Name: evaluation of the cell invasion and migration process: a comparison of the video microscope-based scratch wound assay and the boyden chamber assay
Uploaded: 2017-11-17T13:00:00
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Estas técnicas foram desenvolvidas com o apoio do LabEx PRIMES (ANR-11-LABX-0063), o plano Contrat-Etat-região (CPER) no âmbito científico da ETOILE (CPER 2009-2013) e lírica Grant INCa-DGOS-4664.

Nota: Os ensaios de câmara e zero de Boyden sem inclusão de ECM são referidos como o ensaio de migração, e os ensaios mesmos com o ECM é referido como o ensaio de invasão.
1. Boyden câmara de ensaio
Nota: Este protocolo é adaptado para a linha de celular SQ20B, que é derivada de um câncer de laringe recorrente de cabeça e pescoço Carcinoma de células escamosas (HNSCC) e foi obtida por John Little (Boston, MA, USA).
Dia...

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Nós relatamos aqui duas modalidades diferentes para estudar o processo de migração e invasão celular. A análise deste processo é importante para a compreensão dos factores envolvidos na recorrência metastática, que pode ser explicada pelo aumento da mobilidade de uma subpopulação de células de câncer chamado câncer células-tronco10,11.
O experimento de câmara de Boyden é uma o mais frequentemente usado invasão e migra...

Migração e invasão celular estão envolvidas na disseminação das células cancerosas, que é a causa principal da resistência ao tratamento1 e podem levar a locorregional ou metastática recorrência após tratamento de câncer2. A transição epitelial-mesenquimal (EMT) é o processo inicial de invasão-migração celular no qual câncer células alternar de um epitélio para um fenótipo mesenquimal. E-caderina é um marcador extracelular do fenótipo epiteliais3e expressão aumentada de N-caderina e vimentina é característica do fenótipo mesenquimais4. Migração também depende da capacidade intrínseca das células cancerosas invadir a matriz extracelular (ECM) através da ação das metaloproteases de matriz5.
Esse mecanismo de invasão – migração tem sido descrito por câncer em muitos locais, particularmente no câncer de cabeça e pescoço6. Muitos pesquisadores têm incidido sobre os processos de migração e invasão de entender melhor como as células cancerosas se disseminar na esperança de que esse conhecimento vai levar a novas estratégias de tratamento. É fundamental que estes estudos são realizados utilizando ensaios confiáveis e reproduzíveis.
Análise in vitro da motilidade celular pode ser um desafio. O ensaio de câmara Boyden desenvolveu há muitos anos, é considerado para ser o padrão para análise de invasão – migração7. No entanto, é demorado e muitas vezes é impreciso. Um segundo teste é a cicatrização da ferida ensaio8, que envolve fazer um arranhão em uma cultura celular de monocamadas e captura de imagens da invasão celular e migração em intervalos de tempo fixo. Esta técnica tem sido criticada extensamente por causa das grandes variações entre os resultados de dois testes sucessivos. No entanto, a aplicação de tecnologias modernas, especialmente em microscopia, melhorou a reprodutibilidade do ensaio do risco de ferimento. Microscópios de vídeo podem ser facilmente introduzidos em incubadoras e podem gerar imagens em tempo real de migração celular. Estes dispositivos gravar dados microscópicos e fornecem análise automática de confluência de célula ferida ao longo do tempo. O objetivo deste trabalho é descrever o ensaio de câmara Boyden e o ensaio da ferida zero otimizada e discutir as vantagens e fraquezas de cada abordagem.

<table width="853">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:216px;height:21px;">Fetal Calf Serum Gold</td>
			<td style="width:117px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:181px;">A15-151</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:216px;height:21px;">Hydrocortisone water soluble</td>
			<td style="width:117px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:181px;">H0396-100MG</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="width:216px;height:42px;">Penicillin/Streptomycin 100 X</td>
			<td style="width:117px;">Dominique Dutscher</td>
			<td style="width:181px;">L0022-100</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:216px;height:21px;">DMEM</td>
			<td style="width:117px;">Gibco</td>
			<td style="width:181px;">61965-026</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:216px;height:21px;">F12 Nut Mix (1X) + GlutaMAX-I</td>
			<td style="width:117px;">Gibco</td>
			<td style="width:181px;">31765-027</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="width:216px;height:42px;">EGF</td>
			<td style="width:117px;">Promega</td>
			<td style="width:181px;">G5021</td>
			<td style="width:339px;">The solution must be prepared just before use because it is very unstable</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="width:216px;height:42px;">Z1 coulter particle</td>
			<td style="width:117px;">Beckman Coulter</td>
			<td style="width:181px;">6605698</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:216px;height:21px;">Optical microscope</td>
			<td style="width:117px;">Olympus&#160;</td>
			<td style="width:181px;">CKX31</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="width:216px;height:63px;">SQ20B cell line</td>
			<td style="width:117px;">Gift from the John Little&#8217;s Laboratory</td>
			<td style="width:181px;">-</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="width:216px;height:42px;">Wound Maker</td>
			<td style="width:117px;">Essen Bioscience</td>
			<td style="width:181px;">4494</td>
			<td style="width:339px;">Store in safe and dry place</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="width:216px;height:42px;">96-well ImageLock Plate</td>
			<td style="width:117px;">Essen Bioscience</td>
			<td style="width:181px;">4379</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="width:216px;height:42px;">CoolBox 96F System with CoolSink 96F</td>
			<td style="width:117px;">Essen Bioscience</td>
			<td style="width:181px;">1500-0078-A00</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="width:216px;height:42px;">CoolBox with M30 System</td>
			<td style="width:117px;">Essen Bioscience</td>
			<td style="width:181px;">1500-0078-A00</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="width:216px;height:42px;">Boyden Insert</td>
			<td style="width:117px;">Dominique Dutcher</td>
			<td style="width:181px;">353097</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="width:216px;height:42px;">Boyden Coated Insert</td>
			<td style="width:117px;">Dominique Dutcher</td>
			<td style="width:181px;">354483</td>
			<td style="width:339px;">Store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="width:216px;height:42px;">Companion 24-well Plate</td>
			<td style="width:117px;">Dominique Dutcher</td>
			<td style="width:181px;">353504</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:216px;height:21px;">BD Matrigel standard</td>
			<td style="width:117px;">BD BioScience</td>
			<td style="width:181px;">BD 354234</td>
			<td style="width:339px;">Store at -20&#176;C.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:216px;height:21px;">RAL 555 Staining Kit</td>
			<td style="width:117px;">RAL Diagnostics</td>
			<td style="width:181px;">&#160;361550</td>
			<td style="width:339px;">Store in safe and dry place</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:216px;height:21px;">Microcentrifuge tubes</td>
			<td style="width:117px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:181px;">33511</td>
			<td style="width:339px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

evaluation of the cell invasion and migration process: a comparison of the video microscope-based scratch wound assay and the boyden chamber assay

A capacidade de invasão e migração de células tumorais é principais contribuintes para a progressão do câncer e recorrência. Muitos estudos têm explorado as capacidades de migração e invasão de entender como as células cancerosas se disseminar, com o objectivo de desenvolver novas estratégias de tratamento. Análise das bases celulares e moleculares destas habilidades levou para a caracterização da mobilidade celular e as propriedades físico-químicas do citoesqueleto e microambiente celular. Por muitos anos, o ensaio de câmara Boyden e o risco de ferimento ensaio foram as técnicas padrão para estudar a migração e invasão celular. No entanto, estas duas técnicas têm limitações. O ensaio de câmara Boyden é difícil e demorado, e o ensaio da ferida zero tem baixa reprodutibilidade. Desenvolvimento de tecnologias modernas, especialmente em microscopia, aumentou a reprodutibilidade do ensaio do risco de ferimento. Utilizando sistemas de análise poderosas, um microscópio de vídeo de "no-incubadora" pode ser usado para fornecer análise automática e em tempo real de migração celular e invasão. O objetivo deste trabalho é relatar e comparar os dois ensaios utilizados para estudar a migração e invasão celular: o ensaio de câmara Boyden e um otimizado em vitro vídeo microscópio com base em zero do ensaio de ferida.

Nós relatamos aqui dois métodos diferentes para analisar a migração e invasão celular. A Figura 1 mostra a Boyden experimento de câmara. As inserções são colocadas em uma placa de companheiro com quimiotático médio, e as células são semeadas em CM. A membrana pode ser sem revestimento (ensaio de migração) ou revestido (teste de invasão). As células são semeadas na câmara superior em s-CM. A câmara baixa é preenchida com CM como um quimiot...

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Evaluation of the Cell Invasion and Migration Process: A Comparison of the Video Microscope-based Scratch Wound Assay and the Boyden Chamber Assay

Avaliação do processo de migração e invasão celular: uma comparação da risque baseado no microscópio a ferida do ensaio e o ensaio de câmara Boyden

Este estudo relata dois métodos diferentes para a análise de migração e invasão celular: o ensaio de câmara Boyden e em vitro vídeo baseado em microscópio cicatrização ensaio. São descritos os protocolos para estes dois experimentos, e suas vantagens e desvantagens são comparadas.

The invasion and migration abilities of tumor cells are main contributors to cancer progression and recurrence. Many studies have explored the migration ...

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Using the Dot Assay to Analyze Migration of Cell Sheets

Usando o ensaio de ponto para analisar a migração de células de folhas

Although complex organisms appear static, their tissues are under a continuous turnover. As cells age, die, and are replaced by new cells, cells move ...

Pesquisa do câncer

Moving Upwards: A Simple and Flexible In Vitro Three-dimensional Invasion Assay Protocol

Moving Upwards: A Simple and Flexible In Vitro Three-dimensional Invasion Assay Protocol

Se movendo para cima: Um simples e flexível em Vitro invasão tridimensional protocolo do ensaio

Although 3D invasion assays have been developed, the challenge remains to study cells without affecting the integrity of their microenvironment. ...

The Establishment of a Lung Colonization Assay for Circulating Tumor Cell Visualization in Lung Tissues

O estabelecimento de um ensaio de colonização de pulmão para visualização de células de Tumor nos tecidos do pulmão de circulação

Metastasis is the major cause of cancer death. The role of circulating tumor cells (CTCs) in promoting cancer metastasis, in which lung colonization by ...

Live-Cell Imaging Assays to Study Glioblastoma Brain Tumor Stem Cell Migration and Invasion

Imagem latente da viver-pilha ensaios de migração de células-tronco do estudo Glioblastoma cerebral Tumor e invasão

Glioblastoma (GBM) is an aggressive brain tumor that is poorly controlled with the currently available treatment options. Key features of GBMs include ...

Real Time Detection of In Vitro Tumor Cell Apoptosis Induced by CD8+ T Cells to Study Immune Suppressive Functions of Tumor-infiltrating Myeloid Cells

Real Time Detection of In Vitro Tumor Cell Apoptosis Induced by CD8+ T Cells to Study Immune Suppressive Functions of Tumor-infiltrating Myeloid Cells

Detecção de tempo real em Vitro Tumor celular apoptose induzida por CD8+ T células para estudar as funções imunológicas supressora de Tumor infiltrando células mieloides

Potentiation of the tumor-killing ability of CD8+ T cells in tumors, along with their efficient tumor infiltration, is a key element of successful ...

A Simple Migration/Invasion Workflow Using an Automated Live-cell Imager

Um fluxo de trabalho simples migração/invasão usando um automatizado Imager viver-pilha

Cancer cell mobility is crucial for the initiation of metastasis. Therefore, investigation of the cell movement and invasive capacity is of great ...

Characterize Disease-related Mutants of RAF Family Kinases by Using a Set of Practical and Feasible Methods

Caracterizar Mutants relacionados à doença da família da RAF kinases usando um conjunto de métodos práticos e viáveis

The rapidly accelerated fibrosarcoma (RAF) family kinases play a central role in cell biology and their dysfunction leads to cancers and developmental ...

Impedance-based Real-time Measurement of Cancer Cell Migration and Invasion

Medição em tempo real da migração e invasão de células cancerígenas

Cancer arises due to uncontrolled proliferation of cells initiated by genetic instability, mutations, and environmental and other stress factors. These ...

Modeling Brain Metastases Through Intracranial Injection and Magnetic Resonance Imaging

Modelando metástases cerebrais através de injeção intracraniana e ressonância magnética

Metastatic spread of cancer is an unfortunate consequence of disease progression, aggressive cancer subtypes, and/or late diagnosis. Brain metastases are ...