Name: live-imaging of breast epithelial cell migration after the transient depletion of tip60
Uploaded: 2017-12-07T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live-imaging of Breast Epithelial Cell Migration After the Transient Depletion of TIP60 at JoVE.com

हम उनके सहायक चर्चा और टिप्पणियों के लिए झा प्रयोगशाला के सदस्यों को धंयवाद । sj राष्ट्रीय अनुसंधान फाउंडेशन सिंगापुर से अनुदान द्वारा समर्थित और सिंगापुर के कैंसर विज्ञान संस्थान (आर-713-006-014-271) को उत्कृष्टता पहल के अपने अनुसंधान केन्द्रों के तहत शिक्षा मंत्रालय, राष्ट्रीय चिकित्सा अनुसंधान परिषद् (CBRG-काटकर; BNIG11nov001 और सीएस-IRG; आर-713-000-162-511), शिक्षा मंत्रालय के अकादमिक अनुसंधान कोष (मो AcRF टीयर 1 T1-2012 Oct-04) । Y.Z., G.S.C., और C.Y.T. एक के बाद स्नातक सिंगापुर के कैंसर विज्ञान संस्थान, राष्ट्रीय सिंगापुर विश्वविद्यालय द्वारा संमानित फैलोशिप द्वारा समर्थित थे ।

1. तैयारी
<ol><li>MCF10A कल्चर मीडियम तैयार करें: Dulbecco के संशोधित ईगल मीडियम (DMEM)/F12 (1:1) के साथ 5% हार्स सीरम, 20 एनजी/एमएल उपकला वृद्धि कारक, ०.५ मिलीग्राम/एमएल hydrocortisone, १०० एनजी/एमएल हैजा विष, और 10 µ जी/एमएल इंसुलिन ।</li>
	<li>तैयार ...

<ol>
	<li>Sun, Y., Jiang, X., Chen, S., Fernandes, N., Price, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+role+for+the+Tip60+histone+acetyltransferase+in+the+acetylation+and+activation+of+ATM.">A role for the Tip60 histone acetyltransferase in the acetylation and activation of ATM.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 102 (37), 13182-13187 (2005).</li><li>Sykes, S. M., Stanek, T. J., Frank, A., Murphy, M. E., McMahon, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acetylation+of+the+DNA+binding+domain+regulates+transcription-independent+apoptosis+by+p53.">Acetylation of the DNA binding domain regulates transcription-independent apoptosis by p53.</a> J Biol Chem. 284 (30), 20197-20205 (2009).</li><li>Jha, S., Shibata, E., Dutta, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+Rvb1/Tip49+is+required+for+the+histone+acetyltransferase+activity+of+Tip60/NuA4+and+for+the+downregulation+of+phosphorylation+on+H2AX+after+DNA+damage.">Human Rvb1/Tip49 is required for the histone acetyltransferase activity of Tip60/NuA4 and for the downregulation of phosphorylation on H2AX after DNA damage.</a> Mol Cell Biol. 28 (8), 2690-2700 (2008).</li><li>Sapountzi, V., Logan, I. R., Robson, C. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+functions+of+TIP60.">Cellular functions of TIP60.</a> Int J Biochem Cell Biol. 38 (9), 1496-1509 (2006).</li><li>Squatrito, M., Gorrini, C., Amati, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tip60+in+DNA+damage+response+and+growth+control:+many+tricks+in+one+HAT.">Tip60 in DNA damage response and growth control: many tricks in one HAT.</a> Trends Cell Biol. 16 (9), 433-442 (2006).</li><li>Sun, Y., Xu, Y., Roy, K., Price, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+damage-induced+acetylation+of+lysine+3016+of+ATM+activates+ATM+kinase+activity.">DNA damage-induced acetylation of lysine 3016 of ATM activates ATM kinase activity.</a> Mol Cell Biol. 27 (24), 8502-8509 (2007).</li><li>Sykes, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acetylation+of+the+p53+DNA-binding+domain+regulates+apoptosis+induction.">Acetylation of the p53 DNA-binding domain regulates apoptosis induction.</a> Mol Cell. 24 (6), 841-851 (2006).</li><li>Tang, Y., Luo, J., Zhang, W., Gu, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tip60-dependent+acetylation+of+p53+modulates+the+decision+between+cell-cycle+arrest+and+apoptosis.">Tip60-dependent acetylation of p53 modulates the decision between cell-cycle arrest and apoptosis.</a> Mol Cell. 24 (6), 827-839 (2006).</li><li>Chen, G., Cheng, Y., Tang, Y., Martinka, M., Li, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+Tip60+in+human+melanoma+cell+migration,+metastasis,+and+patient+survival.">Role of Tip60 in human melanoma cell migration, metastasis, and patient survival.</a> J Invest Dermatol. 132 (11), 2632-2641 (2012).</li><li>Gorrini, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tip60+is+a+haplo-insufficient+tumour+suppressor+required+for+an+oncogene-induced+DNA+damage+response.">Tip60 is a haplo-insufficient tumour suppressor required for an oncogene-induced DNA damage response.</a> Nature. 448 (7157), 1063-1067 (2007).</li><li>Jha, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Destabilization+of+TIP60+by+human+papillomavirus+E6+results+in+attenuation+of+TIP60-dependent+transcriptional+regulation+and+apoptotic+pathway.">Destabilization of TIP60 by human papillomavirus E6 results in attenuation of TIP60-dependent transcriptional regulation and apoptotic pathway.</a> Mol Cell. 38 (5), 700-711 (2010).</li><li>Kim, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptional+regulation+of+a+metastasis+suppressor+gene+by+Tip60+and+beta-catenin+complexes.">Transcriptional regulation of a metastasis suppressor gene by Tip60 and beta-catenin complexes.</a> Nature. 434 (7035), 921-926 (2005).</li><li>Sakuraba, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Down-regulation+of+Tip60+gene+as+a+potential+marker+for+the+malignancy+of+colorectal+cancer.">Down-regulation of Tip60 gene as a potential marker for the malignancy of colorectal cancer.</a> Anticancer Res. 29 (10), 3953-3955 (2009).</li><li>Subbaiah, V. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=E3+ligase+EDD1/UBR5+is+utilized+by+the+HPV+E6+oncogene+to+destabilize+tumor+suppressor+TIP60.">E3 ligase EDD1/UBR5 is utilized by the HPV E6 oncogene to destabilize tumor suppressor TIP60.</a> Oncogene. , (2015).</li><li>Friedl, P., Wolf, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumour-cell+invasion+and+migration:+diversity+and+escape+mechanisms.">Tumour-cell invasion and migration: diversity and escape mechanisms.</a> Nat Rev Cancer. 3 (5), 362-374 (2003).</li><li>Nguyen, D. X., Bos, P. D., Massague, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metastasis:+from+dissemination+to+organ-specific+colonization.">Metastasis: from dissemination to organ-specific colonization.</a> Nat Rev Cancer. 9 (4), 274-284 (2009).</li><li>Zijl, F., Krupitza, G., Mikulits, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initial+steps+of+metastasis:+cell+invasion+and+endothelial+transmigration.">Initial steps of metastasis: cell invasion and endothelial transmigration.</a> Mutat Res. 728 (1-2), 23-34 (2011).</li><li>Lamouille, S., Xu, J., Derynck, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mechanisms+of+epithelial-mesenchymal+transition.">Molecular mechanisms of epithelial-mesenchymal transition.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 15 (3), 178-196 (2014).</li><li>Liang, C. C., Park, A. Y., Guan, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+scratch+assay:+a+convenient+and+inexpensive+method+for+analysis+of+cell+migration+in+vitro.">In vitro scratch assay: a convenient and inexpensive method for analysis of cell migration in vitro.</a> Nat Protoc. 2 (2), 329-333 (2007).</li><li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TIP60+inhibits+metastasis+by+ablating+DNMT1-SNAIL2-driven+epithelial-mesenchymal+transition+program.">TIP60 inhibits metastasis by ablating DNMT1-SNAIL2-driven epithelial-mesenchymal transition program.</a> J Mol Cell Biol. , (2016).</li><li>Riahi, R., Yang, Y., Zhang, D. D., Wong, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+wound-healing+assays+for+probing+collective+cell+migration.">Advances in wound-healing assays for probing collective cell migration.</a> J Lab Autom. 17 (1), 59-65 (2012).</li><li>Jonkman, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+introduction+to+the+wound+healing+assay+using+live-cell+microscopy.">An introduction to the wound healing assay using live-cell microscopy.</a> Cell Adh Migr. 8 (5), 440-451 (2014).</li></ol>

यह ज्ञात है कि कक्ष माइग्रेशन की प्रक्रिया में, कक्ष या तो अनुयाई पत्रकों के रूप में ले जा सकते हैं; ढीले समूहों; या एकल, पृथक कक्ष । मोड और सेल आक्रमण के गतिशील एक शर्त से दूसरे में भिंन हो सकते हैं, और phenotype ?...

एचआईवी-जैसे-इंटरैक्टिव प्रोटीन ६० केडीए (TIP60) एक lysine acetyltransferase है जो citrullinated और नॉन-citrullinated प्रोटीन्स1,2को acetylate कर सकता है । अपने कार्यों के लिए प्रतिलेखन, डीएनए क्षति की मरंमत सहित कई संकेत मार्ग, में निहितार्थ है पाया, और apoptosis1,3,4,5,6, 7 , 8. इसके अलावा, TIP60 अक्सर कैंसर में downregulated है, और इसके downregulation के साथ संबंधित है cancer मेटास्टेसिस और गरीब जीवित रहने की दर9,10,11,12, 13,14. ट्यूमर मेटास्टेसिस कैंसर से संबंधित मौत का प्रमुख कारण है । यह एक बहु कदम प्रक्रिया है, और मेटास्टेसिस के प्रारंभिक चरण में आसन्न ऊतकों में ट्यूमर कोशिकाओं के प्रवास और आक्रमण शामिल है15,16. आदेश में ऐसा करने के लिए, ट्यूमर कोशिकाओं को पहले प्राथमिक ट्यूमर द्रव्यमान से अलग करना चाहिए, या तो सामूहिक रूप से एक सेल शीट के रूप में या अलग एकल कोशिकाओं के रूप में17। इस प्रक्रिया के दौरान, ट्यूमर कोशिकाओं को अक्सर उपकला mesenchymal संक्रमण (EMT), आकृति विज्ञान और सेल आसंजन क्षमता17,18में परिवर्तन में जिसके परिणामस्वरूप से गुजरना ।
कुछ तकनीकों के लिए प्रवास और इन विट्रो मेंट्यूमर कोशिकाओं के आक्रमण की क्षमता का अध्ययन करने के लिए विकसित किया गया है । उनमें से, घाव हीलिंग परख सबसे कुशल और किफायती19है । सबसे पहले, इस विधि कोशिकाओं की एक धाराप्रवाह monolayer पर एक कृत्रिम अंतराल के निर्माण, इस प्रकार कोशिकाओं को स्थानांतरित करने और अंतर को बंद करने की अनुमति शामिल है । दूसरा, अंतराल की छवियाँ शुरुआत और प्रयोग के अंत में कब्जा कर लिया जा सकता है. अंत में, अंतर बंद करने की तुलना सेल माइग्रेशन की दर निर्धारित करने के लिए किया जाता है । एक चरण के विपरीत माइक्रोस्कोप आमतौर पर पारंपरिक घाव उपचार परख के लिए छवियों पर कब्जा करने के लिए प्रयोग किया जाता है । घाव भरने की परख का एक और लाभ यह है कि यह आंशिक रूप से vivo ट्यूमर सेल प्रवास में जैसा दिखता है । इसी तरह vivo में ट्यूमर मेटास्टेसिस, सेल माइग्रेशन घाव-हीलिंग परख में उपकला चादरें और अलग एकल कोशिकाओं के प्रवास के दोनों सामूहिक प्रवास से पता चलता है.
हालांकि, सेल माइग्रेशन गतिशील होने के लिए जाना जाता है, और वास्तविक समय में कोशिकाओं के आंदोलन दस्तावेज़ के लिए एक की जरूरत है । उदाहरण के लिए, एक पारंपरिक घाव-चिकित्सा परख एक शोधकर्ता को एकल सेल आंदोलन का विश्लेषण करने की अनुमति नहीं है । दूसरी ओर, घाव चिकित्सा परख के लिए प्रसंस्कृत कोशिकाओं अक्सर सीरम-कोशिका प्रसार को बाधित भूखे हैं । इस सेल प्रसार के कारण अंतर बंद करने की संभावना को शासन करने के लिए किया जाता है । बहरहाल, वहां अभी भी कुछ प्रसार और कोशिका मृत्यु हो, और चरण इसके विपरीत पहले और प्रयोग के बाद छवियों के लिए उन दोनों के बीच अंतर करने में असमर्थ रहे है हो जाएगा ।
लाइव सेल इमेजिंग तकनीक पारंपरिक घाव उपचार परख की इस सीमा के पते । एक सह2 मशीन और उचित तापमान नियंत्रण के साथ संयुक्त एक जीवित इमेजिंग माइक्रोस्कोप का उपयोग करना, शोधकर्ताओं के सुझावों पर स्थित सक्रिय रूप से पलायन कोशिकाओं की आवाजाही को अनुरेखण करते हुए अंतराल आकार और समय के साथ बंद होने की अपनी दर को मापने कर सकते हैं आक्रामक सामने । इसलिए, सेल प्रवास की निगरानी करने के लिए लाइव सेल इमेजिंग के कार्यांवयन केवल सेल प्रवास के बेहतर दृश्य प्रदान नहीं करेगा, लेकिन यह भी संभावना सेल प्रवास और सेल प्रसार के बीच अंतर करने के लिए अनुमति देगा, इस प्रकार एक और अधिक प्रदान सेल माइग्रेशन का विश्वसनीय विश्लेषण ।
इस अध्ययन में, MCF10A स्तन उपकला कोशिकाओं घाव चिकित्सा परख और लाइव सेल इमेजिंग के संयोजन के लिए सेल माइग्रेशन में TIP60 की भूमिका का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया गया । MCF10A कोशिकाओं में वृद्धि हुई माइग्रेशन क्षमताओं में TIP60 परिणाम की कमी.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="874">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:287px;">MCF10A cell</td>
			<td style="width:211px;">ATCC</td>
			<td style="width:119px;">CRL-10317TM</td>
			<td style="width:257px;">Breast epithelial cell</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:287px;">DMEM/F12 media (1:1)</td>
			<td style="width:211px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">11330-032</td>
			<td>MCF10A culture media</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:287px;">Epithelial growth factor (EGF)</td>
			<td style="width:211px;">Peprotech</td>
			<td style="width:119px;">AF-100-15</td>
			<td>Supplements for MCF10A culture media</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:287px;">Cholera Toxin</td>
			<td style="width:211px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">C-8052</td>
			<td>Supplements for MCF10A culture media</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:287px;">Hydrocortisone</td>
			<td style="width:211px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">H-0888</td>
			<td>Supplements for MCF10A culture media</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:287px;">Insulin</td>
			<td style="width:211px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">I-1882</td>
			<td>Supplements for MCF10A culture media</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:287px;">House serum</td>
			<td style="width:211px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">16050-122</td>
			<td>Supplements for MCF10A culture media</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:287px;">Trypsin</td>
			<td style="width:211px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">25200-056</td>
			<td>For MCF10A detach from plate</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:287px;">Hemacytometer</td>
			<td style="width:211px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">267110</td>
			<td>For counting cell</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:287px;">Opti-MEM reduced serum media</td>
			<td style="width:211px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">31985-070</td>
			<td>For siRNA mixture</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:287px;">Lipofectamine RNAiMAX</td>
			<td style="width:211px;">Invitrogen/Life Technologies</td>
			<td style="width:119px;">56532</td>
			<td>Transfect reagent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:287px;">Trizol reagent</td>
			<td style="width:211px;">Invitrogen/Life Technologies</td>
			<td style="width:119px;">15596-026</td>
			<td>For mRNA extraction</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:287px;">iScript cDNA Synthesis Kit</td>
			<td style="width:211px;">Bio-Rad</td>
			<td style="width:119px;">170-8891</td>
			<td>For cDNA generation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:287px;">iTaq Universal SYBR Green Supermix</td>
			<td style="width:211px;">Bio-Rad</td>
			<td style="width:119px;">172-5125</td>
			<td>For real time qPCR</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:287px;">7500 Fast Real Time PCR system</td>
			<td style="width:211px;">Biosystems</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Real time qPCR mechine</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:287px;">10-cm dish</td>
			<td style="width:211px;">Greiner bio-one</td>
			<td style="width:119px;">664160</td>
			<td>For Knockdown experiment</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:287px;">24-well plate</td>
			<td style="width:211px;">Cellstar</td>
			<td style="width:119px;">662160</td>
			<td>For wound healing assay</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:287px;">siControl siRNA</td>
			<td style="width:211px;">Self designed</td>
			<td style="width:119px;">Self designed</td>
			<td>CGUACGCGGAAUACUUCGAdTdT</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:287px;">siTIP60 siRNA</td>
			<td style="width:211px;">Self designed</td>
			<td style="width:119px;">Self designed</td>
			<td>UGAUCGAGUUCAGCUAUGAdTdT</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:287px;">Live cell observer</td>
			<td style="width:211px;">Zeiss</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Zeiss inverted Cell Observer for live cell experiments</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

live-imaging of breast epithelial cell migration after the transient depletion of tip60

घाव-हीलिंग परख कुशल और सबसे किफायती तरीके से इन विट्रो मेंसेल प्रवास के अध्ययन में से एक है । पारंपरिक रूप से, छवियां शुरुआत और एक चरण के विपरीत माइक्रोस्कोप का उपयोग कर एक प्रयोग के अंत में ले रहे हैं, और कोशिकाओं के प्रवास क्षमताओं घावों के बंद द्वारा मूल्यांकन कर रहे हैं । हालांकि, सेल आंदोलन एक गतिशील घटना है, और एक पारंपरिक विधि एकल सेल आंदोलन पर नज़र रखने के लिए अनुमति नहीं है । वर्तमान घाव-हीलिंग परख में सुधार करने के लिए, हम लाइव सेल इमेजिंग तकनीक का उपयोग करने के लिए वास्तविक समय में सेल प्रवास की निगरानी । इस विधि हमें सेल माइग्रेशन दर एक सेल ट्रैकिंग प्रणाली के आधार पर निर्धारित करने के लिए अनुमति देता है और सेल प्रवास और सेल प्रसार के बीच एक स्पष्ट अंतर प्रदान करता है । यहां, हम TIP60 की उपस्थिति से प्रभावित स्तन उपकला कोशिकाओं के विभिन्न प्रवास क्षमताओं का अध्ययन करने के लिए घाव-चिकित्सा परख में रहते सेल इमेजिंग के उपयोग का प्रदर्शन. के रूप में सेल गतिशीलता अत्यधिक गतिशील है, हमारी विधि घाव भरने की प्रक्रिया में और अधिक अंतर्दृष्टि प्रदान करता है घायल उपचार पारंपरिक इमेजिंग घाव चिकित्सा परख के लिए इस्तेमाल तकनीक के साथ लिया बंद का एक स्नैपशॉट से ।

जनरल स्कीमा के लाइव सेल इमेजिंग-सेल माइग्रेशन परख आधारित चित्र 1a इस प्रोटोकॉल का स्कीमा है । siControl के साथ transfected MCF10A कोशिकाओं ठेठ उपकला आकृति विज्ञान दिखाया. TIP60 की कमी के बाद, MCF10...

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Live-imaging of Breast Epithelial Cell Migration After the Transient Depletion of TIP60

TIP60 के क्षणिक कमी के बाद स्तन उपकला कोशिका प्रवास के लाइव इमेजिंग

यहां, हम TIP60-घट MCF10A स्तन उपकला कोशिकाओं का उपयोग कर एक घाव भरने परख में सेल प्रवास के वास्तविक समय निगरानी प्रस्तुत करते हैं । हमारे प्रोटोकॉल में रहते सेल इमेजिंग तकनीक के कार्यांवयन हमें विश्लेषण और वास्तविक समय में और समय के पार एकल सेल आंदोलन कल्पना करने के लिए अनुमति देता है ।

The wound-healing assay is efficient and one of the most economical ways to study cell migration in vitro. Conventionally, images are taken at the ...

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Utilizing Functional Genomics Screening to Identify Potentially Novel Drug Targets in Cancer Cell Spheroid Cultures

उपयोग कार्यात्मक जीनोमिक्स स्क्रीनिंग कैंसर सेल उपगोल संस्कृतियों में संभावित उपन्यास ड्रग लक्ष्यों की पहचान करने के लिए

The identification of functional driver events in cancer is central to furthering our understanding of cancer biology and indispensable for the discovery ...

A Portal Vein Injection Model to Study Liver Metastasis of Breast Cancer

एक पोर्टल नस इंजेक्शन मॉडल का अध्ययन करने के लिए स्तन कैंसर का लिवर मेटास्टेसिस

Breast cancer is the leading cause of cancer-related mortality in women worldwide. Liver metastasis is involved in upwards of 30% of cases with breast ...

Ultrasonographic Evaluation of Breast Cancer-related Lymphedema

स्तन कैंसर से संबंधित lymphedema के Ultrasonographic मूल्यांकन

Lymphedema is one of the most common complications after breast cancer surgery. There are many diagnostic tools for lymphedema, but no standard method yet ...

Live Imaging to Study Microtubule Dynamic Instability in Taxane-resistant Breast Cancers

लाइव इमेजिंग अध्ययन करने के लिए taxane प्रतिरोधी स्तन कैंसर में microtubule गतिशील अस्थिरता

Taxanes such as docetaxel belong to a group of microtubule-targeting agents (MTAs) that are commonly relied upon to treat cancer. However, taxane ...

Invasive Behavior of Human Breast Cancer Cells in Embryonic Zebrafish

भ्रूणीय Zebrafish में मानव स्तन कैंसर की कोशिकाओं के आक्रामक व्यवहार

In many cases, cancer patients do not die of a primary tumor, but rather because of metastasis. Although numerous rodent models are available for studying ...

Using the Dot Assay to Analyze Migration of Cell Sheets

कक्ष पत्रकों के माइग्रेशन का विश्लेषण करने के लिए डॉट परख का उपयोग करना

Although complex organisms appear static, their tissues are under a continuous turnover. As cells age, die, and are replaced by new cells, cells move ...

Live-Cell Imaging Assays to Study Glioblastoma Brain Tumor Stem Cell Migration and Invasion

लाइव सेल इमेजिंग परख ग्लियोब्लास्टोमा ब्रेन ट्यूमर स्टेम सेल प्रवासन और आक्रमण का अध्ययन करने के लिए

Glioblastoma (GBM) is an aggressive brain tumor that is poorly controlled with the currently available treatment options. Key features of GBMs include ...

Flow Cytometric Detection of Newly-formed Breast Cancer Stem Cell-like Cells After Apoptosis Reversal

नव गठित स्तन कैंसर के प्रवाह Cytometric का पता लगाने के Apoptosis उत्क्रमण के बाद कोशिका की तरह स्टेम सेल

Cancer recurrence has long been studied by oncologists while the underlying mechanisms remain unclear. Recently, we and others found that a phenomenon ...

Differentiation of Mouse Breast Epithelial HC11 and EpH4 Cells

माउस स्तन एपिथेलियल एचसी11 और ईपीएच 4 कोशिकाओं का भेदभाव

Cadherins play an important role in the regulation of cell differentiation as well as neoplasia. Here we describe the origins and methods of the induction ...

Evaluating the Differentiation Capacity of Mouse Prostate Epithelial Cells Using Organoid Culture

ऑर्गेनोइड संस्कृति का उपयोग करके माउस प्रोस्टेट एपिथेलियल कोशिकाओं की भेदभाव क्षमता का मूल्यांकन करना

The prostate epithelium is comprised predominantly of basal and luminal cells. In vivo lineage tracing has been utilized to define the differentiation ...