Name: hydrodynamic renal pelvis injection for non-viral expression of proteins in the kidney
Uploaded: 2018-01-08T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Hydrodynamic Renal Pelvis Injection for Non-viral Expression of Proteins in the Kidney at JoVE.com

En karriär Development Award från Department of Veterans Affairs [BX002797] stödde L.E.W. och National Institutes of Health [R01-DK095867] och American Heart Association [15GRNT25700209] stöds J.C. National Institutes of Health [DK093660], Department of Veterans Affairs [BX002190] och Vanderbilt centrum för njursjukdom stöds M.H.W. Detta material är resultatet av arbete stödjas med resurser och användning av anläggningar på VA Tennessee Valley Healthcare System.

Alla metoderna som beskrivs här har godkänts av den institutionella djur vård och användning (IACUCs) av kommittéer Baylor College of Medicine och Vanderbilt University Medical Center.
1. Förbered den DNA-lösningen för injektion
<ol><li>Välj plasmid(s) att uttrycka transgene(s) noggrant för att maximera de önskvärda egenskaperna för att förbättra transfektionsprotokoll effektivitet och transgenens uttryck. Obs: Hydrodynamiska njurbäckenet injektion av plasmider att uttryck...

<ol>
	<li>Liu, F., Song, Y., Liu, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrodynamics-based+transfection+in+animals+by+systemic+administration+of+plasmid+DNA.">Hydrodynamics-based transfection in animals by systemic administration of plasmid DNA.</a> Gene Ther. 6 (7), 1258-1266 (1999).</li><li>Zhang, G., Budker, V., Wolff, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+levels+of+foreign+gene+expression+in+hepatocytes+after+tail+vein+injections+of+naked+plasmid+DNA.">High levels of foreign gene expression in hepatocytes after tail vein injections of naked plasmid DNA.</a> Human Gene Therapy. 10, 1735-1737 (1999).</li><li>Fumoto, S., Nishimura, K., Nishida, K., Kawakami, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-Dimensional+Imaging+of+the+Intracellular+Fate+of+Plasmid+DNA+and+Transgene+Expression:+ZsGreen1+and+Tissue+Clearing+Method+CUBIC+Are+an+Optimal+Combination+for+Multicolor+Deep+Imaging+in+Murine+Tissues.">Three-Dimensional Imaging of the Intracellular Fate of Plasmid DNA and Transgene Expression: ZsGreen1 and Tissue Clearing Method CUBIC Are an Optimal Combination for Multicolor Deep Imaging in Murine Tissues.</a> PLoS One. 11 (1), e0148233 (2016).</li><li>Yoshino, H., Hashizume, K., Kobayashi, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naked+plasmid+DNA+transfer+to+the+porcine+liver+using+rapid+injection+with+large+volume.">Naked plasmid DNA transfer to the porcine liver using rapid injection with large volume.</a> Gene Ther. 13 (24), 1696-1702 (2006).</li><li>Kamimura, K., Suda, T., Xu, W., Zhang, G., Liu, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Image-guided,+lobe-specific+hydrodynamic+gene+delivery+to+swine+liver.">Image-guided, lobe-specific hydrodynamic gene delivery to swine liver.</a> Mol Ther. 17 (3), 491-499 (2009).</li><li>Kamimura, K., Zhang, G., Liu, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Image-guided,intravascular+hydrodynamic+gene+delivery+to+skeletal+muscle+in+pigs.">Image-guided,intravascular hydrodynamic gene delivery to skeletal muscle in pigs.</a> Mol Ther. 18 (1), 93-100 (2010).</li><li>Suda, T., Liu, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrodynamic+gene+delivery:+its+principles+and+applications.">Hydrodynamic gene delivery: its principles and applications.</a> Mol.Ther. 15 (12), 2063-2069 (2007).</li><li>Alino, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naked+DNA+delivery+to+whole+pig+cardiac+tissue+by+coronary+sinus+retrograde+injection+employing+non-invasive+catheterization.">Naked DNA delivery to whole pig cardiac tissue by coronary sinus retrograde injection employing non-invasive catheterization.</a> J Gene Med. 12 (11), 920-926 (2010).</li><li>Suda, T., Gao, X., Stolz, D. B., Liu, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+impact+of+hydrodynamic+injection+on+mouse+liver.">Structural impact of hydrodynamic injection on mouse liver.</a> Gene Ther. 14 (2), 129-137 (2007).</li><li>Skrypnyk, N. I., Harris, R. C., de Caestecker, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ischemia-reperfusion+model+of+acute+kidney+injury+and+post+injury+fibrosis+in+mice.">Ischemia-reperfusion model of acute kidney injury and post injury fibrosis in mice.</a> J Vis Exp. (78), (2013).</li><li>Woodard, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kidney-specific+transposon-mediated+gene+transfer+in+vivo.">Kidney-specific transposon-mediated gene transfer in vivo.</a> Sci Rep. 7, 44904 (2017).</li><li>Liang, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+glutathione+S-transferase+A4+accelerates+obstruction-induced+tubule+damage+and+renal+fibrosis.">Loss of glutathione S-transferase A4 accelerates obstruction-induced tubule damage and renal fibrosis.</a> Journal of Pathology. 228 (4), 448-458 (2012).</li><li>Liang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+role+of+insulin-like+growth+factor-1+receptor+in+endothelial+cells+against+unilateral+ureteral+obstruction-induced+renal+fibrosis.">Protective role of insulin-like growth factor-1 receptor in endothelial cells against unilateral ureteral obstruction-induced renal fibrosis.</a> Am J Pathol. 185 (5), 1234-1250 (2015).</li><li>Corridon, P. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+to+facilitate+and+monitor+expression+of+exogenous+genes+in+the+rat+kidney+using+plasmid+and+viral+vectors.">A method to facilitate and monitor expression of exogenous genes in the rat kidney using plasmid and viral vectors.</a> Am J Physiol Renal Physiol. 304 (9), F1217-F1229 (2013).</li><li>Wallace, D. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tracking+kidney+volume+in+mice+with+polycystic+kidney+disease+by+magnetic+resonance+imaging.">Tracking kidney volume in mice with polycystic kidney disease by magnetic resonance imaging.</a> Kidney Int. 73 (6), 778-781 (2008).</li><li>Woodard, L. E., Wilson, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=piggyBac-ing+models+and+new+therapeutic+strategies.">piggyBac-ing models and new therapeutic strategies.</a> Trends Biotechnol. 33 (9), 525-533 (2015).</li><li>Yeikilis, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrodynamics+based+transfection+in+normal+and+fibrotic+rats.">Hydrodynamics based transfection in normal and fibrotic rats.</a> World J Gastroenterol. 12 (38), 6149-6155 (2006).</li><li>Thalhofer, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+transgenic+Leishmania+parasites+in+a+live+host.">In vivo imaging of transgenic Leishmania parasites in a live host.</a> J Vis Exp. (41), (2010).</li><li>Wooddell, C. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muscle+damage+after+delivery+of+naked+plasmid+DNA+into+skeletal+muscles+is+batch+dependent.">Muscle damage after delivery of naked plasmid DNA into skeletal muscles is batch dependent.</a> Hum Gene Ther. 22 (2), 225-235 (2011).</li><li>Crespo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrodynamic+liver+gene+transfer+mechanism+involves+transient+sinusoidal+blood+stasis+and+massive+hepatocyte+endocytic+vesicles.">Hydrodynamic liver gene transfer mechanism involves transient sinusoidal blood stasis and massive hepatocyte endocytic vesicles.</a> Gene Ther. 12 (11), 927-935 (2005).</li><li>Rocca, C. J., Ur, S. N., Harrison, F., Cherqui, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=rAAV9+combined+with+renal+vein+injection+is+optimal+for+kidney-targeted+gene+delivery:+conclusion+of+a+comparative+study.">rAAV9 combined with renal vein injection is optimal for kidney-targeted gene delivery: conclusion of a comparative study.</a> Gene Ther. 21 (6), 618-628 (2014).</li></ol>

I detta protokoll beskrivs en robust metod för att uppnå reproducerbara genuttryck specifikt i njuren. I händerna på en måttligt erfaren kirurg har vi hittat procentandelen av möss transfekterade genom denna teknik att vara i storleksordningen 50-100%, beroende på mus ålder och känsligheten hos avläsningen av transgenens. Nivån på luciferas genuttryck var över bakgrunden i flera månader i möss som fick piggyBac transposoner och underhålls helt för flera veckor hos immunsupprimerade möss som få...

Hydrodynamiska svans ven injektionsteknik har blivit ett vanligt förekommande sätt att uppnå höga nivåer av genuttryck i mus lever1,2. Njurarna är också transfekterade genom denna teknik på en mycket lägre nivå, cirka 100 gånger mindre3. Den hydrodynamiska njurbäcken injektionen beskrivs här ger ett enkelt sätt att styra specificitet orgel uttryck genom fysikaliska processer använder samma hydrodynamiska principer som har fastställts tidigare i levern4,5 , muskel6och andra organ7,8. Denna metod transfects celler i levande djur i vivo med hjälp av tryck och hastighet för att tvinga vätska innehållande DNA i cellerna samtidigt förmå skada till det organ som är snabbt löst9. Med väletablerade kirurgiska tekniker för att visualisera njuren via en flank snitt10 tillsammans med en enda injektion av insulinspruta upptäckte vi har framgångsrika transfection av olika typer av njurceller, främst interstitiell fibroblaster, tubuli och samlande kanal11. Dissektion av dessa möss har visat att andra organ inte är transfekterade på nivåer som är tillräckligt hög för att visualisera av luciferas imaging tekniker11. Eftersom tekniken är icke-virala, tillåter användning av plasmid DNA för transfection snabb och enkel beredning av reagensen krävs för injektion.
Vi har använt lokaliserade hydrodynamiska injektioner för att uttrycka den antioxidant glutation S-transferas A4, insulin-liknande tillväxtfaktor-1 receptorn och hormonet erytropoietin i njuren, alla med förväntade biologiska effekter11, 12 , 13. detaljerad utvärdering av administreringsväg, injektionsvolym, DNA dosering, och arrangören val har varit utfört11. Båda piggyBac transposon systemet och/eller cyklofosfamid behandling att undertrycka immunreaktion till transgenens har dessutom visat sig förbättra långsiktiga gen uttryck resultat11. Andra utredare har använt en njurvenen strategi i råtta med framgång, att uppnå hög transfection effektivitet för tidsperioder på mer än en månad14. Men genetiska korrigeringen av fenotyper härma mänskliga sjukdomar utförs vanligtvis i möss först som ett proof-of-concept eftersom mest däggdjur genetiska modeller musmodeller. Vi jämförde njurvenen injektion till njurbäckenet injektion och fann att injektion i njurbäckenet var överlägsen njurvenen genuttryck (cirka tio gånger högre) och överlevnad11. I njurbäckenet är en idealisk väg träder i njuren eftersom det är tillräckligt flexibel för att tolerera fluktuationer i urinproduktion och är ofta kunna bibehålla sin strukturella integritet även när vidgade under hydronefros. Dessutom injektion i njurbäckenet tillgång till njuren utan piercing njure kapseln, vilket gör att den injicerade vätskan behålls synbart av njuren bättre än intraparenchymal injektion. Andra musen organ har inte en rutt träder än kärlsystemet, men urin utrymmet i njuren är en idealisk injektionsstället. Dessutom, resulterade i den nedsatt ven i läckage av blod i bukhålan. Den totala njure volymen av vildtyp mus njurar har uppskattats av magnetisk resonanstomografi vara cirka 0,2 cm3, så volymen av en enda njure är ungefär lika med mängden vätska injiceras av njurbäckenet hydrodynamiska injektion (100 µL)15. Häri, har vi gjort tillgängliga alla detaljerade nyanserna av protokollet hydrodynamiska njurbäckenet injektion att uppnå reproducerbara transfection av njure.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>AnaSed Xylazine</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>07-808-1947</td>
			<td>Anesthetic - Not controlled substance</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Insulin Syringe 0.5 mL 29G 1/2 Inch</td>
			<td>Cardinal Health</td>
			<td>309306</td>
			<td>Required syringes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenex</td>
			<td>Pharmacist/Veterinarian</td>
			<td></td>
			<td>Analgesia - Controlled Substance</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dynarex Disposable Towel Drape</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>19-310-671</td>
			<td>Place over heat pad</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EndoFree Plasmid Maxi Kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>12362</td>
			<td>Use only endotoxin-free plasmid DNA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Endosafe Gel-Clot LAL Rapid Positive Control</td>
			<td>Charles River</td>
			<td>PC200</td>
			<td>Positive control for endotoxin test</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Endosafe Gel-Clot LAL Rapid Single Test Vial</td>
			<td>Charles River</td>
			<td>R13500</td>
			<td>Endotoxin test</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Extra Fine Micro Dissecting Scissors</td>
			<td>Roboz Surgical Instrument</td>
			<td>RS-5882</td>
			<td>Surgical tool</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Instant Sealing Sterilization Pouch - 9&#34;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>01-812-51</td>
			<td>For autoclaving surgical tools</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gaymar Heat Pump</td>
			<td>Paragon Medical</td>
			<td>TP-700</td>
			<td>Water-circulating heat pump</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Germinator 500</td>
			<td>Roboz Surgical Instrument</td>
			<td>DS-401</td>
			<td>To reuse surgical tools during surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graefe Forceps</td>
			<td>Roboz Surgical Instrument</td>
			<td>RS-5136</td>
			<td>Surgical tool</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graefe Tissue Forceps</td>
			<td>Roboz Surgical Instrument</td>
			<td>RS-5153</td>
			<td>Surgical tool</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Halsey Needle Holder, 5&#34; Length</td>
			<td>Roboz Surgical Instrument</td>
			<td>RS-7841</td>
			<td>Surgical tool</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heat pads - 15&#34; x 21&#34; - need at least 3</td>
			<td>Paragon Medical</td>
			<td>TP22G</td>
			<td>For use with Gaymar Heat Pump</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IsoFlo (Isoflurane, USP)</td>
			<td>Abbott Animal Health</td>
			<td>5260-04-05</td>
			<td>For imaging and euthanasia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isotec Isoflurane Delivery System Vaporizor</td>
			<td>Smiths Medical</td>
			<td>VCT3K2</td>
			<td>For imaging and euthanasia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Pharmacist/Veterinarian</td>
			<td></td>
			<td>Anesthetic - Controlled Substance</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimwipes</td>
			<td>Kimberly-Clark Professional</td>
			<td>34120</td>
			<td>Laboratory tissues</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Living Image software</td>
			<td>Caliper Life Sciences</td>
			<td></td>
			<td>For live animal imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luciferin</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>122796</td>
			<td>For live animal imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanodrop 2000</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>ND-2000-US-CAN</td>
			<td>Spectrophotometer for DNA measurement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prevantics Swabs</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>23-100-110</td>
			<td>For skin surgery prep</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prolene 5-0 sutures Taper 30&#34;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>NC0256891</td>
			<td>Non-absorbable sutures for skin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puralube Brand Opthalmic Ointment</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>07-888-2572</td>
			<td>To keep eyes moist during surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trans IT - QR Hydrodynamic Delivery Solution</td>
			<td>Mirus Bio</td>
			<td>MIR-5240</td>
			<td>Hydrodynamic delivery buffer for diluting DNA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vicryl 5-0 Sutures J303H</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>NC9816710</td>
			<td>Absorbable sutures for muscle layer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wahl Mini Arco Clipper</td>
			<td>Med-Vet International</td>
			<td>8787-1550</td>
			<td>Shaver for skin prep</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xenogen IVIS 200</td>
			<td>Caliper Life Sciences</td>
			<td></td>
			<td>For live animal imaging</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

hydrodynamic renal pelvis injection for non-viral expression of proteins in the kidney

Hydrodynamiska injektion skapar en lokal, högtrycks miljö för att transfect olika vävnader med plasmid DNA och andra ämnen. Hydrodynamiska svans ven injektion, exempelvis är en väletablerad metod som levern kan vara transfekterade. Detta manuskript beskriver en tillämpning av hydrodynamisk principer genom injektion av mus njure direkt med plasmid DNA för njure-specifika genuttryck. Möss är sövd och njurarna utsätts av en flank snitt följt av en snabb injektion av en plasmid DNA-innehållande lösning direkt in i njurbäckenet. Kanylen hålls på plats i tio sekunder och webbplatsen snittet sys. Följande dag, levande djur imaging, Western blot eller immunohistokemi kan användas till assay genuttryck eller andra analyser som passar transgenens val används för detektion av proteinet av intresse. Publicerade metoder för att förlänga genuttryck inkluderar transposon-medierad transgenens integration och cyklofosfamid behandling för att hämma immunförsvaret till att transgenens.

Kirurgi och injektion tekniken är enkla att utföra en gång behärskar, kräver ingen större utrustning eller dyra material. Om nya flanken-snitt njure kirurgi, bör en träningsdag på flera möss planerad till dödshjälp tillåtas där mössen inte är återställda efter operationen eftersom det första försöket på denna operation kan ta mycket längre tid än normalt. Alternativt, utredare bekant med liknande tekniker kan vara ganska enkelt. Följ noga på bilden i <strong clas...

Watch this Scientific Journal Video about Hydrodynamic Renal Pelvis Injection for Non-viral Expression of Proteins in the Kidney at JoVE.com

Hydrodynamic Renal Pelvis Injection for Non-viral Expression of Proteins in the Kidney

Hydrodynamiska njurbäckenet injektion för icke-virala uttryck av proteiner i njuren

Det här protokollet beskriver en metod för att injicera plasmid DNA i mus njuren via njurbäckenet att producera transgenens uttryck specifikt i njuren.

Hydrodynamic injection creates a local, high-pressure environment to transfect various tissues with plasmid DNA and other substances. Hydrodynamic tail ...

Research

JoVE Journal

Biology

The Preparation of Primary Hematopoietic Cell Cultures From Murine Bone Marrow for Electroporation

Beredningen av primära hematopoietisk cell kulturer från Murine Bone Marrow för elektroporation

It is becoming increasingly apparent that electroporation is the most effective way to introduce plasmid DNA or siRNA into primary cells. The Gene Pulser ...

Murine Renal Transplantation Procedure

Murina njurtransplantation Förfarande

Renal orthotopic transplantation in mice is a technically challenging procedure. Although the first kidney transplants in mice were performed by Russell ...

Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid

Färgning av proteinerna i geler med Coomassie G-250 utan organiska lösningsmedel och ättiksyra

In classical protein staining protocols using Coomassie Brilliant Blue (CBB), solutions with high contents of toxic and flammable organic solvents ...

Expression of Recombinant Proteins in the Methylotrophic Yeast Pichia pastoris

Expression of Recombinant Proteins in the Methylotrophic Yeast Pichia pastoris

Expression av rekombinanta proteiner i Methylotrophic Jäst Pichia pastoris</em

Protein expression in the microbial eukaryotic host Pichia pastoris offers the possibility to generate high amounts of recombinant protein in a fast and ...

In vitro Reconstitution of the Active T. castaneum Telomerase

In vitro Reconstitution of the Active T. castaneum Telomerase

In vitro Beredning av Active T. castaneum Telomeras

Efforts to isolate the catalytic subunit of telomerase, TERT, in sufficient quantities for structural studies, have been met with limited success for more ...

Efficient Agroinfiltration of Plants for High-level Transient Expression of Recombinant Proteins

Effektiv Agroinfiltration av växter för hög nivå Transient Expression av rekombinanta proteiner

Mammalian cell culture is the major platform for commercial production of human vaccines and therapeutic proteins. However, it cannot meet the increasing ...

Transient Expression of Proteins by Hydrodynamic Gene Delivery in Mice

Transient Expression av proteiner från Hydrodynamisk Gene Delivery hos möss

Efficient expression of transgenes in vivo is of critical importance in studying gene function and developing treatments for diseases. Over the past ...

HeLa Based Cell Free Expression Systems for Expression of Plasmodium Rhoptry Proteins

HeLa Based Cell Free Expression Systems for Expression of Plasmodium Rhoptry Proteins

HeLa Baserat Cell yttrandefriheten System för uttryck av<em&gt; Plasmodium</em&gt; Rhoptry Proteiner

Malaria causes significant global morbidity and mortality. No routine vaccine is currently available. One of the major reasons for lack of a vaccine is ...

Methods for the Determination of Rates of Glucose and Fatty Acid Oxidation in the Isolated Working Rat Heart

Metoder för bestämning av priser av glukos och fettsyra oxidation i isolerade Working Rat hjärta

The mammalian heart is a major consumer of ATP and requires a constant supply of energy substrates for contraction. Not surprisingly, alterations of ...

The Mouse Isolated Perfused Kidney Technique

Musen Isolerad perfusion njure Technique

The mouse isolated perfused kidney (MIPK) is a technique for keeping a mouse kidney under ex vivo conditions perfused and functional for 1 hr. This is a ...