Name: detection of mitochondria membrane potential to study clic4 knockdown-induced hn4 cell apoptosis in vitro
Uploaded: 2018-07-17T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Detection of Mitochondria Membrane Potential to Study CLIC4 Knockdown-induced HN4 Cell Apoptosis In Vitro at JoVE.com

يرجى ونشكر السيد شاو فانغ لزراعة الخلايا. كان يؤيد هذا العمل من المنح المقدمة من "مؤسسة العلوم الطبيعية الصينية" (المنحة رقم 81570403، 81371284)؛ مؤسسة العلوم الطبيعية في مقاطعة آنهوي (رقم المنحة 1408085MH158)؛ محقق شاب المعلقة من جامعة آنهوي الطبية؛ دعم البرنامج لمواهب شابه ممتازة في الجامعات لمقاطعة آنهوي.

1-الخلية الثقافة وتعداء
<ol><li>
خلية ثقافة ملاحظة: HN4، على خط خلية هنسكك، مستمدة من المرضى الذين يعانون من هنسكك14.<ol>
<li>الثقافة HN4 الخلايا في دولبيكو لتعديل النسر المتوسطة (دميم، الجلوكوز 4.5 غرام/لتر) وتستكمل مع 10% مصل بقرى الجنين والمضادات الحيوية (البنسلين يو/مليلتر 100 ...

<ol>
	<li>Chen, J., Liao, W., Gao, W., Huang, J., Gao, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intermittent+hypoxia+protects+cerebral+mitochondrial+function+from+calcium+overload.">Intermittent hypoxia protects cerebral mitochondrial function from calcium overload.</a> Acta Neurol Belg. 113, 507-513 (2013).</li><li>Gogol, P., Trzci&#324;ska, M., Bry&#322;a, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Motility,+mitochondrial+membrane+potential+and+ATP+content+of+rabbit+spermatozoa+stored+in+extender+supplemented+with+GnRH+analogue+[des-Gly10,+D-Ala6]-LH-RH+ethylamide.">Motility, mitochondrial membrane potential and ATP content of rabbit spermatozoa stored in extender supplemented with GnRH analogue [des-Gly10, D-Ala6]-LH-RH ethylamide.</a> Pol J Vet Sci. 17, (2014).</li><li>Machiels, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+the+management+of+squamous+cell+carcinoma+of+the+head+and+neck.">Advances in the management of squamous cell carcinoma of the head and neck.</a> F1000Prime Rep. 6, 44 (2014).</li><li>Behera, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Concurrent+therapy+with+taxane+versus+non-taxane+containing+regimens+in+locally+advanced+squamous+cell+carcinomas+of+the+head+and+neck+(SCCHN):+a+systematic+review.">Concurrent therapy with taxane versus non-taxane containing regimens in locally advanced squamous cell carcinomas of the head and neck (SCCHN): a systematic review.</a> Oral Oncol. 50, 888-894 (2014).</li><li>Pancari, P., Mehra, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systemic+therapy+for+squamous+cell+carcinoma+of+the+head+and+neck.">Systemic therapy for squamous cell carcinoma of the head and neck.</a> Surgical Oncology Clinics of North America. 24, 437-454 (2015).</li><li>Peretti, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chloride+channels+in+cancer:+Focus+on+chloride+intracellular+channel+1+and+4+(CLIC1+AND+CLIC4)+proteins+in+tumor+development+and+as+novel+therapeutic+targets.">Chloride channels in cancer: Focus on chloride intracellular channel 1 and 4 (CLIC1 AND CLIC4) proteins in tumor development and as novel therapeutic targets.</a> Biochim Biophys Acta. 1848, 2523-2531 (2015).</li><li>Jentsch, T. J., Stein, V., Weinreich, F., Zdebik, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+structure+and+physiological+function+of+chloride+channels.">Molecular structure and physiological function of chloride channels.</a> Physiol Rev. 82, 503-568 (2002).</li><li>Ponnalagu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Data+supporting+characterization+of+CLIC1,+CLIC4,+CLIC5+and+DmCLIC+antibodies+and+localization+of+CLICs+in+endoplasmic+reticulum+of+cardiomyocytes.">Data supporting characterization of CLIC1, CLIC4, CLIC5 and DmCLIC antibodies and localization of CLICs in endoplasmic reticulum of cardiomyocytes.</a> Data Brief. 7, 1038-1044 (2016).</li><li>Fernandez-Salas, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=mtCLIC/CLIC4,+an+Organellular+Chloride+Channel+Protein,+Is+Increased+by+DNA+Damage+and+Participates+in+the+Apoptotic+Response+to+p53.">mtCLIC/CLIC4, an Organellular Chloride Channel Protein, Is Increased by DNA Damage and Participates in the Apoptotic Response to p53.</a> Mol Cell Biol. 22, 3610-3620 (2002).</li><li>Suh, K. S., Mutoh, M., Gerdes, M., Yuspa, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CLIC4,+an+intracellular+chloride+channel+protein,+is+a+novel+molecular+target+for+cancer+therapy.">CLIC4, an intracellular chloride channel protein, is a novel molecular target for cancer therapy.</a> J Invest Derm Symp P. 10, 105-109 (2005).</li><li>Zhong, J., Kong, X., Zhang, H., Yu, C., Xu, Y., Kang, J., Yu, H., Yi, H., Yang, X., Sun, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+CLIC4+Enhances+Autophagy+and+Triggers+Mitochondrial+and+ER+Stress-Induced+Apoptosis+in+Human+Glioma+U251+Cells+under+Starvation.">Inhibition of CLIC4 Enhances Autophagy and Triggers Mitochondrial and ER Stress-Induced Apoptosis in Human Glioma U251 Cells under Starvation.</a> PloS one. 7, 39378 (2012).</li><li>Ponnalagu, D., Singh, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anion+Channels+of+Mitochondria.">Anion Channels of Mitochondria.</a> Handbook of Experimental Pharmacology. , (2016).</li><li>Leanza, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracellular+ion+channels+and+cancer.">Intracellular ion channels and cancer.</a> Front Physiol. 4, 227 (2013).</li><li>Kim, S. Y., Chu, K. C., Lee, H. R., Lee, K. S., Carey, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+and+characterization+of+nine+new+head+and+neck+cancer+cell+lines.">Establishment and characterization of nine new head and neck cancer cell lines.</a> Acta Oto-Laryngologica. 117, 775-784 (1997).</li><li>Jia, L., Liu, W., Guan, L., Lu, M., Wang, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+Calcium-Activated+Chloride+Channel+ANO1/TMEM16A+Suppresses+Tumor+Growth+and+Invasion+in+Human+Lung+Cancer.">Inhibition of Calcium-Activated Chloride Channel ANO1/TMEM16A Suppresses Tumor Growth and Invasion in Human Lung Cancer.</a> PloS one. 10, 0136584 (2015).</li><li>Xu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+CLIC4/mtCLIC+enhances+hydrogen+peroxide-induced+apoptosis+in+C6+glioma+cells.">Suppression of CLIC4/mtCLIC enhances hydrogen peroxide-induced apoptosis in C6 glioma cells.</a> Oncol Rep. 29, 1483-1491 (2013).</li><li>Zhu, W., Wang, X., Zhou, Y., Wang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C2-ceramide+induces+cell+death+and+protective+autophagy+in+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma+cells.">C2-ceramide induces cell death and protective autophagy in head and neck squamous cell carcinoma cells.</a> Int J Mol Sci. 15, 3336-3355 (2014).</li><li>McFarland, R., Taylor, R. W., Turnbull, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+neurological+perspective+on+mitochondrial+disease.">A neurological perspective on mitochondrial disease.</a> Lancet Neurol. 9, 829-840 (2010).</li><li>Alston, C. L., Rocha, M. C., Lax, N. Z., Turnbull, D. M., Taylor, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+genetics+and+pathology+of+mitochondrial+disease.">The genetics and pathology of mitochondrial disease.</a> J Pathol. 241, 236-250 (2017).</li><li>Zhang, W., Wang, X., Chen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resveratrol+induces+mitochondria-mediated+AIF+and+to+a+lesser+extent+caspase-9-dependent+apoptosis+in+human+lung+adenocarcinoma+ASTC-a-1+cells.">Resveratrol induces mitochondria-mediated AIF and to a lesser extent caspase-9-dependent apoptosis in human lung adenocarcinoma ASTC-a-1 cells.</a> Mol Cell Biochem. 354, 29-37 (2011).</li><li>Bernardi, P., Rasola, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+and+cell+death:+the+mitochondrial+connection.">Calcium and cell death: the mitochondrial connection.</a> Subcell Biochem. 45, 481-506 (2007).</li><li>Perveen, S., Yang, J. S., Ha, T. J., Yoon, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyanidin-3-glucoside+Inhibits+ATP-induced+Intracellular+Free+Ca(2+)+Concentration,+ROS+Formation+and+Mitochondrial+Depolarization+in+PC12+Cells.">Cyanidin-3-glucoside Inhibits ATP-induced Intracellular Free Ca(2+) Concentration, ROS Formation and Mitochondrial Depolarization in PC12 Cells.</a> Korean J Physiol Pharmacol. 18, 297-305 (2014).</li><li>Paddock, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+and+practices+of+laser+scanning+confocal+microscopy.">Principles and practices of laser scanning confocal microscopy.</a> Mol Biotechnol. 16, 127-149 (2000).</li><li>Paddock, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=To+boldly+glow...+applications+of+laser+scanning+confocal+microscopy+in+developmental+biology.">To boldly glow... applications of laser scanning confocal microscopy in developmental biology.</a> BioEssays : news and reviews in molecular, cellular and developmental biology. 16, 357-365 (1994).</li></ol>

أنها موثقة جيدا أن Cl− قنوات أساسية للحفاظ على الأرقاء البيئة الداخلية وتلعب أدواراً هامة في تكاثر الخلايا والمبرمج15،16. ولذلك، فهم العلاقة بين التدخل المستهدفة لقناة أيون والمبرمج حاجة كبيرة وأهمية إيجاد نهج علاجية أفضل لمختلف أنواع السرطان<sup class="xre...

Rh123 هو صبغة fluorescence الأيوني، الذي يخدم كمؤشر لإمكانات transmembrane. Rh123 قادر على اختراق غشاء الخلية وإدخال مصفوفة المتقدرية تبعاً للاختلاف المحتملة من داخل وخارج الغشاء1. [ابوبتوسس] يؤدي إلى الأضرار من سلامة غشاء الميتوكوندريا. وستفتح المسام الانتقال نفاذية ميتوكندريا (MPTP) وتؤدي إلى انهيار نظام التمثيل التناسبي المختلط، الذي يؤدي بدوره في الإفراج عن Rh123 إلى خارج الميتوكوندريا. وأخيراً، سوف يتم الكشف عن أقوى إشارة الفلورية الخضراء تحت مجهر الأسفار. أنها موثقة جيدا أن استنفاد MMP ونفاذيه الغشاء مرتفعة هي العلامات المبكرة للخلايا المبرمج2. ولذلك، قد يكون تطبيق Rh123 الكشف عن تغيير نظام التمثيل التناسبي المختلط، وحدوث استموات الخلايا.
سرطان الأكثر شيوعاً السادسة في العالم، تتدهور سرطان الرأس والرقبة شدة الشخص الصحية3. على الرغم من أن العديد من النهج وضعت في السنوات الأخيرة، هو النتائج السريرية للعلاج للمرضى الذين يعانون من الرأس والعنق الخلايا الحرشفية (HNSCC) لا تزال غير مثالية4. يمكن استكشاف أساليب علاجية جديدة لتحسين علاج هنسكك5. عرض القنوات الأيونية التي تنطوي على العديد من العمليات البيولوجية دوراً هاما في تطوير مختلف أنواع السرطان6. مشاركة الجزئي أو الكلي لقنوات Cl– يشاركون عاليا في الخصائص المختلفة للورم التحول بما في ذلك الهجرة النشطة، وارتفاع معدل انتشار واختزاع. وفي ضوء هذا، أدرجت انقر، عائلة بروتين رواية، كفئة واعدة من الأهداف العلاجية لعلاج السرطان6،7. وقد كشفت الدراسات الأخيرة أن أفراد الأسرة بما في ذلك CLIC1، CLIC4، و CLIC5، انقر ترجمة للقلب mitochondrial والأكسجين التفاعلية ومستوى الأنواع (روس) هو upregulated من CLIC5، مما يشير إلى دور وظيفي المتقدرية يقع Cl -- القنوات في الاستجابة أبوبتوتيك8. CLIC4، أحد أفراد الأسرة انقر (يعرف أيضا باسم متكليك و P64H1 و RS43)، درست أكثر استفاضة لخصائصه التنظيم أبوبتوتيك في الخلايا السرطانية وموقع سوبسيلولار بما في ذلك غولجي وهيولي ميتوكندريا في الإنسان الكيراتينيه7،،من910. صورة CLIC4 التعبير يخضع لعامل نخر الورم-α (تنف-α)، P53، والتحفيز الخارجي. أوفيريكسبريشن ودوونريجوليشن من CLIC4 تؤدي إلى استجابة apoptotic أساسا من خلال المسار المتقدرية مصحوبة باختلال التوازن Bcl-2 أفراد الأسرة، تفعيل caspase تتالي، وإطلاق سراح السيتوكروم ج11، 12 , 13-ولذلك، قياس التمثيل التناسبي المختلط أمر حاسم لاستكشاف المبرمج المتصلة CLIC4، و Rh123 بمثابة مؤشر fluorescence مثالية.
تصف هذه الدراسة بروتوكولا مفصلة للكشف عن نظام التمثيل التناسبي المختلط لدراسة CLIC4 المستحثة بضربه قاضية المبرمج في الخلايا HN4. Rh123 كتحقيق الأسفار لمراقبة التغيير نظام التمثيل التناسبي المختلط. تحت مجهر الأسفار الشائعة والليزر [كنفوكل] المسح مجهر الأسفار، التقلب في الوقت الحقيقي نظام التمثيل التناسبي المختلط قد يكون حلها. نحن مناقشة مزايا وقيود تطبيق [كنفوكل] ليزر المسح مجهر الأسفار بالتفصيل، وكذلك مقارنتها مع أساليب أخرى. يمكن تطبيق هذا البروتوكول أيضا إلى الدراسات الأخرى ذات الصلة بالمبرمج.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1296px;" width="1294">
	<colgroup>
		<col />
		<col span="2" />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:372px;">HNSCC cells</td>
			<td style="width:183px;">ATCC</td>
			<td style="width:183px;">CRL-3241</td>
			<td style="width:559px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Polylysine</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>P4981</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;">Specific siRNA for human CLIC4</td>
			<td>Biomics</td>
			<td>NM_013943</td>
			<td style="width:559px;">(accession numbers, NM_013943; corresponding to the cDNA sequence 
			5-GCTGAAGGAGGAGGACAAAGA-3) and scrambled siRNA (5 ACGCGUAACGCGGGAAUUU-3) were designed and obtained from Biomics Company</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Lipofectamine 2000 Transfection Reagent&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>L3000-015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Opti-MEM I Reduced Serum Medium, GlutaMAX</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>51985-042</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Rhodamine 123, FluoroPure grede</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>R22420</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:47px;width:372px;">Dulbecco&#8217;smodified Eagle medium (DMEM, 4.5 g/L glucose)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11965-084</td>
			<td style="width:559px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:372px;">Fetal Bovine Serum, Qualified, Australia Origin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10099141</td>
			<td style="width:559px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:372px;">Trypsin-EDTA Solution</td>
			<td>Beyotime</td>
			<td>C0201</td>
			<td style="width:559px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:372px;">Antibiotic-Antimycotic, 100X</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15240062</td>
			<td style="width:559px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Laser Scanning Confocal Microscopy</td>
			<td>Leica Microsystems GmbH</td>
			<td>LEICA.SP5-DMI6000-DIC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Nikon Eclipse TE300 Inverted Microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Metaflour, V7.5.0.0</td>
			<td>Universal Imaging Corporation</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Leica application suite, v2.6.0.7266</td>
			<td>Leica Microsystems GmbH</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Microsoft office Excel 2007</td>
			<td>Microsoft</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Sigma Plot 12.5</td>
			<td>Systat Software</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Attofluor Cell Chamber</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A7816</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

detection of mitochondria membrane potential to study clic4 knockdown-induced hn4 cell apoptosis in vitro

ويعتبر استنزاف للغشاء الميتوكوندريا المحتملة (نظام التمثيل التناسبي المختلط، ΔΨm) الحدث تتالي apoptotic بأقرب وقت ممكن. ويحدث ذلك حتى قبل الخصائص apoptotic النووية، بما في ذلك التكثيف الكروماتين والكسر الحمض النووي. متى سيتم بدء انهيار نظام التمثيل التناسبي المختلط، الخلية المبرمج لا رجعة فيه. سلسلة من الأصباغ الموجبة محبتين يمكن تمر عبر غشاء الخلية وتجميع داخل مصفوفة ميتوكندريا، وتكون بمثابة علامة الأسفار لتقييم تغير نظام التمثيل التناسبي المختلط. كواحدة من ستة أعضاء من Cl– الأسرة قناة داخل الخلايا (انقر)، CLIC4 وتشارك في عملية apoptotic الخلية أساسا من خلال المسار المتقدرية. هنا يمكننا وصف بروتوكول مفصلة قياس التمثيل التناسبي المختلط عن طريق رصد تقلبات fluorescence والرودامين 123 (Rh123)، علينا أن ندرس من خلالها المبرمج الناجمة عن ضربة قاضية CLIC4. نحن مناقشة مزايا وقيود التطبيق [كنفوكل] ليزر المسح الضوئي والمجهر الفلورية العادية بالتفصيل، وذلك أيضا مقارنة مع أساليب أخرى.

في هذه الدراسة، تم تطبيق Rh123 للكشف عن نظام التمثيل التناسبي المختلط. في البداية، كان مثقف الخلايا HN4 للأسفار التالية تلطيخ التجارب. واستخدمت ملاقط لوضع كوفيرسليبس التعميم على الجزء السفلي من البئر 6 لوحات (الشكل 1أ). كوفيرسليبس كانت مغطاة بطبقة بو?...

Watch this Scientific Journal Video about Detection of Mitochondria Membrane Potential to Study CLIC4 Knockdown-induced HN4 Cell Apoptosis In Vitro at JoVE.com

Detection of Mitochondria Membrane Potential to Study CLIC4 Knockdown-induced HN4 Cell Apoptosis In Vitro

وهنا يقدم بروتوكول مفصلة لتطبيق والرودامين 123 للغشاء الميتوكوندريا المحتملة (MMP) تحديد ودراسة CLIC4 المستحثة بضربه قاضية HN4 الخلية المبرمج في المختبر. وسجلت تحت مجهر الأسفار الشائعة والليزر [كنفوكل] المسح مجهر الأسفار، التغيير في الوقت الحقيقي نظام التمثيل التناسبي المختلط.

الكشف عن إمكانات غشاء الميتوكوندريا لدراسة CLIC4 HN4 المستحثة بضربه قاضية الخلية المبرمج في المختبر

Depletion of the mitochondrial membrane potential (MMP, &#916;&#936;m) is considered the earliest event in the apoptotic cascade. It even occurs ahead of ...

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Detection of Mitochondria Membrane Potential to Study CLIC4 Knockdown-induced HN4 Cell Apoptosis In Vitro

How to Study Basement Membrane Stiffness as a Biophysical Trigger in Prostate Cancer and Other Age-related Pathologies or Metabolic Diseases

كيفية دراسة بدروم غشاء تصلب بمثابة الزناد البيوفيزيائية في سرطان البروستاتا وعلوم الأمراض الأخرى ذات الصلة العمر أو الأمراض الاستقلابية

Here we describe a protocol that can be used to study the biophysical microenvironment related to increased thickness and stiffness of the basement ...

Characterization of Cell Membrane Extensions and Studying Their Roles in Cancer Cell Adhesion Dynamics

وصف ملحقات غشاء الخلية ودراسة أدوارهم في ديناميات التصاق خلايا السرطان

The cell membrane&#39;s extension repertoire modulates various malignant behaviors of cancer cells, including their adhesive and migratory potentials. The ...

Flow Cytometric Detection of Newly-formed Breast Cancer Stem Cell-like Cells After Apoptosis Reversal

تدفق سيتوميتريك الكشف عن خلايا شبيهة بالخلايا الجذعية سرطان الثدي التي شكلت حديثا بعد عكس المبرمج

Cancer recurrence has long been studied by oncologists while the underlying mechanisms remain unclear. Recently, we and others found that a phenomenon ...

Real Time Detection of In Vitro Tumor Cell Apoptosis Induced by CD8+ T Cells to Study Immune Suppressive Functions of Tumor-infiltrating Myeloid Cells

Real Time Detection of In Vitro Tumor Cell Apoptosis Induced by CD8+ T Cells to Study Immune Suppressive Functions of Tumor-infiltrating Myeloid Cells

الكشف عن الوقت الحقيقي في المختبر ورم الخلايا المبرمج الناجمة عن CD8+ تي الخلايا لدراسة وظائف المناعة القمعية من التسلل إلى ورم الخلايا النقوي

Potentiation of the tumor-killing ability of CD8+ T cells in tumors, along with their efficient tumor infiltration, is a key element of successful ...

Transfer of Manipulated Tumor-associated Neutrophils into Tumor-Bearing Mice to Study their Angiogenic Potential In Vivo

نقل العدلات المرتبطة بالورم إلى الفئران الحاملة للورم لدراسة إمكاناتها الوعائية في الجسم الحي

The contribution of neutrophils to the regulation of tumorigenesis is getting increased attention. These cells are heterogeneous, and depending on the ...

In Vivo Immunofluorescence Localization for Assessment of Therapeutic and Diagnostic Antibody Biodistribution in Cancer Research

في فيفو الفلورة المناعية توطين لتقييم التوزيع الحيوي للجسم المضاد العلاجي والتشخيصي في أبحاث السرطان

Monoclonal antibodies (mAbs) are important tools in cancer detection, diagnosis, and treatment. They are used to unravel the role of proteins in ...

In Vitro Assay to Study Tumor-macrophage Interaction

في المختبر الاختبار لدراسة التفاعل الورم الضامة

Tumor associated macrophages (TAMs) account for a large percentage of cells in the tumor mass for different types of cancers. Glioblastoma (GBM), a ...

Cell Cycle-specific Measurement of &#947;H2AX and Apoptosis After Genotoxic Stress by Flow Cytometry

Cell Cycle-specific Measurement of ÃƒÅ½Ã‚Â³H2AX and Apoptosis After Genotoxic Stress by Flow Cytometry

قياس دورة الخلية محددة من γH2AX والمبرمج بعد الإجهاد السامة الجينية عن طريق قياس التدفق الخلوي

The presented method or slightly modified versions have been devised to study specific treatment responses and side effects of various anti-cancer ...

Using the Chicken Chorioallantoic Membrane In Vivo Model to Study Gynecological and Urological Cancers

استخدام غشاء Chorioallantoic الدجاج في نموذج Vivo لدراسة أمراض النساء وسرطان المسالك البولية

Mouse models are the benchmark tests for in vivo cancer studies. However, cost, time, and ethical considerations have led to calls for alternative in vivo ...