Name: hydrodynamic renal pelvis injection for non-viral expression of proteins in the kidney
Uploaded: 2018-01-08T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Hydrodynamic Renal Pelvis Injection for Non-viral Expression of Proteins in the Kidney at JoVE.com

جائزة تطوير المهنة من إدارة شؤون قدامى المحاربين [BX002797] دعم L.E.W. والمعاهد الوطنية للصحة [R01-DK095867] و "جمعية القلب الأمريكية" [15GRNT25700209] دعم كيركراده المعاهد الوطنية للصحة [DK093660]، وإدارة شؤون قدامى المحاربين في [BX002190]، ومركز فاندربيلت "أمراض الكلي" الدعم M.H.W. هذه المواد هو نتيجة للعمل مدعومة بالموارد واستخدام المرافق في "نظام الرعاية الصحية وادي تينيسي خامسا".

عليها جميع الأساليب الموصوفة هنا برعاية الحيوان المؤسسية واستخدام اللجان (إياكوكس) من كلية بايلور للطب والمركز الطبي بجامعة فاندربيلت.
1. إعداد الحل الحمض النووي لحقن
<ol><li>حدد plasmid(s) للتعبير عن transgene(s) بعناية لتحقيق أقصى قدر من الخصائص المرغوبة لتحسين كفاءة تعداء والتعبير ا...

<ol>
	<li>Liu, F., Song, Y., Liu, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrodynamics-based+transfection+in+animals+by+systemic+administration+of+plasmid+DNA.">Hydrodynamics-based transfection in animals by systemic administration of plasmid DNA.</a> Gene Ther. 6 (7), 1258-1266 (1999).</li><li>Zhang, G., Budker, V., Wolff, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+levels+of+foreign+gene+expression+in+hepatocytes+after+tail+vein+injections+of+naked+plasmid+DNA.">High levels of foreign gene expression in hepatocytes after tail vein injections of naked plasmid DNA.</a> Human Gene Therapy. 10, 1735-1737 (1999).</li><li>Fumoto, S., Nishimura, K., Nishida, K., Kawakami, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-Dimensional+Imaging+of+the+Intracellular+Fate+of+Plasmid+DNA+and+Transgene+Expression:+ZsGreen1+and+Tissue+Clearing+Method+CUBIC+Are+an+Optimal+Combination+for+Multicolor+Deep+Imaging+in+Murine+Tissues.">Three-Dimensional Imaging of the Intracellular Fate of Plasmid DNA and Transgene Expression: ZsGreen1 and Tissue Clearing Method CUBIC Are an Optimal Combination for Multicolor Deep Imaging in Murine Tissues.</a> PLoS One. 11 (1), e0148233 (2016).</li><li>Yoshino, H., Hashizume, K., Kobayashi, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naked+plasmid+DNA+transfer+to+the+porcine+liver+using+rapid+injection+with+large+volume.">Naked plasmid DNA transfer to the porcine liver using rapid injection with large volume.</a> Gene Ther. 13 (24), 1696-1702 (2006).</li><li>Kamimura, K., Suda, T., Xu, W., Zhang, G., Liu, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Image-guided,+lobe-specific+hydrodynamic+gene+delivery+to+swine+liver.">Image-guided, lobe-specific hydrodynamic gene delivery to swine liver.</a> Mol Ther. 17 (3), 491-499 (2009).</li><li>Kamimura, K., Zhang, G., Liu, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Image-guided,intravascular+hydrodynamic+gene+delivery+to+skeletal+muscle+in+pigs.">Image-guided,intravascular hydrodynamic gene delivery to skeletal muscle in pigs.</a> Mol Ther. 18 (1), 93-100 (2010).</li><li>Suda, T., Liu, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrodynamic+gene+delivery:+its+principles+and+applications.">Hydrodynamic gene delivery: its principles and applications.</a> Mol.Ther. 15 (12), 2063-2069 (2007).</li><li>Alino, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naked+DNA+delivery+to+whole+pig+cardiac+tissue+by+coronary+sinus+retrograde+injection+employing+non-invasive+catheterization.">Naked DNA delivery to whole pig cardiac tissue by coronary sinus retrograde injection employing non-invasive catheterization.</a> J Gene Med. 12 (11), 920-926 (2010).</li><li>Suda, T., Gao, X., Stolz, D. B., Liu, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+impact+of+hydrodynamic+injection+on+mouse+liver.">Structural impact of hydrodynamic injection on mouse liver.</a> Gene Ther. 14 (2), 129-137 (2007).</li><li>Skrypnyk, N. I., Harris, R. C., de Caestecker, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ischemia-reperfusion+model+of+acute+kidney+injury+and+post+injury+fibrosis+in+mice.">Ischemia-reperfusion model of acute kidney injury and post injury fibrosis in mice.</a> J Vis Exp. (78), (2013).</li><li>Woodard, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kidney-specific+transposon-mediated+gene+transfer+in+vivo.">Kidney-specific transposon-mediated gene transfer in vivo.</a> Sci Rep. 7, 44904 (2017).</li><li>Liang, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+glutathione+S-transferase+A4+accelerates+obstruction-induced+tubule+damage+and+renal+fibrosis.">Loss of glutathione S-transferase A4 accelerates obstruction-induced tubule damage and renal fibrosis.</a> Journal of Pathology. 228 (4), 448-458 (2012).</li><li>Liang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+role+of+insulin-like+growth+factor-1+receptor+in+endothelial+cells+against+unilateral+ureteral+obstruction-induced+renal+fibrosis.">Protective role of insulin-like growth factor-1 receptor in endothelial cells against unilateral ureteral obstruction-induced renal fibrosis.</a> Am J Pathol. 185 (5), 1234-1250 (2015).</li><li>Corridon, P. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+to+facilitate+and+monitor+expression+of+exogenous+genes+in+the+rat+kidney+using+plasmid+and+viral+vectors.">A method to facilitate and monitor expression of exogenous genes in the rat kidney using plasmid and viral vectors.</a> Am J Physiol Renal Physiol. 304 (9), F1217-F1229 (2013).</li><li>Wallace, D. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tracking+kidney+volume+in+mice+with+polycystic+kidney+disease+by+magnetic+resonance+imaging.">Tracking kidney volume in mice with polycystic kidney disease by magnetic resonance imaging.</a> Kidney Int. 73 (6), 778-781 (2008).</li><li>Woodard, L. E., Wilson, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=piggyBac-ing+models+and+new+therapeutic+strategies.">piggyBac-ing models and new therapeutic strategies.</a> Trends Biotechnol. 33 (9), 525-533 (2015).</li><li>Yeikilis, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrodynamics+based+transfection+in+normal+and+fibrotic+rats.">Hydrodynamics based transfection in normal and fibrotic rats.</a> World J Gastroenterol. 12 (38), 6149-6155 (2006).</li><li>Thalhofer, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+transgenic+Leishmania+parasites+in+a+live+host.">In vivo imaging of transgenic Leishmania parasites in a live host.</a> J Vis Exp. (41), (2010).</li><li>Wooddell, C. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muscle+damage+after+delivery+of+naked+plasmid+DNA+into+skeletal+muscles+is+batch+dependent.">Muscle damage after delivery of naked plasmid DNA into skeletal muscles is batch dependent.</a> Hum Gene Ther. 22 (2), 225-235 (2011).</li><li>Crespo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrodynamic+liver+gene+transfer+mechanism+involves+transient+sinusoidal+blood+stasis+and+massive+hepatocyte+endocytic+vesicles.">Hydrodynamic liver gene transfer mechanism involves transient sinusoidal blood stasis and massive hepatocyte endocytic vesicles.</a> Gene Ther. 12 (11), 927-935 (2005).</li><li>Rocca, C. J., Ur, S. N., Harrison, F., Cherqui, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=rAAV9+combined+with+renal+vein+injection+is+optimal+for+kidney-targeted+gene+delivery:+conclusion+of+a+comparative+study.">rAAV9 combined with renal vein injection is optimal for kidney-targeted gene delivery: conclusion of a comparative study.</a> Gene Ther. 21 (6), 618-628 (2014).</li></ol>

ويرد في هذا البروتوكول وسيلة قوية لتحقيق التعبير الجيني استنساخه على وجه التحديد في الكلي. في أيدي جراح معتدلة من ذوي الخبرة وجدنا النسبة المئوية للفئران ترانسفيكتيد بهذا الأسلوب في نطاق 50-100 ٪، تبعاً للعمر الماوس وحساسية قراءات للتحوير. مستوى التعبير الجيني لوسيفراس فوق الخلفية لعدة أشه...

تقنية حقن الوريد ذيل هيدرودينامية أصبحت وسيلة شائعة لتحقيق مستويات عالية من التعبير الجيني في الماوس الكبد1،2. هي أيضا transfected الكلي بهذا الأسلوب على مستوى أقل بكثير، حوالي 100-fold أقل3. حقن الحوض الكلوي هيدرودينامية الموصوفة هنا يوفر طريقة بسيطة للتحكم في خصوصية التعبير الجهاز من خلال الوسائل المادية باستخدام نفس المبادئ هيدرودينامية التي وضعت سابقا في الكبد4،5 ، العضلات6و7،أجهزة أخرى8. هذا الأسلوب ترانسفيكتس الخلايا في الحيوانات الحية في فيفو باستخدام الضغط والسرعة لإجبار السوائل المحتوية على الحمض الخلوي الصبغي في الخلايا، في نفس الوقت الذي يحفز الضرر للجهاز الذي يتم بسرعة حل9. باستخدام التقنيات الجراحية الراسخة لتصور الكلي عن طريق شق الجناح10 جنبا إلى جنب مع حقنه واحدة بحقنه الأنسولين، وقد وجدنا تعداء الناجح لأنواع مختلفة من خلايا الكلي، أساسا من خلالي الليفية، الأنابيب، وجمع القناة11. تشريح لهذه الفئران أظهرت أن الأجهزة الأخرى هي عدم transfected على مستويات عالية بما يكفي لتصور طريق لوسيفراس11من تقنيات التصوير. نظراً للتقنية غير الفيروسية، يسمح استخدام بلازميد الحمض النووي تعداء إعداد سريع وسهل من الكواشف اللازمة للحقن.
وقد استخدمنا حقن هيدرودينامية المترجمة للتعبير عن الجلوتاثيون المضادة للأكسدة A4 S-ترانسفيراز ومستقبلات عامل النمو-1 مثل الأنسولين، وهرمون ارثروبويتين في الكلي، مع كل من الآثار البيولوجية المتوقعة11، 12 , 13-تقييم مفصل لتوجيه الإدارة وحجم الحقن، وجرعة الحمض النووي، واختيار المروج قد أجرى11. بالإضافة إلى ذلك، أظهرت كلا بيجيباك ينقول النظام و/أو السيكلوفوسفاميد علاج لقمع رد الفعل المناعي للتحوير لتحسين نتائج التعبير الجيني طويلة الأجل11. واستخدمت محققون آخرون نهجاً الوريد كلوي في الفئران بالنجاح، وتحقيق كفاءة عالية تعداء لفترات من الوقت أكثر من شهر واحد من14. بيد التصحيح الوراثي لتعمل محاكاة الأمراض البشرية عادة ما تتم في الفئران أولاً كإثبات لمفهوم منذ النماذج الوراثية معظم الثدييات نماذج الماوس. مقارنة حقن الوريد الكلوي إلى حقن الحوض الكلوي، ووجد أن حقن في الحوض الكلوي متفوقة السياق الكلي للتعبير الجيني (حوالي عشرة إضعاف أعلى) وبقاء11. الحوض الكلوي هو طريقا مثاليا للدخول إلى الكلي لأنها مرنة بما يكفي لتحمل التقلبات في إنتاج البول، وقادرة على الحفاظ على سلامتها الهيكلية حتى عندما المتوسعة خلال هيدرونيفروسيس في كثير من الأحيان. بالإضافة إلى ذلك، يسمح حقن في الحوض الكلوي الوصول إلى الكلي دون ثقب كبسولة الكلي، يسمح للسائل المحقون واضح الاحتفاظ بالكلى أفضل من حقن intraparenchymal. أجهزة الماوس الأخرى لم يكن طريقا لدخول خلاف المفرج، ولكن المساحة البولي الكلي موقع حقن مثالية. بالإضافة إلى ذلك، أدى الحقن الوريد الكلوي تسرب الدم في تجويف البطن. وقدرت حجم الكلي الإجمالي الكلي البرية من نوع الماوس بالتصوير بالرنين المغناطيسي تكون حوالي 0.2 سم3من حيث حجم الكلي واحد مساو تقريبا لكمية السوائل التي تحقن بالحوض الكلوي هيدرودينامية حقن (100 ميليلتر)15. وهنا، قد وفرنا جميع الفروق الدقيقة المفصلة البروتوكول حقن الحوض الكلوي الهيدروديناميكي لتحقيق تعداء قابل لإعادة الإنتاج الكلي.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>AnaSed Xylazine</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>07-808-1947</td>
			<td>Anesthetic - Not controlled substance</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Insulin Syringe 0.5 mL 29G 1/2 Inch</td>
			<td>Cardinal Health</td>
			<td>309306</td>
			<td>Required syringes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenex</td>
			<td>Pharmacist/Veterinarian</td>
			<td></td>
			<td>Analgesia - Controlled Substance</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dynarex Disposable Towel Drape</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>19-310-671</td>
			<td>Place over heat pad</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EndoFree Plasmid Maxi Kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>12362</td>
			<td>Use only endotoxin-free plasmid DNA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Endosafe Gel-Clot LAL Rapid Positive Control</td>
			<td>Charles River</td>
			<td>PC200</td>
			<td>Positive control for endotoxin test</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Endosafe Gel-Clot LAL Rapid Single Test Vial</td>
			<td>Charles River</td>
			<td>R13500</td>
			<td>Endotoxin test</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Extra Fine Micro Dissecting Scissors</td>
			<td>Roboz Surgical Instrument</td>
			<td>RS-5882</td>
			<td>Surgical tool</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Instant Sealing Sterilization Pouch - 9&#34;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>01-812-51</td>
			<td>For autoclaving surgical tools</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gaymar Heat Pump</td>
			<td>Paragon Medical</td>
			<td>TP-700</td>
			<td>Water-circulating heat pump</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Germinator 500</td>
			<td>Roboz Surgical Instrument</td>
			<td>DS-401</td>
			<td>To reuse surgical tools during surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graefe Forceps</td>
			<td>Roboz Surgical Instrument</td>
			<td>RS-5136</td>
			<td>Surgical tool</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graefe Tissue Forceps</td>
			<td>Roboz Surgical Instrument</td>
			<td>RS-5153</td>
			<td>Surgical tool</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Halsey Needle Holder, 5&#34; Length</td>
			<td>Roboz Surgical Instrument</td>
			<td>RS-7841</td>
			<td>Surgical tool</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heat pads - 15&#34; x 21&#34; - need at least 3</td>
			<td>Paragon Medical</td>
			<td>TP22G</td>
			<td>For use with Gaymar Heat Pump</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IsoFlo (Isoflurane, USP)</td>
			<td>Abbott Animal Health</td>
			<td>5260-04-05</td>
			<td>For imaging and euthanasia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isotec Isoflurane Delivery System Vaporizor</td>
			<td>Smiths Medical</td>
			<td>VCT3K2</td>
			<td>For imaging and euthanasia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Pharmacist/Veterinarian</td>
			<td></td>
			<td>Anesthetic - Controlled Substance</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimwipes</td>
			<td>Kimberly-Clark Professional</td>
			<td>34120</td>
			<td>Laboratory tissues</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Living Image software</td>
			<td>Caliper Life Sciences</td>
			<td></td>
			<td>For live animal imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luciferin</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>122796</td>
			<td>For live animal imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanodrop 2000</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>ND-2000-US-CAN</td>
			<td>Spectrophotometer for DNA measurement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prevantics Swabs</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>23-100-110</td>
			<td>For skin surgery prep</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prolene 5-0 sutures Taper 30&#34;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>NC0256891</td>
			<td>Non-absorbable sutures for skin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puralube Brand Opthalmic Ointment</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>07-888-2572</td>
			<td>To keep eyes moist during surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trans IT - QR Hydrodynamic Delivery Solution</td>
			<td>Mirus Bio</td>
			<td>MIR-5240</td>
			<td>Hydrodynamic delivery buffer for diluting DNA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vicryl 5-0 Sutures J303H</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>NC9816710</td>
			<td>Absorbable sutures for muscle layer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wahl Mini Arco Clipper</td>
			<td>Med-Vet International</td>
			<td>8787-1550</td>
			<td>Shaver for skin prep</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xenogen IVIS 200</td>
			<td>Caliper Life Sciences</td>
			<td></td>
			<td>For live animal imaging</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

hydrodynamic renal pelvis injection for non-viral expression of proteins in the kidney

حقن هيدرودينامية يخلق بيئة محلية، والضغط ترانسفيكت الأنسجة المختلفة مع بلازميد الحمض النووي وغيرها من المواد. حقن الوريد هيدرودينامية الذيل، على سبيل المثال، هو أسلوب راسخة التي يمكن ترانسفيكتيد في الكبد. ويصف هذه المخطوطة تطبيق المبادئ هيدرودينامية بالحقن الكلي الماوس مباشرة مع بلازميد الحمض النووي للتعبير الجيني الخاصة بالكلى. تم تخديره من الفئران والكلى يتم كشفها بواسطة شق الجناح متبوعاً حقن سريعة بلازميد الحل التي تحتوي على الحمض النووي مباشرة في الحوض الكلوي. ويحتفظ الإبرة في مكان لمدة عشر ثوان وهو خياطة شق الموقع. يعيش في اليوم التالي، تصوير الحيوان أو لطخة غربية، أو immunohistochemistry قد تستعمل للاعتداء التعبير الجيني أو فحوصات أخرى مناسبة للتحوير لخيار تستخدم للكشف عن البروتين للفائدة. أساليب المنشورة لإطالة أمد التعبير الجيني تشمل المعاملة التكامل والسيكلوفوسفاميد التحوير بوساطة ينقول تكبح الاستجابة المناعية للتحوير.

تقنية الجراحة وحقن بسيطة لأداء يتقن مرة واحدة، تتطلب لا معدات رئيسية أو مواد مكلفة. يوم واحد من التدريب على الفئران عدة المقرر للقتل الرحيم إذا جديدة إلى جراحة الكلي شق الجناح، ينبغي أن يسمح فيها الفئران ليست الجراحة التالية تم استردادها لأن المحاولة الأولى في هذه العمل?...

Watch this Scientific Journal Video about Hydrodynamic Renal Pelvis Injection for Non-viral Expression of Proteins in the Kidney at JoVE.com

Hydrodynamic Renal Pelvis Injection for Non-viral Expression of Proteins in the Kidney

حقن الحوض الكلوي الهيدروديناميكي للتعبير غير الفيروسية من البروتينات في الكلي

ويصف هذا البروتوكول طريقة لحقن بلازميد الحمض النووي الكلي الماوس عبر الحوض الكلوي لإنتاج التعبير التحوير على وجه التحديد في الكلي.

Hydrodynamic injection creates a local, high-pressure environment to transfect various tissues with plasmid DNA and other substances. Hydrodynamic tail ...

Research

JoVE Journal

Biology

The Preparation of Primary Hematopoietic Cell Cultures From Murine Bone Marrow for Electroporation

التحضير لزراعة الخلايا المكونة للدم الابتدائية من نخاع عظام الفئران لElectroporation

It is becoming increasingly apparent that electroporation is the most effective way to introduce plasmid DNA or siRNA into primary cells. The Gene Pulser ...

Murine Renal Transplantation Procedure

فأري إجراء زراعة الكلى

Renal orthotopic transplantation in mice is a technically challenging procedure. Although the first kidney transplants in mice were performed by Russell ...

Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid

تلطيخ من البروتينات في الهلام مع Coomassie G - 250 دون عضوي حمض الخليك والمذيبات

In classical protein staining protocols using Coomassie Brilliant Blue (CBB), solutions with high contents of toxic and flammable organic solvents ...

Expression of Recombinant Proteins in the Methylotrophic Yeast Pichia pastoris

Expression of Recombinant Proteins in the Methylotrophic Yeast Pichia pastoris

التعبير عن البروتينات المؤتلف في الخميرة Methylotrophic Pichia pastoris</em

Protein expression in the microbial eukaryotic host Pichia pastoris offers the possibility to generate high amounts of recombinant protein in a fast and ...

In vitro Reconstitution of the Active T. castaneum Telomerase

In vitro Reconstitution of the Active T. castaneum Telomerase

إعادة إعماره في المختبر من أحدث T. castaneum تيلوميراز

Efforts to isolate the catalytic subunit of telomerase, TERT, in sufficient quantities for structural studies, have been met with limited success for more ...

Efficient Agroinfiltration of Plants for High-level Transient Expression of Recombinant Proteins

Agroinfiltration كفاءة من النباتات للتعبير عابر الرفيع المستوى من البروتينات المؤتلف

Mammalian cell culture is the major platform for commercial production of human vaccines and therapeutic proteins. However, it cannot meet the increasing ...

Transient Expression of Proteins by Hydrodynamic Gene Delivery in Mice

التعبير عابرة من البروتينات عن طريق هيدرودينامي الجينات في الفئران التسليم

Efficient expression of transgenes in vivo is of critical importance in studying gene function and developing treatments for diseases. Over the past ...

HeLa Based Cell Free Expression Systems for Expression of Plasmodium Rhoptry Proteins

HeLa Based Cell Free Expression Systems for Expression of Plasmodium Rhoptry Proteins

نظم هيلا خلية استنادا حرية التعبير للتعبير عن<em&gt; المتصورة</em&gt; المقيرع البروتينات

Malaria causes significant global morbidity and mortality. No routine vaccine is currently available. One of the major reasons for lack of a vaccine is ...

Methods for the Determination of Rates of Glucose and Fatty Acid Oxidation in the Isolated Working Rat Heart

طرق تقدير من معدلات الجلوكوز والأحماض الدهنية الأكسدة في عزل قلب الجرذ العمل

The mammalian heart is a major consumer of ATP and requires a constant supply of energy substrates for contraction. Not surprisingly, alterations of ...

The Mouse Isolated Perfused Kidney Technique

الماوس معزولة تقنية الكلى Perfused

The mouse isolated perfused kidney (MIPK) is a technique for keeping a mouse kidney under ex vivo conditions perfused and functional for 1 hr. This is a ...