Name: in vitro phagocytosis of myelin debris by bone marrow-derived macrophages
Uploaded: 2017-12-30T15:00:00
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著者は、グレン ・ サンガー ・ ホジソン、ビデオ制作、編集、音声のすべての彼の仕事のため旧ソ連医科大学、メディアの専門家に感謝したいと思います。
この作品は、国立衛生研究所 (R01GM100474 および R01GM072611) によって支えられました。

メソッドここで説明のセクション 2 では、フロリダ州立大学機関動物のケアおよび使用委員会 (IACUC) によって承認されているし、ケアと 8th版実験動物の使用のためのガイドに定めるガイドラインに従います.このプロトコルでは、これのすべての動物は、使用まで専用の実験室の動物実験施設で家をしています。生体内で実験を犠牲にする前に実行がありませんでした。...

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	<li>Wynn, T. A., Chawla, A., Pollard, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophage+biology+in+development,+homeostasis+and+disease.">Macrophage biology in development, homeostasis and disease.</a> Nature. 496 (7446), 445-455 (2013).</li><li>Unanue, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antigen-presenting+function+of+the+macrophage.">Antigen-presenting function of the macrophage.</a> Annu Rev Immunol. 2, 395-428 (1984).</li><li>Cavaillon, J. 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O., Sica, A., Mantovani, A., Locati, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophage+activation+and+polarization.">Macrophage activation and polarization.</a> Front Biosci. 13, (2008).</li><li>Mosser, D. M., Edwards, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exploring+the+full+spectrum+of+macrophage+activation.">Exploring the full spectrum of macrophage activation.</a> Nat Rev Immunol. 8 (12), 958-969 (2008).</li></ol>

ここで説明する手順は、新鮮単離粗中枢神経系ミエリン破片とプライマリ骨髄由来マクロファージを利用します。動物の支出を減らすためには、両方の脳をお勧めします、犠牲の時に各マウスの骨髄細胞を収穫します。一緒に働く 2 つの研究者は、同時に両方の材料を準備できます。また、脳は髄鞘の残骸の分離前に抗生物質を添加した PBS で-80 ° C で保存できます。脳の私たちの経験は、?...

骨髄由来マクロファージ (BMDMs) は、自然免疫と適応免疫システム間の重要なリンクです。抗原提示細胞 (APCs)、彼らは両方の抗原提示によるリンパ球と通信できるし、サイトカインのリリース1,2,3。しかし、プロの食、主な機能は病原体、高齢者の細胞および細胞残骸1,4をクリアします。脊髄損傷 (SCI)、次は、中枢神経系の軸索の髄鞘化5担当細胞型死ぬオリゴデンドロ サイトから髄鞘の残骸の相当な量が生成されますように。私たちと他の人は髄鞘の残骸のクリアランスが主に浸潤 BMDMs5,6、7の責任であることを示しています。しかし、脊髄損傷で炎症状態5,8,9に向けてこれらの通常抗炎症のセルをシフトさせるサイト髄鞘の残骸の貪食を示唆されています。脊髄損傷における神経炎症の主要メディエーターとして BMDMs、重要な臨床目標です。
脊髄損傷の BMDMs の影響を調査するため、直接 BMDMs と髄鞘の残骸の対応を研究する生体外モデルを開発しました。生物学的関連性を高めるためには、プライマリ マウス BMDMs と新鮮単離髄鞘の残骸の両方はこれらの調査で使用されます。プライマリ マウス BMDMs の分離文化紹介方法についても詳しく説明し、マウス中枢神経系を分離するために使用変更されたショ糖勾配法は髄鞘の残骸10、11,12派生します。髄鞘の残骸は、蛍光染料、carboxyfluorescein サクシニミジルエステル (CFSE)、BMDMs。 CFSE によってその内面は非細胞傷害性だからこのアプリケーションに適してトラックとその狭い蛍光スペクトル許可で容易にラベル付けできます。その他の蛍光多重13,14をプローブします。次の貪食、髄鞘の残骸の脂質は、リソソームを経由、細胞内脂質液滴5に中性脂質としてパッケージします。この細胞内の脂質の蓄積を定量化するには、オイル赤い O (オロ) 染色法の定量的画像解析の最適化を提案する.この単純な染色法は、堅牢な再現性のある結果と定量化15を生成します。これらのメソッドは、限られた特殊な設備とミエリンの破片貧食能および脂質保持の研究を促進します。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="669">
	<tbody>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:42px;width:180px;">DMEM</td>
			<td style="width:149px;">GE Healthcare Life Sciences</td>
			<td style="width:115px;">SH30243.01</td>
			<td style="width:225px;">High glucose with L-glutamine, sodium pyruvate</td>
		</tr>
		<tr height="62">
			<td height="62" style="height:63px;width:180px;">Penicillin-Streptomycin Solution</td>
			<td style="width:149px;">Corning</td>
			<td style="width:115px;">30-002-CI</td>
			<td style="width:225px;">100X Solution</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:42px;width:180px;">New Born Calf Serum (NCS)</td>
			<td style="width:149px;">Rocky Mountain Biologics</td>
			<td style="width:115px;">NBS-BBT-5XM</td>
			<td style="width:225px;">United States Origin</td>
		</tr>
		<tr height="83">
			<td height="83" style="height:83px;width:180px;">NCTC clone 929 [L cell, L-929, derivative of Strain L]&#160;</td>
			<td style="width:149px;">ATCC</td>
			<td style="width:115px;">CCL-1</td>
			<td style="width:225px;">L929 Cell Line of Conditioned Media Preparation</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:42px;width:180px;">24-well Cell Culture Plates</td>
			<td style="width:149px;">VWR</td>
			<td style="width:115px;">10062-896&#160;</td>
			<td style="width:225px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;width:180px;">Cell Culture Dish</td>
			<td style="width:149px;">Greiner Bio-One</td>
			<td style="width:115px;">639960</td>
			<td style="width:225px;">Polystyrine, 145/20mm</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:42px;width:180px;">CFSE Cell Proliferation Kit</td>
			<td style="width:149px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:115px;">C34570</td>
			<td style="width:225px;">DMSO for Reconsitution Provided</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:42px;width:180px;">Fluoro-gel with Tris Buffer&#160;</td>
			<td style="width:149px;">Electron Microscopy Sciences</td>
			<td style="width:115px;">17985-11</td>
			<td style="width:225px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;width:180px;">Oil Red O</td>
			<td style="width:149px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:115px;">O0625</td>
			<td style="width:225px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:180px;">Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Materials</td>
			<td style="width:149px;">Company</td>
			<td style="width:115px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:225px;">Comments</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:42px;width:180px;">Ultracentrifuge Tubes</td>
			<td style="width:149px;">Beckman Coulter</td>
			<td style="width:115px;">326823</td>
			<td style="width:225px;">Thinwall, Polypropylene, 38.5 mL, 25 x 89 mm</td>
		</tr>
		<tr height="62">
			<td height="62" style="height:63px;width:180px;">SW 32 Ti Ultracentrifuge Rotor</td>
			<td style="width:149px;">Beckman Coulter</td>
			<td style="width:115px;">369650</td>
			<td style="width:225px;">SW 32 Ti Rotor, Swinging Bucket, Titanium</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:42px;width:180px;">Hand Held Rotary Homogenizer</td>
			<td style="width:149px;">Fisher Science</td>
			<td style="width:115px;">08-451-71</td>
			<td style="width:225px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vitro phagocytosis of myelin debris by bone marrow-derived macrophages

骨髄由来マクロファージ (BMDMs) は、さまざまな粒子をクリアできるプロの食として重要な生理的役割を果たす成熟した白血球です。通常、中枢神経系 (CNS)、BMDMs が制限されているが、外傷後に容易に侵入することができます。一度負傷した中枢神経組織内 BMDMs、外傷由来の細胞の残骸を含む脂質豊富な髄鞘の残骸の大量のクリアランスに対して責任がある一次電池タイプです。中枢神経系内 BMDM 浸潤と髄鞘の残骸貪食能の神経病理学的影響が複雑でも理解していません。ここで、説明プロトコルは、BMDMs の直接の in vitro研究中枢神経損傷のコンテキストで許可します。BMDM 髄鞘の残骸の貪食能を評価するためにマウスの BMDM 分離と文化、髄鞘の残骸の準備とアッセイを取り上げます。これらの技術は重要な特殊な機器や材料を必要とせず堅牢な定量化可能な結果を生むまだ研究者のニーズに合わせて簡単にカスタマイズすることができます。

CFSE は髄鞘の残骸のラベルと BMDMs の治療は、明確な内部 (図 2) を得られるはず。3 時間作用時間は下流の検出が確実に十分な追加された髄鞘の残骸の貪食に BMDMs のための十分なが、相互作用の 1 時間ほどの細胞内蓄積を観察できます。ただし、いくつかの髄鞘の残骸まだあるかもしれない細胞表面に洗浄後。これは不十分な洗浄またはない貪食の初期の段階で完全に内?...

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In Vitro Phagocytosis of Myelin Debris by Bone Marrow-Derived Macrophages

蛍光に分類された髄鞘の残骸と細胞内脂質液滴染色を使用してプライマリ マウス骨髄由来マクロファージの貪食能を評価する手法を提案します。

体外骨髄由来マクロファージによって髄鞘の残骸の貪食

Bone marrow-derived macrophages (BMDMs) are mature leukocytes that serve a critical physiological role as professional phagocytes capable of clearing a ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

In Vitro Phagocytosis of Myelin Debris by Bone Marrow-Derived Macrophages

Transfection of Mouse Retinal Ganglion Cells by in vivo Electroporation

Transfection of Mouse Retinal Ganglion Cells by in vivo Electroporation

によるマウス網膜神経節細胞のトランスフェクション in vivoでエレクトロポレーション

The targeting and refinement of RGC projections to the midbrain is a popular and powerful model system for studying how precise patterns of neural ...

Inducing Plasticity of Astrocytic Receptors by Manipulation of Neuronal Firing Rates

神経発火率を操作することによってアストロサイト受容体の可塑性を誘導すること

Close to two decades of research has established that astrocytes in situ and in vivo express numerous G protein-coupled receptors (GPCRs) that can be ...

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

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同時<em&gt; ex vivoで</emによる二つの網膜の&gt;機能テスト<em&gt; in vivoで</em&gt;電図システム

An In vivo electroretinogram (ERG) signal is composed of several overlapping components originating from different retinal cell types, as well as noise ...

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