Name: in vitro phagocytosis of myelin debris by bone marrow-derived macrophages
Uploaded: 2017-12-30T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vitro Phagocytosis of Myelin Debris by Bone Marrow-Derived Macrophages at JoVE.com

लेखक ग्लेन सैंज-Hodgson, चिकित्सा के FSU कॉलेज में वीडियो उत्पादन, संपादन में अपने सभी काम के लिए मीडिया विशेषज्ञ, और आवाज पर शुक्रिया अदा करना चाहूंगा ।
इस काम को राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान (R01GM100474 और R01GM072611) ने समर्थन दिया था.

तरीकों यहां वर्णित है और खंड 2 में फ्लोरिडा राज्य विश्वविद्यालय संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति (IACUC) द्वारा अनुमोदित किया गया है और देखभाल और प्रयोगशाला पशुओं, 8वें संस्करण के उपयोग के लिए गाइड ?...

<ol>
	<li>Wynn, T. A., Chawla, A., Pollard, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophage+biology+in+development,+homeostasis+and+disease.">Macrophage biology in development, homeostasis and disease.</a> Nature. 496 (7446), 445-455 (2013).</li><li>Unanue, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antigen-presenting+function+of+the+macrophage.">Antigen-presenting function of the macrophage.</a> Annu Rev Immunol. 2, 395-428 (1984).</li><li>Cavaillon, J. 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K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimisation+of+oil+red+staining+permits+combination+with+immunofluorescence+and+automated+quantification+of+lipids.">Optimisation of oil red staining permits combination with immunofluorescence and automated quantification of lipids.</a> Histochem Cell Biol. 116 (1), 63-68 (2001).</li><li>Fang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipopolysaccharide-Induced+Macrophage+Inflammatory+Response+Is+Regulated+by+SHIP.">Lipopolysaccharide-Induced Macrophage Inflammatory Response Is Regulated by SHIP.</a> J Immunol. 173 (1), (2004).</li><li>Martinez, F. O., Sica, A., Mantovani, A., Locati, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophage+activation+and+polarization.">Macrophage activation and polarization.</a> Front Biosci. 13, (2008).</li><li>Mosser, D. M., Edwards, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exploring+the+full+spectrum+of+macrophage+activation.">Exploring the full spectrum of macrophage activation.</a> Nat Rev Immunol. 8 (12), 958-969 (2008).</li></ol>

प्रक्रियाओं यहां वर्णित दोनों ताजा पृथक कच्चे तेल सीएनएस myelin मलबे और प्राथमिक अस्थि मज्जा का उपयोग-मैक्रोफेज व्युत्पंन । पशु व्यय को कम करने के लिए, हम अनुशंसा करते हैं कि दोनों दिमाग और अस्थि मज्जा को?...

अस्थि मज्जा-व्युत्पंन मैक्रोफेज (BMDMs) सहज और अनुकूली प्रतिरक्षा प्रणाली के बीच एक महत्वपूर्ण कड़ी कर रहे हैं । antigen प्रस्तुत कक्षों (APCs) के रूप में, वे लिम्फोसाइटों के साथ दोनों antigen प्रस्तुति और cytokine रिलीज़1,2,3के माध्यम से संवाद कर सकते हैं । हालांकि, पेशेवर फ़ैगोसाइट के रूप में, उनके प्राथमिक समारोह रोगजनकों, वृद्ध कोशिकाओं, और सेलुलर मलबे1,4स्पष्ट करने के लिए है । एक रीढ़ की हड्डी की चोट (विज्ञान) के बाद, myelin मलबे की पर्याप्त मात्रा मरने oligodendrocytes से उत्पंन होता है, सेल प्रकार axon सीएनएस के लिए जिंमेदार5myelination । हम और दूसरों को पता चला है कि myelin मलबे की मंजूरी मुख्य रूप से BMDMs5,6,7घुसपैठ की जिंमेदारी है । हालांकि, रीढ़ की हड्डी में चोट साइटों myelin मलबे की समाई के भीतर एक समर्थक भड़काऊ राज्य5,8,9की ओर इन सामांय विरोधी भड़काऊ कोशिकाओं को शिफ्ट करने का सुझाव दिया गया है । घायल रीढ़ की हड्डी में तंत्रिका-सूजन के प्रमुख मध्यस्थों के रूप में, BMDMs महत्वपूर्ण नैदानिक लक्ष्य हैं ।
घायल रीढ़ की हड्डी में BMDMs के प्रभाव की जांच करने में मदद करने के लिए, हम एक इन विट्रो मॉडल सीधे अध्ययन कैसे BMDMs myelin मलबे का जवाब करने के लिए विकसित किया है । जैविक प्रासंगिकता में सुधार करने के लिए, दोनों प्राथमिक murine BMDMs और हौसले से पृथक myelin मलबे इन जांचों में उपयोग किया जाता है । इस तरह के रूप में, यहां प्रस्तुत तरीके भी विस्तार अलगाव और प्राथमिक murine BMDMs की संस्कृति, और एक संशोधित सुक्रोज ढाल को murine myelin मलबे व्युत्पंन10,11,12को अलग इस्तेमाल किया तकनीक । Myelin मलबे आसानी से एक फ्लोरोसेंट डाई, carboxyfluorescein succinimidyl एस्टर (CFSE) के साथ लेबल किया जा सकता है, internalization द्वारा अपने BMDMs को ट्रैक करने के लिए CFSE । यह गैर साइटोटोक्सिक है, और इसके संकीर्ण फ्लोरोसेंट स्पेक्ट्रम परमिट है क्योंकि इस आवेदन के लिए अच्छी तरह से अनुकूल है अन्य फ्लोरोसेंट जांच के साथ division13,14. निम्नलिखित phagocytosis, myelin मलबे लिपिड lysosomes के माध्यम से ले जाया जाता है और intracellular लिपिड बूंदों में तटस्थ लिपिड के रूप में पैक5। इस intracellular लिपिड संचय यों तो, हम एक तेल लाल ओ (ओरो) दाग मात्रात्मक छवि विश्लेषण के लिए अनुकूलित विधि प्रस्तुत करते हैं । यह सरल धुंधला विधि मजबूत प्रतिलिपि परिणाम और ठहराव15पैदा करता है । इन तरीकों myelin मलबे phagocytosis और लिपिड प्रतिधारण सीमित विशेष उपकरणों के साथ के अध्ययन की सुविधा ।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="669">
	<tbody>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:42px;width:180px;">DMEM</td>
			<td style="width:149px;">GE Healthcare Life Sciences</td>
			<td style="width:115px;">SH30243.01</td>
			<td style="width:225px;">High glucose with L-glutamine, sodium pyruvate</td>
		</tr>
		<tr height="62">
			<td height="62" style="height:63px;width:180px;">Penicillin-Streptomycin Solution</td>
			<td style="width:149px;">Corning</td>
			<td style="width:115px;">30-002-CI</td>
			<td style="width:225px;">100X Solution</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:42px;width:180px;">New Born Calf Serum (NCS)</td>
			<td style="width:149px;">Rocky Mountain Biologics</td>
			<td style="width:115px;">NBS-BBT-5XM</td>
			<td style="width:225px;">United States Origin</td>
		</tr>
		<tr height="83">
			<td height="83" style="height:83px;width:180px;">NCTC clone 929 [L cell, L-929, derivative of Strain L]&#160;</td>
			<td style="width:149px;">ATCC</td>
			<td style="width:115px;">CCL-1</td>
			<td style="width:225px;">L929 Cell Line of Conditioned Media Preparation</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:42px;width:180px;">24-well Cell Culture Plates</td>
			<td style="width:149px;">VWR</td>
			<td style="width:115px;">10062-896&#160;</td>
			<td style="width:225px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;width:180px;">Cell Culture Dish</td>
			<td style="width:149px;">Greiner Bio-One</td>
			<td style="width:115px;">639960</td>
			<td style="width:225px;">Polystyrine, 145/20mm</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:42px;width:180px;">CFSE Cell Proliferation Kit</td>
			<td style="width:149px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:115px;">C34570</td>
			<td style="width:225px;">DMSO for Reconsitution Provided</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:42px;width:180px;">Fluoro-gel with Tris Buffer&#160;</td>
			<td style="width:149px;">Electron Microscopy Sciences</td>
			<td style="width:115px;">17985-11</td>
			<td style="width:225px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;width:180px;">Oil Red O</td>
			<td style="width:149px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:115px;">O0625</td>
			<td style="width:225px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:180px;">Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Materials</td>
			<td style="width:149px;">Company</td>
			<td style="width:115px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:225px;">Comments</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:42px;width:180px;">Ultracentrifuge Tubes</td>
			<td style="width:149px;">Beckman Coulter</td>
			<td style="width:115px;">326823</td>
			<td style="width:225px;">Thinwall, Polypropylene, 38.5 mL, 25 x 89 mm</td>
		</tr>
		<tr height="62">
			<td height="62" style="height:63px;width:180px;">SW 32 Ti Ultracentrifuge Rotor</td>
			<td style="width:149px;">Beckman Coulter</td>
			<td style="width:115px;">369650</td>
			<td style="width:225px;">SW 32 Ti Rotor, Swinging Bucket, Titanium</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:42px;width:180px;">Hand Held Rotary Homogenizer</td>
			<td style="width:149px;">Fisher Science</td>
			<td style="width:115px;">08-451-71</td>
			<td style="width:225px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vitro phagocytosis of myelin debris by bone marrow-derived macrophages

अस्थि मज्जा-व्युत्पंन मैक्रोफेज (BMDMs) परिपक्व ल्यूकोसाइट्स कि पेशेवर फ़ैगोसाइट कणों की एक किस्म समाशोधन में सक्षम के रूप में एक महत्वपूर्ण शारीरिक भूमिका की सेवा कर रहे हैं । आम तौर पर, BMDMs केंद्रीय तंत्रिका तंत्र (सीएनएस) से प्रतिबंधित कर रहे हैं, लेकिन एक चोट के बाद, वे आसानी से घुसपैठ कर सकते हैं । एक बार घायल सीएनएस ऊतक के भीतर, BMDMs प्राथमिक कोशिका प्रकार चोट के क्लीयरेंस के लिए जिंमेदार है-सेलुलर मलबे व्युत्पंन, लिपिड अमीर myelin मलबे की बड़ी मात्रा सहित । BMDM घुसपैठ और myelin मलबे के neuropathological असर सीएनएस के भीतर phagocytosis जटिल है और अच्छी तरह से समझ में नहीं आता । प्रोटोकॉल यहां वर्णित, सीएनएस चोट के संदर्भ में BMDMs के प्रत्यक्ष इन विट्रो अध्ययन के लिए अनुमति देते हैं । हम कवर murine BMDM अलगाव और संस्कृति, myelin मलबे की तैयारी, और परख BMDM myelin मलबे phagocytosis का आकलन करने के लिए । इन तकनीकों महत्वपूर्ण विशेष उपकरण या सामग्री के लिए की आवश्यकता के बिना मजबूत quantifiable परिणाम का उत्पादन, अभी तक आसानी से शोधकर्ताओं की जरूरतों को पूरा करने के लिए अनुकूलित किया जा सकता है ।

CFSE लेबल myelin मलबे के साथ BMDMs के उपचार स्पष्ट internalization (चित्रा 2) उपज चाहिए । जबकि एक 3 घंटे के संपर्क समय BMDMs के लिए पर्याप्त है phagocytose मजबूत बहाव का पता लगाने के लिए myelin मलबे जोड़ा, intracellular संचय के रूप में छोटे र...

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In Vitro Phagocytosis of Myelin Debris by Bone Marrow-Derived Macrophages

हम वर्तमान विधियों प्राथमिक murine अस्थि मज्जा की phagocytic क्षमता का आकलन करने के लिए-फ्लोरोसेंट लेबल myelin मलबे और intracellular लिपिड छोटी बूंदों धुंधला का उपयोग मैक्रोफेज व्युत्पंन ।

इन विट्रो अस्थि मज्जा द्वारा Myelin मलबे के Phagocytosis-व्युत्पंन मैक्रोफेज

Bone marrow-derived macrophages (BMDMs) are mature leukocytes that serve a critical physiological role as professional phagocytes capable of clearing a ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

In Vitro Phagocytosis of Myelin Debris by Bone Marrow-Derived Macrophages

Transfection of Mouse Retinal Ganglion Cells by in vivo Electroporation

Transfection of Mouse Retinal Ganglion Cells by in vivo Electroporation

माउस रेटिनल नाड़ीग्रन्थि कोशिकाओं के द्वारा अभिकर्मक Vivo में Electroporation

The targeting and refinement of RGC projections to the midbrain is a popular and powerful model system for studying how precise patterns of neural ...

Inducing Plasticity of Astrocytic Receptors by Manipulation of Neuronal Firing Rates

Neuronal फायरिंग दरों के हेरफेर से astrocytic रिसेप्टर्स की Plasticity उत्प्रेरण

Close to two decades of research has established that astrocytes in situ and in vivo express numerous G protein-coupled receptors (GPCRs) that can be ...

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

समकालिक<em&gt; पूर्व vivo</emदो Retinas की&gt; कार्यात्मक परीक्षण से<em&gt; Vivo</em&gt; Electroretinogram सिस्टम

An In vivo electroretinogram (ERG) signal is composed of several overlapping components originating from different retinal cell types, as well as noise ...

A Novel In Vitro Live-imaging Assay of Astrocyte-mediated Phagocytosis Using pH Indicator-conjugated Synaptosomes

A Novel In Vitro Live-imaging Assay of Astrocyte-mediated Phagocytosis Using pH Indicator-conjugated Synaptosomes

एक उपन्यास इन विट्रो लाइव-इमेजिंग Astrocyte की परख-मध्यस्थता Phagocytosis का उपयोग पीएच संकेतक-संयुग्मित Synaptosomes

Astrocytes are the major cell type in the brain and directly contact synapses and blood vessels. Although microglial cells have been considered the major ...

Ocular Kinematics Measured by In Vitro Stimulation of the Cranial Nerves in the Turtle

Ocular Kinematics Measured by In Vitro Stimulation of the Cranial Nerves in the Turtle

नेत्र कीनेमेटीक्स द्वारा मापा इन विट्रो कछुए में कपाल नसों की उत्तेजना

After animals are euthanized, their tissues begin to die. Turtles offer an advantage because of a longer survival time of their tissues, especially when ...

Identification of Dopamine D1-Alpha Receptor Within Rodent Nucleus Accumbens by an Innovative RNA In Situ Detection Technology

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कुतर नाभिक के भीतर डोपामाइन D1-अल्फा रिसेप्टर की पहचान सीटू का पता लगाने प्रौद्योगिकी में एक अभिनव आरएनए द्वारा Accumbens

In the central nervous system, the D1-alpha subtype receptor (Drd1&#945;) is the most abundant dopamine (DA) receptor, which plays a vital role in ...

Modeling Charcot-Marie-Tooth Disease In Vitro by Transfecting Mouse Primary Motoneurons

Modeling Charcot-Marie-Tooth Disease In Vitro by Transfecting Mouse Primary Motoneurons

Transfecting माउस प्राथमिक Motoneurons द्वारा इन विट्रो में Charcot-Marie-टूथ रोग मॉडलिंग

Neurodegeneration of spinal motoneurons (MNs) is implicated in a large spectrum of neurological disorders including amyotrophic lateral sclerosis, ...

Disruption of Frontal Lobe Neural Synchrony During Cognitive Control by Alcohol Intoxication

शराब नशा द्वारा संज्ञानात्मक नियंत्रण के दौरान ललाट पालि तंत्रिका Synchrony के विघटन

Decision making relies on dynamic interactions of distributed, primarily frontal brain regions. Extensive evidence from functional magnetic resonance ...

Real-time In Vitro Monitoring of Odorant Receptor Activation by an Odorant in the Vapor Phase

वाष्प चरण में एक गंधक द्वारा गंधक रिसेप्टर सक्रियण के वास्तविक समय में विट्रो निगरानी

Olfactory perception begins with the interaction of odorants with odorant receptors (OR) expressed by olfactory sensory neurons (OSN). Odor recognition ...

Rapid Isolation of Dorsal Root Ganglion Macrophages

डोर्सल रूट गंडिका मैक्रोफेज का तेजी से अलगाव

There are growing interests to study the molecular and cellular interactions among immune cells and sensory neurons in the dorsal root ganglia after ...