Name: detection of mitochondria membrane potential to study clic4 knockdown-induced hn4 cell apoptosis in vitro
Uploaded: 2018-07-17T13:00:00
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हम कृपया सेल संस्कृति के लिए श्री चाओ फेंग धंयवाद । यह काम चीन के प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (ग्रांट No. ८१५७०४०३, ८१३७१२८४) से अनुदान द्वारा समर्थित था; अनहुई प्रांतीय प्राकृतिक विज्ञान फाउण्डेशन (अनुदान सं. 1408085MH158); अनहुई चिकित्सा विश्वविद्यालय के बकाया युवा अन्वेषक; अनहुई प्रांत के विश्वविद्यालयों में उत्कृष्ट युवा प्रतिभाओं के लिए सहायक कार्यक्रम.

1. सेल कल्चर और अभिकर्मक
<ol><li>
सेल संस्कृति नोट: HN4, एक HNSCC सेल लाइन, HNSCC14के साथ रोगियों से व्युत्पंन किया गया था ।<ol>
<li>Dulbecco के संशोधित ईगल मध्यम में संस्कृति HN4 कोशिकाओं (DMEM, ४.५ g/L ग्लूकोज) 10% भ्रूण गोज...

<ol>
	<li>Chen, J., Liao, W., Gao, W., Huang, J., Gao, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intermittent+hypoxia+protects+cerebral+mitochondrial+function+from+calcium+overload.">Intermittent hypoxia protects cerebral mitochondrial function from calcium overload.</a> Acta Neurol Belg. 113, 507-513 (2013).</li><li>Gogol, P., Trzci&#324;ska, M., Bry&#322;a, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Motility,+mitochondrial+membrane+potential+and+ATP+content+of+rabbit+spermatozoa+stored+in+extender+supplemented+with+GnRH+analogue+[des-Gly10,+D-Ala6]-LH-RH+ethylamide.">Motility, mitochondrial membrane potential and ATP content of rabbit spermatozoa stored in extender supplemented with GnRH analogue [des-Gly10, D-Ala6]-LH-RH ethylamide.</a> Pol J Vet Sci. 17, (2014).</li><li>Machiels, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+the+management+of+squamous+cell+carcinoma+of+the+head+and+neck.">Advances in the management of squamous cell carcinoma of the head and neck.</a> F1000Prime Rep. 6, 44 (2014).</li><li>Behera, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Concurrent+therapy+with+taxane+versus+non-taxane+containing+regimens+in+locally+advanced+squamous+cell+carcinomas+of+the+head+and+neck+(SCCHN):+a+systematic+review.">Concurrent therapy with taxane versus non-taxane containing regimens in locally advanced squamous cell carcinomas of the head and neck (SCCHN): a systematic review.</a> Oral Oncol. 50, 888-894 (2014).</li><li>Pancari, P., Mehra, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systemic+therapy+for+squamous+cell+carcinoma+of+the+head+and+neck.">Systemic therapy for squamous cell carcinoma of the head and neck.</a> Surgical Oncology Clinics of North America. 24, 437-454 (2015).</li><li>Peretti, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chloride+channels+in+cancer:+Focus+on+chloride+intracellular+channel+1+and+4+(CLIC1+AND+CLIC4)+proteins+in+tumor+development+and+as+novel+therapeutic+targets.">Chloride channels in cancer: Focus on chloride intracellular channel 1 and 4 (CLIC1 AND CLIC4) proteins in tumor development and as novel therapeutic targets.</a> Biochim Biophys Acta. 1848, 2523-2531 (2015).</li><li>Jentsch, T. J., Stein, V., Weinreich, F., Zdebik, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+structure+and+physiological+function+of+chloride+channels.">Molecular structure and physiological function of chloride channels.</a> Physiol Rev. 82, 503-568 (2002).</li><li>Ponnalagu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Data+supporting+characterization+of+CLIC1,+CLIC4,+CLIC5+and+DmCLIC+antibodies+and+localization+of+CLICs+in+endoplasmic+reticulum+of+cardiomyocytes.">Data supporting characterization of CLIC1, CLIC4, CLIC5 and DmCLIC antibodies and localization of CLICs in endoplasmic reticulum of cardiomyocytes.</a> Data Brief. 7, 1038-1044 (2016).</li><li>Fernandez-Salas, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=mtCLIC/CLIC4,+an+Organellular+Chloride+Channel+Protein,+Is+Increased+by+DNA+Damage+and+Participates+in+the+Apoptotic+Response+to+p53.">mtCLIC/CLIC4, an Organellular Chloride Channel Protein, Is Increased by DNA Damage and Participates in the Apoptotic Response to p53.</a> Mol Cell Biol. 22, 3610-3620 (2002).</li><li>Suh, K. S., Mutoh, M., Gerdes, M., Yuspa, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CLIC4,+an+intracellular+chloride+channel+protein,+is+a+novel+molecular+target+for+cancer+therapy.">CLIC4, an intracellular chloride channel protein, is a novel molecular target for cancer therapy.</a> J Invest Derm Symp P. 10, 105-109 (2005).</li><li>Zhong, J., Kong, X., Zhang, H., Yu, C., Xu, Y., Kang, J., Yu, H., Yi, H., Yang, X., Sun, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+CLIC4+Enhances+Autophagy+and+Triggers+Mitochondrial+and+ER+Stress-Induced+Apoptosis+in+Human+Glioma+U251+Cells+under+Starvation.">Inhibition of CLIC4 Enhances Autophagy and Triggers Mitochondrial and ER Stress-Induced Apoptosis in Human Glioma U251 Cells under Starvation.</a> PloS one. 7, 39378 (2012).</li><li>Ponnalagu, D., Singh, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anion+Channels+of+Mitochondria.">Anion Channels of Mitochondria.</a> Handbook of Experimental Pharmacology. , (2016).</li><li>Leanza, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracellular+ion+channels+and+cancer.">Intracellular ion channels and cancer.</a> Front Physiol. 4, 227 (2013).</li><li>Kim, S. Y., Chu, K. C., Lee, H. R., Lee, K. S., Carey, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+and+characterization+of+nine+new+head+and+neck+cancer+cell+lines.">Establishment and characterization of nine new head and neck cancer cell lines.</a> Acta Oto-Laryngologica. 117, 775-784 (1997).</li><li>Jia, L., Liu, W., Guan, L., Lu, M., Wang, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+Calcium-Activated+Chloride+Channel+ANO1/TMEM16A+Suppresses+Tumor+Growth+and+Invasion+in+Human+Lung+Cancer.">Inhibition of Calcium-Activated Chloride Channel ANO1/TMEM16A Suppresses Tumor Growth and Invasion in Human Lung Cancer.</a> PloS one. 10, 0136584 (2015).</li><li>Xu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+CLIC4/mtCLIC+enhances+hydrogen+peroxide-induced+apoptosis+in+C6+glioma+cells.">Suppression of CLIC4/mtCLIC enhances hydrogen peroxide-induced apoptosis in C6 glioma cells.</a> Oncol Rep. 29, 1483-1491 (2013).</li><li>Zhu, W., Wang, X., Zhou, Y., Wang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C2-ceramide+induces+cell+death+and+protective+autophagy+in+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma+cells.">C2-ceramide induces cell death and protective autophagy in head and neck squamous cell carcinoma cells.</a> Int J Mol Sci. 15, 3336-3355 (2014).</li><li>McFarland, R., Taylor, R. W., Turnbull, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+neurological+perspective+on+mitochondrial+disease.">A neurological perspective on mitochondrial disease.</a> Lancet Neurol. 9, 829-840 (2010).</li><li>Alston, C. L., Rocha, M. C., Lax, N. Z., Turnbull, D. M., Taylor, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+genetics+and+pathology+of+mitochondrial+disease.">The genetics and pathology of mitochondrial disease.</a> J Pathol. 241, 236-250 (2017).</li><li>Zhang, W., Wang, X., Chen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resveratrol+induces+mitochondria-mediated+AIF+and+to+a+lesser+extent+caspase-9-dependent+apoptosis+in+human+lung+adenocarcinoma+ASTC-a-1+cells.">Resveratrol induces mitochondria-mediated AIF and to a lesser extent caspase-9-dependent apoptosis in human lung adenocarcinoma ASTC-a-1 cells.</a> Mol Cell Biochem. 354, 29-37 (2011).</li><li>Bernardi, P., Rasola, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+and+cell+death:+the+mitochondrial+connection.">Calcium and cell death: the mitochondrial connection.</a> Subcell Biochem. 45, 481-506 (2007).</li><li>Perveen, S., Yang, J. S., Ha, T. J., Yoon, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyanidin-3-glucoside+Inhibits+ATP-induced+Intracellular+Free+Ca(2+)+Concentration,+ROS+Formation+and+Mitochondrial+Depolarization+in+PC12+Cells.">Cyanidin-3-glucoside Inhibits ATP-induced Intracellular Free Ca(2+) Concentration, ROS Formation and Mitochondrial Depolarization in PC12 Cells.</a> Korean J Physiol Pharmacol. 18, 297-305 (2014).</li><li>Paddock, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+and+practices+of+laser+scanning+confocal+microscopy.">Principles and practices of laser scanning confocal microscopy.</a> Mol Biotechnol. 16, 127-149 (2000).</li><li>Paddock, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=To+boldly+glow...+applications+of+laser+scanning+confocal+microscopy+in+developmental+biology.">To boldly glow... applications of laser scanning confocal microscopy in developmental biology.</a> BioEssays : news and reviews in molecular, cellular and developmental biology. 16, 357-365 (1994).</li></ol>

यह अच्छी तरह से प्रलेखित है कि सीएल− चैनल आंतरिक वातावरण के रक्तस्तम्भन को बनाए रखने और सेल प्रसार और apoptosis15,16में महत्वपूर्ण भूमिका निभाने में आवश्यक हैं । इसलिए, आयन चैनल के बी?...

Rh123 एक cationic प्रतिदीप्ति डाई है, जो transmembrane क्षमता के लिए एक संकेतक के रूप में कार्य करता है । Rh123 कोशिका झिल्ली मर्मज्ञ और अंदर और बाहर झिल्ली1के संभावित अंतर के आधार पर mitochondrial मैट्रिक्स में प्रवेश करने में सक्षम है । Apoptosis mitochondrial झिल्ली अखंडता की क्षति की ओर जाता है । mitochondrion पारगम्यता संक्रमण ताकना (MPTP) खोलने के लिए और एमएमपी, जो Rh123 के mitochondria के बाहर करने के लिए जारी में परिणामों में बारी के पतन के लिए नेतृत्व करेंगे । अंत में, मजबूत हरी प्रतिदीप्ति संकेत प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप के तहत पता लगाया जाएगा । यह अच्छी तरह से प्रलेखित है कि एमएमपी और ऊंचा झिल्ली पारगम्यता की कमी सेल apoptosis2के प्रारंभिक लक्षण हैं । इसलिए, Rh123 एमएमपी परिवर्तन और कक्ष apoptosis की पुनरावृत्ति का पता लगाने के लिए लागू किया जा सकता है ।
दुनिया में 6 सबसे आम कार्सिनोमा के रूप में, सिर और गर्दन के कैंसर गंभीर रूप से एक व्यक्ति के स्वास्थ्य3बिगड़ती है । हालांकि कई दृष्टिकोण हाल के वर्षों में विकसित किए गए, सिर और गर्दन स्क्वैमस सेल कार्सिनोमा (HNSCC) से पीड़ित रोगियों के लिए उपचार के नैदानिक परिणाम अभी भी4आदर्श नहीं है । नए चिकित्सकीय तरीकों की खोज5HNSCC के लिए उपचार में सुधार कर सकते हैं । कई जैविक प्रक्रियाओं को शामिल आयन चैनल अलग6कैंसर के विकास में एक महत्वपूर्ण भूमिका प्रदर्शित करते हैं । सीएल चैनल की आंशिक या कुल भागीदारी अत्यधिक सक्रिय प्रवास, प्रसार और इनवेसिव की उच्च दर सहित नवोत्पादित परिवर्तन के विभिन्न गुणों में शामिल हैं । इस के प्रकाश में, CLIC, एक उपंयास प्रोटीन परिवार, कैंसर के इलाज के लिए चिकित्सकीय लक्ष्य के एक होनहार वर्ग के रूप में सूचीबद्ध किया गया है6,7। हाल के अध्ययनों से पता चला है कि CLIC1, CLIC4, और CLIC5 सहित CLIC परिवार के सदस्यों, कार्डियक mitochondrial और प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों (ROS) के स्तर को स्थानीयकृत CLIC5 द्वारा किया जाता है, mitochondrial के कार्यात्मक भूमिका का संकेत-सीएल स्थित - अपोप्तोटिक जवाब में चैनल8. CLIC4, CLIC परिवार के एक सदस्य (भी mtCLIC, P64H1, और RS43 के रूप में जाना जाता है), सबसे बड़े पैमाने पर कैंसर की कोशिकाओं और अपोप्तोटिक, Golgi endoplasmic सहित सेलुलर स्थान में अपनी जालिका विनियमन संपत्तियों के लिए अध्ययन किया गया है, और मानव में mitochondrion keratinocytes७,९,१०. CLIC4 की अभिव्यक्ति प्रोफ़ाइल ट्यूमर परिगलन कारक द्वारा विनियमित किया गया था-α (TNF-α), P53, और बाहरी उत्तेजना. और CLIC4 के downregulation व्यक्त एक अपोप्तोटिक प्रतिक्रिया मुख्य रूप से mitochondrial मार्ग के माध्यम से Bcl के असंतुलन के साथ साथ-2 परिवार के सदस्यों को ट्रिगर, caspase झरना के सक्रियकरण, और cytochrome सी11की रिहाई, 12 , 13. इसलिए, एमएमपी माप CLIC4 से संबंधित apoptosis का पता लगाने के लिए महत्वपूर्ण है, और Rh123 एक आदर्श प्रतिदीप्ति संकेतक के रूप में कार्य करता है ।
वर्तमान अध्ययन HN4 कोशिकाओं में CLIC4 पछाड़ना-प्रेरित apoptosis अध्ययन करने के लिए एमएमपी का पता लगाने के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल का वर्णन है । Rh123 एमएमपी के परिवर्तन का निरीक्षण करने के लिए एक प्रतिदीप्ति जांच के रूप में प्रयोग किया जाता है । कॉमन प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप और फोकल लेजर स्कैनिंग प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप के तहत, एमएमपी के वास्तविक समय में उतार-चढ़ाव का समाधान हो सकता है । हम लाभ और विस्तार में फोकल लेजर स्कैनिंग प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप के आवेदन की सीमाओं पर चर्चा, और यह भी अन्य तरीकों के साथ तुलना. इस प्रोटोकॉल को भी अन्य apoptosis से संबंधित अध्ययन के लिए लागू किया जा सकता है ।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1296px;" width="1294">
	<colgroup>
		<col />
		<col span="2" />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:372px;">HNSCC cells</td>
			<td style="width:183px;">ATCC</td>
			<td style="width:183px;">CRL-3241</td>
			<td style="width:559px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Polylysine</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>P4981</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;">Specific siRNA for human CLIC4</td>
			<td>Biomics</td>
			<td>NM_013943</td>
			<td style="width:559px;">(accession numbers, NM_013943; corresponding to the cDNA sequence 
			5-GCTGAAGGAGGAGGACAAAGA-3) and scrambled siRNA (5 ACGCGUAACGCGGGAAUUU-3) were designed and obtained from Biomics Company</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Lipofectamine 2000 Transfection Reagent&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>L3000-015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Opti-MEM I Reduced Serum Medium, GlutaMAX</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>51985-042</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Rhodamine 123, FluoroPure grede</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>R22420</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:47px;width:372px;">Dulbecco&#8217;smodified Eagle medium (DMEM, 4.5 g/L glucose)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11965-084</td>
			<td style="width:559px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:372px;">Fetal Bovine Serum, Qualified, Australia Origin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10099141</td>
			<td style="width:559px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:372px;">Trypsin-EDTA Solution</td>
			<td>Beyotime</td>
			<td>C0201</td>
			<td style="width:559px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:372px;">Antibiotic-Antimycotic, 100X</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15240062</td>
			<td style="width:559px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Laser Scanning Confocal Microscopy</td>
			<td>Leica Microsystems GmbH</td>
			<td>LEICA.SP5-DMI6000-DIC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Nikon Eclipse TE300 Inverted Microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Metaflour, V7.5.0.0</td>
			<td>Universal Imaging Corporation</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Leica application suite, v2.6.0.7266</td>
			<td>Leica Microsystems GmbH</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Microsoft office Excel 2007</td>
			<td>Microsoft</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Sigma Plot 12.5</td>
			<td>Systat Software</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Attofluor Cell Chamber</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A7816</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

detection of mitochondria membrane potential to study clic4 knockdown-induced hn4 cell apoptosis in vitro

mitochondrial झिल्ली क्षमता (एमएमपी, ΔΨm) की कमी अपोप्तोटिक झरना में जल्द घटना माना जाता है । यह क्रोमेटिन संघनित्र और डीएनए टूटना सहित नाभिकीय अपोप्तोटिक विशेषताओं से भी आगे होता है । एक बार एमएमपी पतन, सेल apoptosis अचल शुरू होगा । lipophilic cationic रंजक की एक श्रृंखला mitochondrion के मैट्रिक्स के अंदर कोशिका झिल्ली और कुल के माध्यम से पारित कर सकते हैं, और एमएमपी परिवर्तन का मूल्यांकन करने के लिए प्रतिदीप्ति मार्कर के रूप में सेवा. सीएल- intracellular चैनल (CLIC) परिवार के छह सदस्यों में से एक के रूप में, CLIC4 मुख्य रूप से mitochondrial मार्ग के माध्यम से सेल अपोप्तोटिक प्रक्रिया में भाग लेता है । यहाँ हम Rhodamine १२३ (Rh123) के प्रतिदीप्ति उतार-चढ़ाव की निगरानी के माध्यम से एमएमपी को मापने के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल का वर्णन करते हैं, जिसके माध्यम से हम apoptosis CLIC4 द्वारा प्रेरित पछाड़ना का अध्ययन करते हैं । हम लाभ और विस्तार में फोकल लेजर स्कैनिंग और सामांय प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप के आवेदन की सीमाओं पर चर्चा, और यह भी अंय तरीकों के साथ तुलना करें ।

वर्तमान अध्ययन में, एमएमपी का पता लगाने के लिए Rh123 लागू किया गया था । प्रारंभ में, HN4 कोशिकाओं निंनलिखित प्रतिदीप्ति धुंधला प्रयोगों के लिए संस्कृति थे । चिमटी 6-well प्लेट्स (चित्रा 1<s...

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Detection of Mitochondria Membrane Potential to Study CLIC4 Knockdown-induced HN4 Cell Apoptosis In Vitro

यहाँ हम mitochondrial झिल्ली क्षमता (एमएमपी) की पहचान और अध्ययन CLIC4 पछाड़ना-प्रेरित HN4 सेल apoptosis इन विट्रो मेंrhodamine १२३ के आवेदन के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं । कॉमन प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप और फोकल लेजर स्कैनिंग प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप के तहत एमएमपी के रीयल-टाइम चेंज को रिकॉर्ड किया गया ।

CLIC4 पछाड़ना-प्रेरित HN4 सेल Apoptosis इन विट्रो में अध्ययन करने के लिए Mitochondria झिल्ली क्षमता का पता लगाने

Depletion of the mitochondrial membrane potential (MMP, &#916;&#936;m) is considered the earliest event in the apoptotic cascade. It even occurs ahead of ...

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प्रवाह साइटोमेट्री द्वारा जेनोटॉक्सिक तनाव के बाद सेल साइकिल-विशिष्ट मापन

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Using the Chicken Chorioallantoic Membrane In Vivo Model to Study Gynecological and Urological Cancers

स्त्री रोग और यूरोलॉजिकल कैंसर का अध्ययन करने के लिए वीवो मॉडल में चिकन कोरिओलांटोइक झिल्ली का उपयोग करना

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