Name: basic research in plasma medicine - a throughput approach from liquids to cells
Uploaded: 2017-11-17T12:30:00
Duration: 7 min 37 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Basic Research in Plasma Medicine - A Throughput Approach from Liquids to Cells at JoVE.com

تمويل من الوزارة الألمانية الاتحادية للتعليم والبحوث (الفدرالية منح الأرقام 03Z22DN11 و 03Z22DN12) هو العرفان.

1-البلازما رصد الأنواع والإعداد العلاج
<ol><li>
أنواع البلازما الرصد
	<ol>
<li>استخدام طائرة نفاثة بلازما ضغط الجوي وبحد أقصى 2 ليتر القياسية في الدقيقة التي تغذي تدفق الغاز.</li>
		<li>خط عمودي على المحور بلوم، ضع الطائرة أمام جهاز المطياف الضوئي انبعاثات ضوئية، وكرس فوتوميسيون سجل والطول الموجي (200-1,000 nm) باستخدام البرمجيات.</li>
		<li>مزيج من 0.5% من النيتروجين أو الأكسجين الجاف أو هوميديفيد غاز تغذية (5%).</li>
		<li>كرر مطيافية الانبعاث الضوئي لكل شرط الغاز.</li>
		<li>تحليل مع البرامج المناسبة لعرض رسومي للبيانات.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
إعداد العلاج البلازما
	<ol>
<li>إصلاح الطائرة النفاثة لجدول xyz يحركها على جهاز الكمبيوتر.</li>
		<li>تحديد الموقف الآبار وإنشاء برنامج نصي لكمبيوتر لنقل الطائرة النفاثة منضم إلى الجدول، مع أوقات العلاج المناسب، فوق المركز من كل بئر.</li>
		<li>إضافة 104 أي نوع من الثدييات خلايا ملتصقة في 100 ميليلتر من مستنبت الخلية كاملة (RPMI1640 مع FCS 10% والجلوتامين 2% 1% البنسلين/ستربتوميسين) إلى عدة آبار تحت غطاء الاندفاق الصفحي.</li>
		<li>تسمح الالتصاق الخلوي تحدث بين عشية وضحاها في 37 درجة مئوية في جو هوميديفيد بنسبة 5% ثاني أكسيد الكربون.</li>
		<li>علاج الخلايا بالبلازما ل 20 s على ارتفاعات مختلفة (محور ع) فترات 250 ميكرون.</li>
		<li>إضافة 25 ميليلتر من يوديد propidium في خلية ثقافة متوسطة لكل بئر.</li>
		<li>صورة الخلايا تحت المجهر لتحديد الارتفاع المحددة التي لا تسبب نخر خلية بسبب التغذية الغاز دفع المتوسطة الثقافة أعلى الخلايا جانبا. ملاحظة: لأوقات أطول في العلاج، تحديد تبخر السائل في هذا الارتفاع خاصة، في البلازما وإيقاف الوضع، التي تزن اللوحة قبل وبعد المعالجة بالبلازما لتحديد كمية ميكروليتيرس دوبليديستيليد المياه اللازمة لإعادة تأسيس ناضح التوازن في الآبار المعالجة.</li>
		<li>إعداد بروتوكول نهائي ل xyz الجدول مع الأوقات معاملة كل منهما (هنا: 20 ق، 40 s، 60 s البلازما ومراقبة الغاز s 60)، وكذلك المواقف، ولديها استعداد الممصات متعددة القنوات والخزانات للتعامل مع السائل من لوحات 96-جيدا في الاختبارات اللاحقة.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2-تحليل المكونات الرئيسية المتفاعلة في السوائل المعالجة بالبلازما
<ol><li>
تحليل للمعالجة بالبلازما بيروكسيد الهيدروجين
	<ol>
<li>علاج 100 ميليلتر من الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) مع البلازما في ثلاث نسخ في لوحات مسطحة القاع 96-جيدا.</li>
		<li>إعداد مزيج رئيسي عن طريق تحميل 100 ميليلتر من برنامج تلفزيوني مع 10 يو من الفجل البيروكسيديز و 5 ميكرون من بيروكسيد الهيدروجين الكشف عن الكاشف (يكفي لأحد جيدا؛ ورفع مستوى تبعاً لذلك).</li>
		<li>إضافة ميليلتر 95 من مزيج الرئيسي لكل بئر. ملاحظة: الخطوة السابقة ينبغي إجراء تحت أحد مقاعد نظيفة أو في غرفة منفصلة عن مصدر البلازما كما الأوزون الهواء المحيط يمكن أن تقلل حساسية المقايسة.</li>
		<li>في لوح منفصل، إعداد سلسلة تمييع شقين من بيروكسيد الهيدروجين في برنامج تلفزيوني بتركيز أعلى من 100 ميكرومتر في 100 ميليلتر PBS.</li>
		<li>إضافة 5 ميليلتر من عينات أو معايير فوق أكسيد الهيدروجين إلى الآبار التي تحتوي على الكشف عن الكاشف.</li>
		<li>وتشمل الآبار التي تحتوي على الكشف عن الكاشف للطرح الخلفية بعد القراءة فقط.</li>
		<li>احتضان اللوحة في الظلام لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.</li>
		<li>ضع اللوحة في القارئ الميكروسكوبية قياس fluorescence في λت 535 نانومتر و λم 590 نانومتر. ملاحظة: إذا كان من المتوقع ارتفاع تركيزات بيروكسايد في العينات، تمييع عينة يحتاج إلى زيادة أو قراءات تحتاج إلى القيام به مع أوقات حضانة أقصر لتجنب تشبع المقايسة.</li>
		<li>طرح قيم فارغة من جميع العينات وحساب المنحنى القياسي بيروكسايد، وقياس تركيزات بيروكسايد عينة غير معروف من ذلك المنحنى خط الأساس.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
تحليل النتريت المعالجة بالبلازما
	<ol>
<li>علاج 100 ميليلتر من برنامج تلفزيوني مع البلازما في ثلاث نسخ في لوحات 96well فلاتبوتوم.</li>
		<li>إعداد مزيج رئيسي من حل الكشف عن النترات بإضافة 1 ميليلتر من كاشف الكمي إلى 99 ميليلتر من دوبليديستيليد المياه (يكفي للمرء جيدا؛ ورفع مستوى تبعاً لذلك).</li>
		<li>إضافة 100 ميليلتر الواحدة وكذلك إلى لوحة واضحة، فلاتبوتوم 96well. رفع مستوى حسب الحاجة لعدد الآبار.</li>
		<li>إعداد سلسلة تمييع المعايير النتريت في المياه دوبليديستيليد.</li>
		<li>إضافة 10 ميليلتر من المعايير أو عينات إلى مزيج الرئيسي في لوحات 96well.</li>
		<li>احتضان اللوحة في الظلام لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة.</li>
		<li>إضافة 5 ميليلتر من نتريت الكمي مطور الحل لكل بئر.</li>
		<li>قراءة الأسفار في قارئ ميكروسكوبية λالسابقين 365 نانومتر و λم 450 نانومتر.</li>
		<li>طرح قيم فارغة من جميع العينات وحساب المنحنى القياسي والنتريت، وقياس تركيزات النترات عينة غير معروف من ذلك المنحنى خط الأساس.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
تحليل للمعالجة بالبلازما فائق أكسيد
	<ol>
<li>جعل مزيج رئيسي من الفسفرة المؤكسدة (1 ملغ/مل) وكاتالاز (20 ميكروغرام/مل) في برنامج تلفزيوني.</li>
		<li>إضافة 100 ميليلتر من مزيج الرئيسي إلى الآبار لصفيحة 96-جيدا واضحة، مسطحة القاع.</li>
		<li>علاج مزيج الرئيسي مع البلازما في ثلاث نسخ كل حالة المعاملة.</li>
		<li>قراءة امتصاص في 550 نانومتر باستخدام قارئ ميكروسكوبية؛ هذه البيانات الرسم البياني.</li>
		<li>حساب كمية أكسيد فائق التي تم إنشاؤها باستخدام معامل الانقراض المولى السيتوكروم ج، وطول مسار الضوء السائل داخل بئر.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3-الاستجابة البيولوجية للخلايا المعرضة للبلازما
<ol><li>
القراءة المتعددة الأبعاد للخلايا المعالجة بالبلازما: النشاط الأيضي
	<ol>
<li>استخدام غطاء الاندفاق الصفحي لكل من الإجراءات التالية.</li>
		<li>ويكمل البذور 104 خلايا (الميلانوما موريني B16) في 100 ميليلتر الكامل مستنبت الخلية الواحدة وكذلك في لوحات مسطحة القاع 96-جيدا.</li>
		<li>تسمح الالتصاق الخلوي بين عشية وضحاها في 37 درجة مئوية في جو هوميديفيد الحاضنة مع 5% ثاني أكسيد الكربون.</li>
		<li>باستخدام الجدول xyz، معالجة الآبار بالبلازما أو الغاز وحدها وفقا لمخطط معرف مسبقاً، وإضافة الخلايا إلى حاضنة ح 20. ملاحظة: إذا رغبت في ذلك، تقلع supernatants بعد 20 ح لتحليل المنتجات خارج الخلية؛ إضافة 100 ميليلتر من متوسطة جديدة بعد ذلك.</li>
		<li>لكل بئر، إضافة 25 ميليلتر من مستنبت الخلية التي تحتوي على 500 ميكرون ريسازورين (تركيز نهائي 100 ميكرومتر)؛ إعداد الآبار الثلاثة التي تحتوي على ريسازورين وحدها في خلية ثقافة متوسطة دون خلايا للطرح الخلفية.</li>
		<li>احتضانها ح 3 في الحاضنة.</li>
		<li>قراءة الأسفار في λت 535 نانومتر و λم 590 نانومتر في قارئ ميكروسكوبية.</li>
		<li>طرح fluorescence خلفية من جميع العينات، وتطبيع البيانات إلى قيم عنصر التحكم.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
القراءة المتعددة الأبعاد للخلايا المعالجة بالبلازما: صورة التحليل
	<ol>
<li>استخدم لوحة جيدا من 3.1.7 وتجاهل المادة طافية.</li>
		<li>إضافة 100 ميليلتر من مستنبت خلايا جديدة تتضمن يوديد propidium ميكروغرام/ملليلتر 1.</li>
		<li>وضع لوحة تحت مجهر مع مرحلة يجهز الصورة كل بئر. ملاحظة: تفاصيل تصوير تعتمد على مسألة تجريبية؛ هنا، كان يستخدم هدفا X 20 في جهاز تصوير عالية المحتوى لقراءة 3 × 3 حقول النظر في كل بئر في حقل مشرق قناة، قناة التباين المرحلة الرقمية، وقناة (يوديد propidium) الأسفار، واستخدام الضوء الإثارة المناسبة والانبعاثات عوامل التصفية.</li>
		<li>استخدام برمجيات التحليل صورة كمية لتحديد إجمالي مساحة سيتوسوليك في المرحلة الرقمية الصور على النقيض من كافة الحقول لعرض تصويرها في كل بئر. ملاحظة: تحليل معلمات أخرى إذا رغبت في ذلك، على سبيل المثال، عدد خلايا قابلة للحياة و/أو ميت أو نشاط المتقدرية البقع مخصصة باستخدام. في حالة استخدام البقع الأخرى مما هو موضح في هذا العمل، تأكد من أن البقع fluorescence المستخدمة للفحص المجهري لا تتراكب طيفيا مع فلوروتشروميس المستخدمة في التجارب اللاحقة التدفق الخلوي.</li>
		<li>البيانات الرسم البياني، وإذا رغبت في ذلك، اختبار للعلاقة مع القيم التي تم الحصول عليها للنشاط الأيضي.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
القراءة المتعددة الأبعاد للخلايا المعالجة بالبلازما: التدفق الخلوي
	<ol>
<li>لهذا التحليل، استخدم لوحة جيدا من الخطوة 3.2.5.</li>
		<li>تجاهل المادة طافية ويغسل مرتين مع 200 ميليلتر من برنامج تلفزيوني يحتوي على الكالسيوم والمغنيسيوم (0.9 و 0.5 ملم، على التوالي). ملاحظة: إصلاح و/أو بيرميبيليزي الخلايا في هذه المرحلة لمزيد قراءات البيولوجية غير المشمولة في هذه المساهمة، مثل تلطيخ تحليل مستضد أو دورة الخلية داخل الخلية.</li>
		<li>لكل بئر، إضافة 50 ميليلتر من برنامج تلفزيوني مع الكالسيوم والمغنيسيوم التي تحتوي على 50 نانوغرام/مل كالريتيكولين الماوس المضادة الأجسام المضادة.</li>
		<li>احتضان لمدة 15 دقيقة في الحاضنة.</li>
		<li>تماما يغسل مرتين مع 200 ميليلتر لتكميل خلية الثقافة المتوسطة وتجاهل السائل في اللوحة.</li>
		<li>إضافة 100 ميليلتر من الخلية المفرزة الحل لكل بئر، واحتضان لمدة 20 دقيقة في الحاضنة.</li>
		<li>استخدام مجموعة أخرى من الخلايا B16 أونستينيد في تعليق لإعداد بروتوكول اكتساب سيتوميتريك التدفق، النابضة استراتيجية، والمكاسب والفولتية لنظريتهم.</li>
		<li>تحميل اللوحة cytometer تدفق مجهزة عينات سيارات لوحات 96-جيدا.</li>
		<li>الحصول على حد أدنى من الخلايا 1,000 في الأمام والجانب المبعثرة السكان المرتبطة عادة بخلايا قابلة للحياة.</li>
		<li>استخدام برامج مخصصة لتحليل التدفق الخلوي، ملفات.fcs بوابة سكان الفائدة، وتحديد كثافة fluorescence يعني كالريتيكولين.</li>
		<li>بيانات الرسم البياني، وإذا رغبت في ذلك، اختبار للعلاقة مع القيم التي تم الحصول عليها لترسب النشاط والتصوير، و/أو الأكسدة الأيضية.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

البحوث الأساسية هو أمر أساسي لتطوير فهم فعالية والآليات التي يقوم عليها الطب البلازما في البحوث السريرية والاكلينيكية. ويشجع البحوث الأساسية أيضا التحقيق في طلبات الحصول على العلاجات الجديدة. بينما ثبت أن البلازما التوسط آثارها البيولوجية عن طريق توليد الأكسجين التفاعلية والنيتروجين الأنواع19، إلا أنه لا تزال هناك ثلاثة تحديات رئيسية في الميدان. أولاً، هي الأنواع الهامة؟ وهذا يمكن الإجابة جزئيا بتحوير تكوين غاز التغذية البلازما مع التشخيص البصري وقراءات البيولوجية. 20 ثانية، ما هي الآثار التي يمكن رؤية في أهداف بيولوجية مثل الخلايا؟ وهذا، على الأقل جزئيا، موجهة باستخدام تجارب الثقافة الخلية وعدد من فحوصات. في الخلايا حقيقية النواة، آثار بليوتروبيك بما في ذلك دورة الخلية اعتقال21، المبرمج22،23من نخر، والجلد خلية تنشيط24،،من2526، فضلا عن دعم أو إنقاصها للخلية الحركة أو النشاط الأيضي27،،من2829. والتحدي الثالث، المتعلقة بهذه الآثار بليوتروبيك، هو تحديد الجزيئات الرئيسية التي تحدد الاستجابة الخلوية للتأكسد المستمدة من البلازما لشرح تأثيرات مختلفة غالباً ما ينظر في أنواع مختلفة من الخلايا. يمكن أن يتم ذلك قبل اوميكس تقنيات30،،من3132 و/أو حتى أو downregulation الجينات المستهدفة باستخدام siRNA (الأكسدة) إشارات مثبطات، ومضادات الأكسدة والأنزيمات المضادة للأكسدة، فضلا عن التعديل إخراج الأنواع المتفاعلة في البلازما. 33 , 34 , 35 ومن ثم البروتوكولات المقايسة مبسطة هناك حاجة لاختبار مجموعات عينة أكبر مع عدد كبير من التكرارات.
هذه الدراسة نموذجا لكفاءة عمل تجريبي، من الفيزياء إلى علم الأحياء، للبلازما البحوث الطبية فيما يتعلق بالتحديات المذكورة أعلاه. وقد وصف تفاصيل عن الجوانب الهندسية لمصدر البلازما وتوليد بلازما قبل. 36 , 37 , 38 وكل من هذه الاختبارات تجري في لوحات 96well، والذي يحتوي على عدد من المزايا. على سبيل المثال، عينات مثل supernatants ثقافة خلية يمكن بسهولة حمل من التحليل إلى مجموعة لوحات للتحقيق، على سبيل المثال، تركيزات البروتين عن طريق إنزيم مرتبط الممتز المقايسة. في حالة توفر المعدات العلمية قادرة على قراءة مباشرة من 96-الآبار، هذا نهج يقلل تكاليف كل نموذج وهاندسونتيمي ويزيد من نتائج عن طريق الإرسال المتعدد فحوصات مختلفة من نفس العينة. استخدام القنوات المتعددة الممصات بالإضافة إلى ذلك يزيد من سرعة معالجة العينة. من حيث المبدأ، مقايسة الموصوفة هنا يمكن أيضا يتم استخدام تنسيقات لوحة جيدا مع أكبر أقطار جيدا، على الرغم من أن هذا يتطلب خطوات إضافية بيبيتينج في الأنابيب والسفن لفحوصات المتلقين للمعلومات الأخرى. ومع ذلك، لوحة أصغر أنواع مثل لوحات 384well، ولا تمثل هندسة مناسبة للبحوث الطبية الحيوية البلازما استخدام الطائرات مع تدفقات كبيرة من الغاز تغذية. على وجه التحديد، أنه لا يمكن ضمان أن الآبار واحد فقط ولكن ليس المتاخمة تتأثر أثناء علاج.
تحليل السائل ضروري للتحقيق ترسب الأنواع بالبلازما. في تحليلات الخبراء، يمكن وصف إعداد موازية لفحوصات مختلفة السوائل بلاسماتريتيد فيما يتعلق التأكسد مختلفة في نفس الوقت. يسمح هذا الإرسال المتعدد على تطوير صورة متباينة من الأنواع بلاسماديريفيد. وصف نهج حساس بدرجة كبيرة للتحقيق بيروكسيد الهيدروجين تركيزات39، وغالباً ما ضرورية ولكنها ليست دائماً كافية لشرح آثار البلازما. 40 , 41 , 42 بيولوجيا ذات الصلة يمكن أيضا تقييم الآثار في السوائل مع بالانزيم الجلوتاثيون غير المدرجة هنا. 43 المستحسن تحليل النتريت محددة عبر فحوصات جريس التقليدية بسبب حساسية المقايسة أعلى 10fold (البيانات لا تظهر). أيضا يمكن أن يحقق في السوائل بلاسماتريتيد لتكوين حمض هيبوتشلوروس باستخدام دتنب-المقايسة. حتى الآن، لم تشر النتائج السابقة إلى تشكيل تلك الأنواع مع مصدرنا البلازما. 19 , 39 , تدهور الأنواع 44 بعد الانتهاء من المعالجة بالبلازما، يأخذ مكانة على مر الزمن. النيتريت يتفاعل مع نترات؛ أيضا، يتم استهلاك بيروكسيد مع مرور الوقت. بيد أن هذه العمليات تستغرق عدة ساعات. 35 الاستيعاب ج الفسفرة مستقرة على مدى عدة ساعات، وكذلك. ولذلك، إذا تحدث العمليات داخل 30 دقيقة الأولى بعد العلاج، لا تذكر الاختلاف في تركيزات الأنواع المعمرة الموصوفة هنا. ومع ذلك، يجب توخي الحذر عند التحقيق في أنواع معينة من وسائل الإعلام (مثلاً، "تعديل النسر المتوسطة" دولبيكو) كمكونات يمكن مسح تصل إلى 90% بيروكسيد ضمن ح 1 (البيانات لا تظهر) مما أدى إلى استهانة ترسب بيروكسايد البلازما في السوائل.
ويرد مقايسة متعدد النطاقات التي من التحقيق في النشاط الأيضي على مساحة الخلية (مورفولوجيا) للتعبير علامة سطح الخلية. مزيج من هذه الاختبارات قد تكشف عن نتائج مثيرة للاهتمام. على سبيل المثال، أننا أظهرنا سابقا في وحيدات THP1 أن التهم النشاط وخلية الأيض لا تنخفض بطريقة خطية عقب التعرض للبلازما. بل 45 ، مع زيادة وقت العلاج البلازما، لوحظت الخلايا التي تم زيادة في الحجم وكان كتلة المتقدرية أعلى، مما يؤدي إلى ارتفاع معدلات التمثيل الغذائي على أساس بيرسيل. أساسا، المزيج من مولتيبلاتي القارئ، والفحص المجهري، والتدفق الخلوي مولتيبليكسيس معلومات عن الاستجابات الخلوية بعد المعالجة بالبلازما. في خلايا سرطان الجلد، نحن نركز هنا على الآثار السامة للخلايا والاستمناع وساطة من كالريتيكولين. 46 من حيث المبدأ، يمكن معالجة العديد من المسائل الأخرى مع هذا النهج ربط النشاط الأيضي مع التصوير والتدفق الخلوي النتائج. على سبيل المثال، تمايز الخلايا (مثل الاستقطاب بلعم)، إمكانات غشاء الميتوكوندريا، وتحليل دورة الخلية، حركية الخلية، الميكانيكا الحيوية، أو تشكيل ميكرونوكليوس لتحليل سمية جينية يمكن أيضا التحقيق في الخلايا المعالجة بالبلازما. قياس التدفق متعدد الألوان يسمح لتطبيقات أكثر في السكان خلية مختلفة في نفس الوقت. ويشمل هذا، على سبيل المثال، تحليل حالة الفسفرة إشارات البروتينات مثل عوامل النسخ والتحديد الكمي مرناً وقياس السيتوكينات داخل الخلايا، و/أو تقييم لمجموع ثيولس انخفاض على مستوى خلية واحدة. معلومات إضافية ذات صلة بيولوجيا أن يتوفر لكل عينة الإيدز في زيادة تطوير صورة آثار الأكسدة البلازما فهم أفضل لتطبيقات البلازما الحالية والمستقبلية.

أنواع رد الفعل المنظمين الأكسدة الهامة في المرض، بما في ذلك الشاذ الجرح الشفاء1 والسرطان. 2 الأهم من ذلك، تشترك هذه الأنواع في علم الأمراض، فضلا عن قرارها العلاجية. 3 , 4 البلازما الباردة المادية هو غاز المتأين الذي يطرد رد الفعل نوعا من أنواع كثيرة. 5 منذ ظهور ما يسمى البلازما الباردة التي تعمل في درجة حرارة الجسم6، البلازما الباردة يمكن تطبيقها على الخلايا والأنسجة دون الضرر الحراري. بإظهار فعالية والاستخدام الأمن لأجهزة البلازما في الملاحظات ما قبل السريرية والسريرية، تلقينا ثلاثة الاعتماد كالأجهزة الطبية في ألمانيا. 7 لا سيما فيما يتعلق بسلامة سمية جينية، لقد بينت دراسات عديدة نظراً لعدم أحداث مطفرة باستخدام الجهاز الأول، وطائرة نفاثة بلازما أرغون ضغط الجوي. 8 , 9 , 10 الجهازين الآخرين هي تصريفات جدار عازل ما يسمى (DBD)، التي تعمل عن طريق مبدأ مختلفة من jet البلازما. على وجه التحديد، تسمح الطائرات للعلاج دون مشرط مثل الأسطح وتجاويف بينما البلازما دبد تتسم بالكفاءة في معالجة مجالات الأنسجة أكبر ولكن بدلاً من شقة. استغلال الأكسدة الخلوية مما يشير إلى11، والهدف من هذا الأسلوب استخدام المولدة بواسطة بلازما الأنواع التفاعلية للتطبيقات الطبية الحيوية. 12 تطبيق واعدة بوجه خاص للعلاج السريري البلازما هو الدعم لالتئام الجروح. 13 , 14 , وعلاوة على ذلك، 15 كان سيظهر البلازما آثار السرطان في نماذج حيوانية. 16 , 17 , 18
قبل التحقق من فعالية وسلامة من تطبيقات البلازما في نماذج حيوانية، أو حتى من البشر، موحدة في المختبر الاحتياجات البحثية القيام بها بأجهزة البلازما. هذه التجارب ضرورية لاستكشاف تطبيقات البلازما وتحدد الآليات في العمل. وعلاوة على ذلك، هناك حاجة البحوث الأساسية لفهم الأثر المترتب على تكوين الأنواع المتفاعلة والآثار البيولوجية اللاحقة. وتوضح هذه الدراسة كيف يمكن إدماج البلازما في البحوث الطبية الحيوية فهم أفضل والتحكم في إثارة على الخلايا. فهو يصف ضبط تكوين الغاز الأعلاف، ورصد إنتاج الأنواع المتفاعلة، تطبيقات البلازما للسوائل، والخلايا، والأنسجة، ونتائج الكيميائية والبيولوجية الناتجة عن ذلك. وعلاوة على ذلك، تقدم الأمثلة التي يصدر تعليمات بتوحيد العلاج البلازما وفحوصات بيولوجية المصب، مع تركيز على البحوث الطبية البلازما في لوحات 96-جيدا. هذا النهج ومزايا متميزة: أنا) التقليل إلى أدنى حد عدد الخلايا بحاجة كل حالة وكاشف تكاليف ووقت التدريب العملي على كل عينة؛ ثانيا) بدل لمزيد من الدقة في النتائج كما يمكن إعداد العلاجات مكررة أو ثلاث بسهولة؛ وثالثاً) تيسير المعايرة المصب سلس في قارئ لوحة تنسيق 96-جيدا، والتصوير، والتدفق الخلوي التجارب.

<table style="border-collapse:collapse;width:756pt" width="1008">
	<colgroup>
		<col style="width:385pt" width="513" />
		<col style="width:99pt" width="132" />
		<col style="width:120pt" width="160" />
		<col style="width:152pt" width="203" />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl17" height="21" style="width:385pt;height:15.75pt" width="513">accutase</td>
			<td class="xl20" style="width:99pt" width="132">BioLegend</td>
			<td class="xl20" style="width:120pt" width="160">423201</td>
			<td class="xl21" style="width:152pt" width="203"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl17" height="21" style="width:385pt;height:15.75pt" width="513">amplex Ultra Red detection kit (includes horse-radish peroxidase and H2O2)</td>
			<td class="xl20" style="width:99pt" width="132">Thermo</td>
			<td class="xl20" style="width:120pt" width="160">A36006</td>
			<td class="xl21"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl17" height="21" style="width:385pt;height:15.75pt" width="513">argon gas</td>
			<td class="xl20" style="width:99pt" width="132">Air Liquide</td>
			<td class="xl20" style="width:120pt" width="160">N50</td>
			<td class="xl21"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl17" height="21" style="width:385pt;height:15.75pt" width="513">B16F10 murine melanoma cells</td>
			<td class="xl20" style="width:99pt" width="132">ATCC</td>
			<td class="xl20" style="width:120pt" width="160">CRL-6475</td>
			<td class="xl21"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl17" height="21" style="width:385pt;height:15.75pt" width="513">catalase</td>
			<td class="xl20" style="width:99pt" width="132">Sigma</td>
			<td class="xl20" style="width:120pt" width="160">C30</td>
			<td class="xl21"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl17" height="21" style="width:385pt;height:15.75pt" width="513">cell culture incubator</td>
			<td class="xl20" style="width:99pt" width="132">Binder</td>
			<td class="xl20" style="width:120pt" width="160">CB210</td>
			<td class="xl21"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl17" height="21" style="width:385pt;height:15.75pt" width="513">cell culture plastic</td>
			<td class="xl20" style="width:99pt" width="132">NUNC</td>
			<td class="xl20" style="width:120pt" width="160">156545</td>
			<td class="xl21"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl17" height="21" style="width:385pt;height:15.75pt" width="513">cytochrome c, oxidized</td>
			<td class="xl20" style="width:99pt" width="132">Sigma</td>
			<td class="xl20" style="width:120pt" width="160">C2037</td>
			<td class="xl21"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl17" height="21" style="width:385pt;height:15.75pt" width="513">data analysis</td>
			<td class="xl20" style="width:99pt" width="132">GraphPad software</td>
			<td class="xl20" style="width:120pt" width="160">prism 7.03</td>
			<td class="xl21"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl17" height="21" style="width:385pt;height:15.75pt" width="513">fetal bovine serum</td>
			<td class="xl20" style="width:99pt" width="132">Sigma</td>
			<td class="xl20" style="width:120pt" width="160"></td>
			<td class="xl21">batch-tested</td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl17" height="21" style="width:385pt;height:15.75pt" width="513">fine scale</td>
			<td class="xl20" style="width:99pt" width="132"></td>
			<td class="xl20" style="width:120pt" width="160"></td>
			<td class="xl21">any with resolution of 0.01mg</td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl17" height="21" style="width:385pt;height:15.75pt" width="513">flow cytometer</td>
			<td class="xl20" style="width:99pt" width="132">Beckman-Coulter</td>
			<td class="xl20" style="width:120pt" width="160">CytoFlex S</td>
			<td class="xl21"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl17" height="21" style="width:385pt;height:15.75pt" width="513">flow cytometry data analysis</td>
			<td class="xl20" style="width:99pt" width="132">Beckman-Coulter</td>
			<td class="xl20" style="width:120pt" width="160">Kaluza 1.5a</td>
			<td class="xl21"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl17" height="21" style="width:385pt;height:15.75pt" width="513">Glutamine</td>
			<td class="xl20" style="width:99pt" width="132">Sigma</td>
			<td class="xl20" style="width:120pt" width="160">G7513</td>
			<td class="xl21"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl17" height="21" style="width:385pt;height:15.75pt" width="513">imaging quantification software</td>
			<td class="xl20" style="width:99pt" width="132">PerkinElmer</td>
			<td class="xl20" style="width:120pt" width="160">Harmony 4.5</td>
			<td class="xl21"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl17" height="21" style="width:385pt;height:15.75pt" width="513">laminar flow hood</td>
			<td class="xl20" style="width:99pt" width="132">Thermo</td>
			<td class="xl20" style="width:120pt" width="160">Maxisafe 2020</td>
			<td class="xl21"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl17" height="21" style="width:385pt;height:15.75pt" width="513">mass flow controller</td>
			<td class="xl20" style="width:99pt" width="132">MKS</td>
			<td class="xl20" style="width:120pt" width="160">G-series</td>
			<td class="xl21"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl17" height="21" style="width:385pt;height:15.75pt" width="513">Measure-iT nitrite detection kit</td>
			<td class="xl20" style="width:99pt" width="132">Thermo</td>
			<td class="xl20" style="width:120pt" width="160">M36051</td>
			<td class="xl21"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl17" height="21" style="width:385pt;height:15.75pt" width="513">microscope</td>
			<td class="xl20" style="width:99pt" width="132">PerkinElmer</td>
			<td class="xl20" style="width:120pt" width="160">Operetta CLS</td>
			<td class="xl21"></td>
		</tr>
		<tr height="42" style="height:31.5pt">
			<td class="xl17" height="42" style="width:385pt;height:31.5pt" width="513">optical emssion spectroscopy</td>
			<td class="xl20" style="width:99pt" width="132">Avantes</td>
			<td class="xl20" style="width:120pt" width="160">AvaSpec-DDDD-2-USB2</td>
			<td class="xl21"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl17" height="21" style="width:385pt;height:15.75pt" width="513">penicilin/streptomycin</td>
			<td class="xl20" style="width:99pt" width="132">Thermo</td>
			<td class="xl20" style="width:120pt" width="160">15140122</td>
			<td class="xl21"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl17" height="21" style="width:385pt;height:15.75pt" width="513">pipettes</td>
			<td class="xl20" style="width:99pt" width="132">Eppendorf/Brand</td>
			<td class="xl20" style="width:120pt" width="160">single/multi chanel</td>
			<td class="xl21"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl17" height="21" style="width:385pt;height:15.75pt" width="513">plate reader</td>
			<td class="xl20" style="width:99pt" width="132">Tecan</td>
			<td class="xl20" style="width:120pt" width="160">M200pro</td>
			<td class="xl21"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl17" height="21" style="width:385pt;height:15.75pt" width="513">propidium iodide</td>
			<td class="xl20" style="width:99pt" width="132">BioLegend</td>
			<td class="xl20" style="width:120pt" width="160">421301</td>
			<td class="xl21"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl17" height="21" style="width:385pt;height:15.75pt" width="513">resazurin</td>
			<td class="xl20" style="width:99pt" width="132">VWR</td>
			<td class="xl20" style="width:120pt" width="160">B21187.06</td>
			<td class="xl21"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl17" height="21" style="width:385pt;height:15.75pt" width="513">RPMI1640 cell culture media</td>
			<td class="xl20" style="width:99pt" width="132">PanbioTech</td>
			<td class="xl20" style="width:120pt" width="160">P04-16500</td>
			<td class="xl21"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl17" height="21" style="width:385pt;height:15.75pt" width="513">xyz table</td>
			<td class="xl20" style="width:99pt" width="132">CNC step</td>
			<td class="xl20" style="width:120pt" width="160">HIGH-Z S-400/T&#160;</td>
			<td class="xl21"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

basic research in plasma medicine - a throughput approach from liquids to cells

الطب البلازما، وتطبق الغازات المتأينة مع درجات الحرارة قريب من نظم الفقاريات إلى الخلايا والأنسجة. البلازما الباردة تولد رد الفعل الأنواع المعروفة للأكسدة تنظيم العمليات البيولوجية في الصحة والمرض. ما قبل السريرية والسريرية الأدلة يشير إلى الآثار المفيدة للمعالجة بالبلازما في الشفاء من القرحة المزمنة للجلد. المواضيع الناشئة الأخرى، مثل البلازما لعلاج السرطان، تحظى باهتمام متزايد. البحوث الطبية البلازما يتطلب خبرات متعددة التخصصات في الفيزياء والكيمياء والطب الحيوي. هدف واحد لأبحاث البلازما لتمييز الخلايا المعالجة بالبلازما في مجموعة متنوعة من تطبيقات محددة. وهذا يشمل، على سبيل المثال، عدد الخلايا والجدوى والأكسدة الخلوية، نشاط المتقدرية، سيتوتوكسيسيتي وطريقة موت الخلية، تحليل دورة الخلية، والخلية التعبير علامة السطحية، والإفراج عن سيتوكين. تصف هذه الدراسة بالمعدات الأساسية ومهام سير العمل المطلوبة لمثل هذه البحوث في الطب الأحيائي في البلازما. فهو يصف التشغيل السليم لطائرة بلازما الأرغون الضغط الجوي، على وجه الخصوص رصد لها أطياف الانبعاثات الأساسية وتغذية الغاز الإعدادات تعدل الإخراج الأنواع المتفاعلة. استخدام عالية الدقة xyz-جدول وبرامج الحاسوب، jet هو حلقت في الدقة ميلي ثانية واحدة تجاويف ألواح 96-جيدا في الدقة ميكرومتر لأقصى إمكانية تكرار نتائج. تظهر فحوصات المتلقين للمعلومات لتحليل السائل من جزيئات الأكسدة النشطة، والخلايا الهدف المعالجة بالبلازما. على وجه التحديد، يتم تحليل خلايا سرطان الجلد في تسلسل تتسم بكفاءة لفحوصات متتالية مختلفة ولكن باستخدام نفس الخلايا: قياس النشاط الأيضي وخلية الإجمالي في المنطقة، والتعبير علامة السطحية من كالريتيكولين، جزيء مهم موت الخلية مكسبه للخلايا السرطانية. هذه فحوصات استرداد المعلومات البيولوجية ذات المحتوى الغني عن آثار البلازما من صفيحة واحدة. بالإجمال، تصف هذه الدراسة باتخاذ الخطوات الضرورية وبروتوكولات لإجراء أبحاث طبية البلازما.

Watch this Scientific Journal Video about Basic Research in Plasma Medicine - A Throughput Approach from Liquids to Cells at JoVE.com

Basic Research in Plasma Medicine - A Throughput Approach from Liquids to Cells

ويرد بروتوكول علاج بلازما مادية باردة الفائق للسوائل والخلايا. أنها تنطوي على إقامة التراكيب الغاز تغذية مختلفة للاشتعال البلازما، قياس أطياف الانبعاث البلازما، والتحليل اللاحق للسوائل والنشاط الخلوي بعد المعالجة بالبلازما.

البحوث الأساسية في الطب البلازما-نهج إنتاجية من السوائل للخلايا

In plasma medicine, ionized gases with temperatures close to that of vertebrate systems are applied to cells and tissues. Cold plasmas generate reactive ...

Research

JoVE Journal

Environment

Waste Water Derived Electroactive Microbial Biofilms: Growth, Maintenance, and Basic Characterization

The growth of anodic electroactive microbial biofilms from waste water inocula in a fed-batch reactor is demonstrated using a three-electrode setup ...

Design and Construction of an Urban Runoff Research Facility

تصميم وبناء منشأة أبحاث الجريان السطحي في المناطق الحضرية

As the urban population increases, so does the area of irrigated urban landscape. Summer water use in urban areas can be 2-3x winter base line water use ...

A Whole Cell Bioreporter Approach to Assess Transport and Bioavailability of Organic Contaminants in Water Unsaturated Systems

ككل نهج Bioreporter خلية لتقييم النقل والتوافر الحيوي للملوثات العضوية في أنظمة غير المشبعة المياه

Bioavailability of contaminants is a prerequisite for their effective biodegradation in soil. The average bulk concentration of a contaminant, however, is ...

A Technical Perspective in Modern Tree-ring Research - How to Overcome Dendroecological and Wood Anatomical Challenges

منظور تقني في الحديث شجرة الدائري البحث - كيفية التغلب على Dendroecological والخشب تشريحية التحديات

Dendroecological research uses information stored in tree rings to understand how single trees and even entire forest ecosystems responded to ...

Semi-High Throughput Screening for Potential Drought-tolerance in Lettuce (Lactuca sativa) Germplasm Collections

Semi-High Throughput Screening for Potential Drought-tolerance in Lettuce Lactuca sativa Germplasm Collections

شبه عالية الإنتاجية لفحص إمكانية الجفاف التسامح في الخس (<em&gt; خس ساتيفا</em&gt;) مجموعات الأصول الوراثية

This protocol describes a method by which a large collection of the leafy green vegetable lettuce (Lactuca sativa L.) germplasm was screened for likely ...

Automated Gel Size Selection to Improve the Quality of Next-generation Sequencing Libraries Prepared from Environmental Water Samples

جل الآلي الحجم التحديد لتحسين نوعية المكتبات تسلسل الجيل المقبل من إعداد من عينات المياه البيئة

Next-generation sequencing of environmental samples can be challenging because of the variable DNA quantity and quality in these samples. High quality DNA ...

An Aquatic Microbial Metaproteomics Workflow: From Cells to Tryptic Peptides Suitable for Tandem Mass Spectrometry-based Analysis

والمائية الميكروبية Metaproteomics سير العمل: من الخلايا إلى زيتية الببتيدات مناسبة لتحليل يستند الطيف، جنبا إلى جنب الشامل

Meta-omic technologies such as metagenomics, metatranscriptomics and metaproteomics can aid in the understanding of microbial community structure and ...

Administering and Detecting Protein Marks on Arthropods for Dispersal Research

إدارة والكشف عن علامات البروتين على المفصليات للبحوث تشتت

Monitoring arthropod movement is often required to better understand associated population dynamics, dispersal patterns, host plant preferences, and other ...

Pretreatment of Lignocellulosic Biomass with Low-cost Ionic Liquids

المعالجة من Lignocellulosic الكتلة الحيوية مع منخفضة التكلفة أيوني السوائل

A number of ionic liquids (ILs) with economically attractive production costs have recently received growing interest as media for the delignification of ...

A Simple Approach to Manipulate Dissolved Oxygen for Animal Behavior Observations

مقاربة بسيطة لالتلاعب الأوكسجين المذاب لملاحظات سلوك الحيوان

The ability to manipulate dissolved oxygen (DO) in a laboratory setting has significant application to investigate a number of ecological and organismal ...