Name: differentiation of mouse embryonic stem cells into cortical interneuron precursors
Uploaded: 2017-12-03T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Differentiation of Mouse Embryonic Stem Cells into Cortical Interneuron Precursors at JoVE.com

Мы благодарны Цин Сюй для разработки Nkx2.1::mCherry:Lhx6:GFP двойной репортер mESC линии, а также Дженнифер Тайсон, Асиф Маруф и Тим Петрос для их ранние работы на оказание помощи в разработке этого протокола. Мы также благодарим Чоп потока цитометрии ядро для оказания технической помощи. Эта работа была поддержана NIH R01 MH066912 (SA) и F30 MH105045-02 (DT).

Примечание: Линия mESC двойной репортер, указанных в настоящем Протоколе доступен по запросу (sande@mail.med.upenn.edu).
1. средства массовой информации подготовка
Примечание: Теплый все средства массовой информации до 37 ° C перед использованием в клеточной культуре.
<ol...

<ol>
	<li>Jones, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+origins+of+cortical+interneurons:+mouse+versus+monkey+and+human.">The origins of cortical interneurons: mouse versus monkey and human.</a> Cereb Cortex. 19, 1953-1956 (2009).</li><li>Wonders, C. P., Anderson, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+origin+and+specification+of+cortical+interneurons.">The origin and specification of cortical interneurons.</a> Nature reviews. Neuroscience. 7 (6), 687-696 (2006).</li><li>Ascoli, G. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Petilla+terminology:+nomenclature+of+features+of+GABAergic+interneurons+of+the+cerebral+cortex.">Petilla terminology: nomenclature of features of GABAergic interneurons of the cerebral cortex.</a> Nature reviews. Neuroscience. 9, 557-568 (2008).</li><li>DeFelipe, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+insights+into+the+classification+and+nomenclature+of+cortical+GABAergic+interneurons.">New insights into the classification and nomenclature of cortical GABAergic interneurons.</a> Nature reviews. Neuroscience. 14, 202-216 (2013).</li><li>Xu, X., Roby, K. D., Callaway, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunochemical+characterization+of+inhibitory+mouse+cortical+neurons:+three+chemically+distinct+classes+of+inhibitory+cells.">Immunochemical characterization of inhibitory mouse cortical neurons: three chemically distinct classes of inhibitory cells.</a> J Comp Neurol. 518, 389-404 (2010).</li><li>Inan, M., Petros, T. J., Anderson, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Losing+your+inhibition:+Linking+cortical+GABAergic+interneurons+to+schizophrenia.">Losing your inhibition: Linking cortical GABAergic interneurons to schizophrenia.</a> Neurobiol Dis. 53, 36-48 (2013).</li><li>Benes, F. M., Berretta, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GABAergic+interneurons:+implications+for+understanding+schizophrenia+and+bipolar+disorder.">GABAergic interneurons: implications for understanding schizophrenia and bipolar disorder.</a> Neuropsychopharmacology. 25, 1-27 (2001).</li><li>Tyson, J. A., Goldberg, E. M., Maroof, A. M., Petros, T. P., Anderson, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Duration+of+culture+and+Sonic+Hedgehog+signaling+differentially+specify+PV+versus+SST+cortical+interneuron+fates+from+embryonic+stem+cells.">Duration of culture and Sonic Hedgehog signaling differentially specify PV versus SST cortical interneuron fates from embryonic stem cells.</a> Development. 142, 1267-1278 (2015).</li><li>Au, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+modular+gain-of-function+approach+to+generate+cortical+interneuron+subtypes+from+ES+cells.">A modular gain-of-function approach to generate cortical interneuron subtypes from ES cells.</a> Neuron. 80, 1145-1158 (2013).</li><li>Petros, T. J., Maurer, C. W., Anderson, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+derivation+of+mouse+ESC-derived+cortical+interneurons+by+expression+of+Nkx2.1.">Enhanced derivation of mouse ESC-derived cortical interneurons by expression of Nkx2.1.</a> Stem Cell Res. 11, 647-656 (2013).</li><li>Cambray, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activin+induces+cortical+interneuron+identity+and+differentiation+in+embryonic+stem+cell-derived+telencephalic+neural+precursors.">Activin induces cortical interneuron identity and differentiation in embryonic stem cell-derived telencephalic neural precursors.</a> Nat Commun. 3, 841 (2012).</li><li>Chen, Y. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+"MGE+Enhancers"+for+Labeling+and+Selection+of+Embryonic+Stem+Cell-Derived+Medial+Ganglionic+Eminence+(MGE)+Progenitors+and+Neurons.">Use of "MGE Enhancers" for Labeling and Selection of Embryonic Stem Cell-Derived Medial Ganglionic Eminence (MGE) Progenitors and Neurons.</a> PloS one. 8, e61956 (2013).</li><li>Danjo, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subregional+specification+of+embryonic+stem+cell-derived+ventral+telencephalic+tissues+by+timed+and+combinatory+treatment+with+extrinsic+signals.">Subregional specification of embryonic stem cell-derived ventral telencephalic tissues by timed and combinatory treatment with extrinsic signals.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 31, 1919-1933 (2011).</li><li>Watanabe, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Directed+differentiation+of+telencephalic+precursors+from+embryonic+stem+cells.">Directed differentiation of telencephalic precursors from embryonic stem cells.</a> Nat Neurosci. 8, 288-296 (2005).</li><li>Tyson, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Duration+of+culture+and+sonic+hedgehog+signaling+differentially+specify+PV+versus+SST+cortical+interneuron+fates+from+embryonic+stem+cells.">Duration of culture and sonic hedgehog signaling differentially specify PV versus SST cortical interneuron fates from embryonic stem cells.</a> Development. 142, 1267-1278 (2015).</li><li>Maroof, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Directed+differentiation+and+functional+maturation+of+cortical+interneurons+from+human+embryonic+stem+cells.">Directed differentiation and functional maturation of cortical interneurons from human embryonic stem cells.</a> Cell Stem Cell. 12, 559-572 (2013).</li><li>Tischfield, D. J., Kim, J., Anderson, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atypical+PKC+and+Notch+Inhibition+Differentially+Modulate+Cortical+Interneuron+Subclass+Fate+from+Embryonic+Stem+Cells.">Atypical PKC and Notch Inhibition Differentially Modulate Cortical Interneuron Subclass Fate from Embryonic Stem Cells.</a> Stem Cell Reports. 8, 1135-1143 (2017).</li><li>Liodis, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lhx6+activity+is+required+for+the+normal+migration+and+specification+of+cortical+interneuron+subtypes.">Lhx6 activity is required for the normal migration and specification of cortical interneuron subtypes.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 27, 3078-3089 (2007).</li><li>Du, T., Xu, Q., Ocbina, P. J., Anderson, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NKX2.1+specifies+cortical+interneuron+fate+by+activating+Lhx6.">NKX2.1 specifies cortical interneuron fate by activating Lhx6.</a> Development. 135, 1559-1567 (2008).</li><li>Marin, O., Anderson, S. A., Rubenstein, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Origin+and+molecular+specification+of+striatal+interneurons.">Origin and molecular specification of striatal interneurons.</a> Journal of Neuroscience. 20, 6063-6076 (2000).</li><li>Xu, Q., Wonders, C. P., Anderson, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sonic+hedgehog+maintains+the+identity+of+cortical+interneuron+progenitors+in+the+ventral+telencephalon.">Sonic hedgehog maintains the identity of cortical interneuron progenitors in the ventral telencephalon.</a> Development. 132, 4987-4998 (2005).</li><li>Glickstein, S. B., Alexander, S., Ross, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differences+in+cyclin+D2+and+D1+protein+expression+distinguish+forebrain+progenitor+subsets.">Differences in cyclin D2 and D1 protein expression distinguish forebrain progenitor subsets.</a> Cereb Cortex. 17, 632-642 (2007).</li><li>Petros, T. J., Bultje, R. S., Ross, M. E., Fishell, G., Anderson, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apical+versus+Basal+Neurogenesis+Directs+Cortical+Interneuron+Subclass+Fate.">Apical versus Basal Neurogenesis Directs Cortical Interneuron Subclass Fate.</a> Cell Rep. 13, 1090-1095 (2015).</li><li>Xu, Q., Tam, M., Anderson, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fate+mapping+Nkx2.1-lineage+cells+in+the+mouse+telencephalon.">Fate mapping Nkx2.1-lineage cells in the mouse telencephalon.</a> J Comp Neurol. 506, 16-29 (2008).</li><li>Wonders, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+spatial+bias+for+the+origins+of+interneuron+subgroups+within+the+medial+ganglionic+eminence.">A spatial bias for the origins of interneuron subgroups within the medial ganglionic eminence.</a> Dev Biol. 314, 127-136 (2008).</li><li>Inan, M., Welagen, J., Anderson, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatial+and+temporal+bias+in+the+mitotic+origins+of+somatostatin-+and+parvalbumin-expressing+interneuron+subgroups+and+the+chandelier+subtype+in+the+medial+ganglionic+eminence.">Spatial and temporal bias in the mitotic origins of somatostatin- and parvalbumin-expressing interneuron subgroups and the chandelier subtype in the medial ganglionic eminence.</a> Cereb Cortex. 22, 820-827 (2012).</li><li>Flames, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Delineation+of+multiple+subpallial+progenitor+domains+by+the+combinatorial+expression+of+transcriptional+codes.">Delineation of multiple subpallial progenitor domains by the combinatorial expression of transcriptional codes.</a> The Journal of neuroscience: the official journal of the Society for Neuroscience. 27, 9682-9695 (2007).</li><li>Fogarty, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatial+genetic+patterning+of+the+embryonic+neuroepithelium+generates+GABAergic+interneuron+diversity+in+the+adult+cortex.">Spatial genetic patterning of the embryonic neuroepithelium generates GABAergic interneuron diversity in the adult cortex.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 27, 10935-10946 (2007).</li><li>Eiraku, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-organized+formation+of+polarized+cortical+tissues+from+ESCs+and+its+active+manipulation+by+extrinsic+signals.">Self-organized formation of polarized cortical tissues from ESCs and its active manipulation by extrinsic signals.</a> Cell Stem Cell. 3, 519-532 (2008).</li><li>Colasante, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+Conversion+of+Fibroblasts+into+Functional+Forebrain+GABAergic+Interneurons+by+Direct+Genetic+Reprogramming.">Rapid Conversion of Fibroblasts into Functional Forebrain GABAergic Interneurons by Direct Genetic Reprogramming.</a> Cell Stem Cell. 17, 719-734 (2015).</li><li>Xu, Q., Cobos, I., De La Cruz, E., Rubenstein, J. L., Anderson, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Origins+of+cortical+interneuron+subtypes.">Origins of cortical interneuron subtypes.</a> The Journal of neuroscience: the official journal of the Society for Neuroscience. 24, 2612-2622 (2004).</li><li>Southwell, D. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interneurons+from+embryonic+development+to+cell-based+therapy.">Interneurons from embryonic development to cell-based therapy.</a> Science. 344, 1240622 (2014).</li><li>Tyson, J. A., Anderson, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GABAergic+interneuron+transplants+to+study+development+and+treat+disease.">GABAergic interneuron transplants to study development and treat disease.</a> Trends Neurosci. 37, 169-177 (2014).</li><li>Donegan, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cell-derived+interneuron+transplants+as+a+treatment+for+schizophrenia:+preclinical+validation+in+a+rodent+model.">Stem cell-derived interneuron transplants as a treatment for schizophrenia: preclinical validation in a rodent model.</a> Mol Psychiatry. , (2016).</li><li>Deglincerti, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-organization+of+human+embryonic+stem+cells+on+micropatterns.">Self-organization of human embryonic stem cells on micropatterns.</a> Nat Protoc. 11, 2223-2232 (2016).</li><li>Chambers, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+efficient+neural+conversion+of+human+ES+and+iPS+cells+by+dual+inhibition+of+SMAD+signaling.">Highly efficient neural conversion of human ES and iPS cells by dual inhibition of SMAD signaling.</a> Nat Biotechnol. 27, 275-280 (2009).</li><li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+cultivation+of+naive-like+human+pluripotent+stem+cells+based+on+HERVH+expression.">Isolation and cultivation of naive-like human pluripotent stem cells based on HERVH expression.</a> Nat Protoc. 11, 327-346 (2016).</li><li>Zeltner, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Capturing+the+biology+of+disease+severity+in+a+PSC-based+model+of+familial+dysautonomia.">Capturing the biology of disease severity in a PSC-based model of familial dysautonomia.</a> Nat Med. 22, 1421-1427 (2016).</li><li>Blahos, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+site+on+the+Galpha+-protein+that+recognizes+heptahelical+receptors.">A novel site on the Galpha -protein that recognizes heptahelical receptors.</a> J Biol Chem. 276, 3262-3269 (2001).</li></ol>

Хотя этот метод очень эффективен на кучность J1-производные mESCs (ПКРК-1010), мы испытали переменным успехом с другими mESC линий и клоновых изолятов. К примеру, Foxg1::venus mESCs (EB3-производных; Danjo и др. 13) реагируют плохо этот протокол и Foxg1 индукции, DD12 обычно составляет порядка 1-2%. П...

В обоих мышей и людей, примерно половина всех корковых ингибирующее интернейронов (ЦИН) происходят в рамках переходных подкорковые структуры, известный как медиальный Ганглиозный возвышение (MGE), где нейроэпителиальных прародителями Цин и других нейронов и глиальных подгруппы Экспресс фактор транскрипции Nkx2.11,2. Цин подгрупп или подтипы определяются пересекающихся морфологических, нейрохимических, электрофизиологических и подключения характеристики3,4. Цин МГЕ производные могут быть сгруппированы в основном non перекроя подгруппы на основе их выражения PV или SST, выражение которого коррелирует с частности электрофизиологических и подключения тенденции5. Дисфункция интернейронов, особенно те, в подгруппе PV, был вовлечен в несколько нервно-психических расстройств и заболеваний6,7. Общая цель этого метода-производить стволовых клеток митотическая прародителями и мигрирующих прекурсоров, обогащенные для PV или SST CIn судьбу для изучения биологии корковых межнейронного и для использования в терапии на основе ячеек.
Мы разработали масштабируемый, высокоэффективный метод для расчета Nkx2.1 выражая прародителями межнейронного и их потомства от mESCs. С помощью Nkx2.1::mCherry:Lhx6::GFP двойной репортер mESC линии8, Nkx2.1 прародителями или их Lhx6-выражая пост митотическая потомства может быть изолирован через СУИМ и впоследствии используется в ряде нисходящие приложения. Изменяя количество сигнальных путей, продолжительность культуры и режим нейрогенез, мы можем получить миллионы дневно обозначенные межнейронного прекурсоров для множество нисходящие приложения.
Хотя существуют несколько других методов для генерации МГЕ как предшественники из mESCs9,10,11,12,13,14, наш метод, который опирается на Wnt антагонист Демонического-939, особенно эффективен при генерации Foxg1/Nkx2.1 совместно выражая telencephalic прародителями. Кроме того возможность выбора для межнейронного прародителями или их пост митотическая Lhx6-выражая потомства через нашу систему двойного репортер, значительно повышает способность генерировать собственный прародителями и их потомства.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Bottle-top vacuum filter system</td>
			<td>Corning</td>
			<td>CLS430769</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Test Tube with Cell Strainer Snap Cap</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>Corning 352235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse embryonic fibroblasts (CF-1 MEF IRR 7M)</td>
			<td>MTI-Globalstem</td>
			<td>GSC-6101G</td>
			<td>1 vial of 7M MEFs is sufficient for four 10-cm TC plates. References: 29,35</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Atlanta Biologicals</td>
			<td>S11150H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primocin</td>
			<td>Invivogen</td>
			<td>Ant-pm-2</td>
			<td>Also known as antimicrobial agent. Do not filter with base media -- add after filtration. References: 9,11,36,37</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N2 supplement-B</td>
			<td>Stemcell Technologies</td>
			<td>7156</td>
			<td>Do not filter with base media -- add after filtration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutamax (100x)</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>35050061</td>
			<td>Also known as L-alanine-L-glutamine. References: 9,11,38,39</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KnockOut Serum Replacement (KSR)</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>10828028</td>
			<td>Also known as serum-free medium supplement. References: 9,11</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-glutamine (100x)</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>25030081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM-NEAA (100x)</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>11140050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Mercaptoethanol</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>21985023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KnockOut DMEM</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>10829018</td>
			<td>Also known as non-glutamine containing DMEM. References: 9,11</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hyclone FBS</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82013-578</td>
			<td>Also known as stem cell grade FBS. References: 9,11</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue culture treated dish (10cm)</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>353003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-adherent sterile petri dish (10cm)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>25384-342</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leukemia inhibitory factor (mLIF)</td>
			<td>Chemicon</td>
			<td>ESG1107</td>
			<td>Do not freeze, store at 4&#39;C. References: 9,11</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F12</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>11330032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.1% Gelatin Solution</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>ATCC PCS-999-027</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>L2020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly-L-lysine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P6282</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA (0.05%)</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>25300054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Accutase</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>A1110501</td>
			<td>Also known as non-trypsin containing cell dissociation reagent. References: 9,11</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RQ1 RNase-Free DNase</td>
			<td>Promega</td>
			<td>M610A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LDN-193189</td>
			<td>Stemgent</td>
			<td>04-0074</td>
			<td>Resuspend in DMSO and store at -80&#39;C in single use aliquots</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>XAV939</td>
			<td>Stemgent</td>
			<td>04-0046</td>
			<td>Resuspend in DMSO and store at -80&#39;C in single use aliquots</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rhFGF-2</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>233-FB</td>
			<td>Resuspend in PBS with 0.1% BSA and store at -80&#39;C in single use aliquots</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rhIGF-2</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>291-G1</td>
			<td>Resuspend in PBS with 0.1% BSA and store at -80&#39;C in single use aliquots</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ROCK inhibitor (Y-27632)</td>
			<td>Tocris</td>
			<td>1254</td>
			<td>Resuspend in DMSO and store at -80&#39;C in single use aliquots</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Smoothened agonist (SAG)</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>566660-1MG</td>
			<td>Resuspend in H20 and store at -80&#39;C in single use aliquots</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rm Sonic Hedgehog/SHH</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>464-SH-025</td>
			<td>Resuspend in PBS with 0.1% BSA and store at -80&#39;C in single use aliquots</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PKC&#950; Pseudosubstrate Inhibitor, Myristoylated</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>539624</td>
			<td>Resuspend in H20 and store at -80&#39;C in single use aliquots</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

differentiation of mouse embryonic stem cells into cortical interneuron precursors

ГАМК корковых интернейронов являются гетерогенной популяция клеток, которые играют решающую роль в регулировании вывода возбуждающих нейронов пирамидальный, а также Синхронизация выходов Пирамидальный нейрон ансамблей. Дефицит в межнейронного функции были причастны целый ряд психоневрологических расстройств, шизофрении, аутизм и эпилепсии. Дифференцирование корковых интернейронов из эмбриональных стволовых клеток не только позволяет для изучения их развития и функционирования, но обеспечивает проницательность в молекулярные механизмы, лежащие в основе патогенеза корковых расстройств, связанных с межнейронного. Интернейронов также имеют замечательную способность выжить, миграции и интеграции в принимающей корковых схемы после трансплантации, что делает их идеальными кандидатами для использования в терапии на основе ячеек. Здесь мы представляем масштабируемый, высокоэффективных, модифицированных embryoid тело монослоя метод для расчета Nkx2.1 выражая прародителями межнейронного и их потомков из мышиных эмбриональных стволовых клеток (mESCs). С помощью Nkx2.1::mCherry:Lhx6::GFP двойной репортер mESC линии, Nkx2.1 прародителями или их Lhx6-выражая пост митотическая потомства можно изолировали через активированный флуоресценции клеток, сортируя (FACS) и впоследствии используется в ряде нисходящие приложения. Мы также предоставляют методы для обогащения Парвальбумин (PV) или соматостатина (SST) межнейронного подгрупп, которые могут быть полезны для изучения аспектов определения судьбы или для использования в терапевтических приложений, которые выиграют от межнейронного подгруппа обогащенный трансплантаций.

Протокол, описанные в настоящем документе представляет собой модифицированную версию нашего опубликованные протоколы по15,16,17 и оптимизирована для использования с нашей линии двойной репортер mESC Nkx2.1::mCherry:Lhx6::GFP. Путем...

Watch this Scientific Journal Video about Differentiation of Mouse Embryonic Stem Cells into Cortical Interneuron Precursors at JoVE.com

Differentiation of Mouse Embryonic Stem Cells into Cortical Interneuron Precursors

Этот протокол описывает метод для генерации прародителями корковых межнейронного и пост митотическая межнейронного прекурсоров из мышиных эмбриональных стволовых клеток с помощью модифицированного метода embryoid тело монослоя. Эти предшественники/прекурсоров дневно сортируются и пересадить в неонатальной Неокортекс для изучения определения судьбы может быть использоваться в пробирке или терапевтического применения.

Дифференциация мышиных эмбриональных стволовых клеток в корковых межнейронного прекурсоров

GABAergic cortical interneurons are a heterogeneous population of cells that play critical roles in regulating the output of excitatory pyramidal neurons ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Ultrasound-Guided Microinjection into the Mouse Forebrain In Utero at E9.5

Ultrasound-Guided Microinjection into the Mouse Forebrain In Utero at E9.5

Ультразвуковая руководствуясь Микроинъекция в переднего мозга мыши In Utero В E9.5

In utero survival surgery in mice permits the molecular manipulation of gene expression during development.  However, because the uterine wall is opaque ...

Growth and Differentiation of Adult Hippocampal Arctic Ground Squirrel Neural Stem Cells

Роста и дифференцировки взрослых гиппокампа земли Арктики Белка нервные стволовые клетки

Arctic ground squirrels (Urocitellus parryii, AGS) are unique in their ability to hibernate with a core body temperature near or below freezing 1. These ...

Nucleofection and Primary Culture of Embryonic Mouse Hippocampal and Cortical Neurons

Nucleofection и первичной культуры эмбриональных Мышь гиппокампа и корковых нейронов

Hippocampal and cortical neurons have been used extensively to study central nervous system (CNS) neuronal polarization, axon/dendrite outgrowth, and ...

Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay

Создание эмбриональных Мышь нейронные культуры стволовых клеток Использование Neurosphere Пробирной

In mammalians, stem cells acts as a source of undifferentiated cells to maintain cell genesis and renewal in different tissues and organs during the life ...

Generation of Neural Stem Cells from Discarded Human Fetal Cortical Tissue

Генерация нервные стволовые клетки из эмбриона человека Выкинуть корковой ткани

Neural stem cells (NSCs) reside along the ventricular zone neuroepithelium during the development of the cortical plate. These early progenitors ...

Surgical Transplantation of Mouse Neural Stem Cells into the Spinal Cords of Mice Infected with Neurotropic Mouse Hepatitis Virus

Хирургическое трансплантации Мышь нейронных стволовых клеток в спинной мозг мышей, инфицированных Нейротропные вируса гепатита мышь

Mice infected with the neurotropic JHM strain of mouse hepatitis virus (MHV) develop pathological and clinical outcomes similar to patients with the ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

Выделение и культуры клеток нервного гребня из эмбриональных мышей нервной трубки

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

Isolation and Culture of Mouse Cortical Astrocytes

Выделение и культуры мышь кортикальной астроциты

Astrocytes  are an abundant cell type in the mammalian brain, yet much remains to be  learned about their molecular and functional characteristics. In ...

Directed Dopaminergic Neuron Differentiation from Human Pluripotent Stem Cells

Режиссер дофаминергических Neuron Дифференциация от человека плюрипотентных стволовых клеток

Dopaminergic (DA) neurons in the substantia nigra pars compacta  (also known as A9 DA neurons) are the specific cell type that is lost in ...

Homochronic Transplantation of Interneuron Precursors into Early Postnatal Mouse Brains

Homochronic трансплантация межнейронного прекурсоров в раннем постнатальном мыши мозги

Neuronal fate determination and maturation requires an intricate interplay between genetic programs and environmental signals. However, disentangling the ...