Name: improved method for the establishment of an in vitro blood-brain barrier model based on porcine brain endothelial cells
Uploaded: 2017-09-24T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Improved Method for the Establishment of an In Vitro Blood-Brain Barrier Model Based on Porcine Brain Endothelial Cells at JoVE.com

الكتاب يود أن يعترف بروون هيلانة إليزابيث وسارة كريستين كريستنسن نيلز كريستيانسن م. للحصول على المساعدة التقنية، ومنح مؤسسة Lundbeck رقم R155-2013-14113.

تم الحصول على العقول الخنزير كمشتقات صناعة الأغذية الدانمركية. المجازر الدانمركية تحت إشراف صارم ومراقبة وزارة البيئة الدانمركية والأغذية-
 ولدت الفئران المستخدمة لعزل astrocytes ويضم الفريق في مرفق الحيوانات المحلية في درجة حرارة المحيطة من 22 درجة مئوية-23 درجة مئوية وعلى دور...

تنقية وانتشار للمجلس
أثناء إجراء تنقية، تشمل الخطوات الحاسمة الإزالة السريعة والفعالة للسحايا والفصل بين المسألة الأبيض والرمادي، ومهمة لتنقية الغلة والنقاء وإنشاء النموذج الصحيح. لعرضها في المختبر BBB الطراز باستخدام ببيكس، تحسين وتبسيط إجراء تنقية استناداً إلى تجان...

البنية الخلوية ووظيفة حاجز الدم في الدماغ
في واجهة جهاز الدورة الدموية والمركزي العصبي (CNS)، أعمال BBB كموقع تنظيمية رئيسية للسيطرة على هومووستاتيك المكروية الجهاز العصبي المركزي، هو أمر ضروري لوظيفة مناسبة وحماية للجهاز العصبي. هو موقع BBB خلايا بطانية بطانة التجويف الأوعية الدموية. في الشعيرات الدموية في الدماغ، تشكيل خلايا بطانية تقاطعات ضيق بين الخلايا المعقدة وأنماط التعبير بقوة الاستقطاب من الناقلين تدفق و efflux خاصة ضمان النقل جزيئية محددة للغاية بين الدم و الدماغ 1. العناصر الهيكلية للمجمعات مفرق ضيق تشمل البروتينات من الأسرة أوككلودين وكلاودين، أوككلودينس زونولا (زوي) البروتينات، سينجولين، وترتبط جزيئات الالتصاق هالة (المربيات). 5 كلودين مهم بشكل خاص في تقييد هالة باراسيلولار. التعريفي، والحفاظ على هذا النمط الظاهري غشائي BBB مميزة تنطوي على التفاعلات الديناميكية مع الخلايا المحيطة بها، بما في ذلك بيريسيتيس، أستروسيتيس، والخلايا العصبية والأغشية الطابق السفلي، الذي جنبا إلى جنب مع الدماغ غشائي الخلايا النموذج نيوروفاسكولار وحدة (NVU)2،3. الآليات التي تشارك في هذه التفاعلات لا بعد فهم فهما كاملا، ولكن تشمل تبادل الإشارات الكيميائية بين الخلايا، والذي يسمح بتحوير نفاذية BBB في الأجل القصير والحث على ميزات BBB طويل الأجل4. Astrocytes خاصة معروفة للمساهمة في النمط الظاهري خلية غشائي الدماغ وهي مصدر للعوامل التنظيمية مثل نيوروتروفيك الدبقية مشتقة عامل (يؤثر في مخيم داخل الخلايا)5، عامل النمو تنتجها الخلايا الليفية الأساسية6، الهيدروكورتيزون7، وتحويل عامل النمو بيتا (TGF-β)8. بيد أن تأثير TGF-β، كانت موضع نقاش9.
من في فيفو إلى في المختبر BBB
في فيفو دراسات عن الاستمرار في تقديم معلومات قيمة عن البيولوجيا BBB. ومع ذلك، نماذج الثقافة خلية يمكن تقدم أفكاراً إضافية وتشكل أدوات مفيدة لفهم الجوانب الجزيئية ووظيفية مفصلة من BBB في الصحة والمرض. على الرغم من صعوبة تحقيق كامل في نماذج في المختبر التفاعلات المعقدة بين أنواع الخلايا والمكونة من BBB، كان هناك، منذ أول تنقية خلايا الدماغ بطانية وتطبيق هذه في مونو-الثقافات 10 , 11 , 12، وتنمية واسعة النطاق لتنقية إجراءات وشروط النمو من BBB الخلية نماذج الثقافة، أدى إلى تشابه أكبر للحاجز في فيفو . الخلايا الأولية من أصل القوارض والخنزير والأبقار، وفي خطوط الخلايا مخلدة تستند النماذج BBB استخداماً في المختبر . يحتوي كل نموذج مختلف المزايا والعيوب. لاختيار نموذج والمقارنة، تستخدم علامات التحقق من الصحة مثل التعبير عن الإنزيمات BBB والناقلين والمستقبلات والبروتينات الهيكلية لإنشاء لمحات عامة عن النماذج المتبعة حاليا1.
وهدف البروتوكول
هو إحدى السمات الهامة ل BBB حاجز ضيق وطير عالية، ومع ذلك عدد كبير من النماذج المتاحة لا تعكس جيدا على مستويات في فيفو . إدراج مساهمات التنمية والتحسين من عدة مختبرات، والهدف من هذا البروتوكول تقديم أسلوب لإنشاء نموذج طير عالية في المختبر BBB استناداً إلى ببيكس الأولية في MC مع أو بدون أية سي أم، أو في لجنة التنسيق الوطنية مع الابتدائية أستروسيتيس الفئران أو أصل الخنزير. وتشمل الجهود الرامية إلى القضاء على خلايا تلويث وتحسين تمايز ببيكس في النمط الظاهري BBB الإجراءات التطبيقية وإنشاء نموذج. وقد نتج عن هذا العمل في إنشاء نماذج طير موثوقة وعالية مع باراسيلولار منخفضة النفاذية وحسن التعبير الوظيفية الرئيسية البروتينات هالة ضيقة والناقلين، ومستقبلات. بيد كما astrocytes عاملاً مساهما في النمط الظاهري خلية غشائي الدماغ، تمثل ثلاثة شروط مختلفة للثقافة تعمل مختلف ثلاث خلايا غشائي الدماغ. نموذج NCC مفيدة على وجه الخصوص لإجراء دراسات لبعض الآليات المتخصصة التي تشارك في اكتشاف المخدرات، ودراسات النقل والاتجار بها داخل الخلايا، وكذلك للتحقيق من التفاعلات خلية خلية حيث التعبير القصوى من الميزات BBB فائدة.
أصل وتاريخ البروتوكول
نموذج المجلس الموصوفة هنا يستند أساسا إلى نموذج الخنزيري الذي وضع في "مختبرات وايساي" (لندن) الدكتور لويز مورغان والزملاء، استناداً إلى نجاح سابق الدماغ بقرى خلية بطانية نموذجي13whichis. طريقة إعداد الخلية الأصلي كان ترشيح مرحلتين استخدام النايلون تنسجم للقبض على ميكروفيسيلس، تليها خطوة سوبكولتورينج لتحسين نقاء. في تطوير الأسلوب سابق، قد تحققت الأمثل BBB النمط الظاهري وحاجز ضيق بالنمو في المتوسط المستكملة، بما في ذلك مواد تحتوي على الأسبستوس. وأدلى المزيد من التعديلات على الأسلوب سكينر R. في مختبر البروفيسور أ. فنادق في مانشستر المملكة المتحدة14،15. الأسلوب الذي اعتمدته مختبر أبوت، لندن بوكل، حيث جعلت باتابينديجي من أبسط بكثير للتحضير بتجنب استخدام astrocytes أو مواد تحتوي على الأسبستوس، والقضاء على خلايا تلويث مثل بيريسيتيس مع بوروميسين. وأكدت الورقات الأولى الحفاظ على نموذج MC العديد من الميزات الهامة في فيفو بي بي بي، بما في ذلك تقاطعات ضيق فعالة ونظم النقل الغشاء بوساطة مستقبلات ترانسسيتوسيس16،17 , 18 , 19 , 20-يوسف س. "في وقت لاحق" مرة أخرى اختبار ثقافة المشارك astrocyte ووجد أنها تحسن كبير طير، حيث أن هذا هو البديل المفضل المستخدمة حاليا في مختبر أبوت21. النموذج الآن تم بنجاح نقل إلى نيلسن م. عرض مختبر في آرهوس، حيث تم إجراء المزيد من التعديلات (هذا البروتوكول)، بما في ذلك تبسيط غراي يهم استخراج واستخدام شبكة واحدة فقط خطوة الترشيح، وخطوة طلاء تصفية واحد الجمع بين الكولاجين وفيبرونيكتين. تستند الإجراءات التطبيقية لعزل الخنزير أستروسيتيس (هذا البروتوكول) البروتوكولات الذي وضعه مختبر Moos ت. في البورغ، وصف Thomsen et al22. في طير وخصائص أخرى للنموذج التي تم إنشاؤها في لندن وارهوس مماثلة، مما يعطي الثقة للفكرة القائلة بأن هذا النموذج سهولة نقلها بين مختبرات ويستجيب جيدا لرصد دقيق وترشيد أسلوب الخطوات. في الواقع، أنشأ يوسف س. الآن نموذج MC في البلاد المدارية (ماليزيا)23، التي تنطوي على مزيد من التكيف للظروف المحلية ومصادر الأنسجة.
مزايا أكثر الأساليب البديلة وحاليا إنشاء النماذج
بالمقارنة مع خلايا الدماغ بطانية المنشأ البقري والقوارض، ببيكس توفر ميزة وجود معدل أقل من الخسارة في فيفو BBB النمط الظاهري بعد عزل24. وعلاوة على ذلك، ببيكس قادرون على تشكيل الحواجز غشائي ضيق نسبيا، حتى عندما تزرع في MC (800 Ω سم2)16 مقارنة بالمستويات المبلغ عنها شيوعاً مونولاييرس خطوط الخلايا مثل bEND.5 و bEND.3 (سم Ω 502) 25 , 26 , 27وسند (300-800 Ω سم2)28،،من2930، و31،29،سيريبيند (سم Ω 5002)32والدماغ الأولية خلايا بطانية للماوس (100-300 سم Ω2)[س] = "xref" > 33،34،،من3536 والفئران (100-300 سم Ω2)37،38. بيد أظهرت طير التبعية على إجراءات تنقية والثقافة. في معظم الحالات، يظهر إضافة مواد تحتوي على الأسبستوس أو الثقافة المشتركة مع astrocytes آثار التفريق في خلايا بطانية وزيادة في ضيق من طبقات غشائي1. ومع ذلك، مع الجهود المبذولة لتحسين ظروف تثقيف، فقط النماذج المستندة إلى الأبقار أظهرت القيم طير قابلة للمقارنة للنماذج المستندة إلى الخنزير (متوسطات 800 Ω سم2 في MC، تصل إلى 2500 Ω سم2 في ثقافة المشارك أستروسيتي)13 39، ،،من4042،41،43،،من4445. كنماذج تستند إلى الدماغ البقري الأولية أظهرت خلايا بطانية تفاوتاً كبيرا، بين وداخل المختبرات14،45،46،،من4748، يمكن أن تكون إمكانية تكرار نتائج قضية. في نموذج المجلس ذكرت هنا، حققت المختبرات المساهمة طير مشابهة جداً وقيم النفاذية باراسيلولار مع تقلب منخفض، على حد سواء في وبين المختبرات. ومن ثم، سيكون من الممكن لمختبرات أخرى إلى إقامة نموذج قوي مع تقلب منخفضة باستخدام الطريقة المعروضة هنا. بالإضافة إلى تكوين طبقات غشائي ضيق، سبق صحة النماذج مع ببيكس بالتعبير عن البروتينات مفرق ضيق ووظيفية BBB الناقلين والمستقبلات والأنزيمات وأظهرت مدى ملاءمتها لمجموعة من الدراسات15 , 16 , 17 , 19 , 20 , 22 , 49 , 50 , 51 , 52 , 53 , 54 , 55 , 56 , 57 , 58 , 59-وعلاوة على ذلك، تظهر البيانات الترنسكربيتوم غير منشورة في ثقافات ببيكس المشارك الشخصية المتوقعة من الناقلين BBB والمستقبلات (لم تنشر النتائج، نيلسن et al.).
نموذج BBB المستندة إلى الخنزير يتمتع بميزة إضافية الجينوم، والتشريح، وعلم وظائف الأعضاء، وتعكس تطور المرض من الخنازير البيولوجيا البشرية بدرجة أعلى من نماذج أخرى ثابتة ويضم60، التي مواتية صناعة المستحضرات الصيدلانية. كما العقول الخنزير منتج ثانوي مشترك لصناعة اللحوم، أنها تشكل مصدر يمكن الوصول بسهولة للدماغ خلايا بطانية، تقليل عدد الحيوانات اللازمة للتجارب، وتوفير تنقية عالية غلة من المخ الخنزيري واحد. على الرغم من أن زراعة الخلايا الأولية وتنقية تستغرق وقتاً طويلاً إلى حد ما وتتطلب خبرة للتوحيد القياسي في إعداد النموذج، تولد الخلايا الابتدائية نماذج BBB الأكثر موثوقية. خطوط خلية مخلدة لا يمكن أن يكون بديلاً، كخصائص هامة مثل ضيق الحاجز وملامح التعبير الناقل، والتنظيم المكروية لا تعكس النتائج التجريبية في فيفو61، 62-تقديم نماذج في المختبر وميزة خلية يعيش التصوير بدقة أعلى، مما يجعل من الممكن تصور للعمليات داخل الخلايا بالسماح لاتباع نهج مقربة إلى الخلايا عينات أو الملاحظة، باستخدام الأهداف مع تضخم أعلى وأفضل نوعية البصرية63. هذه ليست الحال بالنسبة لاستخدام اثنين-فوتون مجهرية في الحيوانات الحية. وعلاوة على ذلك، توفر نماذج في المختبر القدرة على ترانسفيكت الخلايا، مما يسمح لتصور بروتينات المعلمة والتحقيق في الاتجار بها.
تطبيقات نموذج
وظيفة BBB ليست ثابتة ويمكن أن يكون بشكل حيوي والتضمين في علم وظائف الأعضاء وعلم الأمراض. في الكثير من الأمراض العصبية، بما في ذلك الأعصاب، والالتهابات والأمراض المعدية، واضطراب وزيادة نفاذية BBB يلاحظ64،،من6566،67 . من أجل تقليل ومنع تطور المرض والأضرار اللاحقة، يتم تحديد وتوصيف الآليات الجزيئية الكامنة وراء تحوير BBB أهمية كبرى. وفي هذا السياق، يمكن الاعتماد عليها في المختبر نماذج هي في ارتفاع الطلب في صناعة المستحضرات الصيدلانية، وتلعب أدواراً هامة في التنبؤ نفاذية BBB من المخدرات على الجهاز العصبي المركزي وعلاوة على ذلك. يجب عرض نموذج في المختبر أي يخدم كشاشة نفاذية طريقا باراسيلولار تقييدية، والعمارة خلية فسيولوجيا واقعية والتعبير الوظيفي ل آليات نقل68. أثبتت في الدراسات السابقة16،،من1757، وباراسيلولار النفاذية والتعبير عن بروتينات تي جي وجعفر هنا، نموذج عرض يفي بجميع معايير هذه وهي مناسبة لمجموعة من بي بي بي دراسات في كلا الفسيولوجيا العادية وفي علم الأمراض. نقاط قوة طريقة تنقية وزراعة المقدمة تشمل مزيجاً من البساطة وإمكانية تكرار نتائج والقدرة على تضمين أستروسيتيك التأثير الناتج قوية وموثوق بها عالية طير في المختبر BBB نموذجا. لهذا الغرض، أستروسيتيس من الخنزير والفئران أظهرت المنشأ زيادة النمط الظاهري BBB من ببيكس طريقة مماثلة22.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Fibronectin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F1141</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagen IV</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C5533</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly-L-lysine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P1524</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F-12</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>BE12-719F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/Low Glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D6046</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>Gibco Invitrogen</td>
			<td>15140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plasma derived serum (PDS)</td>
			<td>First Link UK Ltd.</td>
			<td>60-00-89</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Gibco Invitrogen</td>
			<td>10-270-106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin/EDTA</td>
			<td>Gibco Invitrogen</td>
			<td>15090-046</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H3393</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puromycin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P8833</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrocortisone</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H4001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8-CPT-cAMP</td>
			<td>Biolog</td>
			<td>C010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RO 20-1724</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>B8279</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gentamicin Sulfate</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>17-518Z</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>34896</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D8537</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EtOH</td>
			<td>VWR</td>
			<td>20,824,296</td>
			<td>Mix the 70 % solution from the 96 % EtOH</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNAse 1</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D4513</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase CLS2</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C6885</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ddH2O</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Made with Elga System</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T75 flasks</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>156499</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Costar Transwell inserts (Cell permeable membrane inserts)</td>
			<td>Costar</td>
			<td>CLS3401</td>
			<td>12-well plate, 12 mm diameter, 0.4 &#956;m polycarbonate membrane</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 ml centrifuge tubes</td>
			<td>Cellstar</td>
			<td>188271</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 ml centrifuge tubes</td>
			<td>Cellstar</td>
			<td>227261</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>150350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryo vials</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>377224</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>500 ml bottle</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>159910/159920</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpels</td>
			<td>Swann-Morten</td>
			<td>REF0211</td>
			<td>Type 24</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue homogenizer</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D9188</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>140 &#956;m filters</td>
			<td>MERCK</td>
			<td>NY4H04700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>40 &#956;m filters</td>
			<td>Corning</td>
			<td>431750</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EndOhm chamber system</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>ENDOHM-12</td>
			<td>EndOhm chamber for 12mm Culture Cups</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EVOM2 electrode system</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>300523+STX100C</td>
			<td>TEER measurement system with rigid STX-100C electrode pair</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Long needle</td>
			<td>Sigma</td>
			<td></td>
			<td>Attach to a syringe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine-tip curved forceps</td>
			<td>KLS Martin</td>
			<td>12-409-12-07</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Broad tip forceps</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82027-390</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter holder</td>
			<td>MERCK Milipore</td>
			<td>Swinnex-47</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 ml syringe</td>
			<td>Braun</td>
			<td>4617509F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 ml syringe</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>SSt20ESI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Occludin antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab31721</td>
			<td>1:100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-p120 Catenin antibody</td>
			<td>BD Transduction laboratories</td>
			<td>610133</td>
			<td>1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-ZO-1 antibody</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>61-7300</td>
			<td>1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Claudin 5 antibody</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>SAB4502981</td>
			<td>1:100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti rabbit IgG conjugated with Alexa Flour 568</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>A10042</td>
			<td>1:500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti mouse IgG conjugated with Alexa Flour 488</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>A21202</td>
			<td>1:500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>NEC100X250UC</td>
			<td>0.15&#181;l/ml final working conc</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lucifer Yellow</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>L0144</td>
			<td>10 &#181;g/ml final working conc</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

improved method for the establishment of an in vitro blood-brain barrier model based on porcine brain endothelial cells

والهدف من هذا البروتوكول ويعرض إجراء أمثل لتنقية وزراعة ببيكس و في المختبر حاجز الدم في الدماغ (BBB) وضع نماذج تستند إلى ببيكس في مونو-الثقافة (MC)، مولودية مع مكيفة astrocyte المتوسطة (ACM)، و عدم الاتصال ثقافة المشارك (NCC) مع أستروسيتيس من الخنزير أو الفئران المنشأ. ببيكس كانت معزولة ومثقف من شظايا من الشعيرات الدموية من كورتيسيس الدماغ من الخنازير المحلية 5-6 أشهر من العمر. تم تنقية هذه الأجزاء بعناية بإزالة السحايا والعزلة وتجانس المادة الرمادية، والترشيح، والهضم الأنزيمي، والطرد المركزي. لمواصلة القضاء على الخلايا تلويث، كان مثقف الشظايا الشعرية مع المحتوية على بوروميسين المتوسطة. عند روافد 60-95%، كانت باساجيد ببيكس المتزايد من الشظايا الشعرية لإدراج تصفية نفاذية الأغشية والمنشأة في النماذج. زيادة حاجز ضيق والنمط الظاهري مميزة BBB من ببيكس، تعامل الخلايا مع عوامل التمايز التالي: غشاء بيرمينت 8-CPT-المخيم (مخيم المختصر هنا) والهيدروكورتيزون المانع فوسفوديستريس، رو-20-1724 (RO). الإجراء الذي أجرى خلال فترة من 9-11 يوما، وعند إنشاء نموذج لجنة التنسيق الوطنية، أستروسيتيس كانت مثقف 2-8 أسابيع مقدما. التقيد بالإجراءات الموصوفة في البروتوكول قد سمح بإنشاء طبقات بطانية ذات النفاذية باراسيلولار مقيدة للغاية، ومع لجنة التنسيق الوطنية نموذج عرض ترانسيندوثيليال متوسط مقاومة كهربائية (طير) 1249 ± 80 سم Ω 2، وباراسيلولار نفاذية (فالتطبيق) "إبليس الأصفر" من 0.90 10-6 ± 0.13 10-6 سم-1 ثانية (يعني ± ووزارة شؤون المرأة، n = 55). أظهرت مزيد من التقييم لهذا النمط الظاهري المجلس التعبير الجيد عن كلودين البروتينات هالة ضيق 5، زوي-1، كاتينين p120 البروتين مفرق أوككلودين وأدهيرينس. ويمكن استخدام نموذج عرض لمجموعة من دراسات BBB في الصحة والمرض، ومع نفاذية باراسيلولار الشديدة التقييد، وهذا النموذج مناسبة للدراسات المتعلقة بالنقل والاتجار داخل الخلايا.

إنشاء BBB نماذج في المختبر
في أسلوب عرضها، والأمثل، أجريت زراعة ببيكس وإنشاء نظام إدراج نفاذية الأغشية مع MC أو دون ACM أو NCC مع أستروسيتيس (الشكل 1) لفترة من 9-11 يوما (الشكل 2). لاختيار خلايا بطانية، اقترن ثقاف...

Watch this Scientific Journal Video about Improved Method for the Establishment of an In Vitro Blood-Brain Barrier Model Based on Porcine Brain Endothelial Cells at JoVE.com

Improved Method for the Establishment of an In Vitro Blood-Brain Barrier Model Based on Porcine Brain Endothelial Cells

تحسين أسلوب لإنشاء في المختبر حاجز الدم – المخ نموذج استناداً إلى خلايا المخ الخنزيري بطانية

وهدف البروتوكول تقديم إجراء محسنة لإنشاء في المختبر حاجز الدم في الدماغ (BBB) نموذجا يستند إلى خلايا المخ الخنزيري الابتدائي غشائي (ببيكس). نموذج يظهر إمكانية تكرار نتائج عالية، ضيق عالية، وهي مناسبة للدراسات المتعلقة بالنقل والاتجار داخل الخلايا في اكتشاف الأدوية.

The aim of this protocol presents an optimized procedure for the purification and cultivation of pBECs and to establish in vitro blood-brain barrier (BBB) ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Improved Method for the Establishment of an In Vitro Blood-Brain Barrier Model Based on Porcine Brain Endothelial Cells

MRI-guided Disruption of the Blood-brain Barrier using Transcranial Focused Ultrasound in a Rat Model

التصوير بالرنين المغناطيسي موجهة تعطيل حاجز الدم في الدماغ باستخدام الموجات فوق الصوتية المركزة عبر الجمجمة في نموذج الفئران

Focused ultrasound (FUS) disruption of the blood-brain barrier (BBB) is an increasingly investigated technique for circumventing the BBB1-5. The BBB is a ...

Rat Model of Blood-brain Barrier Disruption to Allow Targeted Neurovascular Therapeutics

للسماح المستهدفة نموذج الفئران من تعطيل حاجز الدم في الدماغ التداوي عائي عصبي

Endothelial cells with tight junctions along with the basement membrane and astrocyte end feet surround cerebral blood vessels to form the blood-brain ...

Stretch in Brain Microvascular Endothelial Cells (cEND) as an In Vitro Traumatic Brain Injury Model of the Blood Brain Barrier

Stretch in Brain Microvascular Endothelial Cells cEND as an In Vitro Traumatic Brain Injury Model of the Blood Brain Barrier

تمتد في الدماغ الخلايا البطانية الاوعية الدموية الدقيقة (cEND) بوصفه<em&gt; في المختبر</em&gt; صدمة إصابات الدماغ نموذج من حاجز الدم في الدماغ

Due to the high mortality incident brought about by traumatic brain injury (TBI), methods that would enable one to better understand the underlying ...

Setting-up an In Vitro Model of Rat Blood-brain Barrier (BBB): A Focus on BBB Impermeability and Receptor-mediated Transport

Setting-up an In Vitro Model of Rat Blood-brain Barrier BBB: A Focus on BBB Impermeability and Receptor-mediated Transport

وضع ما يصل إلى<em&gt; في المختبر</em&gt; نموذج من الفئران حاجز الدم في الدماغ (BBB): التركيز على BBB عدم النفاذ والنقل مستقبلات بوساطة

The blood brain barrier (BBB) specifically regulates molecular and cellular flux between the blood and the nervous tissue. Our aim was to develop and ...

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

excitotoxic المواد تحفيز الدماغ باعتبارها Microslices<em&gt; في المختبر</em&gt; نموذج من السكتة الدماغية

Examining molecular mechanisms involved in neuropathological conditions, such as ischemic stroke, can be difficult when using whole animal systems. As ...

Oxygen-Glucose Deprivation and Reoxygenation as an In Vitro Ischemia-Reperfusion Injury Model for Studying Blood-Brain Barrier Dysfunction

Oxygen-Glucose Deprivation and Reoxygenation as an In Vitro Ischemia-Reperfusion Injury Model for Studying Blood-Brain Barrier Dysfunction

الأوكسجين الجلوكوز الحرمان وعودة التأكسج باعتبارها<em&gt; في المختبر</em&gt; الإسكيمية-ضخه من الإصابات نموذج لدراسة الدم في الدماغ الحاجز الجنسي لدى الرجال

Ischemia-Reperfusion (IR) injury is known to contribute significantly to the morbidity and mortality associated with ischemic strokes. Ischemic ...

An Improved Method for Rapid Intubation of the Trachea in Mice

افضل طريقة لرابيد تنبيب القصبة الهوائية في الفئران

Despite some anatomical and physiological differences, mouse models continue to be an essential tool for studying human lung disease. Bleomycin toxicity ...

An Anesthesia, Surgery, and Harvest Method for the Evaluation of Transpedicular Screws Using an In Vivo Porcine Lumbar Spine Model

An Anesthesia, Surgery, and Harvest Method for the Evaluation of Transpedicular Screws Using an In Vivo Porcine Lumbar Spine Model

التخدير، والجراحة، وطريقة الحصاد لتقييم مسامير ترانسبديكولار باستخدام<em&gt; في فيفو</em&gt; الخنزير القطني العمود الفقري نموذج

Pedicle screw fixation is the gold standard for the treatment of spinal diseases. However, many studies have reported the issue of loosening pedicle ...

In Vitro Assays to Assess Blood-brain Barrier Mesh-like Vessel Formation and Disruption

In Vitro Assays to Assess Blood-brain Barrier Mesh-like Vessel Formation and Disruption

في مقايسات المختبر لتقييم الحاجز الدموي الدماغي تشبه تشكيل سفينة وتشوه

Blood-brain barrier (BBB) coverage plays a central role in the homeostasis of the central nervous system (CNS). The BBB is dynamically maintained by ...

A Porcine Corneal Endothelial Organ Culture Model Using Split Corneal Buttons

نموذج ثقافة الجهاز البطانية القرنية الخنازير باستخدام أزرار القرنية الانقسام

Experimental research on corneal endothelial cells is associated with several difficulties. Human donor corneas are scarce and rarely available for ...