Name: regeneration of arrayed gold microelectrodes equipped for a real-time cell analyzer
Uploaded: 2018-03-12T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Regeneration of Arrayed Gold Microelectrodes Equipped for a Real-Time Cell Analyzer at JoVE.com

وأيده العمل "الوطني العلوم الطبيعية مؤسسة في الصين" (U1703118)، مشروع ممول من أولوية الأكاديمية برنامج التنمية من جيانغسو التعليم العالي المؤسسات (PAPD)، والبرنامج شوانجتشوانج جيانغسو، وصناديق مفتوحة من "مفتاح الدولة" المختبر الكيماوي/بيوسينسينج وتشيموميتريكس (2016015) و "المختبر الوطني من بيوماكروموليكوليس" (2017kf05) والمشروع البروفسور Jiangsu Specially-Appointed، الصين.

ملاحظة: بشكل عام، عملية التجديد يشمل الهضم التربسين والشطف خطوة مع الإيثانول والمياه. وقت الهضم تتغير وفقا لعدد الخلايا المستخدمة ونوع وعدد من الخلايا المستخدمة قد تختلف تبعاً لأغراض تجريبية. وينصح للتحقق من الرقائق المجددة استخدام أساليب البصرية والكهروكيميائيه لتحسين شروط التجديد. أث...

<ol>
	<li>Michaelis, S., Wegener, J., Robelek, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Label-free+monitoring+of+cell-based+assays:+Combining+impedance+analysis+with+SPR+for+multiparametric+cell+profiling.">Label-free monitoring of cell-based assays: Combining impedance analysis with SPR for multiparametric cell profiling.</a> Biosens. Bioelectron. 49, 63-70 (2013).</li><li>Hillger, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole-cell+biosensor+for+label-free+detection+of+GPCR-mediated+drug+responses+in+personal+cell+lines.">Whole-cell biosensor for label-free detection of GPCR-mediated drug responses in personal cell lines.</a> Biosens. Bioelectron. 74, 233-242 (2015).</li><li>Atienzar, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+real-time+cell+analyzer+technology+in+drug+discovery:+defining+optimal+cell+culture+conditions+and+assay+reproducibility+with+different+adherent+cellular+models.">The use of real-time cell analyzer technology in drug discovery: defining optimal cell culture conditions and assay reproducibility with different adherent cellular models.</a> J. Biomol. Screen. 16 (6), 575-587 (2011).</li><li>Chen, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Label-free+luminescent+mesoporous+silica+nanoparticles+for+imaging+and+drug+delivery.">Label-free luminescent mesoporous silica nanoparticles for imaging and drug delivery.</a> Theranostics. 3 (9), 650-657 (2013).</li><li>Gao, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silicon+Nanowire+Arrays+for+Label-Free+Detection+of+DNA.">Silicon Nanowire Arrays for Label-Free Detection of DNA.</a> Anal. Chem. 79 (9), 3291-3297 (2007).</li><li>Giaever, I., Keese, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+morphological+biosensor+for+mammalian+cells.">A morphological biosensor for mammalian cells.</a> Nature. 366 (6455), 591-592 (1993).</li><li>Xiao, C., Lachance, B., Sunahara, G., Luong, J. H. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+cytotoxicity+using+electric+cell-substrate+impedance+sensing:+concentration+and+time+response+function+approach.">Assessment of cytotoxicity using electric cell-substrate impedance sensing: concentration and time response function approach.</a> Anal. Chem. 74 (22), 5748-5753 (2002).</li><li>Xiao, C., Lachance, B., Sunahara, G., Luong, J. H. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+in-depth+analysis+of+electric+cell-substrate+impedance+sensing+to+study+the+attachment+and+spreading+of+mammalian+cells.">An in-depth analysis of electric cell-substrate impedance sensing to study the attachment and spreading of mammalian cells.</a> Anal. Chem. 74 (6), 1333-1339 (2002).</li><li>Xing, J. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+monitoring+of+cytotoxicity+on+microelectronic+sensors.">Dynamic monitoring of cytotoxicity on microelectronic sensors.</a> Chem. Res. Toxicol. 18 (2), 154-161 (2005).</li><li>Abassi, Y. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinetic+cell-based+morphological+screening:+prediction+of+mechanism+of+compound+action+and+off-target+effects.">Kinetic cell-based morphological screening: prediction of mechanism of compound action and off-target effects.</a> Chem. Biol. 16 (7), 712-723 (2009).</li><li>Urcan, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+xCELLigence+impedance+analysis+of+the+cytotoxicity+of+dental+composite+components+on+human+gingival+fibroblasts.">Real-time xCELLigence impedance analysis of the cytotoxicity of dental composite components on human gingival fibroblasts.</a> Dent. Mater. 26 (1), 51-58 (2010).</li><li>Atienza, J. M., Zhu, J., Wang, X., Xu, X., Abassi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+monitoring+of+cell+adhesion+and+spreading+on+microelectronic+sensor+arrays.">Dynamic monitoring of cell adhesion and spreading on microelectronic sensor arrays.</a> J. Biomol. Screen. 10 (8), 795-805 (2005).</li><li>Rahim, S., Uren, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Real-time+Electrical+Impedance+Based+Technique+to+Measure+Invasion+of+Endothelial+Cell+Monolayer+by+Cancer+Cells.">A Real-time Electrical Impedance Based Technique to Measure Invasion of Endothelial Cell Monolayer by Cancer Cells.</a> J. Vis. Exp. (50), e2792 (2011).</li><li>Moodley, K., Angel, C. E., Glass, M., Graham, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+profiling+of+NK+cell+killing+of+human+astrocytes+using+xCELLigence+technology.">Real-time profiling of NK cell killing of human astrocytes using xCELLigence technology.</a> J. Neurosci. Meth. 200 (2), 173-180 (2011).</li><li>Marinova, Z., Walitza, S., Grunblatt, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+impedance-based+cell+analyzer+as+a+tool+to+delineate+molecular+pathways+involved+in+neurotoxicity+and+neuroprotection+in+a+neuronal+cell+line.">Real-time impedance-based cell analyzer as a tool to delineate molecular pathways involved in neurotoxicity and neuroprotection in a neuronal cell line.</a> J. Vis. Exp. (90), e51748 (2014).</li><li>Chatelier, R. C., Gengenbach, T. R., Griesser, H. J., Brighamburke, M., Oshannessy, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+general+method+to+recondition+and+reuse+Biacore+sensor+chips+fouled+with+covalently+immobilized+protein/peptide.">A general method to recondition and reuse Biacore sensor chips fouled with covalently immobilized protein/peptide.</a> Anal. Biochem. 229 (1), 112-118 (1995).</li><li>Vashist, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+regenerating+gold+surface+for+prolonged+reuse+of+gold-coated+surface+plasmon+resonance+chip.">A method for regenerating gold surface for prolonged reuse of gold-coated surface plasmon resonance chip.</a> Anal. Biochem. 423 (1), 23-25 (2012).</li><li>Nguyen, T. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+regenerative+label-free+fiber+optic+sensor+using+surface+plasmon+resonance+for+clinical+diagnosis+of+fibrinogen.">A regenerative label-free fiber optic sensor using surface plasmon resonance for clinical diagnosis of fibrinogen.</a> Int. J. Nanomed. 10, 155-163 (2015).</li><li>Xu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+general+method+to+regenerate+arrayed+gold+microelectrodes+for+label-free+cell+assay.">A general method to regenerate arrayed gold microelectrodes for label-free cell assay.</a> Anal. Biochem. 516, 57-60 (2017).</li><li>Wang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensionally+controllable+synthesis+of+multichannel+silica+nanotubes+and+their+application+as+dual+drug+carriers.">Three-dimensionally controllable synthesis of multichannel silica nanotubes and their application as dual drug carriers.</a> ChemPlusChem. 80 (11), 1615-1623 (2015).</li><li>Verrier, S., Notingher, I., Polak, J. M., Hench, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+situ+monitoring+of+cell+death+using+Raman+microspectroscopy.">In situ monitoring of cell death using Raman microspectroscopy.</a> Biopolymers. 74 (1-2), 157-162 (2004).</li><li>Keighley, S. D., Li, P., Estrela, P., Migliorato, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+DNA+immobilization+on+gold+electrodes+for+label-free+detection+by+electrochemical+impedance+spectroscopy.">Optimization of DNA immobilization on gold electrodes for label-free detection by electrochemical impedance spectroscopy.</a> Biosens. Bioelectron. 23 (8), 1291-1297 (2008).</li><li>Kandimalla, V. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regeneration+of+ethyl+parathion+antibodies+for+repeated+use+in+immunosensor:+a+study+on+dissociation+of+antigens+from+antibodies.">Regeneration of ethyl parathion antibodies for repeated use in immunosensor: a study on dissociation of antigens from antibodies.</a> Biosens. Bioelectron. 20 (4), 903-906 (2004).</li><li>McGovern, J. P., Shih, W. Y., Shih, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+situ+detection+of+Bacillus+anthracis+spores+using+fully+submersible,+self-exciting,+self-sensing+PMN-PT/Sn+piezoelectric+microcantilevers.">In situ detection of Bacillus anthracis spores using fully submersible, self-exciting, self-sensing PMN-PT/Sn piezoelectric microcantilevers.</a> Analyst. 132 (8), 777-783 (2007).</li><li>Loo, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rapid+method+to+regenerate+piezoelectric+microcantilever+sensors+(PEMS).">A rapid method to regenerate piezoelectric microcantilever sensors (PEMS).</a> Sensors. 11 (5), 5520-5528 (2011).</li><li>Fischer, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gold+cleaning+methods+for+electrochemical+detection+applications.">Gold cleaning methods for electrochemical detection applications.</a> Microelectron. Eng. 86 (4-6), 1282-1285 (2009).</li></ol>

يمكننا تلخيص عدة الأساليب المتاحة17،،من2324،25،26 لتجديد الرقائق في الجدول 1. وتشارك هذه الأساليب أساسا، نسبيا قسوة الظروف التجريبية لتحقيق التجديد الكامل للرقائق بسبب وجود تفاعلات جزيء جزيء ق...

نظراً لأن كفاءة وأقل عملية تجريبية ذات العمالة الكثيفة، خالية من تسمية الخلية المستندة إلى التكنولوجيا شهدت نمواً سريعاً على مدى العقد الماضي لأغراض تحليلية، فضلا عن الفحص كما هو الحال في الجانب المتعلق بالبروتينات1،2 ، المخدرات تسليم3، إلخ4،5 مقارنة مع أساليب الكيمياء الحيوية التقليدية تهدف إلى تحليل الخلية، فحص الخلية خالية من التسمية في الوقت الحقيقي مع النموذج الأولى وضعتها جيفيير وزملاء العمل السابق6 يرتكز على مبدأ تسجيل التغييرات إشارة كهربائية على سطح الرقائق الدقيقة المرفقة بالخلية، التي تسمح بقياس مستمر لنمو الخلايا أو الهجرة بطريقة كمية. وفي أعقاب هذه الاستراتيجية، أطلق خلية في الوقت الحقيقي إلكترونية الاستشعار عن نظام (RT-مؤتمر الإحصائيين الأوروبيين) باستخدام مبدأ الكشف على أساس مقاومة كهربائية تم إدخال7،8 وهو محلل تجاري خلية في الوقت الحقيقي (RTCA) في الآونة الأخيرة لمختبر البحوث9.
محلل الخلية في الوقت الحقيقي التجاري أساسا يقرأ إشارات مقولة الخلايا لمقاومة الكهربائية، التي تنتج عن التغيرات الفسيولوجية للخلايا المحتضنة بما في ذلك انتشار الخلايا، والهجرة والبقاء، ومورفولوجيا والتقيد سطح الرقائق الدقيقة10،11. كذلك يتم تحويل هذه الإشارات الكهربائية بالمحلل إلى معلمة هو اسم فهرس الخلية (CI) لتقييم حالة الخلية. تغيير المقاومة من الرقائق الدقيقة أساسا يعكس البيئة الأيونية المحلية الخلايا المغطاة في واجهة القطب/الحل. ولذلك، الأداء التحليلي لمحلل الخلية تعتمد اعتماداً كبيرا على وحدة الاستشعار الأساسية، المتاح من الرقائق الدقيقة (أي، ما يسمى لوحات إلكترونية، مثلاً، 96/16/8-جيدا)، التي تصنع من صفت ميكروليكتروديس الذهب طباعة ليثوجرافيكالي في الجزء السفلي من الآبار الحضانة. ميكروليكتروديس الذهب التجمع في شكل خط في الدائرة (الشكل 1)، وتغطي معظم مساحة السطح من الآبار الحضانة، التي تسمح بالكشف عن الخلايا المرفقة3،12،13 حيوية وحساسة ،14. كاريتاس الدولية سوف تزيد في حالة المزيد من التغطية السطحية للخلايا على الرقاقة، وينخفض عندما تتعرض الخلايا لأنها سامة أسفر عن المبرمج. على الرغم من أن محلل الخلية في الوقت الحقيقي قد استخدمت غالباً لتحديد سيتوتوكسيسيتي11 والسمية العصبية15 وتوفير معلومات الحركية أكثر من أسلوب النهاية الكلاسيكية، لوحات إلكترونية يمكن التخلص منها هي تكلفة الاستهلاكية.
وحتى الآن، كانت هناك لا الأساليب المتاحة لتجديد اللوحة الإلكترونية، التي ربما يرجع ذلك إلى حقيقة أن شروط تجديد قاسية، مثل حمض الخليك أو حل البيرانا هي17تشارك16،، 18، وقد تغير الوضع الكهربائية للرقائق الذهبية. ولذلك، سوف يكون أسلوب معتدل وتتسم بالكفاءة لإزالة الخلايا ملتصقة وغيرها من المواد من سطح رقائق الذهب مرغوب فيه لعملية تجديد اللوحة الإلكترونية. وقد وضعنا مؤخرا بروتوكول يهدف إلى تجديد لوحات الإلكترونية المتاح باستخدام كواشف غير قابلة للتآكل ورقائق المجددة اتسمت الطرق الكهروكيميائية فضلا عن البصري19. باستخدام الكواشف المختبرية متوفرة بسهولة ومعتدلة بما في ذلك التربسين والايثانول، وقد أنشأنا طريقة عامة لتجديد اللوحة الإلكترونية التجارية دون الآثار السلبية، التي يتم تطبيقها بنجاح على تجديد هما النوعان الرئيسيان لوحة إلكترونية (16 و L8) المستخدمة ل RTCA.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1064">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Rat: Sprague-Dawley</td>
			<td style="width:317px;">Charles River</td>
			<td style="width:263px;">Cat# 400</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:293px;">mouse anti-rat CD11b monoclonal (clone OX42)</td>
			<td style="width:317px;">Bio-Rad</td>
			<td style="width:263px;">Cat# MCA275R</td>
			<td style="width:192px;">Panning: 1:1,000; Staining: 1:500</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Goat polycolonal anti-Iba1&#160;</td>
			<td style="width:317px;">Abcam</td>
			<td style="width:263px;">Cat# AB5076</td>
			<td style="width:192px;">Staining: 1:500</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Rabbit polyclonal anti-Ki67&#160;</td>
			<td style="width:317px;">Abcam&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Cat# AB15580</td>
			<td style="width:192px;">Staining: 1:500</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Alexa Fluor Donkey anti-mouse 594</td>
			<td style="width:317px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:263px;">Cat# 11055</td>
			<td style="width:192px;">Staining: 1:500</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Alexa Fluor Donkey anti-goat 488</td>
			<td style="width:317px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:263px;">Cat# A-21203</td>
			<td style="width:192px;">Staining: 1:500</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Alexa Fluor Donkey anti-Rabbit 647</td>
			<td style="width:317px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:263px;">Cat# A-31573</td>
			<td style="width:192px;">Staining: 1:500</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Triton-X (detergent in ICC staining)</td>
			<td style="width:317px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:263px;">Cat# 28313</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Heparan sulfate</td>
			<td style="width:317px;">Galen Laboratory Supplies</td>
			<td style="width:263px;">Cat# GAG-HS01</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Heparin</td>
			<td style="width:317px;">Sigma&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Cat# M3149</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Peptone from milk solids</td>
			<td style="width:317px;">Sigma</td>
			<td style="width:263px;">Cat# P6838</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">TGF-&#946;2</td>
			<td style="width:317px;">Peprotech</td>
			<td style="width:263px;">Cat# 100-35B</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Murine IL-34</td>
			<td style="width:317px;">R&#38;D Systems</td>
			<td style="width:263px;">Cat# 5195-ML/CF</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Ovine wool cholesterol</td>
			<td style="width:317px;">Avanti Polar Lipids</td>
			<td style="width:263px;">Cat# 700000P</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Collagen IV</td>
			<td style="width:317px;">Corning&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Cat# 354233</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Oleic acid</td>
			<td style="width:317px;">Cayman Chemicals&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Cat# 90260</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">11(Z)Eicosadienoic (Gondoic) Acid</td>
			<td style="width:317px;">Cayman Chemicals&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Cat# 20606</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Calcein AM dye</td>
			<td style="width:317px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:263px;">Cat# C3100MP</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Ethidium homodimer-1</td>
			<td style="width:317px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:263px;">Cat# E1169</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">DNaseI</td>
			<td style="width:317px;">Worthington</td>
			<td style="width:263px;">Cat# DPRFS</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Percoll PLUS</td>
			<td style="width:317px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:263px;">Cat# 17-5445-02</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Trypsin&#160;</td>
			<td style="width:317px;">Sigma</td>
			<td style="width:263px;">Cat# T9935</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">DMEM/F12</td>
			<td style="width:317px;">Gibco</td>
			<td style="width:263px;">Cat# 21041-02</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Penicillin/ Streptomycin</td>
			<td style="width:317px;">Gibco</td>
			<td style="width:263px;">Cat# 15140-122</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Glutamine</td>
			<td style="width:317px;">Gibco</td>
			<td style="width:263px;">Cat# 25030-081</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">N-acetyl cysteine&#160;</td>
			<td style="width:317px;">Sigma</td>
			<td style="width:263px;">Cat# A9165</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Insulin</td>
			<td style="width:317px;">Sigma</td>
			<td style="width:263px;">Cat# 16634</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Apo-transferrin&#160;</td>
			<td style="width:317px;">Sigma</td>
			<td style="width:263px;">Cat# T1147</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Sodium selenite</td>
			<td style="width:317px;">Sigma</td>
			<td style="width:263px;">Cat# S-5261</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">DMEM (high glucose)</td>
			<td style="width:317px;">Gibco</td>
			<td style="width:263px;">Cat# 11960-044</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Dapi Fluoromount-G</td>
			<td style="width:317px;">Southern Biotech</td>
			<td style="width:263px;">Cat# 0100-20&#160;</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Poly-D-Lysine&#160;</td>
			<td style="width:317px;">Sigma</td>
			<td style="width:263px;">Cat# A-003-E</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Primaria Plates&#160;</td>
			<td style="width:317px;">VWR</td>
			<td style="width:263px;">Cat# 62406-456</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:293px;">Stock reagents&#160;</td>
			<td style="width:317px;">reconstitution&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Concentration used</td>
			<td style="width:192px;">Storage</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Apo-transferrin</td>
			<td style="width:317px;">10 mg/mL in PBS&#160;</td>
			<td style="width:263px;">1:100</td>
			<td>-20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:293px;">N-acetyl cysteine</td>
			<td style="width:317px;">5 mg/mL in H2O&#160;</td>
			<td style="width:263px;">1:1,000</td>
			<td>-20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:293px;">Sodium selenite</td>
			<td style="width:317px;">2.5 mg/mL in H2O&#160;</td>
			<td style="width:263px;">1:25,000</td>
			<td>-20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Collagen IV</td>
			<td style="width:317px;">200 &#956;g/mL in PBS&#160;</td>
			<td style="width:263px;">1:100</td>
			<td>-80&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">TGF-b2</td>
			<td style="width:317px;">20 &#956;g/mL in PBS&#160;</td>
			<td style="width:263px;">1:10,000</td>
			<td>-20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">IL-34</td>
			<td style="width:317px;">100 &#956;g/mL in PBS&#160;</td>
			<td style="width:263px;">1:1,000</td>
			<td>-80&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Ovine wool cholesterol</td>
			<td style="width:317px;">1.5 mg/mL in 100% ethanol&#160;</td>
			<td style="width:263px;">1:1,000</td>
			<td>-20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:293px;">Heparan sulfate</td>
			<td style="width:317px;">1 mg/mL in H2O</td>
			<td style="width:263px;">1:1,000</td>
			<td>-20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:293px;">Oleic acid/Gondoic acid</td>
			<td style="width:317px;">Gondoic: 0.001 mg/mL; Oleic: 0.1 mg/mL in 100% ethanol&#160;</td>
			<td style="width:263px;">1:1,000</td>
			<td>-20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Heparin</td>
			<td style="width:317px;">50 mg/mL in PBS&#160;</td>
			<td style="width:263px;">1:100</td>
			<td>-20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:293px;">Solutions&#160;</td>
			<td style="width:317px;">Recipe&#160;</td>
			<td style="width:263px;"></td>
			<td style="width:192px;">Comments</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;">Perfusion Buffer</td>
			<td style="width:317px;">50 &#956;g/mL heparin in DPBS++ (PBS with Ca++ and Mg+ +)</td>
			<td style="width:263px;"></td>
			<td style="width:192px;">Use when ice-cold</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Douncing Buffer</td>
			<td style="width:317px;">200 &#956;L of 0.4% DNaseI in 50 mL of DPBS++</td>
			<td style="width:263px;"></td>
			<td style="width:192px;">Use when ice-cold</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Panning Buffer</td>
			<td style="width:317px;">2 mg/mL of peptone from milk solids in DPBS++</td>
			<td style="width:263px;"></td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="105">
			<td height="105" style="height:105px;">Microglia Growth Medium (MGM)</td>
			<td style="width:317px;">DMEM/F12 containing 100 units/mL penicillin, 100 &#956;g/mL streptomycin, 2 mM glutamine, 5 &#956;g/mL N-acetyl cysteine, 5 &#956;g/mL insulin, 100 &#956;g/mL apo-transferrin, and 100 ng/mL sodium selenite</td>
			<td style="width:263px;"></td>
			<td style="width:192px;">Use ice-cold MGM to pan microglia off of immnopanning dish.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Collagen IV Coating</td>
			<td style="width:317px;">MGM containing 2 &#956;g/mL collagen IV</td>
			<td style="width:263px;"></td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="50">
			<td height="50" style="height:50px;">Myelin Seperation Buffer</td>
			<td style="width:317px;">9 mL Percoll PLUS, 1 mL 10x PBS without Ca++ and Mg++, 9 &#956;L 1 M CaCl2, 5 &#956;L 1 M MgCl2</td>
			<td style="width:263px;"></td>
			<td style="width:192px;">Mix well after the addition of&#160; CaCl2 and MgCl2</td>
		</tr>
		<tr height="235">
			<td height="235" style="height:235px;width:293px;">TGF-b2/IL-34/Cholesterol containing growth media (TIC)&#160;</td>
			<td style="width:317px;">MGM containing human 2 ng/mL TGF-b2, 100 ng/mL murine IL-34, 1.5 &#956;g/mL ovine wool cholesterol, 10 &#956;g/mL heparan sulfate, 0.1 &#956;g/ml oleic acid, and 0.001 &#956;g/ml gondoic acid</td>
			<td style="width:263px;"></td>
			<td style="width:192px;">Make sure to add cholesterol to media warmed to 37 &#176;C and do not add more than 1.5 &#956;g/mL or it will precipitate out. Do not filter cholesterol-containing media. Equilibrate TIC media with 10% CO2 for 30 min- 1 hr before adding to cells to insure optimal pH.&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

regeneration of arrayed gold microelectrodes equipped for a real-time cell analyzer

تحليل يستند إلى الخلية خالية من التسمية مفيد لدراسة الكيمياء الحيوية نظراً لأنها لا تتطلب استخدام الحيوانات التجريبية. نظراً لقدرته على توفير معلومات أكثر دينامية حول الخلايا تحت ظروف فسيولوجية من فحوصات الكيمياء الحيوية الكلاسيكية، هذا الإنزيم الخلية خالية من التسمية في الوقت الحقيقي على أساس مبدأ مقاومة كهربائية هو جذب المزيد من الاهتمام في الماضي العقد. ومع ذلك، قد يكون استخدامها العملي محدودة بسبب تكلفة باهظة الثمن نسبيا للقياس، والتي تستخدم لمحلل الخلية مكلفة الرقائق الذهب المتاح للاستهلاك. في هذا البروتوكول، قمنا بتطوير استراتيجية عامة لتجديد ميكروليكتروديس الذهب صفت مجهزة لهو محلل خلية خالية من العلامة تجارية. وتشمل عملية التجديد الهضم التربسين، الشطف مع الإيثانول والمياه، وخطوة لغزل. الطريقة المقترحة قد تم اختبارها وأظهرت أن تكون فعالة للتجدد والاستخدام المتكرر للوحات الإلكترونية التجارية ثلاث مرات على الأقل، التي ستساعد الباحثين حفظ على التكلفة العالية لفحوصات الخلية في الوقت الحقيقي.

خصائص السطح من الرقائق الذهبية: تجديد الإجراءات المستخدمة في هذا البروتوكول كانت المبين في الشكل 1. ويبين الشكل 2 مجهرية سطح صور جديد وإعادة إنشاء لوحات إلكترونية بالمجهر الضوئي. كما هو مبين في الشكل 2 ألف</strong...

Watch this Scientific Journal Video about Regeneration of Arrayed Gold Microelectrodes Equipped for a Real-Time Cell Analyzer at JoVE.com

Regeneration of Arrayed Gold Microelectrodes Equipped for a Real-Time Cell Analyzer

ويصف هذا البروتوكول وضع استراتيجية عامة لتجديد التجارية ميكروليكتروديس الذهب صفت مجهزة لهو محلل خلية خالية من التسمية تهدف إلى إنقاذ على فحوصات أوفميكروتشيب-على أساس تكاليف تشغيل عالية. وتشمل عملية التجديد الهضم التربسين، الشطف مع الإيثانول والمياه، وخطوة لغزل، الذي يتيح للاستخدام المتكرر للرقائق.

تجديد ميكروليكتروديس الذهب صفت مجهزة لهو محلل خلية في الوقت الحقيقي

The label-free cell-based assay is advantageous for biochemical study because of it does not require the use of experimental animals. Due to its ability ...

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Highly Sensitive and Rapid Fluorescence Detection with a Portable FRET Analyzer

حساسة للغاية وسريع كشف الإسفار مع محلل الحنق المحمولة

Recent improvements in F&#246;rster resonance energy transfer (FRET) sensors have enabled their use to detect various small molecules including ions and ...

A Protein Preparation Method for the High-throughput Identification of Proteins Interacting with a Nuclear Cofactor Using LC-MS/MS Analysis

بروتين طريقة التحضير لتحديد إنتاجية عالية من البروتينات التفاعل مع العامل المساعد النووية عن طريق LC-MS / MS تحليل

Transcriptional coregulators are vital to the efficient transcriptional regulation of nuclear chromatin structure. Coregulators play a variety of roles in ...

Real-time Tracking of DNA Fragment Separation by Smartphone

في الوقت الحقيقي تتبع فصل جزء من الحمض النووي عن طريق الهاتف الذكي

Slab gel electrophoresis (SGE) is the most common method for the separation of DNA fragments; thus, it is broadly applied to the field of biology and ...

A Modified Yeast-one Hybrid System for Heteromeric Protein Complex-DNA Interaction Studies

A الخميرة تعديل واحد نظام هجين ل هيتيروميريك البروتين مجمع دنا التفاعل الدراسات

Over the years, the yeast one-hybrid assay has proven to be an important technique for the identification and validation of physical interactions between ...

A Fluorescence Fluctuation Spectroscopy Assay of Protein-Protein Interactions at Cell-Cell Contacts

تحليل الطيفي تقلب Fluorescence من تفاعلات البروتين البروتين في الخلية جهات الاتصال

A variety of biological processes involves cell-cell interactions, typically mediated by proteins that interact at the interface between neighboring ...

Real-time Observation of the DNA Strand Exchange Reaction Mediated by Rad51

المراقبة في الوقت الحقيقي من رد تبادل حبلا الحمض النووي توسط Rad51

The DNA strand exchange reaction mediated by Rad51 is a critical step of homologous recombination. In this reaction, Rad51 forms a nucleoprotein filament ...

Real-Time, Semi-Automated Fluorescent Measurement of the Airway Surface Liquid pH of Primary Human Airway Epithelial Cells

في الوقت الحقيقي ، وشبه التلقائي قياس الفلورسنت من الدرجة الهوائية السائل سطح المجري الجوي للخلايا الاساسيه الإنسان الظهاريه

In recent years, the importance of mucosal surface pH in the airways has been highlighted by its ability to regulate airway surface liquid (ASL) ...

Monitoring GPCR-&#946;-arrestin1/2 Interactions in Real Time Living Systems to Accelerate Drug Discovery

Monitoring GPCR-ÃƒÅ½Ã‚Â²-arrestin1/2 Interactions in Real Time Living Systems to Accelerate Drug Discovery

رصد GPCR-β-arrestin1/2 التفاعلات في أنظمة المعيشة في الوقت الحقيقي لتسريع اكتشاف المخدرات

Interactions between G-protein coupled receptors (GPCRs) and &#946;-arrestins are vital processes with physiological implications of great importance. ...

Using an Extracellular Flux Analyzer to Measure Changes in Glycolysis and Oxidative Phosphorylation during Mouse Sperm Capacitation

باستخدام محلل الجريان خارج الخلية لقياس التغيرات في تحلل الجلوكوز والاكسده اثناء الماوس العنبر التقوية

Mammalian sperm acquire fertilization capacity in the female reproductive tract in a process known as capacitation. Capacitation-associated processes ...

Measuring Nucleotide Binding to Intact, Functional Membrane Proteins in Real Time

قياس ارتباط النوكليوتيدات ببروتينات الغشاء الوظيفية السليمة في الوقت الفعلي

We have developed a method to measure binding of adenine nucleotides to intact, functional transmembrane receptors in a cellular or membrane environment. ...