Name: evaluation of the cell invasion and migration process: a comparison of the video microscope-based scratch wound assay and the boyden chamber assay
Uploaded: 2017-11-17T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Evaluation of the Cell Invasion and Migration Process: A Comparison of the Video Microscope-based Scratch Wound Assay and the Boyden Chamber Assay at JoVE.com

इन तकनीकों को LabEx प्राइमर्स (ANR-11-LABX-००६३), Contrat प्लान-Etat-रीजन (CPER) के वैज्ञानिक ढांचे के भीतर ETOILE (CPER 2009-2013), और गीतकार ग्रांट इंका-DGOS-४६६४ के सहयोग से विकसित किया गया ।

नोट: Boyden चैंबर और ECM के शामिल किए जाने के बिना खरोंच परख प्रवास परख के रूप में भेजा जाता है, और ECM के साथ ही परख आक्रमण परख के रूप में जाना जाता है ।
1. Boyden चैंबर परख
नोट: इस प्रोटोकॉल SQ20B सेल लाइ...

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	<li>Friedl, P., Wolf, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumour-cell+invasion+and+migration:+diversity+and+escape+mechanisms.">Tumour-cell invasion and migration: diversity and escape mechanisms.</a> Nat Rev Cancer. 3 (5), 362-374 (2003).</li><li>Moncharmont, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiation-enhanced+cell+migration/invasion+process:+A+review.">Radiation-enhanced cell migration/invasion process: A review.</a> Crit Rev Oncol Hematol. , (2014).</li><li>Burdsal, C. A., Damsky, C. H., Pedersen, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+E-cadherin+and+integrins+in+mesoderm+differentiation+and+migration+at+the+mammalian+primitive+streak.">The role of E-cadherin and integrins in mesoderm differentiation and migration at the mammalian primitive streak.</a> Development. 118 (3), 829-844 (1993).</li><li>Chen, C., Zimmermann, M., Tinhofer, I., Kaufmann, A. M., Albers, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial-to-mesenchymal+transition+and+cancer+stem(-like)+cells+in+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma.">Epithelial-to-mesenchymal transition and cancer stem(-like) cells in head and neck squamous cell carcinoma.</a> Cancer Lett. 338 (1), 47-56 (2013).</li><li>Nelson, A. R., Fingleton, B., Rothenberg, M. L., Matrisian, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matrix+metalloproteinases:+biologic+activity+and+clinical+implications.">Matrix metalloproteinases: biologic activity and clinical implications.</a> J Clin Oncol. 18 (5), 1135-1149 (2000).</li><li>Smith, A., Teknos, T. N., Pan, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial+to+mesenchymal+transition+in+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma.">Epithelial to mesenchymal transition in head and neck squamous cell carcinoma.</a> Oral Oncol. 49 (4), 287-292 (2013).</li><li>Chen, H. -. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Boyden+chamber+assay.">Boyden chamber assay.</a> Meth Mol Biol. 294, 15-22 (2005).</li><li>Rodriguez, L. G., Wu, X., Guan, J. -. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wound-healing+assay.">Wound-healing assay.</a> Meth Mol Biol. 294, 23-29 (2005).</li><li>Piaton, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technical+recommendations+and+best+practice+guidelines+for+May-Gr&#252;nwald-Giemsa+staining:+literature+review+and+insights+from+the+quality+assurance.">Technical recommendations and best practice guidelines for May-Gr&#252;nwald-Giemsa staining: literature review and insights from the quality assurance.</a> Ann Path. 35 (4), 294-305 (2015).</li><li>Moncharmont, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+a+cornerstone+of+radiation+resistance:+cancer+stem+cell.">Targeting a cornerstone of radiation resistance: cancer stem cell.</a> Cancer lett. 322 (2), 139-147 (2012).</li><li>Moncharmont, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carbon+ion+irradiation+withstands+cancer+stem+cells’+migration/invasion+process+in+Head+and+Neck+Squamous+Cell+Carcinoma+(HNSCC).">Carbon ion irradiation withstands cancer stem cells’ migration/invasion process in Head and Neck Squamous Cell Carcinoma (HNSCC).</a> Oncotarget. 7 (30), 47738-47749 (2016).</li><li>Gilormini, M., Wozny, A. -. S., Battiston-Montagne, P., Ardail, D., Alphonse, G., Rodriguez-Lafrasse, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Characterization+of+a+Head+and+Neck+Squamous+Cell+Carcinoma+Subpopulation+Having+Stem+Cell+Characteristics.">Isolation and Characterization of a Head and Neck Squamous Cell Carcinoma Subpopulation Having Stem Cell Characteristics.</a> J Vis Exp: JoVE. (111), (2016).</li></ol>

सेल आक्रमण और माइग्रेशन प्रक्रिया का अध्ययन करने के लिए हम यहाँ दो विभिन्न मोडलों की रिपोर्ट करते हैं । इस प्रक्रिया का विश्लेषण मेटास्टेटिक पुनरावर्तन में शामिल कारकों को समझने के लिए महत्वपूर्ण है...

कोशिका आक्रमण और प्रवास कैंसर कोशिकाओं के प्रसार में शामिल हैं, जो उपचार के लिए प्रतिरोध का मुख्य कारण है1 और कैंसर के उपचार के बाद locoregional या मेटास्टेटिक पुनरावृत्ति करने के लिए नेतृत्व कर सकते हैं2. उपकला-mesenchymal संक्रमण (EMT) सेल आक्रमण की प्रारंभिक प्रक्रिया है-माइग्रेशन जिसमें कैंसर कोशिकाओं एक उपकला से एक mesenchymal phenotype के लिए स्विच. ई-Cadherin उपकला phenotype3की एक extracellular मार्कर है, और N की वृद्धि की अभिव्यक्ति-Cadherin और vimentin mesenchymal phenotype4की विशेषता है. प्रवासन भी कैंसर कोशिकाओं की आंतरिक क्षमता पर निर्भर करता है extracellular मैट्रिक्स (ECM) की कार्रवाई के माध्यम से आक्रमण करने के लिए मैट्रिक्स metalloproteases5।
इस आक्रमण-प्रवासन तंत्र कई स्थानों पर कैंसर के लिए वर्णित किया गया है, विशेष रूप से सिर और गर्दन के कैंसर में6। कई शोधकर्ताओं ने प्रवास और आक्रमण प्रक्रियाओं पर ध्यान केंद्रित किया है बेहतर समझ कैसे कैंसर कोशिकाओं को उंमीद है कि इस ज्ञान को नए उपचार रणनीतियों को बढ़ावा मिलेगा में प्रसार । यह महत्वपूर्ण है कि इन अध्ययनों विश्वसनीय और प्रतिलिपि परख का उपयोग किया जाता है ।
इन विट्रो में सेल गतिशीलता का विश्लेषण चुनौतीपूर्ण हो सकता है । कई साल पहले विकसित, Boyden चैंबर परख आक्रमण के लिए मानक माना जाता है-प्रवासन विश्लेषण7। हालांकि, यह समय लगता है और अक्सर गलत है । एक दूसरे परीक्षण घाव-चिकित्सा परख8है, जो एक सेल monolayer संस्कृति पर एक खरोंच बनाने और निश्चित समय अंतराल पर सेल आक्रमण और प्रवास की छवियों पर कब्जा करना शामिल है । इस तकनीक की वजह से दो क्रमिक परीक्षणों के परिणामों के बीच बड़े बदलावों की व्यापक रूप से आलोचना की गई है. हालांकि, आधुनिक प्रौद्योगिकियों के आवेदन, विशेष रूप से माइक्रोस्कोपी में, खरोंच घाव परख के reproducibility में सुधार हुआ है । वीडियो सूक्ष्मदर्शी आसानी से मशीन में पेश किया जा सकता है और सेल प्रवास के वास्तविक समय छवियों को उत्पंन कर सकते हैं । इन उपकरणों सूक्ष्म डेटा रिकॉर्ड और समय के साथ घाव सेल संगम का स्वत: विश्लेषण प्रदान करते हैं । इस कागज का उद्देश्य Boyden चैंबर परख और अनुकूलित खरोंच घाव परख का वर्णन है, और लाभ और प्रत्येक दृष्टिकोण की कमजोरियों पर चर्चा ।

<table width="853">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:216px;height:21px;">Fetal Calf Serum Gold</td>
			<td style="width:117px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:181px;">A15-151</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:216px;height:21px;">Hydrocortisone water soluble</td>
			<td style="width:117px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:181px;">H0396-100MG</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="width:216px;height:42px;">Penicillin/Streptomycin 100 X</td>
			<td style="width:117px;">Dominique Dutscher</td>
			<td style="width:181px;">L0022-100</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:216px;height:21px;">DMEM</td>
			<td style="width:117px;">Gibco</td>
			<td style="width:181px;">61965-026</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:216px;height:21px;">F12 Nut Mix (1X) + GlutaMAX-I</td>
			<td style="width:117px;">Gibco</td>
			<td style="width:181px;">31765-027</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="width:216px;height:42px;">EGF</td>
			<td style="width:117px;">Promega</td>
			<td style="width:181px;">G5021</td>
			<td style="width:339px;">The solution must be prepared just before use because it is very unstable</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="width:216px;height:42px;">Z1 coulter particle</td>
			<td style="width:117px;">Beckman Coulter</td>
			<td style="width:181px;">6605698</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:216px;height:21px;">Optical microscope</td>
			<td style="width:117px;">Olympus&#160;</td>
			<td style="width:181px;">CKX31</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="width:216px;height:63px;">SQ20B cell line</td>
			<td style="width:117px;">Gift from the John Little&#8217;s Laboratory</td>
			<td style="width:181px;">-</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="width:216px;height:42px;">Wound Maker</td>
			<td style="width:117px;">Essen Bioscience</td>
			<td style="width:181px;">4494</td>
			<td style="width:339px;">Store in safe and dry place</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="width:216px;height:42px;">96-well ImageLock Plate</td>
			<td style="width:117px;">Essen Bioscience</td>
			<td style="width:181px;">4379</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="width:216px;height:42px;">CoolBox 96F System with CoolSink 96F</td>
			<td style="width:117px;">Essen Bioscience</td>
			<td style="width:181px;">1500-0078-A00</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="width:216px;height:42px;">CoolBox with M30 System</td>
			<td style="width:117px;">Essen Bioscience</td>
			<td style="width:181px;">1500-0078-A00</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="width:216px;height:42px;">Boyden Insert</td>
			<td style="width:117px;">Dominique Dutcher</td>
			<td style="width:181px;">353097</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="width:216px;height:42px;">Boyden Coated Insert</td>
			<td style="width:117px;">Dominique Dutcher</td>
			<td style="width:181px;">354483</td>
			<td style="width:339px;">Store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="width:216px;height:42px;">Companion 24-well Plate</td>
			<td style="width:117px;">Dominique Dutcher</td>
			<td style="width:181px;">353504</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:216px;height:21px;">BD Matrigel standard</td>
			<td style="width:117px;">BD BioScience</td>
			<td style="width:181px;">BD 354234</td>
			<td style="width:339px;">Store at -20&#176;C.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:216px;height:21px;">RAL 555 Staining Kit</td>
			<td style="width:117px;">RAL Diagnostics</td>
			<td style="width:181px;">&#160;361550</td>
			<td style="width:339px;">Store in safe and dry place</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:216px;height:21px;">Microcentrifuge tubes</td>
			<td style="width:117px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:181px;">33511</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

evaluation of the cell invasion and migration process: a comparison of the video microscope-based scratch wound assay and the boyden chamber assay

आक्रमण और ट्यूमर कोशिकाओं के प्रवास क्षमताओं कैंसर प्रगति और पुनरावृत्ति के लिए मुख्य योगदान कर रहे हैं । कई अध्ययनों से पता लगाया है प्रवासन और आक्रमण क्षमताओं को समझने की कैसे कैंसर कोशिकाओं का प्रसार, नए उपचार रणनीतियों के विकास के उद्देश्य के साथ । सेलुलर और इन क्षमताओं का आणविक आधार का विश्लेषण सेल गतिशीलता और cytoskeleton और सेलुलर microenvironment के भौतिक गुणों के लक्षण वर्णन करने के लिए नेतृत्व किया गया है । कई वर्षों के लिए, Boyden चैंबर परख और खरोंच घाव परख मानक तकनीकों को सेल आक्रमण और प्रवास का अध्ययन किया गया है । हालांकि, इन दो तकनीकों में सीमाएं हैं । Boyden चैंबर परख मुश्किल और समय लगता है, और खरोंच घाव परख कम reproducibility है । आधुनिक प्रौद्योगिकियों के विकास, विशेष रूप से माइक्रोस्कोपी में, खरोंच घाव परख के reproducibility वृद्धि हुई है । शक्तिशाली विश्लेषण प्रणाली, एक "में-मशीन" वीडियो माइक्रोस्कोप का उपयोग करने के लिए स्वचालित और सेल प्रवास और आक्रमण के वास्तविक समय विश्लेषण प्रदान किया जा सकता है । इस कागज का उद्देश्य रिपोर्ट और दो सेल आक्रमण और प्रवास के अध्ययन के लिए इस्तेमाल किया परख: Boyden चैंबर परख और एक अनुकूलित इन विट्रो वीडियो माइक्रोस्कोप पर आधारित खरोंच घाव परख की तुलना में है ।

हम यहां रिपोर्ट दो अलग तरीकों सेल आक्रमण और प्रवास का विश्लेषण करने के लिए । चित्रा 1 Boyden चैंबर प्रयोग से पता चलता है. आवेषण chemoattractant माध्यम के साथ एक साथी थाली में रखा जाता है, और कोशि?...

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Evaluation of the Cell Invasion and Migration Process: A Comparison of the Video Microscope-based Scratch Wound Assay and the Boyden Chamber Assay

सेल आक्रमण और प्रवासन प्रक्रिया का मूल्यांकन: वीडियो माइक्रोस्कोप की तुलना-खरोंच घाव परख और Boyden चैंबर परख आधारित

इस अध्ययन सेल आक्रमण और प्रवास के विश्लेषण के लिए दो अलग तरीके रिपोर्ट: Boyden चैंबर परख और इन विट्रो वीडियो माइक्रोस्कोप पर आधारित घाव-चिकित्सा परख । इन दोनों प्रयोगों के लिए प्रोटोकॉल का वर्णन किया जाता है, और उनके लाभ और हानि की तुलना की जाती है ।

The invasion and migration abilities of tumor cells are main contributors to cancer progression and recurrence. Many studies have explored the migration ...

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Using the Dot Assay to Analyze Migration of Cell Sheets

कक्ष पत्रकों के माइग्रेशन का विश्लेषण करने के लिए डॉट परख का उपयोग करना

Although complex organisms appear static, their tissues are under a continuous turnover. As cells age, die, and are replaced by new cells, cells move ...

Moving Upwards: A Simple and Flexible In Vitro Three-dimensional Invasion Assay Protocol

Moving Upwards: A Simple and Flexible In Vitro Three-dimensional Invasion Assay Protocol

ऊपर की ओर बढ़ रहा है: एक सरल और लचीले इन विट्रो में तीन आयामी आक्रमण परख प्रोटोकॉल

Although 3D invasion assays have been developed, the challenge remains to study cells without affecting the integrity of their microenvironment. ...

The Establishment of a Lung Colonization Assay for Circulating Tumor Cell Visualization in Lung Tissues

फेफड़ों के ऊतकों में ट्यूमर कोशिका दृश्य परिसंचारी के लिए एक फेफड़े औपनिवेशीकरण परख की स्थापना

Metastasis is the major cause of cancer death. The role of circulating tumor cells (CTCs) in promoting cancer metastasis, in which lung colonization by ...

Live-Cell Imaging Assays to Study Glioblastoma Brain Tumor Stem Cell Migration and Invasion

लाइव सेल इमेजिंग परख ग्लियोब्लास्टोमा ब्रेन ट्यूमर स्टेम सेल प्रवासन और आक्रमण का अध्ययन करने के लिए

Glioblastoma (GBM) is an aggressive brain tumor that is poorly controlled with the currently available treatment options. Key features of GBMs include ...

Real Time Detection of In Vitro Tumor Cell Apoptosis Induced by CD8+ T Cells to Study Immune Suppressive Functions of Tumor-infiltrating Myeloid Cells

Real Time Detection of In Vitro Tumor Cell Apoptosis Induced by CD8+ T Cells to Study Immune Suppressive Functions of Tumor-infiltrating Myeloid Cells

इन विट्रो में के वास्तविक समय का पता लगाने ट्यूमर सेल Apoptosis सीडी 8 द्वारा प्रेरित+ टी कोशिकाओं ट्यूमर घुसपैठ माइलॉयड कोशिकाओं की प्रतिरक्षा दमन कार्यों का अध्ययन करने के लिए

Potentiation of the tumor-killing ability of CD8+ T cells in tumors, along with their efficient tumor infiltration, is a key element of successful ...

A Simple Migration/Invasion Workflow Using an Automated Live-cell Imager

स्वचालित लाइव-सेल Imager का उपयोग करके एक साधारण माइग्रेशन/

Cancer cell mobility is crucial for the initiation of metastasis. Therefore, investigation of the cell movement and invasive capacity is of great ...

Characterize Disease-related Mutants of RAF Family Kinases by Using a Set of Practical and Feasible Methods

व्यावहारिक और संभावित तरीकों का एक सेट का उपयोग करके आरएएफ परिवार Kinases के रोग से संबंधित उत्परिवर्ती विशेषता

The rapidly accelerated fibrosarcoma (RAF) family kinases play a central role in cell biology and their dysfunction leads to cancers and developmental ...

Impedance-based Real-time Measurement of Cancer Cell Migration and Invasion

बाधा आधारित वास्तविक समय कैंसर सेल प्रवास और आक्रमण के माप

Cancer arises due to uncontrolled proliferation of cells initiated by genetic instability, mutations, and environmental and other stress factors. These ...

Modeling Brain Metastases Through Intracranial Injection and Magnetic Resonance Imaging

इंट्राक्रैनियल इंजेक्शन और चुंबकीय अनुनाद इमेजिंग के माध्यम से मॉडलिंग ब्रेन मेटास्टेस

Metastatic spread of cancer is an unfortunate consequence of disease progression, aggressive cancer subtypes, and/or late diagnosis. Brain metastases are ...