Name: evaluation of the cell invasion and migration process: a comparison of the video microscope-based scratch wound assay and the boyden chamber assay
Uploaded: 2017-11-17T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Evaluation of the Cell Invasion and Migration Process: A Comparison of the Video Microscope-based Scratch Wound Assay and the Boyden Chamber Assay at JoVE.com

Ces techniques ont été développées avec l’appui du LabEx nombres premiers (ANR-11-LABX-0063), le Contrat de Plan Etat-région (CPER) dans le cadre scientifique de l’ETOILE (CPER 2009-2013) et lyrique Grant INCa-DGCD-4664.

Remarque : Les dosages de chambre et d’éraflure de Boyden sans inclusion de l’ECM sont appelés le test de migration, et les mêmes dosages avec l’ECM est dénommé le dosage de l’invasion.
1. Boyden chambre Assay
Remarque : Ce protocole est adapté pour la cellule SQ20B, qui est dérivé d’un cancer laryngé récurrent, tête et cou Squamous Cell Carcinoma (HNSCC) et a été obtenue de John Little (Boston, MA, USA).
Jo...

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Nous rapportons deux modalités différentes d’étudier le processus d’invasion et de la migration des cellules. L’analyse de ce processus est importante pour comprendre les facteurs de récidive métastatique, qui pourrait s’expliquer par la motilité accrue d’une sous-population de cellules cancéreuses appelé cancer cellules souches10,11.
L’expérience de chambre de Boyden est celle utilisée le plus souvent invasion et...

Migration et invasion des cellules sont impliqués dans la dissémination des cellules cancéreuses, qui est la principale cause de la résistance au traitement1 et peuvent conduire à locorégional ou récidive métastatique après traitement de cancer2. La transition épithéliale-mésenchymateuse (EMT) est le processus initial de la migration-invasion cellulaire dans lequel le cancer cellules passer d’un épithélium à un phénotype mésenchymateux. E-cadhérine est un marqueur extracellulaire du phénotype épithéliales3, et une expression accrue de la N-cadhérine et la vimentine est caractéristique du phénotype mésenchymateuses4. Migration dépend aussi de la capacité intrinsèque des cellules cancéreuses à envahir la matrice extracellulaire (ECM) sous l’action des métalloprotéases de matrice5.
Ce mécanisme d’invasion – migration a été décrite pour le cancer dans de nombreux endroits, notamment dans la tête et du cou, du cancer6. De nombreux chercheurs ont mis l’accent sur les processus de migration et invasion de mieux comprendre comment les cellules cancéreuses diffusent dans l’espoir que cette connaissance conduira à nouvelles stratégies de traitement. Il est crucial que ces études sont réalisées à l’aide de tests fiables et reproductibles.
L’analyse in vitro de la motilité cellulaire peut être difficile. Mis au point il y a de nombreuses années, le test de chambre de Boyden est considéré comme la norme pour l’invasion – migration analyse7. Cependant, il prend beaucoup de temps et est souvent inexacte. Un deuxième essai est la cicatrisation test8, qui consiste à faire une égratignure sur la culture cellulaire monocouche et capturer des images de l’invasion cellulaire et migration à intervalles de temps fixes. Cette technique a été largement critiquée en raison des grandes variations entre les résultats de deux tests successifs. Cependant, l’application des technologies modernes, notamment en microscopie, a amélioré la reproductibilité du dosage zéro blessure. Microscopes vidéo peuvent être facilement introduits en couveuse et peuvent générer des images en temps réel de la migration cellulaire. Ces appareils enregistrent des données microscopiques et fournissent une analyse automatique de confluence cellulaire plaie au fil du temps. Cet article vise à décrire le test de chambre de Boyden et le dosage optimisé plaie de grattage et de discuter les avantages et les faiblesses de chaque approche.

<table width="853">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:216px;height:21px;">Fetal Calf Serum Gold</td>
			<td style="width:117px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:181px;">A15-151</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:216px;height:21px;">Hydrocortisone water soluble</td>
			<td style="width:117px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:181px;">H0396-100MG</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="width:216px;height:42px;">Penicillin/Streptomycin 100 X</td>
			<td style="width:117px;">Dominique Dutscher</td>
			<td style="width:181px;">L0022-100</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:216px;height:21px;">DMEM</td>
			<td style="width:117px;">Gibco</td>
			<td style="width:181px;">61965-026</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:216px;height:21px;">F12 Nut Mix (1X) + GlutaMAX-I</td>
			<td style="width:117px;">Gibco</td>
			<td style="width:181px;">31765-027</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="width:216px;height:42px;">EGF</td>
			<td style="width:117px;">Promega</td>
			<td style="width:181px;">G5021</td>
			<td style="width:339px;">The solution must be prepared just before use because it is very unstable</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="width:216px;height:42px;">Z1 coulter particle</td>
			<td style="width:117px;">Beckman Coulter</td>
			<td style="width:181px;">6605698</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:216px;height:21px;">Optical microscope</td>
			<td style="width:117px;">Olympus&#160;</td>
			<td style="width:181px;">CKX31</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="width:216px;height:63px;">SQ20B cell line</td>
			<td style="width:117px;">Gift from the John Little&#8217;s Laboratory</td>
			<td style="width:181px;">-</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="width:216px;height:42px;">Wound Maker</td>
			<td style="width:117px;">Essen Bioscience</td>
			<td style="width:181px;">4494</td>
			<td style="width:339px;">Store in safe and dry place</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="width:216px;height:42px;">96-well ImageLock Plate</td>
			<td style="width:117px;">Essen Bioscience</td>
			<td style="width:181px;">4379</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="width:216px;height:42px;">CoolBox 96F System with CoolSink 96F</td>
			<td style="width:117px;">Essen Bioscience</td>
			<td style="width:181px;">1500-0078-A00</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="width:216px;height:42px;">CoolBox with M30 System</td>
			<td style="width:117px;">Essen Bioscience</td>
			<td style="width:181px;">1500-0078-A00</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="width:216px;height:42px;">Boyden Insert</td>
			<td style="width:117px;">Dominique Dutcher</td>
			<td style="width:181px;">353097</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="width:216px;height:42px;">Boyden Coated Insert</td>
			<td style="width:117px;">Dominique Dutcher</td>
			<td style="width:181px;">354483</td>
			<td style="width:339px;">Store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="width:216px;height:42px;">Companion 24-well Plate</td>
			<td style="width:117px;">Dominique Dutcher</td>
			<td style="width:181px;">353504</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:216px;height:21px;">BD Matrigel standard</td>
			<td style="width:117px;">BD BioScience</td>
			<td style="width:181px;">BD 354234</td>
			<td style="width:339px;">Store at -20&#176;C.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:216px;height:21px;">RAL 555 Staining Kit</td>
			<td style="width:117px;">RAL Diagnostics</td>
			<td style="width:181px;">&#160;361550</td>
			<td style="width:339px;">Store in safe and dry place</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:216px;height:21px;">Microcentrifuge tubes</td>
			<td style="width:117px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:181px;">33511</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

evaluation of the cell invasion and migration process: a comparison of the video microscope-based scratch wound assay and the boyden chamber assay

Les capacités d’invasion et de la migration des cellules tumorales sont les principaux contributeurs à la progression du cancer et de la récurrence. De nombreuses études ont exploré les capacités de migration et invasion de comprendre comment les cellules cancéreuses diffusent, dans le but de développer de nouvelles stratégies de traitement. Analyse des fondements cellulaires et moléculaires de ces capacités a conduit à la caractérisation de la mobilité de la cellule et les propriétés physico-chimiques du cytosquelette et microenvironnement cellulaire. Pendant de nombreuses années, le test de chambre de Boyden et le dosage zéro blessure ont été les techniques standards d’étudier la migration et l’invasion des cellules. Toutefois, ces deux techniques ont des limites. L’essai de chambre de Boyden est longue et difficile, et le dosage zéro blessure a faible reproductibilité. Développement des technologies modernes, notamment en microscopie, a augmenté la reproductibilité du dosage zéro blessure. À l’aide de systèmes d’analyse puissants, un microscope video de « en-incubateur » peut être utilisé pour fournir une analyse automatique et en temps réel de la migration cellulaire et l’invasion. L’objectif de cette communication est de déclarer et de comparer les deux essais utilisés pour étudier l’invasion cellulaire et migration : le dosage de chambre de Boyden et une optimisée en vitro vidéo axée sur le microscope scratch enroulés dosage.

Nous présentons ici deux méthodes différentes pour analyser les migrations et l’invasion des cellules. La figure 1 montre la Boyden expérience en chambre. Les inserts sont placées dans une assiette de compagnon avec chemoattractant moyen, et les cellules sont ensemencées en CM. La membrane peut être non couchée (test de migration) ou couché (dosage de l’invasion). Les cellules sont ensemencées dans la chambre haute en s-CM. La chambre basse est ...

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Evaluation of the Cell Invasion and Migration Process: A Comparison of the Video Microscope-based Scratch Wound Assay and the Boyden Chamber Assay

Évaluation de l’Invasion des cellules et le processus de Migration : une comparaison de la rayure axée sur le Microscope vidéo blessure test et le test de chambre de Boyden

Cette étude rend compte de deux méthodes différentes pour l’analyse de l’invasion cellulaire et migration : le test de chambre de Boyden et l’essai in vitro vidéo axée sur le microscope cicatrisation avec. Les protocoles de ces deux expériences sont décrites, et leurs avantages et leurs inconvénients sont comparés.

The invasion and migration abilities of tumor cells are main contributors to cancer progression and recurrence. Many studies have explored the migration ...

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Using the Dot Assay to Analyze Migration of Cell Sheets

Utilisant le test de Dot pour analyser la Migration des cellules feuilles

Although complex organisms appear static, their tissues are under a continuous turnover. As cells age, die, and are replaced by new cells, cells move ...

Recherche

Recherche en cancérologie

Moving Upwards: A Simple and Flexible In Vitro Three-dimensional Invasion Assay Protocol

Moving Upwards: A Simple and Flexible In Vitro Three-dimensional Invasion Assay Protocol

Déplacement vers le haut : Un Simple et Flexible In Vitro Invasion en trois dimensions Assay protocole

Although 3D invasion assays have been developed, the challenge remains to study cells without affecting the integrity of their microenvironment. ...

The Establishment of a Lung Colonization Assay for Circulating Tumor Cell Visualization in Lung Tissues

La mise en place d’un essai de colonisation poumon pour la visualisation de cellules de tumeur dans les tissus pulmonaires en circulation

Metastasis is the major cause of cancer death. The role of circulating tumor cells (CTCs) in promoting cancer metastasis, in which lung colonization by ...

Live-Cell Imaging Assays to Study Glioblastoma Brain Tumor Stem Cell Migration and Invasion

Épreuves d’imagerie de cellules vivantes pour étude glioblastome Brain Tumor Stem Cell Migration et Invasion

Glioblastoma (GBM) is an aggressive brain tumor that is poorly controlled with the currently available treatment options. Key features of GBMs include ...

Real Time Detection of In Vitro Tumor Cell Apoptosis Induced by CD8+ T Cells to Study Immune Suppressive Functions of Tumor-infiltrating Myeloid Cells

Real Time Detection of In Vitro Tumor Cell Apoptosis Induced by CD8+ T Cells to Study Immune Suppressive Functions of Tumor-infiltrating Myeloid Cells

Détection en temps réel de dans l’apoptose des cellules tumorales in Vitro induite par CD8+ T Cells pour étudier les fonctions immunitaires de suppresseurs de tumeur-infiltration de cellules myéloïdes

Potentiation of the tumor-killing ability of CD8+ T cells in tumors, along with their efficient tumor infiltration, is a key element of successful ...

A Simple Migration/Invasion Workflow Using an Automated Live-cell Imager

Un Workflow Simple Migration/Invasion à l’aide d’un imageur automatisé de cellules vivantes

Cancer cell mobility is crucial for the initiation of metastasis. Therefore, investigation of the cell movement and invasive capacity is of great ...

Characterize Disease-related Mutants of RAF Family Kinases by Using a Set of Practical and Feasible Methods

Caractériser les mutants liés à la maladie des kinases familiales de la RAF en utilisant un ensemble de méthodes pratiques et réalisables

The rapidly accelerated fibrosarcoma (RAF) family kinases play a central role in cell biology and their dysfunction leads to cancers and developmental ...

Impedance-based Real-time Measurement of Cancer Cell Migration and Invasion

Mesure en temps réel de la migration et de l’invasion des cellules cancéreuses

Cancer arises due to uncontrolled proliferation of cells initiated by genetic instability, mutations, and environmental and other stress factors. These ...

Modeling Brain Metastases Through Intracranial Injection and Magnetic Resonance Imaging

Modélisation des métastases cérébrales par injection intracrânienne et imagerie par résonance magnétique

Metastatic spread of cancer is an unfortunate consequence of disease progression, aggressive cancer subtypes, and/or late diagnosis. Brain metastases are ...