Name: regeneration of arrayed gold microelectrodes equipped for a real-time cell analyzer
Uploaded: 2018-03-12T12:30:00
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일 국가 자연 과학 재단의 중국 (U1703118), 프로젝트 우선 순위 학술 프로그램 개발의 장쑤 등 교육 기관 (PAPD), 강 소 Shuangchuang 프로그램, 주 키의 오픈 펀드 자금에 의해 지원 되었다 화학/바이오 센 싱 및 Chemometrics (2016015)와 Biomacromolecules (2017kf05)의 국가 연구소 및 Jiangsu Specially-Appointed 교수 프로젝트, 중국의 실험실

주: 일반적으로, 재생성 프로세스 포함 한다 트립 신 소화와 에탄올과 물으로 헹 구는 단계. 소화 시간이 사용 하는 셀의 수에 따라 변경 하 고 사용 하는 셀의 수는 실험 목적에 따라 다를 수 있습니다. 광학 및 전기 화학적 방법을 사용 하 여 재생 조건 최적화 재생성 된 마이크로 칩을 확인 하는 것이 좋습니다. 실험 기간 동안 가용성과 불용 성 화학 물질 관련 되어있을 수 있습니다, 그리고 여기 ...

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	<li>Michaelis, S., Wegener, J., Robelek, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Label-free+monitoring+of+cell-based+assays:+Combining+impedance+analysis+with+SPR+for+multiparametric+cell+profiling.">Label-free monitoring of cell-based assays: Combining impedance analysis with SPR for multiparametric cell profiling.</a> Biosens. Bioelectron. 49, 63-70 (2013).</li><li>Hillger, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole-cell+biosensor+for+label-free+detection+of+GPCR-mediated+drug+responses+in+personal+cell+lines.">Whole-cell biosensor for label-free detection of GPCR-mediated drug responses in personal cell lines.</a> Biosens. Bioelectron. 74, 233-242 (2015).</li><li>Atienzar, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+real-time+cell+analyzer+technology+in+drug+discovery:+defining+optimal+cell+culture+conditions+and+assay+reproducibility+with+different+adherent+cellular+models.">The use of real-time cell analyzer technology in drug discovery: defining optimal cell culture conditions and assay reproducibility with different adherent cellular models.</a> J. Biomol. Screen. 16 (6), 575-587 (2011).</li><li>Chen, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Label-free+luminescent+mesoporous+silica+nanoparticles+for+imaging+and+drug+delivery.">Label-free luminescent mesoporous silica nanoparticles for imaging and drug delivery.</a> Theranostics. 3 (9), 650-657 (2013).</li><li>Gao, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silicon+Nanowire+Arrays+for+Label-Free+Detection+of+DNA.">Silicon Nanowire Arrays for Label-Free Detection of DNA.</a> Anal. Chem. 79 (9), 3291-3297 (2007).</li><li>Giaever, I., Keese, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+morphological+biosensor+for+mammalian+cells.">A morphological biosensor for mammalian cells.</a> Nature. 366 (6455), 591-592 (1993).</li><li>Xiao, C., Lachance, B., Sunahara, G., Luong, J. H. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+cytotoxicity+using+electric+cell-substrate+impedance+sensing:+concentration+and+time+response+function+approach.">Assessment of cytotoxicity using electric cell-substrate impedance sensing: concentration and time response function approach.</a> Anal. Chem. 74 (22), 5748-5753 (2002).</li><li>Xiao, C., Lachance, B., Sunahara, G., Luong, J. H. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+in-depth+analysis+of+electric+cell-substrate+impedance+sensing+to+study+the+attachment+and+spreading+of+mammalian+cells.">An in-depth analysis of electric cell-substrate impedance sensing to study the attachment and spreading of mammalian cells.</a> Anal. Chem. 74 (6), 1333-1339 (2002).</li><li>Xing, J. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+monitoring+of+cytotoxicity+on+microelectronic+sensors.">Dynamic monitoring of cytotoxicity on microelectronic sensors.</a> Chem. Res. Toxicol. 18 (2), 154-161 (2005).</li><li>Abassi, Y. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinetic+cell-based+morphological+screening:+prediction+of+mechanism+of+compound+action+and+off-target+effects.">Kinetic cell-based morphological screening: prediction of mechanism of compound action and off-target effects.</a> Chem. Biol. 16 (7), 712-723 (2009).</li><li>Urcan, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+xCELLigence+impedance+analysis+of+the+cytotoxicity+of+dental+composite+components+on+human+gingival+fibroblasts.">Real-time xCELLigence impedance analysis of the cytotoxicity of dental composite components on human gingival fibroblasts.</a> Dent. Mater. 26 (1), 51-58 (2010).</li><li>Atienza, J. M., Zhu, J., Wang, X., Xu, X., Abassi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+monitoring+of+cell+adhesion+and+spreading+on+microelectronic+sensor+arrays.">Dynamic monitoring of cell adhesion and spreading on microelectronic sensor arrays.</a> J. Biomol. Screen. 10 (8), 795-805 (2005).</li><li>Rahim, S., Uren, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Real-time+Electrical+Impedance+Based+Technique+to+Measure+Invasion+of+Endothelial+Cell+Monolayer+by+Cancer+Cells.">A Real-time Electrical Impedance Based Technique to Measure Invasion of Endothelial Cell Monolayer by Cancer Cells.</a> J. Vis. Exp. (50), e2792 (2011).</li><li>Moodley, K., Angel, C. E., Glass, M., Graham, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+profiling+of+NK+cell+killing+of+human+astrocytes+using+xCELLigence+technology.">Real-time profiling of NK cell killing of human astrocytes using xCELLigence technology.</a> J. Neurosci. Meth. 200 (2), 173-180 (2011).</li><li>Marinova, Z., Walitza, S., Grunblatt, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+impedance-based+cell+analyzer+as+a+tool+to+delineate+molecular+pathways+involved+in+neurotoxicity+and+neuroprotection+in+a+neuronal+cell+line.">Real-time impedance-based cell analyzer as a tool to delineate molecular pathways involved in neurotoxicity and neuroprotection in a neuronal cell line.</a> J. Vis. Exp. (90), e51748 (2014).</li><li>Chatelier, R. C., Gengenbach, T. R., Griesser, H. J., Brighamburke, M., Oshannessy, D. 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T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+regenerative+label-free+fiber+optic+sensor+using+surface+plasmon+resonance+for+clinical+diagnosis+of+fibrinogen.">A regenerative label-free fiber optic sensor using surface plasmon resonance for clinical diagnosis of fibrinogen.</a> Int. J. Nanomed. 10, 155-163 (2015).</li><li>Xu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+general+method+to+regenerate+arrayed+gold+microelectrodes+for+label-free+cell+assay.">A general method to regenerate arrayed gold microelectrodes for label-free cell assay.</a> Anal. Biochem. 516, 57-60 (2017).</li><li>Wang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensionally+controllable+synthesis+of+multichannel+silica+nanotubes+and+their+application+as+dual+drug+carriers.">Three-dimensionally controllable synthesis of multichannel silica nanotubes and their application as dual drug carriers.</a> ChemPlusChem. 80 (11), 1615-1623 (2015).</li><li>Verrier, S., Notingher, I., Polak, J. M., Hench, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+situ+monitoring+of+cell+death+using+Raman+microspectroscopy.">In situ monitoring of cell death using Raman microspectroscopy.</a> Biopolymers. 74 (1-2), 157-162 (2004).</li><li>Keighley, S. D., Li, P., Estrela, P., Migliorato, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+DNA+immobilization+on+gold+electrodes+for+label-free+detection+by+electrochemical+impedance+spectroscopy.">Optimization of DNA immobilization on gold electrodes for label-free detection by electrochemical impedance spectroscopy.</a> Biosens. Bioelectron. 23 (8), 1291-1297 (2008).</li><li>Kandimalla, V. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regeneration+of+ethyl+parathion+antibodies+for+repeated+use+in+immunosensor:+a+study+on+dissociation+of+antigens+from+antibodies.">Regeneration of ethyl parathion antibodies for repeated use in immunosensor: a study on dissociation of antigens from antibodies.</a> Biosens. Bioelectron. 20 (4), 903-906 (2004).</li><li>McGovern, J. P., Shih, W. Y., Shih, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+situ+detection+of+Bacillus+anthracis+spores+using+fully+submersible,+self-exciting,+self-sensing+PMN-PT/Sn+piezoelectric+microcantilevers.">In situ detection of Bacillus anthracis spores using fully submersible, self-exciting, self-sensing PMN-PT/Sn piezoelectric microcantilevers.</a> Analyst. 132 (8), 777-783 (2007).</li><li>Loo, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rapid+method+to+regenerate+piezoelectric+microcantilever+sensors+(PEMS).">A rapid method to regenerate piezoelectric microcantilever sensors (PEMS).</a> Sensors. 11 (5), 5520-5528 (2011).</li><li>Fischer, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gold+cleaning+methods+for+electrochemical+detection+applications.">Gold cleaning methods for electrochemical detection applications.</a> Microelectron. Eng. 86 (4-6), 1282-1285 (2009).</li></ol>

우리는 몇 가지 가능한 방법17,23,24,25,26 표 1에 마이크로 칩을 다시 생성에 대 한 요약. 기본적으로, 이러한 방법은 상대적으로 가혹한 실험 조건 면역 단지 SPR 칩에 사용 되는 등 강한 분자-분자 상호 작용의 존재 때문에 칩의 완전 한 재생을 달성에 참여. 그러나,...

레이블 없는 셀 기반 기술 proteomics1,2의 측면에서와 같은 분석으로 검사 목적을 위해 지난 10 년간 급속 한 성장을 목격 했다 때문에 그것의 효율적인 갈수록 많은 실험 과정, , 마약 배달3, 등4,5 비교 셀 분석, 프로토 이전 Giaever 및 동료에 의해 개발 된6 라벨 무료 실시간 세포 분석 실험 목적으로 전통적인 생 화 확 적인 방법으로 정량 방식으로 세포 성장 또는 마이그레이션의 연속 측정을 허용 하는 셀에 연결 된 마이크로 칩의 표면에 전기 신호 변화를 기록 하는 원칙에 기반. 이 전략에 따라 실시간 셀 전기 임피던스 기반 탐지 원리를 사용 하 여 (RT-CES) 시스템은 도입된7,8 그리고 더 최근의 상업 실시간 세포 분석기 (RTCA) 감지 전자 출범 실험실 연구9에 대 한.
상업 실시간 세포 분석기 주로 incubated 세포 등 세포 증식, 마이그레이션, 생존, 형태학, 준수에의 생리 적 변화에서 결과 전기 임피던스의 evoked 신호에 세포 읽는다 고 마이크로 칩10,11의 표면. 이러한 전기 신호는 더 셀 상태를 평가 하기 위해 셀 인덱스 (CI) 라는 크기가 없는 매개 변수 변환 분석기. 마이크로 칩의 임피던스의 변화는 주로 전극/솔루션 인터페이스에 대상된 셀의 로컬 이온 환경을 반영합니다. 따라서, 세포 분석기의 분석 성능 핵심 감지 장치, 일회용 마이크로 (즉, 소위 전자 판, 예를 들어, 96/16/8-잘), 기준점과 골드 microelectrodes로 만들어진에 크게 의존 있고 외피 우물의 바닥에 인쇄. 금 microelectrodes 원에 선 형식 (그림 1)에서 조립 및 연결 된 셀3,12,13의 역동적이 고 민감한 탐지를 허용 하는 인큐베이션 우물의 표면적의 대부분을 커버 ,14. CI의 셀 칩, 더 많은 표면 적용의 경우 증가 하 고 세포 apoptosis의 결과로 toxicant에 노출 되 면 감소. 일회용 전자 격판덮개는 물가가 가장 비싼는 비록 실시간 세포 분석기 자주 사용 세포 독성11 neurotoxicity15 결정 클래식 끝점 방법 보다 더 많은 운동 정보를 제공 하 소모품입니다.
지금까지, 아니 사용할 수 있는 메서드는 아마도 사실은 피 솔루션 또는 초 산 등의 가혹한 재생 조건 관련된16,17, 는 전자 판의 재생을 위한 되었습니다. 18, 하 금 마이크로 칩의 전기 상태를 변경할 수 있습니다. 따라서, 골드 칩의 표면에서 부착 세포와 다른 물질을 제거 하는 온화 하 고 효율적인 방법 전자 판 재생 프로세스에 대 한 바람직한 것입니다. 우리는 최근 일회용 전자 번호판 비 부식성 시 약을 사용 하 여 재생 하기 위한 프로토콜을 개발 하 고 재생성된 칩 광학 뿐만 아니라 전기 화학 방법19특징 이었다. 트립 신, 에탄올 등 쉽게 구할 수 있고 온건 실험실 시 약을 사용해 서, 우리는 두 가지 주요 유형 생성에 성공적으로 적용 되는 불리 한 효과 없이 상업적인 전자 접시를 다시 생성 하는 일반적인 방법 설립 전자 판의 RTCA (16, L8) 사용.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1064">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Rat: Sprague-Dawley</td>
			<td style="width:317px;">Charles River</td>
			<td style="width:263px;">Cat# 400</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:293px;">mouse anti-rat CD11b monoclonal (clone OX42)</td>
			<td style="width:317px;">Bio-Rad</td>
			<td style="width:263px;">Cat# MCA275R</td>
			<td style="width:192px;">Panning: 1:1,000; Staining: 1:500</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Goat polycolonal anti-Iba1&#160;</td>
			<td style="width:317px;">Abcam</td>
			<td style="width:263px;">Cat# AB5076</td>
			<td style="width:192px;">Staining: 1:500</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Rabbit polyclonal anti-Ki67&#160;</td>
			<td style="width:317px;">Abcam&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Cat# AB15580</td>
			<td style="width:192px;">Staining: 1:500</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Alexa Fluor Donkey anti-mouse 594</td>
			<td style="width:317px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:263px;">Cat# 11055</td>
			<td style="width:192px;">Staining: 1:500</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Alexa Fluor Donkey anti-goat 488</td>
			<td style="width:317px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:263px;">Cat# A-21203</td>
			<td style="width:192px;">Staining: 1:500</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Alexa Fluor Donkey anti-Rabbit 647</td>
			<td style="width:317px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:263px;">Cat# A-31573</td>
			<td style="width:192px;">Staining: 1:500</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Triton-X (detergent in ICC staining)</td>
			<td style="width:317px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:263px;">Cat# 28313</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Heparan sulfate</td>
			<td style="width:317px;">Galen Laboratory Supplies</td>
			<td style="width:263px;">Cat# GAG-HS01</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Heparin</td>
			<td style="width:317px;">Sigma&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Cat# M3149</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Peptone from milk solids</td>
			<td style="width:317px;">Sigma</td>
			<td style="width:263px;">Cat# P6838</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">TGF-&#946;2</td>
			<td style="width:317px;">Peprotech</td>
			<td style="width:263px;">Cat# 100-35B</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Murine IL-34</td>
			<td style="width:317px;">R&#38;D Systems</td>
			<td style="width:263px;">Cat# 5195-ML/CF</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Ovine wool cholesterol</td>
			<td style="width:317px;">Avanti Polar Lipids</td>
			<td style="width:263px;">Cat# 700000P</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Collagen IV</td>
			<td style="width:317px;">Corning&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Cat# 354233</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Oleic acid</td>
			<td style="width:317px;">Cayman Chemicals&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Cat# 90260</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">11(Z)Eicosadienoic (Gondoic) Acid</td>
			<td style="width:317px;">Cayman Chemicals&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Cat# 20606</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Calcein AM dye</td>
			<td style="width:317px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:263px;">Cat# C3100MP</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Ethidium homodimer-1</td>
			<td style="width:317px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:263px;">Cat# E1169</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">DNaseI</td>
			<td style="width:317px;">Worthington</td>
			<td style="width:263px;">Cat# DPRFS</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Percoll PLUS</td>
			<td style="width:317px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:263px;">Cat# 17-5445-02</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Trypsin&#160;</td>
			<td style="width:317px;">Sigma</td>
			<td style="width:263px;">Cat# T9935</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">DMEM/F12</td>
			<td style="width:317px;">Gibco</td>
			<td style="width:263px;">Cat# 21041-02</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Penicillin/ Streptomycin</td>
			<td style="width:317px;">Gibco</td>
			<td style="width:263px;">Cat# 15140-122</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Glutamine</td>
			<td style="width:317px;">Gibco</td>
			<td style="width:263px;">Cat# 25030-081</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">N-acetyl cysteine&#160;</td>
			<td style="width:317px;">Sigma</td>
			<td style="width:263px;">Cat# A9165</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Insulin</td>
			<td style="width:317px;">Sigma</td>
			<td style="width:263px;">Cat# 16634</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Apo-transferrin&#160;</td>
			<td style="width:317px;">Sigma</td>
			<td style="width:263px;">Cat# T1147</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Sodium selenite</td>
			<td style="width:317px;">Sigma</td>
			<td style="width:263px;">Cat# S-5261</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">DMEM (high glucose)</td>
			<td style="width:317px;">Gibco</td>
			<td style="width:263px;">Cat# 11960-044</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Dapi Fluoromount-G</td>
			<td style="width:317px;">Southern Biotech</td>
			<td style="width:263px;">Cat# 0100-20&#160;</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Poly-D-Lysine&#160;</td>
			<td style="width:317px;">Sigma</td>
			<td style="width:263px;">Cat# A-003-E</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Primaria Plates&#160;</td>
			<td style="width:317px;">VWR</td>
			<td style="width:263px;">Cat# 62406-456</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:293px;">Stock reagents&#160;</td>
			<td style="width:317px;">reconstitution&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Concentration used</td>
			<td style="width:192px;">Storage</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Apo-transferrin</td>
			<td style="width:317px;">10 mg/mL in PBS&#160;</td>
			<td style="width:263px;">1:100</td>
			<td>-20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:293px;">N-acetyl cysteine</td>
			<td style="width:317px;">5 mg/mL in H2O&#160;</td>
			<td style="width:263px;">1:1,000</td>
			<td>-20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:293px;">Sodium selenite</td>
			<td style="width:317px;">2.5 mg/mL in H2O&#160;</td>
			<td style="width:263px;">1:25,000</td>
			<td>-20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Collagen IV</td>
			<td style="width:317px;">200 &#956;g/mL in PBS&#160;</td>
			<td style="width:263px;">1:100</td>
			<td>-80&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">TGF-b2</td>
			<td style="width:317px;">20 &#956;g/mL in PBS&#160;</td>
			<td style="width:263px;">1:10,000</td>
			<td>-20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">IL-34</td>
			<td style="width:317px;">100 &#956;g/mL in PBS&#160;</td>
			<td style="width:263px;">1:1,000</td>
			<td>-80&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Ovine wool cholesterol</td>
			<td style="width:317px;">1.5 mg/mL in 100% ethanol&#160;</td>
			<td style="width:263px;">1:1,000</td>
			<td>-20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:293px;">Heparan sulfate</td>
			<td style="width:317px;">1 mg/mL in H2O</td>
			<td style="width:263px;">1:1,000</td>
			<td>-20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:293px;">Oleic acid/Gondoic acid</td>
			<td style="width:317px;">Gondoic: 0.001 mg/mL; Oleic: 0.1 mg/mL in 100% ethanol&#160;</td>
			<td style="width:263px;">1:1,000</td>
			<td>-20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Heparin</td>
			<td style="width:317px;">50 mg/mL in PBS&#160;</td>
			<td style="width:263px;">1:100</td>
			<td>-20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:293px;">Solutions&#160;</td>
			<td style="width:317px;">Recipe&#160;</td>
			<td style="width:263px;"></td>
			<td style="width:192px;">Comments</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;">Perfusion Buffer</td>
			<td style="width:317px;">50 &#956;g/mL heparin in DPBS++ (PBS with Ca++ and Mg+ +)</td>
			<td style="width:263px;"></td>
			<td style="width:192px;">Use when ice-cold</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Douncing Buffer</td>
			<td style="width:317px;">200 &#956;L of 0.4% DNaseI in 50 mL of DPBS++</td>
			<td style="width:263px;"></td>
			<td style="width:192px;">Use when ice-cold</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Panning Buffer</td>
			<td style="width:317px;">2 mg/mL of peptone from milk solids in DPBS++</td>
			<td style="width:263px;"></td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="105">
			<td height="105" style="height:105px;">Microglia Growth Medium (MGM)</td>
			<td style="width:317px;">DMEM/F12 containing 100 units/mL penicillin, 100 &#956;g/mL streptomycin, 2 mM glutamine, 5 &#956;g/mL N-acetyl cysteine, 5 &#956;g/mL insulin, 100 &#956;g/mL apo-transferrin, and 100 ng/mL sodium selenite</td>
			<td style="width:263px;"></td>
			<td style="width:192px;">Use ice-cold MGM to pan microglia off of immnopanning dish.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Collagen IV Coating</td>
			<td style="width:317px;">MGM containing 2 &#956;g/mL collagen IV</td>
			<td style="width:263px;"></td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="50">
			<td height="50" style="height:50px;">Myelin Seperation Buffer</td>
			<td style="width:317px;">9 mL Percoll PLUS, 1 mL 10x PBS without Ca++ and Mg++, 9 &#956;L 1 M CaCl2, 5 &#956;L 1 M MgCl2</td>
			<td style="width:263px;"></td>
			<td style="width:192px;">Mix well after the addition of&#160; CaCl2 and MgCl2</td>
		</tr>
		<tr height="235">
			<td height="235" style="height:235px;width:293px;">TGF-b2/IL-34/Cholesterol containing growth media (TIC)&#160;</td>
			<td style="width:317px;">MGM containing human 2 ng/mL TGF-b2, 100 ng/mL murine IL-34, 1.5 &#956;g/mL ovine wool cholesterol, 10 &#956;g/mL heparan sulfate, 0.1 &#956;g/ml oleic acid, and 0.001 &#956;g/ml gondoic acid</td>
			<td style="width:263px;"></td>
			<td style="width:192px;">Make sure to add cholesterol to media warmed to 37 &#176;C and do not add more than 1.5 &#956;g/mL or it will precipitate out. Do not filter cholesterol-containing media. Equilibrate TIC media with 10% CO2 for 30 min- 1 hr before adding to cells to insure optimal pH.&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

regeneration of arrayed gold microelectrodes equipped for a real-time cell analyzer

레이블 없는 세포 기반 분석 결과 유리한 그것 때문에 생 화 확 적인 연구 실험 동물의 사용을 요구 하지 않습니다. 고아 한 생 화 확 적인 분석 실험 보다 생리 적 조건 하에서 세포에 대 한 보다 동적인 정보를 제공 하는 기능 때문이 라벨 무료 실시간 셀 분석 결과 전기 임피던스 원리에 따라 과거 동안 더 많은 관심 유치는 10 년입니다. 그러나, 그것의 실용적인 활용 비싼 소모품 일회용 골드 마이크로칩이 세포 분석기에 사용 되는 측정의 상대적으로 비싼 비용으로 인해 제한 된 수 있습니다. 이 프로토콜에서 우리는 상업 레이블 없는 세포 분석기 장착 기준점과 골드 microelectrodes를 다시 생성 하는 일반적인 전략을 개발 했습니다. 재생성 프로세스 트립 신 소화, 에탄올과 물, 그리고 회전 단계와 rinsing 포함 되어 있습니다. 제안 된 메서드는 테스트 되었고 세 번 이상 중생 및 상업적인 전자 번호판의 반복된 사용에 대 한 효과적인 것으로 표시 실시간 세포 분석 실험의 높은 운영 비용에 저장 연구를 도움이 될 것입니다.

골드 마이크로 칩의 표면 특성:이 프로토콜에 사용 되는 재생 절차는 그림 1에 설명 했다. 그림 2 는 미세한 표면 신선한의 사진 및 광학 현미경에 의해 전자 번호판을 다시 생성. 같이 그림 2A 에 그림 2C, 현미경 관찰 표시 했음을 사실상 마이크로 칩의 광학...

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Regeneration of Arrayed Gold Microelectrodes Equipped for a Real-Time Cell Analyzer

이 프로토콜 높은 실행 비용 ofmicrochip 기반 분석에 절약 목적으로 레이블 없는 세포 분석기 장착 상업 기준점과 골드 microelectrodes를 다시 생성 하는 일반적인 전략을 설명 합니다. 재생성 프로세스 트립 신 소화, 에탄올과 물, 그리고 마이크로 칩의 반복된 사용을 가능 하 게 회전 단계와 rinsing 포함 되어 있습니다.

실시간 세포 분석기 장착 기준점과 골드 Microelectrodes의 재생

The label-free cell-based assay is advantageous for biochemical study because of it does not require the use of experimental animals. Due to its ability ...

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Highly Sensitive and Rapid Fluorescence Detection with a Portable FRET Analyzer

휴대용 FRET 분석과 고감도 및 고속 형광 검출

Recent improvements in F&#246;rster resonance energy transfer (FRET) sensors have enabled their use to detect various small molecules including ions and ...

연구

생화학

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LC-MS / MS 분석을 이용하여 핵 공동 인자와 상호 작용 단백질의 높은 처리량 식별 단백질 제조 방법

Transcriptional coregulators are vital to the efficient transcriptional regulation of nuclear chromatin structure. Coregulators play a variety of roles in ...

Real-time Tracking of DNA Fragment Separation by Smartphone

Smartphone을 이용한 DNA 단편 분리 실시간 추적

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A Modified Yeast-one Hybrid System for Heteromeric Protein Complex-DNA Interaction Studies

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Over the years, the yeast one-hybrid assay has proven to be an important technique for the identification and validation of physical interactions between ...

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A variety of biological processes involves cell-cell interactions, typically mediated by proteins that interact at the interface between neighboring ...

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