which it is possible to ...

Loss- and Gain-of-function Approach to Investigate Early Cell Fate Determinants in Preimplantation Mouse Embryos

Убыт- и Gain-оф-функции подход к расследованию Early Cell Судьба определителям предимплантационной эмбрионов мыши

 Gene silencing and overexpression techniques are instrumental for the identification of genes involved in embryonic development. Direct target gene ...

Development of an Ethanol-induced Fibrotic Liver Model in Zebrafish to Study Progenitor Cell-mediated Hepatocyte Regeneration

Разработка Этанол-индуцированной фиброзных модели печени в данио рерио для изучения прогениторных клеток-гепатоцитов опосредуется Регенерация

Sustained liver fibrosis with continuation of extracellular matrix (ECM) protein build-up results in the loss of cellular competency of the liver, leading ...

Building Finite Element Models to Investigate Zebrafish Jaw Biomechanics

Построение конечно-элементных моделей по расследованию данио рерио Щековые биомеханики

Skeletal morphogenesis occurs through tightly regulated cell behaviors during development; many cell types alter their behavior in response to mechanical ...

Dissection of Larval Zebrafish Gonadal Tissue

Вскрытие Личинки данио гонадная ткани

Although wild zebrafish possess a ZZ/ZW sex-determination system, domesticated zebrafish have lost the sex chromosome. They utilize a polygenic sex ...

Orthotopic Ovarian Transplantation Procedures to Investigate the Life- and Health-span Influence of Ovarian Senescence in Female Mice

Ортотопическая яичников трансплантации процедуры расследования продолжительность жизни и здоровья влияние яичников старение в самок мышей

Ovarian transplantation was first conducted at Utah State University in 1963. In more recent work, heterochronic transplantation of mammalian ovaries is ...

Electroretinogram Recording in Larval Zebrafish using A Novel Cone-Shaped Sponge-tip Electrode

Сравнительно запись в личиночной данио рерио, с помощью Роман конусообразной Губка наконечник электрода

The zebrafish (Danio rerio) is commonly used as a vertebrate model in developmental studies and is particularly suitable for visual neuroscience. For ...

Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C (UV-C) Damage

Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C UV-C Damage

Оценка окислительного повреждения в первичной мыши глазной поверхностных клеток / стволовых клеток в ответ на ультрафиолет-C (UV-C) Ущерб

The ocular surface is subjected to regular wear and tear due to various environmental factors. Exposure to UV-C radiation constitutes an occupational ...

An Ectopic Chemokine Expression Model for Testing Macrophage Recruitment In Vivo

Эктопическая модель экспрессии хемокина для тестирования макрофагов набора в Vivo

Zebrafish are widely used in basic and biomedical research. Many zebrafish transgenic lines are currently available to label various types of cells. Owing ...