Name: real-time quaking-induced conversion assay for detection of cwd prions in fecal material
Uploaded: 2017-09-29T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Real-time Quaking-induced Conversion Assay for Detection of CWD Prions in Fecal Material at JoVE.com

Estamos agradecidos con el Dr. Byron Caughey (NIH Rocky Mountain Laboratories) para la formación y el plásmido de expresión bacteriana de PrP de cérvidos. SG es apoyado por el programa de la Cátedra de investigación de Canadá. Reconocemos que la financiación para esta investigación a SG de genoma Canadá, Alberta del prión Instituto de investigación y agricultura de Alberta y forestal a través de genoma Alberta y la Universidad de Calgary en apoyo de esta labor. Reconocemos una beca de investigación de la Margaret Gunn Foundation para la investigación Animal.

1. Materia Fecal utilizando RT-QuIC <ol><li>preparación de heces de cérvidos extractos <ol><li>hacer fecal homogeneizado mediante la adición de 1 g de material fecal en 10 mL de heces Extraiga el tampón (fosfato de sodio 20 mM, pH 7,1, 130 mM NaCl, 0,05% Tween 20, 1 mM PMSF 1 x completan los inhibidores de proteasa, libre de EDTA) para obtener una concentración final del 10% (p/v). El buffer de homogeneización puede ser preparado antes de la utilización y almacenado a -20 ° C.</li>
		<li>Homog...

RT-QuIC fue empleada previamente para detectar priones CWD en orina y fecales extractos de venado cola blanca y venado bura oral infectada 38. El sistema que se muestra en este manuscrito es un método adaptado del ensayo RT-QuIC. Pasos adicionales se incorporaron en el ensayo de RT-QuIC "clásico" para mejorar la detección y la sensibilidad del ensayo de priones CWD en materia fecal de animales infectados.
La baja sensibilidad de la detección en extractos de las hece...

Enfermedades priónicas o encefalopatías espongiformes transmisibles (EET) son trastornos neurodegenerativos como la enfermedad de Creutzfeldt - Jakob (ECJ) en humanos, la encefalopatía espongiforme bovina (EEB) en bovinos, scrapie en ovejas y cabras y emaciación crónica enfermedad (CWD) en cérvidos 1,2. Las EET se caracterizan por la apariencia espongiforme distintivo y pérdida de neuronas en el cerebro. Según la hipótesis de "sólo proteína", priones están compuestos principalmente de PrPSc ('Sc' para scrapie) 3, una isoforma mal plegada de la proteína priónica celular codificada en host, PrPC. PrPSc resulta de la transformación de PrPC en una conformación enriquecida en hojas de ᵦ 4,5,6 que puede actuar como una semilla para enlazar y convertir otras moléculas de PrPC . Las moléculas de PrPSc recién generadas se incorporan en un crecimiento polímero 7,8 se rompe en pequeños oligómeros, dando por resultado un número mayor de núcleos infecciosos. PrPSc es propensa a la agregación y es parcialmente resistente a proteasas 9,10.
CWD afecta salvajes y cultivados elk (Cervus canadensis), venado bura (Odocoileus hemionus), venado de cola blanca (DMT; Odocoileus virginianus), alces (Alces alces) y renos (Rangifer tarandus tarandus) 11,12,13. Se considera la enfermedad más contagiosa del prión con transmisión horizontal favorecida por las interacciones de cérvidos y persistencia ambiental de infectividad 14,15. A diferencia de otras enfermedades priónicas en acumulación de PrPSc e infectividad se limitan al cerebro, en CWD estos también se encuentran en tejidos periféricos y fluidos corporales por ejemplo, saliva, orina y heces 16,17, 18.
Inmunohistoquímica se considera el estándar de oro para el diagnóstico CWD detectar PrPSc distribución y espongiforme lesiones 19,20. ELISA y en más raras ocasiones, mancha blanca /negra occidental también se utilizan para el diagnóstico CWD. Así, diagnóstico de enfermedades priónicas actual se basa principalmente en la detección de priones en tejidos post-mortem. El diagnóstico ante mortem para CWD está disponible tomando las amígdalas o biopsias de tejido linfoide asociado a mucosa recto-anal (RAMALT); sin embargo, este procedimiento es invasivo y requiere la captura de los animales. Así, el uso de muestras de fácil acceso, como la orina y las heces, sería una manera práctica para la detección de priones CWD. Sin embargo, esos puerto de excretas relativamente bajas concentraciones de priones por debajo del límite de detección actuales de métodos de diagnóstico. Por lo tanto, es necesaria una más sensible y de alto rendimiento herramienta de diagnóstico. In vitro sistemas de conversión, tales como proteína mal plegamiento de amplificación cíclica del análisis (EPCP) 21, amiloide siembra ensayo y conversión inducida por el temblor en tiempo real (RT-QuIC) ensayo 22,23, 24 son herramientas muy poderosas para explotar la capacidad uno mismo-propagación de PrPSc para imitar en vitro el proceso de conversión del prión y así ampliar la presencia de cantidades minuciosas de PrPSc a niveles detectables 25 ,26. El método de RT-QuIC, sin embargo, aprovecha el hecho de que el producto de conversión enriquecido en β-hoja estructura secundaria puede atar específicamente tioflavina T (Th-T). Por lo tanto, PrP recombinante (formará) sobre conversión de semilla crece en las fibrillas amiloideas que Th-T se unen y así se pueden detectar en tiempo real midiendo la fluorescencia del Th-T expresada en unidades de fluorescencia relativa (RFU) con el tiempo. Una vez controlados, la RFU puede utilizarse para evaluar actividades siembra relativa y parámetros cuantitativos como la fase lag. La fase de retraso representa el tiempo (h) necesario para alcanzar el umbral, durante que formará la conversión en la etapa temprana de la reacción es por debajo del límite de detección de fluorescencia Th-T. Al final de la fase de retraso evidente, concomitante a la formación de un núcleo de amiloide suficiente (carga/alargamiento), ocurre cuando la fluorescencia Th-T supera el nivel umbral y se convierte en positivo. El crecimiento de amiloide fibrillas se pueden detectar en tiempo real y la inicial de PrPSc o siembra actividad contenida en la muestra es amplificado por la segmentación que genera más semillas. Estas semillas a su vez inducen una rápida fase exponencial de crecimiento de la fibra amiloide.
Debido a que este análisis sean capaz de detectar tan bajo como 1 fg de PrPSc 24, la alta sensibilidad califica esta técnica para lograr ante mortem o diagnóstico no invasivo mediante la detección de PrPSc en diversos tejidos periféricos, excretas u otros tipo de muestra que los bajos niveles de infectividad. RT-QuIC definitivamente proporciona ventajas sobre otros ensayos para su reproducibilidad, practicidad, rapidez (menos de 50 h) y bajos costos en comparación a las pruebas biológicas. Evita las complejidades técnicas como sonicación en EPCP; también, se realiza en una microplaca de cinta de sellado que minimiza el riesgo de contaminación de aerosoles de cada pozo. El formato multi-bien permite el análisis de hasta 96 muestras en el mismo experimento. Para contrarrestar el problema recurrente de los falsos positivos y la conversión espontánea de formará en los ensayos de conversión en vitro es muy útil la aplicación de un umbral (corte) en RT-QuIC. De hecho, basándose en los resultados del control negativo (RFU promedio de muestras negativas + 5 SD 27), una línea de base se establece que se puede hacer discriminación entre muestras positivas y negativas. El uso de cuatro repeticiones para cada muestra así puede ayudar a definir una muestra como positiva cuando al menos el 50% de las repeticiones muestran una señal positiva, es decir, cruzar el corte 28. La homología entre la semilla y el substrato no es necesaria en RT-QuIC, como por ejemplo en un estudio anterior, formará hámster fue encontrado ser un sustrato más sensible en comparación con el sustrato homólogo en humanos de PrPECJv sin semillas y scrapie ovino sembrado reacciones 29. oveja hámster quimérica formará también sugirió que un sustrato más adecuado que formará humana para la detección de priones ECJ variante humana 30. Por lo tanto, la utilización de sustratos formará de distintas especies es muy común en este ensayo. Este ensayo se ha aplicado con éxito a varias enfermedades del prión como la esporádica CJD 31,32,33, genenfermedades de prion ETIC 34, EEB 35,36,37, tembladera 23,36y CWD 38,39,40,41, 42. Estudios usando procesan líquido cefalorraquídeo, sangre, saliva y orina como semillas en RT-QuIC todos lograron detectar PrPSc 38,39,40,41, 42. fomentar la capacidad de detección en muestras de plasma de la sangre que puede contener inhibidores de la formación de amiloide, Orrú et al. (2011) desarrolló una estrategia para eliminar potenciales inhibidores de la formación amiloide peinando PrPSc paso de inmunoprecipitación (IP) y RT-QuIC, llamado "mejorado QuIC" ensayo (eQuIC). Además, un paso de recambio de sustrato se empleó después de ~ 24 h de tiempo de reacción para mejorar la sensibilidad. En última instancia, como solo 1 ag de PrPSc era perceptible por el eQuIC 30.
Con el fin de purificar extractos de las heces y eliminar inhibidores de posible análisis en heces, muestras de heces recogidas en las fases preclínicas y clínicas de alce sobre infección oral experimental se homogeneizaron en tampón que contiene detergentes e inhibidores de la proteasa. Los extractos de las heces más fueron sometidos a diferentes metodologías para PrPSc se concentran en las muestras utilizando la precipitación de la proteína en el ácido (NaPTA) precipitación de sodio fosfotúngstico. El método de precipitación de NaPTA, primero descrito por Safar et al. 43, se usa para PrPSc se concentran en las muestras de prueba. La incubación de NaPTA con la muestra de resultados en la precipitación preferencial de PrPSc en lugar de PrPC. Sin embargo, el mecanismo molecular es todavía incierto. Este paso también ayudó a contener y prevenir la conversión espontánea de formará, que se observa en algunos casos. Finalmente, los extractos de las heces se analizaron optimizado RT-QuIC usando ratón formará (aa 23-231) como sustrato y como recambio de sustrato en el protocolo para mejorar la sensibilidad de detección.
Los resultados aquí demuestran que este método mejorado puede detectar muy bajas concentraciones de priones CWD y aumenta la sensibilidad de detección y especificidad en muestras fecales en comparación con un protocolo sin reemplazo de precipitación y el substrato de NaPTA. Potencialmente, este método puede ser aplicado a otros tejidos y fluidos corporales y puede ser de gran utilidad para la vigilancia de CWD en cérvidos silvestres y en cautiverio.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Materials</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acrodisc seringe filters</td>
			<td>PALL</td>
			<td>4652</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>amicon Ultra-15 Centrifugal filter Unit</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>UCF901024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD 10 ml seringe</td>
			<td>VWR</td>
			<td>CA75846-842</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloramphenicol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C0378</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning bottle-top vacuum filters</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>431118</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E4884</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>gentleMACS M Tube</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-093-236</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Guanidine hydrochloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G4505</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imidazole</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>I5513</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>I9516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kanamycin sulfate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>60615</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luria-Bertani (LB) broth</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>12780029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M9272</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N2 supplement (100X)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>15502048</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-lauroylsarcosine sodium salt (sarkosyl)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>ML9150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanosep centrifugal devices with omega membrane 100K</td>
			<td>PALL</td>
			<td>OD100C34</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunc sealing tapes</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>232702</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm M</td>
			<td>VWR</td>
			<td>52858-000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P7626</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protease inhibitor tablet</td>
			<td>Roche</td>
			<td>4693159001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S3014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium deoxycholate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D6750</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium dodecyl sulfate (SDS)</td>
			<td>Calbiochem</td>
			<td>7910-OP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sodium phosphate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>342483</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphate dibasic anhydrous</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S9763</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphate monobasic monohydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S9638</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphotungstate hydrate (NaPTA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>496626</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thioflavin T</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T3516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris-Hydroxy-Methyl-Amino-Methan (Tris)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T6066</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton-100</td>
			<td>Calbiochem</td>
			<td>9410-OP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P7949</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Commercial buffers and solutions</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BugBuster Master Mix</td>
			<td>Nogagen</td>
			<td>71456-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ni-NTA superflow</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>1018401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-buffered saline (PBS) pH 7.4 (1X)</td>
			<td>Life Technoligies</td>
			<td>P5493</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UltraPure Distilled Water</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>10977015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standards and commercial kits</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Express Autoinduction System 1</td>
			<td>Novagen</td>
			<td>71300-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pierce BCA Protein Assay Kit</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>23227</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment setup</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AKTA protein purification systems FPLC</td>
			<td>GE Healthcare Life Sciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Beckman Avanti J-25 Centrifuge</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Beckman rotor JA-25.50</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Beckman rotor JA-10</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FLUOstar Omega microplate reader</td>
			<td>BMG Labtech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>gentleMACS Dissociator</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-093-235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sofware</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MARS Data Analysis</td>
			<td>BMG Labtech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GraphPad Prism6</td>
			<td>GraphPad software</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

real-time quaking-induced conversion assay for detection of cwd prions in fecal material

La técnica de RT-QuIC es una sensibilidad en vitro acelulares priones test de amplificación basado principalmente en el mal plegamiento y agregación de substrato de la proteína (PrP) de prión recombinante usando las semillas del prión como plantilla para la conversión. RT-QuIC es una técnica novedosa de alto rendimiento que es análoga a la reacción en cadena de polimerasa en tiempo real (PCR). Detección de crecimiento de fibrilas amiloides se basa en el colorante tioflavina T, que aparece sobre la interacción específica con proteínas ricas hoja de ᵦ. Así, la formación de amiloide puede detectarse en tiempo real. Hemos intentado desarrollar una prueba de cribado no invasiva confiable para detectar priones de la enfermedad (CWD) emaciación crónica en extracto fecal. Aquí, específicamente hemos adaptado la técnica de RT-QuIC para revelar PrPSc siembra actividad en heces de CWD infectados cérvidos. Inicialmente, la actividad de siembra de los extractos fecales preparamos fue relativamente baja en RT-QuIC, posiblemente debido a potenciales inhibidores de análisis en la materia fecal. Para mejorar la actividad de siembra de los extractos de las heces y eliminar potenciales inhibidores de ensayo, homogeneizaron las muestras fecales en un tampón que contiene detergentes e inhibidores de la proteasa. También hemos presentado las muestras a diferentes metodologías para concentrarse PrPSc en base a la precipitación de la proteína usando sodio ácido fosfotúngstico y la fuerza centrífuga. Finalmente, los extractos de las heces se analizaron optimizado RT-QuIC que incluyó el recambio de sustrato en el protocolo para mejorar la sensibilidad de detección. Así, estableció un protocolo para la detección sensible de priones CWD siembra actividad en heces de cérvidos preclínicos y clínicos por RT-QuIC, que puede ser una herramienta práctica para diagnóstico no invasivo de CWD.

Los extractos fecales CWD preparados al 10% (p/v) fueron capaces de reacción RT-QuIC de la semilla, sin embargo, la sensibilidad de detección fue de baja 27. Utiliza un búfer específico de homogeneización fecal fue un paso crítico para evitar la fluorescencia del fondo alto en reacciones de RT-QuIC concomitantes al uso de sustrato de ratón formará más que formará de ciervos que permitió obtener más resultados de 27. La adición d...

Watch this Scientific Journal Video about Real-time Quaking-induced Conversion Assay for Detection of CWD Prions in Fecal Material at JoVE.com

Real-time Quaking-induced Conversion Assay for Detection of CWD Prions in Fecal Material

Aquí, presentamos un protocolo para describir una técnica de amplificación del prión simple, rápido y eficiente, el método de conversión inducida por el temblor en tiempo real (RT-QuIC).

En tiempo real temblando inducida por conversión de ensayo para la detección de priones CWD en materia Fecal

The RT-QuIC technique is a sensitive in vitro cell-free prion amplification assay based mainly on the seeded misfolding and aggregation of recombinant ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Protein Misfolding Cyclic Amplification of Prions

Mal plegamiento de proteínas priones de amplificación cíclica

Prions  are infectious agents that cause the inevitably fatal transmissible spongiform  encephalopathy (TSE) in animals and humans9,18. The prion protein ...

Investigación

Inmunología e Infección

Detection of MicroRNAs in Microglia by Real-time PCR in Normal CNS and During Neuroinflammation

La detección de microARNs en la microglía por PCR en tiempo real en el SNC normal y durante la neuroinflamación

Microglia are cells of the myeloid lineage that reside in the central nervous system (CNS)1. These cells play an important role in pathologies of many ...

Real-time Live Imaging of T-cell Signaling Complex Formation

En tiempo real de imágenes en vivo de las células T de señalización Formación de complejos

Protection against infectious diseases is mediated by the immune system 1,2. T lymphocytes are the master coordinators of the immune system, regulating ...

Following in Real Time the Impact of Pneumococcal Virulence Factors in an Acute Mouse Pneumonia Model Using Bioluminescent Bacteria

Siguiendo en tiempo real el impacto de factores de virulencia neumocócica en un ratón de neumonía aguda modelo utilizando bacterias bioluminiscentes

Pneumonia is one of the major health care problems in developing and industrialized countries and is associated with considerable morbidity and mortality. ...

High-throughput Quantitative Real-time RT-PCR Assay for Determining Expression Profiles of Types I and III Interferon Subtypes

De Alto Rendimiento Cuantitativa en tiempo real RT-PCR ensayo para determinar los perfiles de expresión de los tipos I y III de interferón subtipos

Described in this report is a qRT-PCR assay for the analysis of seventeen human IFN subtypes in a 384-well plate format that incorporates highly specific ...

A Real-time Potency Assay for Chimeric Antigen Receptor T Cells Targeting Solid and Hematological Cancer Cells

Un ensayo de potencia en tiempo real para células T receptores de antígeno quimérico dirigido a células cancerosas sólidas y hematológicas

Chimeric antigen receptor (CAR) T-cell therapy for cancer has achieved significant clinical benefit for resistant and refractory hematological ...

Pan-lyssavirus Real Time RT-PCR for Rabies Diagnosis

Pan-lyssavirus en tiempo real RT-PCR para diagnóstico de rabia

Molecular assays are rapid, sensitive and specific, and have become central to diagnosing rabies. PCR based assays have been utilized for decades to ...

Culture Methods to Determine the Limit of Detection and Survival in Transport Media of Campylobacter Jejuni in Human Fecal Specimens

Culture Methods to Determine the Limit of Detection and Survival in Transport Media of Campylobacter Jejuni in Human Fecal Specimens

Métodos de cultivo para determinar el límite de detección y supervivencia en los medios de transporte de Campylobacter Jejuni en especímenes fecales humanos

A culture from human stool for diagnosis of Campylobacter-based intestinal illness takes several days, a wait that taxes the fortitude of the physician ...

Fecal (micro) RNA Isolation

Fecal micro RNA Isolation

Aislamiento de (micro) ARN fecal

It is becoming clear that RNA exists in the gut lumen and feces in animals and humans. The protocol described below isolates total RNA including microRNAs ...

Tools for the Real-Time Assessment of a Pseudomonas aeruginosa Infection Model

Tools for the Real-Time Assessment of a Pseudomonas aeruginosa Infection Model

Herramientas para la evaluación en tiempo real de un modelo de infección por Pseudomonas aeruginosa

Pseudomonas aeruginosa (Pa) is one of the most common opportunistic pathogens associated with cystic fibrosis (CF). Once Pa colonization is established, a ...