Name: real-time quaking-induced conversion assay for detection of cwd prions in fecal material
Uploaded: 2017-09-29T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Real-time Quaking-induced Conversion Assay for Detection of CWD Prions in Fecal Material at JoVE.com

Wij zijn dankbaar aan Dr Byron Caughey (NIH Rocky Mountain laboratoria) voor het verstrekken van opleiding en het cervid PrP bacteriële expressie plasmide. SG wordt ondersteund door het programma van de Canada Research Chair. Wij erkennen dat financiering voor dit onderzoek met SG van genoom Canada, Alberta Prion Research Institute en Alberta land- en bosbouw door genoom Alberta, en de Universiteit van Calgary ter ondersteuning van dit werk. Wij erkennen een onderzoeksbeurs van de Margaret Gunn Foundation for Animal Research.

1. RT-QuIC met behulp van fecaal materiaal de fecale homogenaat <ol><li>voorbereiding van cervid ontlasting wordt geëxtraheerd <ol><li>maken door toevoeging van 1 g van fecaal materiaal tot 10 mL van ontlasting extract buffer (20 mM natriumfosfaat, pH 7.1, 130 mM NaCl, 0,05% Tween 20, 1 mM PMSF en 1 x voltooien proteaseinhibitors, EDTA-gratis) om een eindconcentratie van 10% (m/v). De homogenisering buffer kan worden voorbereid voordat het gebruik en opgeslagen bij -20 ° C.</li>
		<li>Homogenize fec...

RT-QuIC was eerder werkzaam voor de opsporing van CWD prionen in urine en fecale extracten van mondeling besmette Witstaarthert en Muildierhert 38. Het systeem dat is afgebeeld in dit manuscript is een aangepaste methode van de RT-QuIC assay. Extra stappen werden ingelijfd bij de "klassieke" RT-QuIC assay de detectie en de gevoeligheid van de test voor CWD prionen in fecaal materiaal van besmette dieren te verbeteren.
De lage gevoeligheid voor detection in ontlasting ex...

Prionziekten of overdraagbare spongiforme encefalopathieën (TSE) zijn neurodegeneratieve aandoeningen, met inbegrip van Creutzfeldt - Jacob (CJD) bij mensen, boviene spongiforme encefalopathie (BSE) bij runderen, scrapie bij schapen en geiten, en chronische verspillen ziekte (CWD) bij hertachtigen 1,2. TSE's worden gekenmerkt door onderscheidende spongiforme uiterlijk en verlies van neuronen in de hersenen. Volgens de "alleen eiwit" hypothese, zijn prionen voornamelijk samengesteld uit PrPSc ('Sc' voor scrapie) 3, een misfolded isovorm van het host-gecodeerde cellulaire prion-eiwit, PrPC. PrPSc vloeit voort uit de omzetting van PrPC in een conformatie verrijkt in ᵦ-bladen 4,5,6 die kan fungeren als een zaadje om te binden en converteren van andere PrPC moleculen. De nieuw gegenereerde PrPSc -moleculen worden opgenomen in een groeiende polymeer 7,8 die in kleinere oligomeren breekt, wat resulteert in hogere nummers van besmettelijke kernen. PrPSc is gevoelig voor aggregatie en is gedeeltelijk resistent tegen proteasen 9,10.
CWD beïnvloedt wilde en gekweekte elanden (Cervus canadensis), muildierhert (Odocoileus hemionus), Witstaarthert (WTD; Odocoileus virginianus), elanden (Alces alces), en (Rangifer dierkunde dierkunde) rendier 11,12,13. Het wordt beschouwd als de meest besmettelijke prionziekte met horizontale overdracht begunstigd door cervid interacties en milieu persistentie van infectiviteit 14,15. In tegenstelling tot andere prionziekten waar PrPSc accumulatie en infectiviteit zijn beperkt tot de hersenen, in CWD zijn deze ook gevonden in perifere weefsels en lichaamsvloeistoffen zoals speeksel, urine en ontlasting 16,17, 18.
Immunohistochemistry wordt beschouwd als de gouden standaard voor CWD diagnose om PrPSc distributie en spongiforme laesies 19,20te detecteren. ELISA en in meer zeldzame gevallen, westelijke vlek zijn ook gebruikt voor CWD diagnostiek. Huidige prion ziekten diagnose is dus voornamelijk gebaseerd op het opsporen van prionen in post mortem weefsels. Ante mortem diagnose voor CWD is beschikbaar door middel van amandelen of biopsieën recto-anale mucosa-geassocieerde lymfoïde weefsel (RAMALT); echter, deze procedure is invasieve en vereist het vangen van de dieren. Dus, zou het gebruik van gemakkelijk toegankelijke specimens, zoals urine en ontlasting, een praktische manier voor CWD prion detectie. Echter, deze haven uitscheidingsproducten relatief lage concentraties van prionen onder de detectiegrens van huidige diagnostische methoden. Bijgevolg is een gevoeliger en hoge doorvoer diagnostische tool noodzakelijk. In vitro conversie systemen, zoals eiwit misfolding cyclische amplificatie assay (PMCA) 21, amyloid seeding assay, en real-time schokkend-geïnduceerde conversie (RT-QuIC) assay 22,23, 24 zijn zeer krachtige hulpmiddelen te exploiteren de zelf teeltmateriaal vermogen van PrPSc na te bootsen in vitro het prion-conversieproces en daardoor het versterken van de aanwezigheid van minieme hoeveelheden van PrPSc naar detecteerbare niveaus 25 ,26. De RT-QuIC methode, maar profiteert van het feit dat het product van de conversie verrijkt met β-sheet secundaire structuur specifiek thioflavin T (Th-T) kunt binden. Daarom groeit recombinante PrP (rPrP) bij de geplaatste conversie uit tot amyloïde fibrillen die Th-T binden en dus in real time kunnen worden gedetecteerd door het meten van de fluorescentie van Th-T uitgedrukt als relatieve fluorescentie eenheden (RFU) na verloop van tijd. Zodra gecontroleerd, kan de RFU worden gebruikt om te evalueren van de relatieve seeding activiteiten en kwantitatieve parameters zoals de lag-fase. De lag-fase vertegenwoordigt de (h) benodigde tijd voor het bereiken van de drempel, tijdens welke rPrP conversie in het vroege stadium van de reactie onder de detectiegrens van Th-T fluorescentie is. Het einde van de fase van de schijnbare lag, gelijktijdige tot de vorming van een voldoende amyloïde nucleus (nucleatie/rek), vindt plaats wanneer de Th-T fluorescentie groter is dan de drempelwaarde en positief. De groei van amyloid fibrillen kunnen worden opgespoord in real time en de eerste PrPSc of seeding activiteit opgenomen in de steekproef wordt versterkt door de segmentatie die meer zaden genereert. Deze zaden induceren op zijn beurt een snelle exponentiële groeifase amyloïde vezel.
Omdat deze test is het kundig voor speurder zo laag als 1 fg van PrPSc 24, de hoge gevoeligheid kwalificeert deze techniek om antemortem- of niet-invasieve diagnose door het detecteren van PrPSc in de verschillende perifere weefsels, uitscheidingsproducten of andere soorten specimen lage niveaus van infectiviteit herbergen. RT-QuIC biedt zeker voordelen ten opzichte van andere testen voor de reproduceerbaarheid, bruikbaarheid, snelheid (minder dan 50 h) en lage kosten in vergelijking met bioassays. Het vermijdt de technische complexiteit zoals ultrasoonapparaat gebruikt in PMCA; het wordt ook uitgevoerd in een tape-verzegeld microplate die het risico van aërosol besmetting van elk putje minimaliseert. De multi goed indeling maakt het mogelijk de analyse van maximaal 96 monsters in hetzelfde experiment. Om het steeds terugkerende probleem van valse positieven en spontane omzetting van rPrP in de conversie in vitro testen tegen te gaan is de uitvoering van een drempel (cut-off) in RT-QuIC erg handig. Inderdaad, op basis van de resultaten van de negatieve controle (gemiddelde RFU van negatieve monsters + 5 SD 27), een basislijn wordt ingesteld waarmee discriminatie tussen de positieve en negatieve monsters kan worden gedaan. Het gebruik van vier replicatieonderzoeken voor elk monster kan dus helpen om een monster positief wanneer ten minste 50% van de duplo's een positief signaal tonen, dat wil zeggen over de licht-donkerscheiding 28. De homologie tussen zaad en substraat is niet vereist in RT-QuIC, zoals bijvoorbeeld in een eerdere studie, hamster rPrP bleek te zijn een gevoeliger substraat in vergelijking met het homologe substraat in menselijke PrPvCJD zaadjes en schapen scrapie agarvoedingsbodem reacties 29. hamster-schapen chimeer rPrP werd ook voorgesteld als een meer geschikt substraat dan menselijke rPrP te sporen van menselijke variant Creutzfeldt-Jakob prionen 30. Dus, het gebruik van rPrP substraten uit verschillende soorten is heel gebruikelijk in deze test. Deze bepaling is met succes toegepast op verschillende prionziekten, zoals de sporadische CJD 31,32,33, geneTIC prion ziekten 34,36,37van de 35,van de BSE- en scrapie 23,36CWD 38,39,40,41, 42. Studies met verwerkt cerebrospinale vloeistof, bloed, speeksel en urine zoals zaden in RT-QuIC allen succesvol waren te detecteren PrPSc 38,39,40,41, 42. ter bevordering van de detectie mogelijkheid in monsters zoals bloedplasma die remmers van amyloïde formatie bevatten kan, Orrú et al. (2011) een strategie om te verwijderen van potentiële remmers van amyloïde vorming door te kammen PrPSc immunoprecipitation (IP) stap en RT-QuIC ontwikkeld, genaamd "versterkte QuIC" assay (eQuIC). Daarnaast een substraat vervanging stap werkte na ~ 24 h van reactietijd ter verbetering van de gevoeligheid. Uiteindelijk, als laag als 1 ag voor PrPSc was aantoonbaar met eQuIC 30.
Fecale monsters verzameld in preklinische en klinische stadia van elk na experimentele mondelinge infectie waren te zuiveren van extracten van de ontlasting mogelijk assay remmers verwijderen in ontlasting, gehomogeniseerd in buffer met detergenten en proteaseinhibitors. De ontlasting-extracten werden verder ingediend bij verschillende methodologieën te concentreren PrPSc in de monsters met behulp van eiwit neerslag via natrium phosphotungstic zuur (NaPTA) neerslag. De neerslag van de NaPTA methode, voor het eerst beschreven door Safar et al. 43, wordt gebruikt om zich te concentreren PrPSc van analysemonsters. De incubatie van NaPTA met de resultaten van de steekproef in preferentiële neerslag van PrPSc in plaats van PrPC. Het moleculaire mechanisme is echter nog onduidelijk. Deze stap heeft ook geholpen dat bevat en het voorkomen van de spontane omzetting van rPrP, die in sommige gevallen wordt waargenomen. Tot slot, de ontlasting extracten zijn getest door geoptimaliseerde RT-QuIC met behulp van de muis rPrP (aa 23-231) als substraat en met inbegrip van basismateriaal vervanging in het protocol ter verbetering van de gevoeligheid van detectie.
De resultaten hier laten zien dat deze verbeterde methode zeer lage concentraties van CWD prionen detecteren kan en de gevoeligheid van de detectie- en specificiteit in fecale monsters in vergelijking met een protocol zonder neerslag en substraat vervanging van de NaPTA verhoogt. Deze methode kan worden toegepast op andere weefsels en lichaamsvloeistoffen potentieel en kan van groot nut zijn voor toezicht op CWD bij hertachtigen wild en in gevangenschap.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Materials</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acrodisc seringe filters</td>
			<td>PALL</td>
			<td>4652</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>amicon Ultra-15 Centrifugal filter Unit</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>UCF901024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD 10 ml seringe</td>
			<td>VWR</td>
			<td>CA75846-842</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloramphenicol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C0378</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning bottle-top vacuum filters</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>431118</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E4884</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>gentleMACS M Tube</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-093-236</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Guanidine hydrochloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G4505</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imidazole</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>I5513</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>I9516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kanamycin sulfate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>60615</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luria-Bertani (LB) broth</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>12780029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M9272</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N2 supplement (100X)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>15502048</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-lauroylsarcosine sodium salt (sarkosyl)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>ML9150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanosep centrifugal devices with omega membrane 100K</td>
			<td>PALL</td>
			<td>OD100C34</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunc sealing tapes</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>232702</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm M</td>
			<td>VWR</td>
			<td>52858-000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P7626</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protease inhibitor tablet</td>
			<td>Roche</td>
			<td>4693159001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S3014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium deoxycholate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D6750</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium dodecyl sulfate (SDS)</td>
			<td>Calbiochem</td>
			<td>7910-OP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sodium phosphate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>342483</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphate dibasic anhydrous</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S9763</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphate monobasic monohydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S9638</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphotungstate hydrate (NaPTA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>496626</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thioflavin T</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T3516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris-Hydroxy-Methyl-Amino-Methan (Tris)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T6066</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton-100</td>
			<td>Calbiochem</td>
			<td>9410-OP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P7949</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Commercial buffers and solutions</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BugBuster Master Mix</td>
			<td>Nogagen</td>
			<td>71456-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ni-NTA superflow</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>1018401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-buffered saline (PBS) pH 7.4 (1X)</td>
			<td>Life Technoligies</td>
			<td>P5493</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UltraPure Distilled Water</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>10977015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standards and commercial kits</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Express Autoinduction System 1</td>
			<td>Novagen</td>
			<td>71300-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pierce BCA Protein Assay Kit</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>23227</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment setup</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AKTA protein purification systems FPLC</td>
			<td>GE Healthcare Life Sciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Beckman Avanti J-25 Centrifuge</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Beckman rotor JA-25.50</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Beckman rotor JA-10</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FLUOstar Omega microplate reader</td>
			<td>BMG Labtech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>gentleMACS Dissociator</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-093-235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sofware</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MARS Data Analysis</td>
			<td>BMG Labtech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GraphPad Prism6</td>
			<td>GraphPad software</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

real-time quaking-induced conversion assay for detection of cwd prions in fecal material

De RT-QuIC techniek is een gevoelige in vitro cel-vrije prion amplificatie assay voornamelijk gebaseerd op de geplaatste misfolding en aggregatie van recombinante prion-eiwit (PrP) substraat prion zaden als sjabloon gebruiken voor de conversie. RT-QuIC is een nieuwe hoog-productie-techniek die analoog aan de real-time polymerasekettingreactie (PCR is). Detectie van amyloïde fibril groei is gebaseerd op de kleurstof Thioflavin T, dat op specifieke interactie met ᵦ vel rijke eiwitten licht. Dus, kan de amyloïde vorming gedetecteerd worden in real-time. Wij probeerden om een betrouwbare, niet-invasieve screeningtest op te sporen van chronische verspillen disease (CWD) prionen in fecale extract. Hier hebben we de RT-QuIC techniek te onthullen PrPSc zaaien activiteit in uitwerpselen van CWD besmet hertachtigen specifiek aangepast. Aanvankelijk was de seeding activiteit van de fecale extracten die wij bereid in RT-QuIC, mogelijk als gevolg van potentiële assay-remmers in het fecaal materiaal relatief laag. Ter verbetering van de activiteit van de seeding van extracten van de ontlasting en verwijderen van potentiële assay-remmers, we de fecale monsters in een buffer met detergenten en proteaseinhibitors gehomogeniseerd. We ook afkomstig van de monsters naar verschillende methodologieën te concentreren PrPSc op basis van eiwit neerslag met behulp van natrium phosphotungstic zuur, en de middelpuntvliedende kracht. Tot slot, de ontlasting extracten zijn getest door geoptimaliseerde RT-QuIC waaronder substraat vervanging in het protocol bij het verbeteren van de gevoeligheid van detectie. Dus, we ingesteld een protocol voor gevoelige detectie van CWD prion activiteit in uitwerpselen van pre-klinische en klinische hertachtigen door RT-QuIC, die een praktisch instrument voor niet-invasieve diagnose van CWD kunnen zaaien.

De CWD fecale extracten, bereid op 10% (m/v) waren in staat om het zaad van de RT-QuIC reactie, maar de gevoeligheid van detectie was laag 27. Met behulp van een specifieke buffer voor fecale homogenisering was een belangrijke stap om te voorkomen dat hoge achtergrond fluorescentie in RT-QuIC reacties die daarmee gepaard gaande zijn op het gebruik van muis rPrP substraat in plaats van herten rPrP waardoor om meer specifieke resultaten 27. De...

Watch this Scientific Journal Video about Real-time Quaking-induced Conversion Assay for Detection of CWD Prions in Fecal Material at JoVE.com

Real-time Quaking-induced Conversion Assay for Detection of CWD Prions in Fecal Material

Hier presenteren we een protocol om te beschrijven van een eenvoudige, snelle en efficiënte prion amplificatie techniek, de real-time schokkend-geïnduceerde conversie (RT-QuIC) methode.

Real-time schokkend-geïnduceerde conversie Assay voor het opsporen van CWD prionen in fecaal materiaal

The RT-QuIC technique is a sensitive in vitro cell-free prion amplification assay based mainly on the seeded misfolding and aggregation of recombinant ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Protein Misfolding Cyclic Amplification of Prions

Eiwit misfolding Cyclische Versterking van prionen

Prions  are infectious agents that cause the inevitably fatal transmissible spongiform  encephalopathy (TSE) in animals and humans9,18. The prion protein ...

Detection of MicroRNAs in Microglia by Real-time PCR in Normal CNS and During Neuroinflammation

Detectie van microRNA&#39;s in Microglia door Real-time PCR in Normal CNS en tijdens ontstekingsprocessen

Microglia are cells of the myeloid lineage that reside in the central nervous system (CNS)1. These cells play an important role in pathologies of many ...

Real-time Live Imaging of T-cell Signaling Complex Formation

Real-time Live beeldvorming van T-cel signaleringscomplex Vorming

Protection against infectious diseases is mediated by the immune system 1,2. T lymphocytes are the master coordinators of the immune system, regulating ...

Following in Real Time the Impact of Pneumococcal Virulence Factors in an Acute Mouse Pneumonia Model Using Bioluminescent Bacteria

Na in Real Time de impact van Pneumokokken virulentiefactoren in een acute longontsteking Muis Model Met behulp van Bioluminescent Bacteriën

Pneumonia is one of the major health care problems in developing and industrialized countries and is associated with considerable morbidity and mortality. ...

High-throughput Quantitative Real-time RT-PCR Assay for Determining Expression Profiles of Types I and III Interferon Subtypes

High-throughput Kwantitatieve real-time RT-PCR assay voor het bepalen van expressieprofielen van de typen I en III interferon subtypen

Described in this report is a qRT-PCR assay for the analysis of seventeen human IFN subtypes in a 384-well plate format that incorporates highly specific ...

A Real-time Potency Assay for Chimeric Antigen Receptor T Cells Targeting Solid and Hematological Cancer Cells

Een real-time potentie test voor Chimerische antigeen receptor T-cellen gericht op vaste en hematologische kankercellen

Chimeric antigen receptor (CAR) T-cell therapy for cancer has achieved significant clinical benefit for resistant and refractory hematological ...

Pan-lyssavirus Real Time RT-PCR for Rabies Diagnosis

Pan-Lyssavirus real time RT-PCR voor rabiës diagnose

Molecular assays are rapid, sensitive and specific, and have become central to diagnosing rabies. PCR based assays have been utilized for decades to ...

Culture Methods to Determine the Limit of Detection and Survival in Transport Media of Campylobacter Jejuni in Human Fecal Specimens

Culture Methods to Determine the Limit of Detection and Survival in Transport Media of Campylobacter Jejuni in Human Fecal Specimens

Cultuurmethoden om de limiet van detectie en overleving in transportmedia van Campylobacter Jejuni in menselijke fecale specimens te bepalen

A culture from human stool for diagnosis of Campylobacter-based intestinal illness takes several days, a wait that taxes the fortitude of the physician ...

Fecal (micro) RNA Isolation

Fecal micro RNA Isolation

Fecale (micro) RNA-isolatie

It is becoming clear that RNA exists in the gut lumen and feces in animals and humans. The protocol described below isolates total RNA including microRNAs ...

Tools for the Real-Time Assessment of a Pseudomonas aeruginosa Infection Model

Tools for the Real-Time Assessment of a Pseudomonas aeruginosa Infection Model

Tools voor de real-time beoordeling van een Pseudomonas aeruginosa-infectiemodel

Pseudomonas aeruginosa (Pa) is one of the most common opportunistic pathogens associated with cystic fibrosis (CF). Once Pa colonization is established, a ...