Name: improved method for the establishment of an in vitro blood-brain barrier model based on porcine brain endothelial cells
Uploaded: 2017-09-24T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Improved Method for the Establishment of an In Vitro Blood-Brain Barrier Model Based on Porcine Brain Endothelial Cells at JoVE.com

De auteurs wil erkennen Elisabeth Helena Bruun, Sarah Christine Christensen en Niels M. Kristiansen voor technische bijstand, en de Stichting Lundbeck verlenen nummer R155-2013-14113.

varkens hersenen werden verkregen als bijproduct van de Deense voedingsindustrie. Deense slachthuizen staan onder streng toezicht en -waarneming door de Deense Ministerie voor milieu en voedsel.
 gebruikt voor isolatie van astrocyten ratten werden gefokt en groep-gevestigd in de lokale dier faciliteit bij een kamertemperatuur van 22 ° C - 23 ° C en op een cyclus van 12/12 h donker/licht onder controle van de dierenarts en volgens Deens verordeningen voor lab dieren. De ratten werden euthani...

Zuivering en proliferatie van pBEC
Tijdens de procedure van de zuivering omvatten kritische stappen snelle en effectieve verwijdering van hersenvliezen en scheiding van de witte en grijze materie, die belangrijk is voor de opbrengst van de zuivering en de zuiverheid en de juiste instelling van het model. Voor het gepresenteerde in vitro BBB model met behulp van pBECs, hebben we verbeterd en vereenvoudigd een zuivering procedure op basis van mechanische homogenisering van geïsoleerde gri...

Cellulaire structuur en functie van de bloed - hersen barrière
Op het grensvlak van de bloedsomloop en het centrale zenuwstelsel (CNS) fungeert de BBB als een belangrijke regelgevende site voor homoeostatic controle op de communicatie van de CNS, die is van essentieel belang voor de werking en bescherming van het zenuwstelsel. De site van de BBB is de endotheliale cellen voering van het bloedvat lumen. In de haarvaten van de hersenen, endotheliale cellen vormen complexe intercellulaire strakke kruispunten en sterk gepolariseerde expressiepatronen van bepaalde toestroom en efflux vervoerders zorgen voor zeer specifieke moleculaire vervoer tussen het bloed en de hersenen 1. De structurele onderdelen van de strakke junction complexen bevatten eiwitten uit de occludin en claudin familie, de zonula occludens (ZO) eiwitten, de cingulin, en bijbehorende regulates celadhesie-moleculen (Jam). Claudin 5 is vooral belangrijk in de paracellular regulates beperking. Inductie en onderhoud van deze karakteristieke BBB endothelial fenotype dynamische interacties met de omringende cellen, met inbegrip van de membranen van de kelder, die samen met de hersenen endotheliale cellen van vorm, pericytes, astrocyten en neuronen betrekken de neurovasculaire eenheid (NVU)2,3. De mechanismen die betrokken zijn bij deze interacties worden nog niet volledig begrepen, maar omvatten uitwisseling van chemische signalen tussen cellen, waardoor modulatie van de permeabiliteit van de BBB op korte termijn en lange termijn BBB functies4induceert. Astrocyten vooral bij te dragen tot de hersenen endothelial cel fenotype zijn bekend en zijn een bron van regelgevende factoren zoals gliale-afgeleide neurotrophic factor (die intracellulaire cAMP)5, fundamentele fibroblast groeifactor6, Hydrocortison7en transformerende groeifactor β (TGF-β)8. Het effect van TGF-β, echter al besproken9.
Van In Vivo In Vitro BBB
In vivo studies blijven waardevolle informatie te verstrekken over BBB biologie. Cel cultuur modellen kunnen echter aanvullende inzichten en vormen nuttige hulpmiddelen voor het begrijpen van de gedetailleerde moleculaire en functionele aspecten van de BBB in zowel de volksgezondheid als de ziekte. Hoewel de complexe interacties tussen de celtypes en bestanddelen van de BBB moeilijk om volledig in in vitro modellen, is er, sinds de eerste reiniging van endotheliale cellen van de hersenen en de toepassing hiervan in mono-culturen 10 , 11 , 12, uitgebreide ontwikkeling van de zuiveringsprocedures en groei omstandigheden van de BBB mobiele cultuur modellen, wat resulteert in meer gelijkenis met de barrière in vivo . De meest gebruikte in vitro BBB modellen zijn gebaseerd op primaire cellen van knaagdieren, varkens en runderen oorsprong, en vereeuwigd cellijnen. Elk model heeft verschillende voor- en nadelen. Voor vergelijkings- en model keuze, worden validatie markeringen zoals expressie van BBB enzymen, vervoerders, receptoren en structurele proteïnen gebruikt voor het maken van Overzichten van de huidige gevestigde modellen1.
Doel van het Protocol
Een belangrijk kenmerk van de BBB is barrière krapte en hoge TEER, maar een groot aantal van de beschikbare modellen weerspiegelen niet goed de in vivo -niveaus. Integratie van ontwikkeling en optimalisatie bijdragen van verschillende laboratoria, het doel van dit protocol is te presenteren een methode voor de vaststelling van een hoge TEER in vitro BBB model gebaseerd op de primaire pBECs in MC met of zonder ACM of in NCC met primaire astrocyten van rat of varkens oorsprong. De toegepaste procedures en de vaststelling van het model zijn inspanningen op te heffen van contaminerende cellen en ter verbetering van de differentiatie van pBECs in een BBB fenotype. Dit werk heeft geleid tot de oprichting van betrouwbare, hoge TEER modellen met lage paracellular permeabiliteit en goede functionele uitdrukking van belangrijke strakke regulates eiwitten, vervoerders en receptoren. Echter, zoals de astrocyten een factor die bijdraagt tot de hersenen endothelial cel fenotype zijn, de drie verschillende voorwaarden van cultuur vertegenwoordigen drie verschillende fenotypes van endothelial hersencellen. De NCC-model is specifiek nuttig voor studies van bepaalde gespecialiseerde mechanismen die betrokken zijn in de Geneesmiddelenontwikkeling, vervoer studies en intracellulaire mensenhandel, evenals voor onderzoek van de cel interacties waar maximale expressie van BBB functies voordelige.
Oorsprong en geschiedenis van het Protocol
Het model van de pBEC hier beschreven is grotendeels gebaseerd op de varkens model ontwikkeld bij Eisai Laboratories (Londen) door Dr. Louise Morgan en collega's, op basis van een succesvolle eerdere boviene hersenen endothelial cel model13whichis. De originele methode van cel voorbereiding was een twee-traps filtratie met behulp van nylon netten om te vangen van de microvessels, gevolgd door een subculturing stap ter verbetering van de zuiverheid. In de eerdere ontwikkeling van de methode, optimale BBB fenotype en barrière krapte werden bereikt door groei in aangevuld medium, met inbegrip van ACM. Verdere wijzigingen in de methode werden gemaakt door R. Skinner in Prof N. Rothwell van lab in Manchester UK14,15. De methode werd aangenomen door het laboratorium van Abbott, KCL Londen, waar Patabendige het aanzienlijk eenvoudiger maakte te bereiden door het vermijden van het gebruik van astrocyten of ACM en door het wegnemen van contaminerende cellen zoals pericytes met puromycin. De eerste papieren bevestigd dat de MC-model enkele belangrijke kenmerken van de in vivo BBB behouden, met inbegrip van doeltreffende strakke kruispunten, membraan vervoerssystemen en receptor-gemedieerde transcytosis16,17 , 18 , 19 , 20. later S. Yusof opnieuw getest Astrocyt co cultuur en het aanzienlijk verbeterd TEER, dus dit de gewenste variant die momenteel worden gebruikt in het Abbott lab21 is. Het model is inmiddels met succes overgebracht naar de M. Nielsen lab in Aarhus, waar verdere wijzigingen zijn ingevoerd (dit protocol), met inbegrip van vereenvoudiging grijs uit extractie, met behulp van slechts één mesh filtratie stap, en een Enkelfilter coating het combineren van collageen en fibronectine. De toegepaste procedure voor het isoleren van varkens astrocyten (dit protocol) was gebaseerd op protocollen ontwikkeld door het laboratorium van T. Moos in Aalborg, beschreven door Thomsen et al.22. De TEER en andere eigenschappen van het model gegenereerd in Londen en Aarhus lijken, die vertrouwen op het idee dat het model wordt gemakkelijk overgedragen tussen labs en reageert goed op zorgvuldige observatie en rationalisatie van de stappen van methode leent. Inderdaad, heeft S. Yusof nu de MC-model in een tropisch land (Maleisië)23, die verdere aanpassing voor plaatselijke omstandigheden en weefsel bronnen betrokken opgericht.
Voordelen boven alternatieve methoden en momenteel gevestigd modellen
Vergeleken met endothelial hersencellen van oorsprong van de runderen, knaagdieren, bieden pBECs het voordeel van een lager tarief van verlies van het in vivo BBB fenotype na isolatie24. Bovendien kunnen pBECs vormen vrij krap endothelial belemmeringen, zelfs als volwassen in MC (800 Ω cm2)16 in vergelijking met de vaak gerapporteerde niveaus voor monolayers van cellijnen zoals bEND.5 en bEND.3 (50 Ω cm2) 25 , 26 , 27, cvoleinding (300-800 Ω cm2)28,29,30, en cerebEND (500 Ω cm2)29,31,32, en de primaire hersenen endotheliale cellen van muis (100-300 Ω cm2)SS = "xref" > 33,34,35,,36 en rat (100-300 Ω cm2)37,38. De TEER leert echter afhankelijkheid op de procedures voor zuivering en cultuur. In de meeste gevallen toont de toevoeging van ACM of co cultuur met astrocyten onderscheidende effecten op de endotheliale cellen en een toename in dichtheid van het endotheel lagen1. Echter over het streven naar het optimaliseren van de kweken voorwaarden, alleen de runderen-gebaseerde modellen hebben aangetoond TEER waarden vergelijkbaar met de varkens-gebaseerde modellen (gemiddelden voor 800 Ω cm2 in MC, maximaal 2500 Ω cm2 in Astrocyt co cultuur)13 ,39,40,41,42,43,44,45. Als de modellen op basis van primaire boviene hersenen hebben endotheliale cellen aangetoond grote verschillen, zowel tussen als binnen laboratoria14,45,46,47,48, reproduceerbaarheid zou een probleem zijn. In het pBEC-objectmodel gemeld hier, hebben de bijdragende laboratoria bereikt zeer vergelijkbaar TEER en paracellular permeabiliteit waarden met lage variabiliteit, zowel in als tussen laboratoria. Vandaar, moet het mogelijk zijn voor andere laboratoria tot stand brengen van een robuust model met lage variabiliteit met behulp van de methode die hier gepresenteerd. Naast het strakke endothelial lagen vormen, zijn modellen met pBECs eerder gevalideerd door expressie van strakke junction eiwitten, functionele BBB vervoerders, receptoren en enzymen en bewezen geschiktheid voor allerlei studies15 , 16 , 17 , 19 , 20 , 22 , 49 , 50 , 51 , 52 , 53 , 54 , 55 , 56 , 57 , 58 , 59. Bovendien ongepubliceerde transcriptome gegevens over de mede culturen van pBECs blijkt een verwachte Profiel van BBB vervoerders en receptoren (niet-gepubliceerde resultaten, Nielsen et al.).
De BBB varkens gebaseerde model heeft een bijkomend voordeel als het genoom, anatomie, fysiologie, en de progressie van de ziekte van het varken overeen met de menselijke biologie aan een hogere mate dan andere gevestigde modellen beschikt over60, die gunstig zijn voor de farmaceutische industrie. Als varkens hersenen een gemeenschappelijk bijproduct van de vleesindustrie zijn, vormen ze een gemakkelijk toegankelijke bron van hersenen endotheliale cellen, het aantal dieren die nodig zijn voor de experimenten, en het verstrekken van een hoge zuivering opbrengst van één varkens hersenen minimaliseren. Hoewel zuivering en teelt van primaire cellen is enigszins tijdrovend en vereist expertise voor normalisatie bij het opzetten van het model, primaire cellen genereren de betrouwbaarste BBB-modellen. Vereeuwigd cellijnen kunnen invaller, niet als belangrijke eigenschappen zoals barrière benauwdheid, vervoerder expressieprofielen en communicatie regelgeving komen niet overeen met de experimentele bevindingen in vivo61, 62. in vitro modellen bieden het voordeel van live-cel imaging met een hogere resolutie, waardoor de visualisatie van intracellulaire processen mogelijk doordat een benadering dicht naar de bemonsterde of waargenomen cellen, met doelstellingen met hogere vergroting en betere optische kwaliteit63. Dit is niet het geval voor het gebruik van twee-foton microscopie in levende dieren. In vitro modellen bieden bovendien de mogelijkheid om transfect cellen, waardoor de visualisatie van tagged eiwitten en onderzoek van hun handel.
Toepassingen van het Model
De functie van de BBB is niet vast en kan dynamisch worden gemoduleerd in zowel de Fysiologie en pathologie. In veel neurologische ziekten, met inbegrip van neurodegeneratieve, wordt ontstekings-en infectieziekten, verstoring en verhoogde permeabiliteit van de BBB waargenomen64,65,66,67 . Om te verminderen en voorkomen van de progressie van de ziekte en vervolgschade, zijn identificatie en karakterisering van de moleculaire mechanismen die ten grondslag liggen aan de modulatie van de BBB van groot belang. In dit verband, betrouwbare in vitro modellen zijn in de hoge vraag door de farmaceutische industrie, en bovendien spelen een belangrijke rol in het voorspellen van BBB permeabiliteit van drugs naar de CNS. Een in vitro model van het bijeenkomen van een scherm van de permeabiliteit moet een restrictieve paracellular traject, een fysiologisch realistische cel architectuur en functionele expressie van vervoerder mechanismen68worden weergegeven. Aangetoond in eerdere studies16,17,57, en door paracellular permeabiliteit en expressie van TJ en AJ eiwitten hier, het gepresenteerde model voldoet aan al deze criteria en is geschikt voor een scala van BBB studies in zowel normale fysiologie en pathologie. De sterke punten van de onderhavige zuivering en cultivatie methode bestaan uit een combinatie van eenvoud en reproduceerbaarheid en de mogelijkheid om op te nemen astrocytic beïnvloeden met een resulterende robuuste en betrouwbare hoge TEER in vitro BBB model. Voor dit purpose, astrocyten van varkens en rat oorsprong is aangetoond dat het vergroten van de BBB fenotype van pBECs in een soortgelijke manier22.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Fibronectin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F1141</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagen IV</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C5533</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly-L-lysine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P1524</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F-12</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>BE12-719F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/Low Glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D6046</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>Gibco Invitrogen</td>
			<td>15140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plasma derived serum (PDS)</td>
			<td>First Link UK Ltd.</td>
			<td>60-00-89</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Gibco Invitrogen</td>
			<td>10-270-106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin/EDTA</td>
			<td>Gibco Invitrogen</td>
			<td>15090-046</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H3393</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puromycin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P8833</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrocortisone</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H4001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8-CPT-cAMP</td>
			<td>Biolog</td>
			<td>C010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RO 20-1724</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>B8279</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gentamicin Sulfate</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>17-518Z</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>34896</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D8537</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EtOH</td>
			<td>VWR</td>
			<td>20,824,296</td>
			<td>Mix the 70 % solution from the 96 % EtOH</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNAse 1</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D4513</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase CLS2</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C6885</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ddH2O</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Made with Elga System</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T75 flasks</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>156499</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Costar Transwell inserts (Cell permeable membrane inserts)</td>
			<td>Costar</td>
			<td>CLS3401</td>
			<td>12-well plate, 12 mm diameter, 0.4 &#956;m polycarbonate membrane</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 ml centrifuge tubes</td>
			<td>Cellstar</td>
			<td>188271</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 ml centrifuge tubes</td>
			<td>Cellstar</td>
			<td>227261</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>150350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryo vials</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>377224</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>500 ml bottle</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>159910/159920</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpels</td>
			<td>Swann-Morten</td>
			<td>REF0211</td>
			<td>Type 24</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue homogenizer</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D9188</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>140 &#956;m filters</td>
			<td>MERCK</td>
			<td>NY4H04700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>40 &#956;m filters</td>
			<td>Corning</td>
			<td>431750</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EndOhm chamber system</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>ENDOHM-12</td>
			<td>EndOhm chamber for 12mm Culture Cups</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EVOM2 electrode system</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>300523+STX100C</td>
			<td>TEER measurement system with rigid STX-100C electrode pair</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Long needle</td>
			<td>Sigma</td>
			<td></td>
			<td>Attach to a syringe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine-tip curved forceps</td>
			<td>KLS Martin</td>
			<td>12-409-12-07</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Broad tip forceps</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82027-390</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter holder</td>
			<td>MERCK Milipore</td>
			<td>Swinnex-47</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 ml syringe</td>
			<td>Braun</td>
			<td>4617509F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 ml syringe</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>SSt20ESI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Occludin antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab31721</td>
			<td>1:100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-p120 Catenin antibody</td>
			<td>BD Transduction laboratories</td>
			<td>610133</td>
			<td>1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-ZO-1 antibody</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>61-7300</td>
			<td>1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Claudin 5 antibody</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>SAB4502981</td>
			<td>1:100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti rabbit IgG conjugated with Alexa Flour 568</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>A10042</td>
			<td>1:500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti mouse IgG conjugated with Alexa Flour 488</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>A21202</td>
			<td>1:500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>NEC100X250UC</td>
			<td>0.15&#181;l/ml final working conc</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lucifer Yellow</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>L0144</td>
			<td>10 &#181;g/ml final working conc</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

improved method for the establishment of an in vitro blood-brain barrier model based on porcine brain endothelial cells

Het doel van dit protocol presenteert een geoptimaliseerde procedure voor de zuivering en de teelt van pBECs en om vast te stellen in vitro bloed - hersenbarrière (BBB) modellen, gebaseerd op de pBECs in mono-cultuur (MC), MC met Astrocyt-geconditioneerd medium (ACM), en contactloze co cultuur (NCC) met astrocyten van varkens- of rat oorsprong. pBECs waren geïsoleerd en gekweekt uit fragmenten van haarvaten van de cortices van de hersenen van binnenlandse varkens 5-6 maanden oud. Deze fragmenten werden gezuiverd door zorgvuldige verwijdering van de hersenvliezen, isolatie en homogenisering van de grijze stof, filtratie, enzymatische spijsvertering en centrifugeren. Om te verder elimineren contaminerende cellen, de capillaire fragmenten werden gekweekt met puromycin-bevattende medium. 60-95% heuvels, pBECs groeien uit de capillaire fragmenten waren gepasseerd te permeabel membraanfilter wordt ingevoegd als vastgesteld in de modellen. Ter verbetering van de barrière krapte en BBB karakteristiek fenotype van pBECs, de cellen werden behandeld met de volgende factoren van de differentiatie: permeant 8-CPT-kamp van de membraan (hier afgekort kamp), hydrocortison, en een fosfodiesterase inhibitor, RO-20-1724 (RO). De ingreep was uitgevoerd over een periode van 9-11 dagen, en bij de vaststelling van de NCC-model, de astrocyten 2-8 weken van tevoren werden gekweekt. Naleving van de beschreven procedures in het protocol heeft toegestaan de oprichting van endothelial lagen met zeer beperkt paracellular permeabiliteit, met de NCC model tonen een gemiddelde signaalcomplexen elektrische weerstand (TEER) van 1249 ± 80 Ω cm 2, en paracellular permeabiliteit (Papp) voor gele Lucifer van 0.90 10-6 ± 0.13 10-6 cm sec-1 (bedoel ± SEM, n = 55). Verdere evaluatie van deze pBEC fenotype toonde goede uitdrukking van de strakke regulates eiwitten claudin 5, ZO-1, occludin en adherens junction eiwit p120 catenine. Het model gepresenteerd kan worden gebruikt voor een aantal studies van de BBB in gezondheid en ziekte en met de zeer restrictieve paracellular permeabiliteit, dit model is geschikt voor studies van vervoer en intracellulaire mensenhandel.

Oprichting van de BBB In Vitro modellen
In de gepresenteerde, geoptimaliseerde methode, werd teelt van pBECs en de vestiging van de ordening van de invoegen permeabel membraan met MC of zonder ACM of NCC met astrocyten (Figuur 1) uitgevoerd voor een periode van 9-11 dagen (Figuur 2). Voor de selectie van endotheliale cellen, een eerste cultuur van gezuiverde capil...

Watch this Scientific Journal Video about Improved Method for the Establishment of an In Vitro Blood-Brain Barrier Model Based on Porcine Brain Endothelial Cells at JoVE.com

Improved Method for the Establishment of an In Vitro Blood-Brain Barrier Model Based on Porcine Brain Endothelial Cells

Verbeterde methode voor de vaststelling van een In Vitro bloed - hersenbarrière Model gebaseerd op varkens Endothelial hersencellen

Het doel van het protocol is te presenteren van een geoptimaliseerde procedure tot vaststelling van een in vitro bloed - hersenbarrière (BBB) model gebaseerd op primaire varkens endothelial hersencellen (pBECs). Het model toont hoge reproduceerbaarheid, hoge dichtheid, en is geschikt voor studies van vervoer en intracellulaire drugontdekking mensenhandel.

The aim of this protocol presents an optimized procedure for the purification and cultivation of pBECs and to establish in vitro blood-brain barrier (BBB) ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Improved Method for the Establishment of an In Vitro Blood-Brain Barrier Model Based on Porcine Brain Endothelial Cells

MRI-guided Disruption of the Blood-brain Barrier using Transcranial Focused Ultrasound in a Rat Model

MRI-geleide Verstoring van de bloed-hersen barrière met behulp van Transcraniële Focused Ultrasound in een ratmodel

Focused ultrasound (FUS) disruption of the blood-brain barrier (BBB) is an increasingly investigated technique for circumventing the BBB1-5. The BBB is a ...

Rat Model of Blood-brain Barrier Disruption to Allow Targeted Neurovascular Therapeutics

Rat Model van bloed-hersen barrière Verstoring toestaan ​​Gerichte Neurovasculaire Therapeutics

Endothelial cells with tight junctions along with the basement membrane and astrocyte end feet surround cerebral blood vessels to form the blood-brain ...

Stretch in Brain Microvascular Endothelial Cells (cEND) as an In Vitro Traumatic Brain Injury Model of the Blood Brain Barrier

Stretch in Brain Microvascular Endothelial Cells cEND as an In Vitro Traumatic Brain Injury Model of the Blood Brain Barrier

Strekken in Brain microvasculaire endotheelcellen (CEND) als een<em&gt; In Vitro</em&gt; Traumatisch Hersenletsel Model van de Blood Brain Barrier

Due to the high mortality incident brought about by traumatic brain injury (TBI), methods that would enable one to better understand the underlying ...

Setting-up an In Vitro Model of Rat Blood-brain Barrier (BBB): A Focus on BBB Impermeability and Receptor-mediated Transport

Setting-up an In Vitro Model of Rat Blood-brain Barrier BBB: A Focus on BBB Impermeability and Receptor-mediated Transport

Oprichting van een<em&gt; In Vitro</em&gt; Model van Rat bloed-hersenbarrière (BBB): een focus op BBB Ondoordringbaarheid en receptor-gemedieerd transport

The blood brain barrier (BBB) specifically regulates molecular and cellular flux between the blood and the nervous tissue. Our aim was to develop and ...

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

Excitotoxische Stimulatie van Hersenen Microslices als<em&gt; In vitro</em&gt; Model van een beroerte

Examining molecular mechanisms involved in neuropathological conditions, such as ischemic stroke, can be difficult when using whole animal systems. As ...

Oxygen-Glucose Deprivation and Reoxygenation as an In Vitro Ischemia-Reperfusion Injury Model for Studying Blood-Brain Barrier Dysfunction

Oxygen-Glucose Deprivation and Reoxygenation as an In Vitro Ischemia-Reperfusion Injury Model for Studying Blood-Brain Barrier Dysfunction

Zuurstof-Glucose beroving en reoxygenatie als een<em&gt; In Vitro</em&gt; Ischemie-reperfusie letsel model voor de studie bloed-hersenbarrière Dysfunction

Ischemia-Reperfusion (IR) injury is known to contribute significantly to the morbidity and mortality associated with ischemic strokes. Ischemic ...

An Improved Method for Rapid Intubation of the Trachea in Mice

Een verbeterde werkwijze voor snelle intubatie van de trachea in muizen

Despite some anatomical and physiological differences, mouse models continue to be an essential tool for studying human lung disease. Bleomycin toxicity ...

An Anesthesia, Surgery, and Harvest Method for the Evaluation of Transpedicular Screws Using an In Vivo Porcine Lumbar Spine Model

An Anesthesia, Surgery, and Harvest Method for the Evaluation of Transpedicular Screws Using an In Vivo Porcine Lumbar Spine Model

Een verdovings-, chirurgie- en oogstmethode voor de evaluatie van transpediculaire schroeven met behulp van een<em&gt; In Vivo</em&gt; Porcine Lumbar Spine Model

Pedicle screw fixation is the gold standard for the treatment of spinal diseases. However, many studies have reported the issue of loosening pedicle ...

In Vitro Assays to Assess Blood-brain Barrier Mesh-like Vessel Formation and Disruption

In Vitro Assays to Assess Blood-brain Barrier Mesh-like Vessel Formation and Disruption

In Vitro- analyses voor het beoordelen van bloed-hersenbarrière Mesh-like Vessel Formation and Disruption

Blood-brain barrier (BBB) coverage plays a central role in the homeostasis of the central nervous system (CNS). The BBB is dynamically maintained by ...

A Porcine Corneal Endothelial Organ Culture Model Using Split Corneal Buttons

Een porcine Corneale endotheliale orgel cultuur model met behulp van splitsen Corneale knoppen

Experimental research on corneal endothelial cells is associated with several difficulties. Human donor corneas are scarce and rarely available for ...