Name: dissection and coronal slice preparation of developing mouse pituitary gland
Uploaded: 2017-11-16T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Dissection and Coronal Slice Preparation of Developing Mouse Pituitary Gland at JoVE.com

Ce travail a été soutenu par les subventions de la Fondation de sciences naturelles nationales de la Chine (31201086, 31470759 et 31671219) et la Fondation des sciences naturelles de Shanghai (12ZR1436900).

souris C57BL/6 sont élevés dans des conditions spécifiques exempts de micro-organismes pathogènes. Toutes les méthodes expérimentales animales sont en conformité avec les directives approuvées par le Comité d’éthique à l’Université de médecine militaire de seconde et animalier.
 1. dissection de Postnatal développant hypophyse <ol><li>Perform anesthésie : placer la souris néonatales (P0 - P5) sur la glace pilée pour induire l’hypothermie. Pour les souris âgées de 5...

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	<li>Fauquier, T., Lacampagne, A., Travo, P., Bauer, K., Mollard, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hidden+face+of+the+anterior+pituitary.">Hidden face of the anterior pituitary.</a> Trends Endocrinol Metab. 13 (7), 304-309 (2002).</li><li>Haedo, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+pituitary+function+by+cytokines.">Regulation of pituitary function by cytokines.</a> Horm Res. 72 (5), 266-274 (2009).</li><li>Zhu, X., Gleiberman, A. S., Rosenfeld, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+physiology+of+pituitary+development:+signaling+and+transcriptional+networks.">Molecular physiology of pituitary development: signaling and transcriptional networks.</a> Physiol Rev. 87 (3), 933-963 (2007).</li><li>Bancalari, R. E., Gregory, L. C., McCabe, M. J., Dattani, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pituitary+gland+development:+an+update.">Pituitary gland development: an update.</a> Endocr Dev. 23, 1-15 (2012).</li><li>Kelberman, D., Rizzoti, K., Lovell-Badge, R., Robinson, I. C., Dattani, M. 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(46), (2010).</li><li>Budry, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Related+pituitary+cell+lineages+develop+into+interdigitated+3D+cell+networks.">Related pituitary cell lineages develop into interdigitated 3D cell networks.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 108 (30), 12515-12520 (2011).</li><li>Wilson, D. B., Wyatt, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histopathology+of+the+pituitary+gland+in+neonatal+little+(lit)+mutant+mice.">Histopathology of the pituitary gland in neonatal little (lit) mutant mice.</a> Histol Histopathol. 7 (3), 451-455 (1992).</li><li>Jonkers, B. W., Sterk, J. C., Wouterlood, F. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcardial+perfusion+fixation+of+the+CNS+by+means+of+a+compressed-air-driven+device.">Transcardial perfusion fixation of the CNS by means of a compressed-air-driven device.</a> J Neurosci Methods. 12 (2), 141-149 (1984).</li><li>Cao, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ZBTB20+is+required+for+anterior+pituitary+development+and+lactotrope+specification.">ZBTB20 is required for anterior pituitary development and lactotrope specification.</a> Nat Commun. 7, 11121 (2016).</li></ol>

Pour développer des hypophyses murins, il a été techniquement difficile d’obtenir des sections coronales appropriées en raison de leurs caractéristiques de minuscules et fragiles et les particularités anatomiques6,8. Certains groupes de recherche a donc choisi des sections misagittal d’analyser la morphologie embryonnaire et néonatale hypophysaire11,,12. Bien que la section longitudinal de l...

La glande pituitaire ou hypophyse est un organe endocrine sécrétant des hormones essentielles pour l’homéostasie1,2. Anatomiquement, l’hypophyse est une structure '' two-in-one'', consistant en la neurohypophyse et l’adénohypophyse. Ces pièces ont très différemment de fonction et différentes origines embryonnaires. La neurohypophyse est dérivée de l’ectoderme neural et sécrète de l’ocytocine et l’hormone antidiurétique. L’adénohypophyse provient de la poche de Rathke et est responsable de la libération d’hormones dont l’hormone de croissance, prolactine, hormone stimulant la thyroïde, hormone folliculo - stimulante, hormone lutéinisante, hormone corticotrope, et hormone folliculostimulante de mélanocytes –3,4,5.
La glande pituitaire repose sur la surface dorsale de l’OS sphénoïde (selle turcique) du crâne de souris et est fixée sur le plancher du cerveau par une tige fragile. Il est entouré latéralement par les nerfs trijumeau et vers l’avant par le chiasma6,7. La glande a une forme ovale allongée avec son grand axe perpendiculaire à celui de la tête. Sur sa face dorsale, la neurohypophyse et l’adénohypophyse peuvent facilement être délimités, avec l’ancien occupant la région médiane dorsale et la dernière s’étendant latéralement et sur le ventre. Pendant le développement postnatal, la taille de l’hypophyse augmente rapidement durant le premier mois après la naissance de8,9. Néanmoins, l’hypophyse de la souris est toujours très petite taille avec un poids moyen de 1,9 mg et d’un diamètre d’axe de ~ 3 mm en adulte10, axe de diamètre de 2 à 2,5 mm au 21e jour (P21) et seulement 1 à 1,5 mm au P0.
Une section coronale est préférable pour afficher l’adénohypophyse et neurohypophyse en une seule tranche de l’hypophyse de la souris. Toutefois, certaines compétences techniques sont nécessaires pour obtenir satisfaisant coronales sections des glandes pituitaires des pays en développement de souris grâce à sa taille exceptionnellement petite et anatomie distincte. Dans cet article en vidéo, nous démontrons comment disséquer les hypophyses souris et préparer les sections coronales hypophysaires aux stades de développement différents.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Tools/Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical scissors-straight</td>
			<td>JinZhong</td>
			<td>J21010</td>
			<td>can be purchased from other vendors</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine scissors-strainght</td>
			<td>JinZhong</td>
			<td>WA1010</td>
			<td>can be purchased from other vendors</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blunt forceps</td>
			<td>JinZhong</td>
			<td>JD1020</td>
			<td>can be purchased from other vendors</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine forceps</td>
			<td>Dumont</td>
			<td>RS-5015</td>
			<td>for isolation of the pituitary</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>26G (0.45mm) needle</td>
			<td>HongDa</td>
			<td></td>
			<td>for transcardial perfusion</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe (1 mL)</td>
			<td>BD</td>
			<td>300841</td>
			<td>can be purchased from other vendors</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe (10 mL)</td>
			<td>BD</td>
			<td></td>
			<td>can be purchased from other vendors</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>35mm dish</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430165</td>
			<td>can be purchased from other vendors</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lens cleaning paper</td>
			<td>ShuangQuan</td>
			<td></td>
			<td>can be purchased from other vendors</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anatomical microscope</td>
			<td>OLYMPUS</td>
			<td>SZX-ILLB2-200</td>
			<td>can be purchased from other vendors</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embedding cassette</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>22-272423</td>
			<td>can be purchased from other vendors</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue embedding console system</td>
			<td>KEDEE</td>
			<td>KD-BM11</td>
			<td>can be purchased from other vendors</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>HM315R</td>
			<td>can be purchased from other vendors</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superfrost-Plus slides</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>22-037-246</td>
			<td>can be purchased from other vendors</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover glass</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>12-543</td>
			<td>can be purchased from other vendors</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence microscope</td>
			<td>OLYMPUS</td>
			<td>BH2-RFCA</td>
			<td>can be purchased from other vendors</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagents</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Urethane</td>
			<td>BBI</td>
			<td>EB0448</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S9625</td>
			<td>for PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P9541</td>
			<td>for PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na2HPO4.12H2O</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>71650</td>
			<td>for PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>K2HPO4</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P2222</td>
			<td>for PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaNO2</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>237213</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin Sodium Injection</td>
			<td>SPH</td>
			<td>H31022051</td>
			<td>for perfusion saline</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde (PFA)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P6148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>SCR</td>
			<td>10009218</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>SCR</td>
			<td>10023418</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>8330</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H9627</td>
			<td>for H&#38;E staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin Y</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>E4009</td>
			<td>for H&#38;E staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rabbit anti growth hormone (GH)</td>
			<td>National Hormone</td>
			<td></td>
			<td>for immunostaining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>antibody</td>
			<td>Pituitary Program</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-mouse GFAP antibody</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G9269</td>
			<td>for immunostaining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-rabbit IgG, HRP</td>
			<td>Jackson</td>
			<td>111-035-003</td>
			<td>for immunostaining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TSA system</td>
			<td>NEN Life Science Products</td>
			<td>NEL700</td>
			<td>for immunostaining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Streptavidin, Alexa Fluor 594</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>S32356</td>
			<td>for immunostaining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-FITC Alexa Fluor 488</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>A11090</td>
			<td>for immunostaining</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dissection and coronal slice preparation of developing mouse pituitary gland

La glande pituitaire ou hypophyse est un organe endocrine sécrétant des hormones essentielles pour l’homéostasie. Il se compose de deux glandes avec origines embryonnaires distinctes et les fonctions — la neurohypophyse et l’adénohypophyse. L’hypophyse en développement de souris est minuscule et délicat avec une forme ovale allongée. Une section coronale est préférée à afficher l’adénohypophyse et la neurohypophyse en une seule tranche de l’hypophyse de la souris.
Le but du présent protocole est d’atteindre la bonne sections coronales hypophysaires avec des architectures de tissu bien préservé des pays en développement de la souris. Dans ce protocole, nous décrivons en détail comment disséquer et traiter des glandes pituitaires correctement des pays en développement de la souris. Tout d’abord, les souris sont fixés par transcardial perfusion de formaldéhyde avant la dissection. Puis les trois techniques différentes de dissection sont appliquées pour obtenir les hypophyses intacts selon l’âge de la souris. Chez les souris foetales de jours embryonnaires (E) 17,5-18,5 et nouveaux-nés vers le haut à 4 jours, les régions de sella entière y compris le sphénoïde, glandes et des nerfs trijumeau sont disséquées. Pour les petits âgés jours (P) 5-14, les glandes pituitaires reliés aux nerfs trijumeau sont disséqués dans son ensemble. Pour les souris âgé de plus de 3 semaines, les glandes pituitaires sont soigneusement disséqués gratuite les tissus environnants. Nous affichons également comment intégrer les glandes pituitaires dans une orientation appropriée en utilisant les tissus environnants comme repères pour obtenir satisfaisant des sections coronales. Ces méthodes sont utiles dans l’analyse des caractéristiques histologiques et du développement des glandes pituitaires dans le développement des souris.

Ce protocole présente une méthode pour disséquer les glandes pituitaires des pays en développement de la souris. Pour la souris néonatale, des régions entières sella contenant la glande pituitaire, les nerfs trijumeau et le dessous sphénoïde ont été disséqués à partir de la base du crâne. L’hypophyse minuscule et délicate sont restés intact au cours du processus (Figure 1 a). Pour les souris plus de 5 jours, les glandes pituitaires attaché...

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Dissection and Coronal Slice Preparation of Developing Mouse Pituitary Gland

Dissection et préparation de tranches coronales de développer la glande pituitaire souris

Nous présentons un protocole pour disséquer les glandes pituitaires et préparer hypophysaires sections coronales des pays en développement de la souris.

The pituitary gland or hypophysis is an important endocrine organ secreting hormones essential for homeostasis. It consists of two glands with separate ...

Research

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