Name: real-time quaking-induced conversion assay for detection of cwd prions in fecal material
Uploaded: 2017-09-29T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Real-time Quaking-induced Conversion Assay for Detection of CWD Prions in Fecal Material at JoVE.com

Vi är tacksamma mot Dr. Byron Caughey (NIH Rocky Mountain Laboratories) för att tillhandahålla utbildning och hjortdjur PrP bakteriell uttryck Plasmiden. SG stöds av programmet Kanada forskning stol. Vi erkänner att finansiering för denna forskning till SG från genomet Kanada, Alberta Prion Research Institute och Alberta jordbruk och skogsbruk genom genomet Alberta och University of Calgary till stöd för detta arbete. Vi erkänner ett forskningsanslag från Margaret Gunn Foundation för djur forskning.

1. RT-QuIC använder fekalt Material <ol><li>beredning av hjortdjur avföring extrakt <ol><li>göra fekal Homogenatet genom att lägga 1 g av fekalt material till 10 mL av avföring extrahera buffert (20 mM natriumfosfat, pH 7.1, 130 mM NaCl, 0,05% Tween-20, 1 mM PMSF och 1 x komplett proteashämmare, EDTA-fria) att ge en slutlig koncentration på 10% (w/v). Den homogenisering buffert kan förberedas före användning och lagras vid -20 ° C.</li>
		<li>Homogenize fekal pellets (1 g) och buffert (10 m...

RT-QuIC var tidigare anställd att upptäcka CWD prioner i urin och fekal extrakt av oralt infekterade vitsvanshjort och mule deer 38. Det system som visas i detta manuskript är en anpassad metod för RT-QuIC analysen. Ytterligare steg inkorporerades i den ”klassiska” RT-QuIC assay att förbättra upptäckten och känsligheten i analysen för CWD prioner i fekalt material av smittade djur.
Den låga känsligheten för upptäckt i avföring extrakt ledde oss till f?...

Prionsjukdomar eller transmissibel spongiform encefalopati (TSE) är neurodegenerativa sjukdomar inklusive Creutzfeldt - Jakobs sjukdom (CJS) hos människor, bovin spongiform encefalopati (BSE) hos nötkreatur, skrapie hos får och getter, och chronic wasting disease sjukdom (CWD) hos hjortdjur 1,2. TSE är kännetecknas av särskiljande spongiform utseende och förlust av nervceller i hjärnan. Enligt ”endast protein” hypotesen består prioner huvudsakligen av PrPSc ('Sc' för skrapie) 3, ett felveckning isoformen av värd-kodade cellulära prionproteinet, PrPC. PrPSc resultat från omvandling av PrPC till en konformation berikad i ᵦ-ark 4,5,6 som kan fungera som ett frö att binda och konvertera andra PrPC molekyler. De nyligen genererade PrPSc -molekylerna införlivas i en växande polymer 7,8 som bryter sig in mindre oligomerer, vilket resulterar i högre nummer av infektiös atomkärnor. PrPSc är benägna att aggregering och är delvis resistenta mot proteaser 9,10.
CWD påverkar vild och odlad älg (Cervus canadensis), mule deer (Odocoileus hemionus), vitsvanshjort (WTD; Odocoileus virginianus), älgen (Alces alces) och renar (Rangifer tarandus tarandus) 11,12,13. Är det den mest smittsamma prion sjukdomen med horisontell överföring gynnas av hjortdjur interaktioner och miljömässiga persistens av smittsamhet 14,15. Till skillnad från andra prionsjukdomar där PrPSc ackumulering och smittsamhet är begränsade till hjärnan, i CWD finns dessa också i perifera vävnader och kroppsvätskor t.ex. saliv, urin och avföring 16,17, 18.
Immunhistokemi anses vara den gyllene standarden för CWD diagnos att upptäcka PrPSc distribution och spongiform lesioner 19,20. ELISA och i mer sällsynta fall, western blot används också för CWD diagnostik. Således, nuvarande prion sjukdomsdiagnos baseras huvudsakligen på att upptäcka prioner i postmortala vävnader. Ante-mortem-diagnos för CWD är tillgänglig genom att ta tonsiller eller recto-anal slemhinna-associerade lymfoida vävnad (RAMALT) biopsier; men proceduren är invasiv och kräver avskiljning av djuren. Således, användning av lättillgänglig prover, såsom urin och avföring, vore ett praktiskt sätt för CWD prion upptäckt. Dock dessa exkrementer harbor relativt låga koncentrationer av prioner under detektionsgränsen av nuvarande diagnostiska metoder. Följaktligen krävs det en mer känslig och hög genomströmning diagnostiskt verktyg. In vitro konvertering system, såsom protein Skellefteåsjukan cykliska förstärkning assay (PMCA) 21, amyloid sådd assay och realtid skakande-inducerad konvertering (RT-QuIC) assay 22,23, 24 är mycket kraftfulla verktyg att utnyttja PrPSc egenföretagare föröknings förmåga att härma i vitro prion konverteringsprocessen och därmed förstärka närvaron av minuten mängder PrPSc till detekterbara halter 25 ,26. RT-QuIC metoden, men tar fördel av det faktum att produktens omvandlingen berikad i β-ark sekundärt strukturera specifikt kan binda Tioflavin T (Th-T). Därför växer rekombinant PrP (rPrP) vid seedade konvertering till amyloida fibriller som binder Th-T och därmed kan upptäckas i realtid genom att mäta fluorescensen av Th-T uttryckt som relativa fluorescens enheter (RFU) över tid. När övervakas, kan RFUEN användas för att utvärdera relativ sådd aktiviteter och kvantitativa parametrar såsom fasen eftersläpning. Den eftersläpning fasen representerar den tid (h) som krävs för att nå tröskeln, under vilka rPrP konvertering i det tidiga skedet av reaktionen understiger detektionsgränsen för Th-T fluorescens. I slutet av fasen uppenbar eftersläpning, samtidig till bildandet av en tillräcklig amyloid kärna (kärnbildning/töjning), uppstår när Th-T fluorescensen överskrider tröskelvärdet och blir positiva. Tillväxten av amyloida fibriller kan upptäckas i realtid och inledande PrPSc eller sådd aktivitet som ingår i urvalet förstärks genom segmentering som genererar mer frön. Dessa frön inducerar i sin tur en snabb exponentiell fas av amyloid fiber tillväxt.
Eftersom denna analys är köpa duktig upptäcka så lågt som 1 fg PrPSc 24, hög känslighet kvalificerar denna teknik för att uppnå slakt eller icke-invasiv diagnostik genom att upptäcka PrPSc i olika perifera vävnader, exkrementer eller andra typer av preparatet härbärgerat låga nivåer av smittsamhet. RT-QuIC ger definitivt fördelar över andra analyser för dess reproducerbarhet, funktionalitet, snabbhet (mindre än 50 h) och låga kostnader jämfört med bioassays. Man undviker de tekniska komplexitet som ultraljudsbehandling används i PMCA; också, det utförs i en tape-förseglade mikroplattan vilket minimerar risken för aerosol förorening av varje brunn. Flera format möjliggör analys av upp till 96 prover i samma experiment. För att motverka det återkommande problemet med falska positiva och spontan konvertering av rPrP i in vitro- konvertering analyserna är genomförandet av ett tröskelvärde (cut-off) i RT-QuIC mycket användbar. Faktiskt, baserat på resultaten av den negativa kontrollen (genomsnittliga RFU negativa prover + 5 SD 27), en originalplan ställs in som diskriminering mellan positiva och negativa prover kan göras. Användningen av fyra replikat för varje prov kan därmed bidra till att definiera ett prov som positiv när minst 50% av replikerar visar en positiv signal, över dvs cut-off 28. Homologi mellan utsäde och substrat krävs inte i RT-sn, som t.ex. i en tidigare studie, hamster rPrP konstaterades att vara mer känsliga substrat jämfört med homologa substratet i mänskliga PrPvCJD seedade och fåren skrapie seedade reaktioner 29. hamster-får chimära rPrP föreslogs också för att vara ett mer lämpade substrat än mänsklig rPrP att upptäcka mänsklig variant CJD prioner 30. Således, användning av rPrP substrat från olika arter är mycket vanliga i denna analys. Denna analys har framgångsrikt tillämpats flera prionsjukdomar, såsom sporadisk CJD 31,32,33, genEtic prion sjukdomar 34, BSE 35,36,37, skrapie 23,36och CWD 38,39,40,41, 42. Studier med bearbetade cerebrospinalvätska, helblod, saliv och urin som frön i RT-QuIC var alla framgångsrika att upptäcka PrPSc 38,39,40,41, 42. att främja förmågan att detektera i prover såsom blod plasma som kan innehålla hämmare av amyloid bildas, Orrú et al. (2011) utvecklat en strategi för att ta bort potentiella inhibitorer av amyloid bildas genom kamning PrPSc immunoprecipitation (IP) steg och RT-QuIC, heter ”enhanced QuIC” assay (eQuIC). Dessutom anställdes ett substrat ersättning steg efter ~ 24 h av reaktionstid för att förbättra känsligheten. Slutligen, som låg som 1 ag av PrPSc var upptäckas av eQuIC 30.
För att rena avföring extrakt och ta bort eventuella assay-hämmare i avföring, var fecal prov som samlats i prekliniska och kliniska stadier från älg vid experimentell oral infektion homogeniserad i buffert som innehåller rengöringsmedel och proteashämmare. Extrakt av avföring lämnades vidare till olika metoder för att koncentrera PrPSc i de prover som utnyttjar protein nederbörd via natrium phosphotungstic syra (NaPTA) nederbörd. Metoden NaPTA nederbörd, först beskrevs av Safar o.a. 43, används för att koncentrera PrPSc i proverna. Inkubering av NaPTA med provet resulterar i förmånliga utfällning av PrPSc i stället för PrPC. Den molekylära mekanismen är dock fortfarande oklart. Detta steg också hjälpt innehållande och förhindra spontan konvertering av rPrP, som kan observeras i vissa fall. Slutligen, extrakt av avföring testades av optimerad RT-QuIC använder mus rPrP (aa 23-231) som substrat och inklusive substrat ersättare i protokollet att förbättra känsligheten för upptäckt.
Resultatet här Visa att denna förbättrade metod kan upptäcka mycket låga koncentrationer av CWD prioner och ökar känsligheten för upptäckt och specificitet i fecal prov jämfört med ett protokoll utan NaPTA nederbörd och substrat byte. Denna metod potentiellt kan tillämpas på andra vävnader och kroppsvätskor och kan vara till stor nytta för CWD övervakning i vilda och fångenskap hjortdjur.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Materials</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acrodisc seringe filters</td>
			<td>PALL</td>
			<td>4652</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>amicon Ultra-15 Centrifugal filter Unit</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>UCF901024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD 10 ml seringe</td>
			<td>VWR</td>
			<td>CA75846-842</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloramphenicol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C0378</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning bottle-top vacuum filters</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>431118</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E4884</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>gentleMACS M Tube</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-093-236</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Guanidine hydrochloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G4505</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imidazole</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>I5513</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>I9516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kanamycin sulfate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>60615</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luria-Bertani (LB) broth</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>12780029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M9272</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N2 supplement (100X)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>15502048</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-lauroylsarcosine sodium salt (sarkosyl)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>ML9150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanosep centrifugal devices with omega membrane 100K</td>
			<td>PALL</td>
			<td>OD100C34</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunc sealing tapes</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>232702</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm M</td>
			<td>VWR</td>
			<td>52858-000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P7626</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protease inhibitor tablet</td>
			<td>Roche</td>
			<td>4693159001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S3014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium deoxycholate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D6750</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium dodecyl sulfate (SDS)</td>
			<td>Calbiochem</td>
			<td>7910-OP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sodium phosphate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>342483</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphate dibasic anhydrous</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S9763</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphate monobasic monohydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S9638</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphotungstate hydrate (NaPTA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>496626</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thioflavin T</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T3516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris-Hydroxy-Methyl-Amino-Methan (Tris)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T6066</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton-100</td>
			<td>Calbiochem</td>
			<td>9410-OP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P7949</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Commercial buffers and solutions</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BugBuster Master Mix</td>
			<td>Nogagen</td>
			<td>71456-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ni-NTA superflow</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>1018401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-buffered saline (PBS) pH 7.4 (1X)</td>
			<td>Life Technoligies</td>
			<td>P5493</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UltraPure Distilled Water</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>10977015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standards and commercial kits</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Express Autoinduction System 1</td>
			<td>Novagen</td>
			<td>71300-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pierce BCA Protein Assay Kit</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>23227</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment setup</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AKTA protein purification systems FPLC</td>
			<td>GE Healthcare Life Sciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Beckman Avanti J-25 Centrifuge</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Beckman rotor JA-25.50</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Beckman rotor JA-10</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FLUOstar Omega microplate reader</td>
			<td>BMG Labtech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>gentleMACS Dissociator</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-093-235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sofware</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MARS Data Analysis</td>
			<td>BMG Labtech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GraphPad Prism6</td>
			<td>GraphPad software</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

real-time quaking-induced conversion assay for detection of cwd prions in fecal material

RT-QuIC tekniken är en känslig i vitro cellfria prion förstärkning analys baserat främst på seedade Skellefteåsjukan och aggregering av rekombinant prion protein (PrP) substrat med prion frön som en mall för konvertering. RT-QuIC är ny hög genomströmning teknik som är jämförbar med realtid polymeraskedjereaktion (PCR). Påvisande av amyloid fibrill tillväxt bygger på färgämnet Tioflavin T, som fluorescerar vid särskild interaktion med ᵦ ark rika proteiner. Således, amyloid bildas kan upptäckas i realtid. Vi försökte utveckla en tillförlitlig noninvasiv screeningtest för att påvisa kroniskt avmagrade sjukdom (CWD) prioner i fekal extrakt. Här har vi specifikt anpassat RT-QuIC tekniken för att avslöja PrPSc sådd aktivitet i avföring från CWD infekterade hjortdjur. Inledningsvis var aktiviteten sådd av fekal extrakten vi beredda relativt låg i RT-sn, möjligen på grund av potentiella assay inhibitorer av fekalt material. För att förbättra sådd aktivitet av avföring extrakt och ta bort potentiella assay inhibitorer, homogeniserad vi fekal proverna i en buffert som innehåller rengöringsmedel och proteashämmare. Vi lämnade också olika metoder att koncentrera PrPSc på grundval av protein nederbörd med natrium phosphotungstic syra och centrifugalkraften proverna. Slutligen, extrakt av avföring testades av optimerad RT-QuIC som inkluderade substrat ersättare i protokollet till förbättra känsligheten för upptäckt. Således etablerat vi ett protokoll för känslig detektion av CWD prion sådd aktivitet i avföring från prekliniska och kliniska hjortdjur av RT-sn, vilket kan vara ett praktiskt verktyg för icke-invasiv CWD diagnos.

Extrakt av CWD-fekal beredd på 10% (w/v) kunde utsäde RT-QuIC reaktion, men känsligheten för upptäckt var låg 27. Använda en viss buffert för fekal homogenisering var ett viktigt steg för att undvika hög bakgrund fluorescens i RT-QuIC reaktioner samtidig användning av mus rPrP substrat snarare än rådjur rPrP som tillät för att få mer specifika resultat 27. Tillägg av NaPTA nederbörd minskad spontan konvertering av rPrP i RT...

Watch this Scientific Journal Video about Real-time Quaking-induced Conversion Assay for Detection of CWD Prions in Fecal Material at JoVE.com

Real-time Quaking-induced Conversion Assay for Detection of CWD Prions in Fecal Material (Video) | JoVE

Här presenterar vi ett protokoll för att beskriva en enkel, snabb och effektiv prion amplifiering, konverteringsmetoden realtid skakande-inducerad (RT-SN).

Realtid skakande-inducerad konvertering analys för detektion av CWD prioner i fekalt Material

The RT-QuIC technique is a sensitive in vitro cell-free prion amplification assay based mainly on the seeded misfolding and aggregation of recombinant ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Real-time Quaking-induced Conversion Assay for Detection of CWD Prions in Fecal Material

Protein Misfolding Cyclic Amplification of Prions

Protein Misfolding Cyclic Amplification of Prions (Video) | JoVE

Protein felveckning Cyklisk amplifiering av prioner

Prions  are infectious agents that cause the inevitably fatal transmissible spongiform  encephalopathy (TSE) in animals and humans9,18. The prion protein ...

Detection of MicroRNAs in Microglia by Real-time PCR in Normal CNS and During Neuroinflammation

Detection of MicroRNAs in Microglia by Real-time PCR in Normal CNS and During Neuroinflammation (Video) | JoVE

Detektering av MikroRNA i Mikroglia av Real-time PCR i normala CNS och under Neuroinflammation

Microglia are cells of the myeloid lineage that reside in the central nervous system (CNS)1. These cells play an important role in pathologies of many ...

Real-time Live Imaging of T-cell Signaling Complex Formation

Real-time Live Imaging of T-cell Signaling Complex Formation (Video) | JoVE

Real-time Live avbildning av T-cellsignalering Complex Formation

Protection against infectious diseases is mediated by the immune system 1,2. T lymphocytes are the master coordinators of the immune system, regulating ...

Following in Real Time the Impact of Pneumococcal Virulence Factors in an Acute Mouse Pneumonia Model Using Bioluminescent Bacteria

Following in Real Time the Impact of Pneumococcal Virulence Factors in an Acute Mouse Pneumonia Model Using Bioluminescent Bacteria (Video) | JoVE

Efter i realtid konsekvens av Pneumococcal Virulensfaktorer i en akut Mus Lunginflammation Modell Använda självlysande bakterier

Pneumonia is one of the major health care problems in developing and industrialized countries and is associated with considerable morbidity and mortality. ...

High-throughput Quantitative Real-time RT-PCR Assay for Determining Expression Profiles of Types I and III Interferon Subtypes

High-throughput Quantitative Real-time RT-PCR Assay for Determining Expression Profiles of Types I and III Interferon Subtypes (Video) | JoVE

Hög-throughput kvantitativ realtids-RT-PCR-analys för bestämning av uttryck Profiler av typ I och III Interferon Subtyper

Described in this report is a qRT-PCR assay for the analysis of seventeen human IFN subtypes in a 384-well plate format that incorporates highly specific ...

A Real-time Potency Assay for Chimeric Antigen Receptor T Cells Targeting Solid and Hematological Cancer Cells

A Real-time Potency Assay for Chimeric Antigen Receptor T Cells Targeting Solid and Hematological Cancer Cells (Video) | JoVE

En potens-analys i real tid för chimeric antigen receptor T-celler riktade mot solida och hematologiska cancer celler

Chimeric antigen receptor (CAR) T-cell therapy for cancer has achieved significant clinical benefit for resistant and refractory hematological ...

Pan-lyssavirus Real Time RT-PCR for Rabies Diagnosis

Pan-lyssavirus Real Time RT-PCR for Rabies Diagnosis (Video) | JoVE

Pan-lyssavirus Real Time RT-PCR för rabies diagnos

Molecular assays are rapid, sensitive and specific, and have become central to diagnosing rabies. PCR based assays have been utilized for decades to ...

Culture Methods to Determine the Limit of Detection and Survival in Transport Media of Campylobacter Jejuni in Human Fecal Specimens

Culture Methods to Determine the Limit of Detection and Survival in Transport Media of Campylobacter Jejuni in Human Fecal Specimens (Video) | JoVE

Kulturmetoder för att bestämma gränsen för upptäckt och överlevnad i Transport Media of Campylobacter Jejuni i humana fekalprover

A culture from human stool for diagnosis of Campylobacter-based intestinal illness takes several days, a wait that taxes the fortitude of the physician ...

Fecal (micro) RNA Isolation

Fecal micro RNA Isolation (Video) | JoVE

Fekal (mikro) RNA-isolering

It is becoming clear that RNA exists in the gut lumen and feces in animals and humans. The protocol described below isolates total RNA including microRNAs ...

Tools for the Real-Time Assessment of a Pseudomonas aeruginosa Infection Model

Tools for the Real-Time Assessment of a Pseudomonas aeruginosa Infection Model (Video) | JoVE

Verktyg för realtidsbedömning av en Pseudomonas aeruginosa-infektionsmodell

Pseudomonas aeruginosa (Pa) is one of the most common opportunistic pathogens associated with cystic fibrosis (CF). Once Pa colonization is established, a ...