Name: regeneration of arrayed gold microelectrodes equipped for a real-time cell analyzer
Uploaded: 2018-03-12T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Regeneration of Arrayed Gold Microelectrodes Equipped for a Real-Time Cell Analyzer at JoVE.com

Работа была поддержана национальной естественных наук фонд Китая (U1703118), проект, финансируемый приоритет академической программы развития из Цзянсу высшее образование учреждений (PAPD), Цзянсу Shuangchuang программы, открытые фонды государственного ключа Лаборатория для химиотерапии/Biosensing и хемометрике (2016015) и национальной лаборатории биомакромолекулах (2017kf05) и профессор Jiangsu Specially-Appointed проекта, Китай.

Примечание: В общем, процесс регенерации включает Пищеварение трипсина и полоща шаг с этанол и вода. Пищеварение время меняется в зависимости от количество ячеек, которые используются, и тип и количество ячеек, которые используются могут отличаться в зависимости от экспериментальных ц...

<ol>
	<li>Michaelis, S., Wegener, J., Robelek, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Label-free+monitoring+of+cell-based+assays:+Combining+impedance+analysis+with+SPR+for+multiparametric+cell+profiling.">Label-free monitoring of cell-based assays: Combining impedance analysis with SPR for multiparametric cell profiling.</a> Biosens. Bioelectron. 49, 63-70 (2013).</li><li>Hillger, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole-cell+biosensor+for+label-free+detection+of+GPCR-mediated+drug+responses+in+personal+cell+lines.">Whole-cell biosensor for label-free detection of GPCR-mediated drug responses in personal cell lines.</a> Biosens. Bioelectron. 74, 233-242 (2015).</li><li>Atienzar, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+real-time+cell+analyzer+technology+in+drug+discovery:+defining+optimal+cell+culture+conditions+and+assay+reproducibility+with+different+adherent+cellular+models.">The use of real-time cell analyzer technology in drug discovery: defining optimal cell culture conditions and assay reproducibility with different adherent cellular models.</a> J. Biomol. Screen. 16 (6), 575-587 (2011).</li><li>Chen, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Label-free+luminescent+mesoporous+silica+nanoparticles+for+imaging+and+drug+delivery.">Label-free luminescent mesoporous silica nanoparticles for imaging and drug delivery.</a> Theranostics. 3 (9), 650-657 (2013).</li><li>Gao, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silicon+Nanowire+Arrays+for+Label-Free+Detection+of+DNA.">Silicon Nanowire Arrays for Label-Free Detection of DNA.</a> Anal. Chem. 79 (9), 3291-3297 (2007).</li><li>Giaever, I., Keese, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+morphological+biosensor+for+mammalian+cells.">A morphological biosensor for mammalian cells.</a> Nature. 366 (6455), 591-592 (1993).</li><li>Xiao, C., Lachance, B., Sunahara, G., Luong, J. H. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+cytotoxicity+using+electric+cell-substrate+impedance+sensing:+concentration+and+time+response+function+approach.">Assessment of cytotoxicity using electric cell-substrate impedance sensing: concentration and time response function approach.</a> Anal. Chem. 74 (22), 5748-5753 (2002).</li><li>Xiao, C., Lachance, B., Sunahara, G., Luong, J. H. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+in-depth+analysis+of+electric+cell-substrate+impedance+sensing+to+study+the+attachment+and+spreading+of+mammalian+cells.">An in-depth analysis of electric cell-substrate impedance sensing to study the attachment and spreading of mammalian cells.</a> Anal. Chem. 74 (6), 1333-1339 (2002).</li><li>Xing, J. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+monitoring+of+cytotoxicity+on+microelectronic+sensors.">Dynamic monitoring of cytotoxicity on microelectronic sensors.</a> Chem. Res. Toxicol. 18 (2), 154-161 (2005).</li><li>Abassi, Y. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinetic+cell-based+morphological+screening:+prediction+of+mechanism+of+compound+action+and+off-target+effects.">Kinetic cell-based morphological screening: prediction of mechanism of compound action and off-target effects.</a> Chem. Biol. 16 (7), 712-723 (2009).</li><li>Urcan, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+xCELLigence+impedance+analysis+of+the+cytotoxicity+of+dental+composite+components+on+human+gingival+fibroblasts.">Real-time xCELLigence impedance analysis of the cytotoxicity of dental composite components on human gingival fibroblasts.</a> Dent. Mater. 26 (1), 51-58 (2010).</li><li>Atienza, J. M., Zhu, J., Wang, X., Xu, X., Abassi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+monitoring+of+cell+adhesion+and+spreading+on+microelectronic+sensor+arrays.">Dynamic monitoring of cell adhesion and spreading on microelectronic sensor arrays.</a> J. Biomol. Screen. 10 (8), 795-805 (2005).</li><li>Rahim, S., Uren, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Real-time+Electrical+Impedance+Based+Technique+to+Measure+Invasion+of+Endothelial+Cell+Monolayer+by+Cancer+Cells.">A Real-time Electrical Impedance Based Technique to Measure Invasion of Endothelial Cell Monolayer by Cancer Cells.</a> J. Vis. Exp. (50), e2792 (2011).</li><li>Moodley, K., Angel, C. E., Glass, M., Graham, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+profiling+of+NK+cell+killing+of+human+astrocytes+using+xCELLigence+technology.">Real-time profiling of NK cell killing of human astrocytes using xCELLigence technology.</a> J. Neurosci. Meth. 200 (2), 173-180 (2011).</li><li>Marinova, Z., Walitza, S., Grunblatt, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+impedance-based+cell+analyzer+as+a+tool+to+delineate+molecular+pathways+involved+in+neurotoxicity+and+neuroprotection+in+a+neuronal+cell+line.">Real-time impedance-based cell analyzer as a tool to delineate molecular pathways involved in neurotoxicity and neuroprotection in a neuronal cell line.</a> J. Vis. Exp. (90), e51748 (2014).</li><li>Chatelier, R. C., Gengenbach, T. R., Griesser, H. J., Brighamburke, M., Oshannessy, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+general+method+to+recondition+and+reuse+Biacore+sensor+chips+fouled+with+covalently+immobilized+protein/peptide.">A general method to recondition and reuse Biacore sensor chips fouled with covalently immobilized protein/peptide.</a> Anal. Biochem. 229 (1), 112-118 (1995).</li><li>Vashist, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+regenerating+gold+surface+for+prolonged+reuse+of+gold-coated+surface+plasmon+resonance+chip.">A method for regenerating gold surface for prolonged reuse of gold-coated surface plasmon resonance chip.</a> Anal. Biochem. 423 (1), 23-25 (2012).</li><li>Nguyen, T. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+regenerative+label-free+fiber+optic+sensor+using+surface+plasmon+resonance+for+clinical+diagnosis+of+fibrinogen.">A regenerative label-free fiber optic sensor using surface plasmon resonance for clinical diagnosis of fibrinogen.</a> Int. J. Nanomed. 10, 155-163 (2015).</li><li>Xu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+general+method+to+regenerate+arrayed+gold+microelectrodes+for+label-free+cell+assay.">A general method to regenerate arrayed gold microelectrodes for label-free cell assay.</a> Anal. Biochem. 516, 57-60 (2017).</li><li>Wang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensionally+controllable+synthesis+of+multichannel+silica+nanotubes+and+their+application+as+dual+drug+carriers.">Three-dimensionally controllable synthesis of multichannel silica nanotubes and their application as dual drug carriers.</a> ChemPlusChem. 80 (11), 1615-1623 (2015).</li><li>Verrier, S., Notingher, I., Polak, J. M., Hench, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+situ+monitoring+of+cell+death+using+Raman+microspectroscopy.">In situ monitoring of cell death using Raman microspectroscopy.</a> Biopolymers. 74 (1-2), 157-162 (2004).</li><li>Keighley, S. D., Li, P., Estrela, P., Migliorato, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+DNA+immobilization+on+gold+electrodes+for+label-free+detection+by+electrochemical+impedance+spectroscopy.">Optimization of DNA immobilization on gold electrodes for label-free detection by electrochemical impedance spectroscopy.</a> Biosens. Bioelectron. 23 (8), 1291-1297 (2008).</li><li>Kandimalla, V. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regeneration+of+ethyl+parathion+antibodies+for+repeated+use+in+immunosensor:+a+study+on+dissociation+of+antigens+from+antibodies.">Regeneration of ethyl parathion antibodies for repeated use in immunosensor: a study on dissociation of antigens from antibodies.</a> Biosens. Bioelectron. 20 (4), 903-906 (2004).</li><li>McGovern, J. P., Shih, W. Y., Shih, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+situ+detection+of+Bacillus+anthracis+spores+using+fully+submersible,+self-exciting,+self-sensing+PMN-PT/Sn+piezoelectric+microcantilevers.">In situ detection of Bacillus anthracis spores using fully submersible, self-exciting, self-sensing PMN-PT/Sn piezoelectric microcantilevers.</a> Analyst. 132 (8), 777-783 (2007).</li><li>Loo, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rapid+method+to+regenerate+piezoelectric+microcantilever+sensors+(PEMS).">A rapid method to regenerate piezoelectric microcantilever sensors (PEMS).</a> Sensors. 11 (5), 5520-5528 (2011).</li><li>Fischer, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gold+cleaning+methods+for+electrochemical+detection+applications.">Gold cleaning methods for electrochemical detection applications.</a> Microelectron. Eng. 86 (4-6), 1282-1285 (2009).</li></ol>

Мы кратко несколько доступных методов17,23,24,25,26 для регенерации микросхемы в таблице 1. В основном эти методы участвует относительно суровые экспериментальных условий для достижения полно?...

Из-за его эффективное и менее трудоемкий процесс экспериментальной лейбл свободной ячейки-технологии на основе стал свидетелем быстрого роста за последнее десятилетие в целях как аналитической, так и отбора таких как в аспекте протеомики1,2 , препарат доставки3, и т.д.4,5 по сравнению с традиционными биохимических методов, направленных на анализ клеток, assay этикетка бесплатно реального времени клетки с прототип, разработанный Giaever и coworkers ранее6 основана на принципе регистрации изменений электрического сигнала на поверхности клеток придает микрочипы, которые допускают непрерывного измерения роста клеток или миграции в количественном выражении. Следуя этой стратегии был запущен в реальном времени ячейки электронной зондирования (RT-КЕС) системы, используя принцип электрическое сопротивление на основе обнаружения был представлен7,8 и совсем недавно коммерческой реального времени ячейки анализатор (RTCA) для лабораторных исследований9.
Главным образом, коммерческие реального времени ячейки анализатор считывает клеток вызвали сигналы электрического сопротивления, которые приводят к от физиологических изменений инкубирован клеток, включая пролиферацию клеток, миграции, жизнеспособность, морфология и соблюдение на поверхность микросхемы,1011. Такие электрические сигналы далее преобразуются Безразмерный параметр с именем индекса ячейки (CI) для оценки состояния ячейки в анализатор. Изменение сопротивления микросхемы отражает главным образом местных ионных окружающей среды покрыты клеток в интерфейсе электрода/решения. Таким образом аналитическая производительность анализатор клеток полагается на ядро зондирования блок, одноразовые микросхемы (то есть, так называемые электронные пластины, например, 96/16/8-Ну), изготовленные из выстроились золото микроэлектродов lithographically печать в нижней части скважины инкубации. Золото микроэлектродов собрать в формате круг на линия (рис. 1) и покрывают большую часть площади поверхности инкубации скважин, которые позволяют для обнаружения динамических и чувствительных прилагаемый клетки3,12,13 ,14. CI увеличит в случае более поверхности покрытия клеток на чипе и уменьшаться, когда клетки подвергаются токсикант, что приводит к апоптозу. Хотя анализатор реального времени клетки часто использовался для определения цитотоксичность11 и нейротоксичность15 и предоставить больше кинетическая информации, чем классическая конечных точек метод, одноразовые электронные пластины являются дорогостоящая Расходные материалы.
До сих пор были не доступны методы для регенерации электронных пластины, которая, вероятно, объясняется тем, что суровые регенерации условия, такие как пираньи решения или уксусной кислоты являются участие16,17, 18, которые могут изменить состояние электрических золотые микросхемы. Таким образом мягкий и эффективный метод для удаления адэрентных клеток и других веществ с поверхности золотые фишки будет желательным для процесса регенерации электронных пластины. Мы недавно разработали протокол, направленный на регенерацию одноразовых электронных плит с использованием неагрессивных реагентов и регенерированный фишки характеризовались электрохимический, а также оптические методы19. С помощью легко доступных и умеренные лабораторных реагентов, включая трипсина и этанола, мы создали общий метод для повторного создания коммерческих электронных пластину без побочных эффектов, который успешно применяется для регенерации два основных типа электронные пластины (16 и L8) используется для RTCA.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1064">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Rat: Sprague-Dawley</td>
			<td style="width:317px;">Charles River</td>
			<td style="width:263px;">Cat# 400</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:293px;">mouse anti-rat CD11b monoclonal (clone OX42)</td>
			<td style="width:317px;">Bio-Rad</td>
			<td style="width:263px;">Cat# MCA275R</td>
			<td style="width:192px;">Panning: 1:1,000; Staining: 1:500</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Goat polycolonal anti-Iba1&#160;</td>
			<td style="width:317px;">Abcam</td>
			<td style="width:263px;">Cat# AB5076</td>
			<td style="width:192px;">Staining: 1:500</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Rabbit polyclonal anti-Ki67&#160;</td>
			<td style="width:317px;">Abcam&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Cat# AB15580</td>
			<td style="width:192px;">Staining: 1:500</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Alexa Fluor Donkey anti-mouse 594</td>
			<td style="width:317px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:263px;">Cat# 11055</td>
			<td style="width:192px;">Staining: 1:500</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Alexa Fluor Donkey anti-goat 488</td>
			<td style="width:317px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:263px;">Cat# A-21203</td>
			<td style="width:192px;">Staining: 1:500</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Alexa Fluor Donkey anti-Rabbit 647</td>
			<td style="width:317px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:263px;">Cat# A-31573</td>
			<td style="width:192px;">Staining: 1:500</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Triton-X (detergent in ICC staining)</td>
			<td style="width:317px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:263px;">Cat# 28313</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Heparan sulfate</td>
			<td style="width:317px;">Galen Laboratory Supplies</td>
			<td style="width:263px;">Cat# GAG-HS01</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Heparin</td>
			<td style="width:317px;">Sigma&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Cat# M3149</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Peptone from milk solids</td>
			<td style="width:317px;">Sigma</td>
			<td style="width:263px;">Cat# P6838</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">TGF-&#946;2</td>
			<td style="width:317px;">Peprotech</td>
			<td style="width:263px;">Cat# 100-35B</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Murine IL-34</td>
			<td style="width:317px;">R&#38;D Systems</td>
			<td style="width:263px;">Cat# 5195-ML/CF</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Ovine wool cholesterol</td>
			<td style="width:317px;">Avanti Polar Lipids</td>
			<td style="width:263px;">Cat# 700000P</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Collagen IV</td>
			<td style="width:317px;">Corning&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Cat# 354233</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Oleic acid</td>
			<td style="width:317px;">Cayman Chemicals&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Cat# 90260</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">11(Z)Eicosadienoic (Gondoic) Acid</td>
			<td style="width:317px;">Cayman Chemicals&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Cat# 20606</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Calcein AM dye</td>
			<td style="width:317px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:263px;">Cat# C3100MP</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Ethidium homodimer-1</td>
			<td style="width:317px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:263px;">Cat# E1169</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">DNaseI</td>
			<td style="width:317px;">Worthington</td>
			<td style="width:263px;">Cat# DPRFS</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Percoll PLUS</td>
			<td style="width:317px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:263px;">Cat# 17-5445-02</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Trypsin&#160;</td>
			<td style="width:317px;">Sigma</td>
			<td style="width:263px;">Cat# T9935</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">DMEM/F12</td>
			<td style="width:317px;">Gibco</td>
			<td style="width:263px;">Cat# 21041-02</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Penicillin/ Streptomycin</td>
			<td style="width:317px;">Gibco</td>
			<td style="width:263px;">Cat# 15140-122</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Glutamine</td>
			<td style="width:317px;">Gibco</td>
			<td style="width:263px;">Cat# 25030-081</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">N-acetyl cysteine&#160;</td>
			<td style="width:317px;">Sigma</td>
			<td style="width:263px;">Cat# A9165</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Insulin</td>
			<td style="width:317px;">Sigma</td>
			<td style="width:263px;">Cat# 16634</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Apo-transferrin&#160;</td>
			<td style="width:317px;">Sigma</td>
			<td style="width:263px;">Cat# T1147</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Sodium selenite</td>
			<td style="width:317px;">Sigma</td>
			<td style="width:263px;">Cat# S-5261</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">DMEM (high glucose)</td>
			<td style="width:317px;">Gibco</td>
			<td style="width:263px;">Cat# 11960-044</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Dapi Fluoromount-G</td>
			<td style="width:317px;">Southern Biotech</td>
			<td style="width:263px;">Cat# 0100-20&#160;</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Poly-D-Lysine&#160;</td>
			<td style="width:317px;">Sigma</td>
			<td style="width:263px;">Cat# A-003-E</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Primaria Plates&#160;</td>
			<td style="width:317px;">VWR</td>
			<td style="width:263px;">Cat# 62406-456</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:293px;">Stock reagents&#160;</td>
			<td style="width:317px;">reconstitution&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Concentration used</td>
			<td style="width:192px;">Storage</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Apo-transferrin</td>
			<td style="width:317px;">10 mg/mL in PBS&#160;</td>
			<td style="width:263px;">1:100</td>
			<td>-20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:293px;">N-acetyl cysteine</td>
			<td style="width:317px;">5 mg/mL in H2O&#160;</td>
			<td style="width:263px;">1:1,000</td>
			<td>-20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:293px;">Sodium selenite</td>
			<td style="width:317px;">2.5 mg/mL in H2O&#160;</td>
			<td style="width:263px;">1:25,000</td>
			<td>-20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Collagen IV</td>
			<td style="width:317px;">200 &#956;g/mL in PBS&#160;</td>
			<td style="width:263px;">1:100</td>
			<td>-80&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">TGF-b2</td>
			<td style="width:317px;">20 &#956;g/mL in PBS&#160;</td>
			<td style="width:263px;">1:10,000</td>
			<td>-20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">IL-34</td>
			<td style="width:317px;">100 &#956;g/mL in PBS&#160;</td>
			<td style="width:263px;">1:1,000</td>
			<td>-80&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Ovine wool cholesterol</td>
			<td style="width:317px;">1.5 mg/mL in 100% ethanol&#160;</td>
			<td style="width:263px;">1:1,000</td>
			<td>-20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:293px;">Heparan sulfate</td>
			<td style="width:317px;">1 mg/mL in H2O</td>
			<td style="width:263px;">1:1,000</td>
			<td>-20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:293px;">Oleic acid/Gondoic acid</td>
			<td style="width:317px;">Gondoic: 0.001 mg/mL; Oleic: 0.1 mg/mL in 100% ethanol&#160;</td>
			<td style="width:263px;">1:1,000</td>
			<td>-20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Heparin</td>
			<td style="width:317px;">50 mg/mL in PBS&#160;</td>
			<td style="width:263px;">1:100</td>
			<td>-20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:293px;">Solutions&#160;</td>
			<td style="width:317px;">Recipe&#160;</td>
			<td style="width:263px;"></td>
			<td style="width:192px;">Comments</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;">Perfusion Buffer</td>
			<td style="width:317px;">50 &#956;g/mL heparin in DPBS++ (PBS with Ca++ and Mg+ +)</td>
			<td style="width:263px;"></td>
			<td style="width:192px;">Use when ice-cold</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Douncing Buffer</td>
			<td style="width:317px;">200 &#956;L of 0.4% DNaseI in 50 mL of DPBS++</td>
			<td style="width:263px;"></td>
			<td style="width:192px;">Use when ice-cold</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Panning Buffer</td>
			<td style="width:317px;">2 mg/mL of peptone from milk solids in DPBS++</td>
			<td style="width:263px;"></td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="105">
			<td height="105" style="height:105px;">Microglia Growth Medium (MGM)</td>
			<td style="width:317px;">DMEM/F12 containing 100 units/mL penicillin, 100 &#956;g/mL streptomycin, 2 mM glutamine, 5 &#956;g/mL N-acetyl cysteine, 5 &#956;g/mL insulin, 100 &#956;g/mL apo-transferrin, and 100 ng/mL sodium selenite</td>
			<td style="width:263px;"></td>
			<td style="width:192px;">Use ice-cold MGM to pan microglia off of immnopanning dish.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Collagen IV Coating</td>
			<td style="width:317px;">MGM containing 2 &#956;g/mL collagen IV</td>
			<td style="width:263px;"></td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="50">
			<td height="50" style="height:50px;">Myelin Seperation Buffer</td>
			<td style="width:317px;">9 mL Percoll PLUS, 1 mL 10x PBS without Ca++ and Mg++, 9 &#956;L 1 M CaCl2, 5 &#956;L 1 M MgCl2</td>
			<td style="width:263px;"></td>
			<td style="width:192px;">Mix well after the addition of&#160; CaCl2 and MgCl2</td>
		</tr>
		<tr height="235">
			<td height="235" style="height:235px;width:293px;">TGF-b2/IL-34/Cholesterol containing growth media (TIC)&#160;</td>
			<td style="width:317px;">MGM containing human 2 ng/mL TGF-b2, 100 ng/mL murine IL-34, 1.5 &#956;g/mL ovine wool cholesterol, 10 &#956;g/mL heparan sulfate, 0.1 &#956;g/ml oleic acid, and 0.001 &#956;g/ml gondoic acid</td>
			<td style="width:263px;"></td>
			<td style="width:192px;">Make sure to add cholesterol to media warmed to 37 &#176;C and do not add more than 1.5 &#956;g/mL or it will precipitate out. Do not filter cholesterol-containing media. Equilibrate TIC media with 10% CO2 for 30 min- 1 hr before adding to cells to insure optimal pH.&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

regeneration of arrayed gold microelectrodes equipped for a real-time cell analyzer

Этикетка бесплатно на основе ячеек пробирного выгодно для биохимического исследования из-за него не требует использования экспериментальных животных. Из-за его способности предоставлять более динамичной информации о клетки в физиологических условиях, чем классическая биохимических анализов этот assay лейбл бесплатно реального времени клетки, основанного на принципе электроимпедансной привлекает больше внимания в течение последних десятилетия. Однако его практического использования могут быть ограничены из-за относительно высокой стоимостью измерения, в котором дорогостоящих расходных одноразовых золотые микросхемы используются для анализатор клеток. В этом протоколе мы разработали общую стратегию для регенерации выстроились золото микроэлектродов, оборудованных для анализатора в коммерческих лейбл свободных клеток. Пищеварение трипсина, полоскание с этанол и вода и спиннинг шаг включает в себя процесс регенерации. Предложенный метод был испытания и показали свою эффективность для регенерации и повторного использования коммерческих электронных плит по крайней мере три раза, который поможет исследователям сохранить на высокой стоимости работает в реальном времени клеток.

Свойств поверхности золота микросхемы: регенерации процедуры, используемые в настоящем протоколе были изложены на рисунке 1. На рисунке 2 показан микроскопических поверхности фотографии свежей и обновленной электр?...

Watch this Scientific Journal Video about Regeneration of Arrayed Gold Microelectrodes Equipped for a Real-Time Cell Analyzer at JoVE.com

Regeneration of Arrayed Gold Microelectrodes Equipped for a Real-Time Cell Analyzer

Этот протокол описывает общую стратегию, для повторного создания коммерческих выстроились золото микроэлектродов, оборудованных для метки бесплатный мобильный анализатор, направленных на экономию на высокой работает на основе ofmicrochip анализов затрат. Пищеварение трипсина, полоскание с этанол и вода и спиннинг шаг, который позволяет повторное использование микросхем включает в себя процесс регенерации.

Регенерация выстроились золото микроэлектродов, оборудованных для анализатора в реальном времени ячейки

The label-free cell-based assay is advantageous for biochemical study because of it does not require the use of experimental animals. Due to its ability ...

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Highly Sensitive and Rapid Fluorescence Detection with a Portable FRET Analyzer

Высокочувствительных и быстрое обнаружение флуоресценция с помощью портативного анализатора FRET

Recent improvements in F&#246;rster resonance energy transfer (FRET) sensors have enabled their use to detect various small molecules including ions and ...

A Protein Preparation Method for the High-throughput Identification of Proteins Interacting with a Nuclear Cofactor Using LC-MS/MS Analysis

Белок, Способ получения для высокой пропускной способности идентификации белков, взаимодействующих с ядерной кофактора Используя LC-MS / MS Analysis

Transcriptional coregulators are vital to the efficient transcriptional regulation of nuclear chromatin structure. Coregulators play a variety of roles in ...

Real-time Tracking of DNA Fragment Separation by Smartphone

В режиме реального времени отслеживание разделения фрагментов ДНК с помощью смартфона

Slab gel electrophoresis (SGE) is the most common method for the separation of DNA fragments; thus, it is broadly applied to the field of biology and ...

A Modified Yeast-one Hybrid System for Heteromeric Protein Complex-DNA Interaction Studies

Модифицированная дрожжевая гибридная система для исследований комплексных ДНК-гетерогенных белков

Over the years, the yeast one-hybrid assay has proven to be an important technique for the identification and validation of physical interactions between ...

A Fluorescence Fluctuation Spectroscopy Assay of Protein-Protein Interactions at Cell-Cell Contacts

Флуоресценции колебания спектроскопии Assay белок белковых взаимодействий в ячейке контакты

A variety of biological processes involves cell-cell interactions, typically mediated by proteins that interact at the interface between neighboring ...

Real-time Observation of the DNA Strand Exchange Reaction Mediated by Rad51

В реальном времени наблюдения опосредовано Rad51 реакции обмена Strand ДНК

The DNA strand exchange reaction mediated by Rad51 is a critical step of homologous recombination. In this reaction, Rad51 forms a nucleoprotein filament ...

Real-Time, Semi-Automated Fluorescent Measurement of the Airway Surface Liquid pH of Primary Human Airway Epithelial Cells

В режиме реального времени, полуавтоматические флуоресцентные измерения воздуха поверхности жидкости рН первичных человеческих дыхательных путей эпителиальных клеток

In recent years, the importance of mucosal surface pH in the airways has been highlighted by its ability to regulate airway surface liquid (ASL) ...

Monitoring GPCR-&#946;-arrestin1/2 Interactions in Real Time Living Systems to Accelerate Drug Discovery

Monitoring GPCR-ÃƒÅ½Ã‚Â²-arrestin1/2 Interactions in Real Time Living Systems to Accelerate Drug Discovery

Мониторинг GPCR-я-arrestin1/2 Взаимодействия в режиме реального времени живых систем для ускорения обнаружения наркотиков

Interactions between G-protein coupled receptors (GPCRs) and &#946;-arrestins are vital processes with physiological implications of great importance. ...

Using an Extracellular Flux Analyzer to Measure Changes in Glycolysis and Oxidative Phosphorylation during Mouse Sperm Capacitation

Использование внеклеточного анализатора flux для измерения изменений в гликолизе и окислительной фосфорилации во время емки спермы мыши

Mammalian sperm acquire fertilization capacity in the female reproductive tract in a process known as capacitation. Capacitation-associated processes ...

Measuring Nucleotide Binding to Intact, Functional Membrane Proteins in Real Time

Измерение связывания нуклеотидов с интактными функциональными мембранными белками в режиме реального времени

We have developed a method to measure binding of adenine nucleotides to intact, functional transmembrane receptors in a cellular or membrane environment. ...