Name: preparation of primary acute lymphoblastic leukemia cells in different cell cycle phases by centrifugal elutriation
Uploaded: 2017-11-10T14:00:00
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Este trabalho foi financiado pelo NIH CA109821 (para o TCC). Agradecemos Beckman-Coulter, generosamente, fornecendo recursos para cobrir os custos de publicação e de assistência técnica na instalação e operação do sistema elutriation. Agradecemos o Dr. Fred Falkenburg pelo fornecimento inicial primária todas as culturas.

Nota: Este protocolo foi otimizado para primário B-todas as células que variam em diâmetro de aproximadamente 8 µm (fase G1) a 13 µm (fases G2/M). Assim, as velocidades de centrifugação específicos e taxas de fluxo da bomba podem não ser aplicáveis às pilhas com intervalos de tamanho diferente. Não obstante, parâmetros de elutriation apropriado podem ser estimados usando a equação de taxa de sedimentação. As células são cultivadas em meio livre de soro definido como descrito 1...

<ol>
	<li>Beach, D., Piper, M., Shall, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+newly-initiated+DNA+from+the+early+S+phase+of+the+synchronous+eukaryote,+Physarum+polycephalum.">Isolation of newly-initiated DNA from the early S phase of the synchronous eukaryote, Physarum polycephalum.</a> Exp cell res. 129, 211-221 (1980).</li><li>Sevcikova, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Completion+of+cell+division+is+associated+with+maximum+telomerase+activity+in+naturally+synchronized+cultures+of+the+green+alga+Desmodesmus+quadricauda.">Completion of cell division is associated with maximum telomerase activity in naturally synchronized cultures of the green alga Desmodesmus quadricauda.</a> FEBS letters. 587, 743-748 (2013).</li><li>Rosner, M., Schipany, K., Hengstschlager, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Merging+high-quality+biochemical+fractionation+with+a+refined+flow+cytometry+approach+to+monitor+nucleocytoplasmic+protein+expression+throughout+the+unperturbed+mammalian+cell+cycle.">Merging high-quality biochemical fractionation with a refined flow cytometry approach to monitor nucleocytoplasmic protein expression throughout the unperturbed mammalian cell cycle.</a> Nat protoc. 8, 602-626 (2013).</li><li>Banfalvi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overview+of+cell+synchronization.">Overview of cell synchronization.</a> Meth mol biol. 761, 1-23 (2011).</li><li>Langan, T. 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Clinic oncol. 8, 244-250 (2011).</li><li>Furst, R., Vollmar, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+perspective+on+old+drugs:+non-mitotic+actions+of+tubulin-binding+drugs+play+a+major+role+in+cancer+treatment.">A new perspective on old drugs: non-mitotic actions of tubulin-binding drugs play a major role in cancer treatment.</a> Die Pharmazie. 68, 478-483 (2013).</li><li>Kothari, A., Hittelman, W. N., Chambers, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+Cycle-Dependent+Mechanisms+Underlie+Vincristine-Induced+Death+of+Primary+Acute+Lymphoblastic+Leukemia+Cells.">Cell Cycle-Dependent Mechanisms Underlie Vincristine-Induced Death of Primary Acute Lymphoblastic Leukemia Cells.</a> Cancer res. 76, 3553-3561 (2016).</li><li>Nijmeijer, B. 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Descrevemos um método de obtenção primária todas as células em diferentes fases do ciclo celular usando o CCE. Sob condições ideais uma população essencialmente pura de células na fase G1 e uma população altamente enriquecida de células em G2/M fases prontamente poderiam ser obtidos em excelente rendimento, e células altamente enriquecidas em fase S também podem ser obtidas se desejado. Os resultados aqui apresentados foram obtidos usando um primário de que toda cultura (especificamente, ALL-5) e essencia...

Células cultivadas geralmente crescem de forma assíncrona e células individuais estão presentes em diferentes fases do ciclo celular. Alguns organismos apresentam ciclos de célula naturalmente síncronos ou podem ser sincronizados por estímulos fisiológicos específicos. Por exemplo, núcleos dentro plasmódios gigantes do slime molde Physarum polycephalum dividem em uma forma altamente síncrona1e as células das algas verdes que desmodesmus quadricauda podem ser sincronizados por alternadas claras e escuras períodos2. Embora esses organismos oferecem atributos únicos experimentais, são modelos inadequadamente as complexidades de células de mamíferos. A capacidade de sincronizar artificialmente as populações de células de mamíferos tem sido fundamental para fazer avançar a nossa compreensão da regulação do ciclo celular e a base molecular dos postos de controlo do ciclo celular. Métodos comuns incluem privação de soro, bloco de químico e liberação ou explorando características físicas3,4. Retirada do soro, muitas vezes, faz com que células entrar quiescência, e a re-adição de soro promove ciclo celular reentrada para o G1 fase5. Inibidores químicos incluem agentes como timidina excesso hidroxiureia que bloqueiam as células no limite do G1/S ou inibidores de microtúbulos que tipicamente prendam células na fase M3,4. Abordagens que exploram características físicas incluem mitótica shake off-que pode ser usado para enriquecer para células mitóticas desde que eles são menos aderentes que interfase células6. No entanto, todas essas técnicas têm desvantagens potenciais. Por exemplo, nem todos os tipos de célula mantêm viabilidade na ausência de soro ou a presença de inibidores químicos e o rendimento das células após agitar-off mitótica é limitado sem prévia sincronização com inibidores mitóticos.
Com excepção dos primeiros ciclos de celular embrionários, onde células progressivamente diminuem de tamanho, como eles dividem7, a maioria das células, avançando através do ciclo passam por fases de crescimento e se tornam maiores. Esta propriedade é explorada na técnica de elutriation centrífuga contrafluxo (CCE), que pode ser usado para separar as células diferindo em tamanho e, portanto, no ciclo celular fase8,9. Durante CCE, as células estão sob a influência de duas forças opostas: a força centrífuga, que leva as células longe do eixo de rotação e a velocidade do fluido (contrafluxo), que leva as células para o eixo de rotação (Figura 1). Células na câmara elutriation alcançar uma posição de equilíbrio onde estas forças são iguais. Os principais fatores que ditam a posição de equilíbrio são a densidade e diâmetro da célula. Como o fluxo taxa da solução-tampão é aumentada e a força de arrasto de contrafluxo supera a força centrífuga, é estabelecido um novo equilíbrio, causando uma mudança na posição de células dentro da câmara. Todas as células são deslocadas na direção de saída da câmara, resultando em menores deixando a câmara, em primeiro lugar, Considerando que as maiores células permanecer dentro da câmara até que a taxa de contrafluxo é aumentada suficientemente para promover sua saída. As células escapar da câmara de elutriation com aumentos consecutivos na taxa de contrafluxo podem ser coletadas em frações específicas e cada fração contém células de tamanhos que aumentam sequencialmente. Em vez de realizar elutriation com aumentos incrementais em taxa de contrafluxo, sequencial diminui em força centrífuga, diminuindo a velocidade de centrifugação irá realizar o mesmo resultado. O processo de elutriation exige otimização dependendo do tipo de célula, buffer de elutriation empregado e o aparelho específico utilizado. A taxa de sedimentação de células nestas condições é melhor descrita pela lei de Stokes: SV = [d2(ρp- ρm) / 18η] .ω2r, onde SV = velocidade de sedimentação; d = diâmetro da partícula; Ρ,p = densidade da partícula; Ρm = densidade do buffer; Η = viscosidade do buffer; Ω = velocidade angular do rotor; e r = posição radial da partícula. Assim, o SV é proporcional à densidade e diâmetro da célula, e desde que o diâmetro é elevado à segunda potência, contribui mais significativamente do que a densidade que é geralmente constante ao longo do ciclo celular.
Uma vantagem importante da CCE é que as células não estão sujeitos a condições adversas de tratamento químico ou privação nutricional e podem ser recuperadas em excelente rendimento essencialmente imperturbável. Um requisito é que as células em questão se submeter a um aumento significativo de diâmetro, pelo menos 30%, como eles atravessam o ciclo celular. A principal desvantagem é o custo do centrifugador especializado, rotor e acessórios. No entanto, a capacidade de preparar células enriquecidas nas fases do ciclo celular específico por CCE tem facilitada pesquisa do ciclo celular em organismos do fermento para células de mamíferos9,10. Além disso, os avanços recentes estão expandindo usos para a separação das células de saudável contra o tecido canceroso, a separação dos diferentes tipos de células em misturas heterogêneas e a produção de tipos de células específicas para imunoterapia9.
Nosso interesse principal tem sido na compreensão do mecanismo de ação do microtubule direcionamento MTAs (agentes) tais como alcaloides da vinca e taxanos. Estas drogas foram pensadas para atuar exclusivamente na mitose, bloqueando os microtúbulos do fuso função11,12, mas a evidência recente sugere que eles também podem direcionar interfase microtúbulos13,14. Recentemente, informou que as células de leucemia linfoblástica aguda primária (todos) sofrem a morte em qualquer fase G1 ou no M fase quando tratados com vincristina e outros MTAs em uma maneira dependente do ciclo celular15. A habilidade de separar todas as células em fases diferentes de ciclo celular por CCE foi fundamental para chegar a esta conclusão. Neste artigo, descrevemos os detalhes técnicos e oferecer dicas práticas para a aplicação da CCE para a preparação da escola primária de todas as células nas fases do ciclo celular diferente.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1542">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:535px;">Hanks&#39; balanced salt solution</td>
			<td style="width:108px;">Lonza</td>
			<td style="width:119px;">10-508Q</td>
			<td style="width:780px;">1 L bottle</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:535px;">Fetal Plus bovine serum</td>
			<td style="width:108px;">Atlas Biologicals</td>
			<td style="width:119px;">FP-0500-A</td>
			<td>500 mL bottle</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:535px;">2-napthol-6,8-disulfonic acid dipotassium salt</td>
			<td style="width:108px;">Acros Organics</td>
			<td style="width:119px;">212-672-4</td>
			<td>100 g powder</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:535px;">50 mL concial tubes</td>
			<td style="width:108px;">Denville Scientifics</td>
			<td style="width:119px;">C1062-P</td>
			<td>500/case</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:535px;">PES Membrane 0.22 &#181;m filter unit</td>
			<td style="width:108px;">Millipore</td>
			<td style="width:119px;">SLGP033RB</td>
			<td>250/pack</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Avanti J-26S XPI w/ Elut. Non-IVD - 50/60 Hz, 200/208/240V</td>
			<td style="width:108px;">Beckman Coulter</td>
			<td style="width:119px;">B14544</td>
			<td>centrifuge compatible with elutriation system</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:535px;">JE 5.0 elutriator rotor kit</td>
			<td style="width:108px;">Beckman Coulter</td>
			<td style="width:119px;">356900</td>
			<td>rotor kit which includes the rotor, T-handle hex wrench, the quick release assembly (w/o the elutriation chamber), anchoring cable, and the strobe assembly</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Chamber, standard, 4-mL, &#34;A&#34;</td>
			<td style="width:108px;">Beckman Coulter</td>
			<td style="width:119px;">356943</td>
			<td>standard elutriation chamber&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:535px;">Masterflex L/S Easy-Load pump head</td>
			<td style="width:108px;">Cole-Parmer</td>
			<td style="width:119px;">EW-07518-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:535px;">Masterflex L/S Variable-Speed Drive</td>
			<td style="width:108px;">Cole-Parmer</td>
			<td style="width:119px;">EW-07528-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:535px;">Masterflex BioPharm platinum-cured silicone pump tubing, L/S 16</td>
			<td style="width:108px;">Cole-Parmer</td>
			<td style="width:119px;">EW-96420-16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:535px;">25 G x 1.5 Precision Glide needle</td>
			<td style="width:108px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">305127</td>
			<td>sterile, single-use needles</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:535px;">10 mL Luer-Lok syringe</td>
			<td style="width:108px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">309604</td>
			<td>sterile, single-use syringes</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:535px;">Vi-Cell XR</td>
			<td style="width:108px;">Beckman Coulter</td>
			<td style="width:119px;">383556</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:535px;">PI/RNase staining buffer</td>
			<td style="width:108px;">BD Pharmingen</td>
			<td style="width:119px;">550825</td>
			<td>propidium iodide/RNase staining buffer</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:535px;">cyclin B1 (GNS1) mouse monoclonal IgG antibody</td>
			<td style="width:108px;">Santa Cruz Biotechnology</td>
			<td style="width:119px;">sc-245</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:535px;">cyclin D1 (DCS-6) mouse monoclonal IgG antibody</td>
			<td style="width:108px;">Santa Cruz Biotechnology</td>
			<td style="width:119px;">sc-20044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:535px;">P-Rb (S807/811) (D20B12) XPR rabbit monoclonal antibody</td>
			<td style="width:108px;">Cell Signaling Technology</td>
			<td style="width:119px;">8516s</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:535px;">GAPDH (14C10) rabbit monoclonal antibody</td>
			<td style="width:108px;">Cell Signaling Technology</td>
			<td style="width:119px;">2118s</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:535px;">Goat anti-mouse IgG (H+L)-HRP conjugate</td>
			<td style="width:108px;">BioRad</td>
			<td style="width:119px;">170-6516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:535px;">Goat anti-rabbit IgG (H+L)-HRP conjugate</td>
			<td style="width:108px;">BioRad</td>
			<td style="width:119px;">170-6515</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of primary acute lymphoblastic leukemia cells in different cell cycle phases by centrifugal elutriation

A capacidade de sincronizar as células tem sido fundamental para fazer avançar a nossa compreensão da regulação do ciclo celular. Técnicas comuns empregadas incluem privação de soro; produtos químicos que prendam células em fases diferentes de ciclo celular; ou o uso de mitótica shake off-que explora sua aderência reduzida. No entanto, todos estes têm desvantagens. Por exemplo, a fome de soro funciona bem para as células normais, mas menos bem para células tumorais, com pontos de verificação ciclo de celular comprometida devido à perda de supressor de ativação ou tumor do oncogene. Da mesma forma, populações de células quimicamente tratada podem abrigar dano induzido e mostrar alterações relacionadas ao estresse. Uma técnica que contorna esses problemas é elutriation centrífuga de contracorrente (CCE), onde as células estão sujeitos a duas forças opostas, a força centrífuga e a velocidade do fluido, que resulta na separação de células com base no tamanho e densidade. Desde células avançando através do ciclo normalmente ampliar, CCE pode ser usado para separar as células em fases diferentes de ciclo celular. Aqui podemos aplicar esta técnica para as células de leucemia linfoblástica aguda primária. Sob condições ideais, uma população essencialmente pura de células na fase G1 e uma população altamente enriquecida de células em G2/M fases podem ser obtidas em excelente rendimento. Estas populações de células são ideais para estudar mecanismos de ciclo celular dependente da ação de drogas anticâncer e para outras aplicações. Podemos também mostrar como modificações para o procedimento padrão pode resultam em desempenho suboptimal e discutir as limitações da técnica. A metodologia detalhada apresentada deve facilitar a aplicação e exploração da técnica para outros tipos de células.

Primária todas as células (3-4 x 108) foram submetidas a elutriation centrífuga e coletadas em duas fracções de lavagem e vinte principais frações, conforme descrito no protocolo. A tabela 1 mostra dados representativos, onde o número total de células em cada fração, bem como a velocidade do rotor correspondente é apresentado. Em geral rendimento era tipicamente mais de 80%. Medição do diâmetro da célula em frações individuais confirmou esse diâmetro celular ...

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Preparation of Primary Acute Lymphoblastic Leukemia Cells in Different Cell Cycle Phases by Centrifugal Elutriation

Este protocolo descreve o uso de centrífuga elutriation para separar as células de leucemia linfoblástica aguda primária em fases diferentes de ciclo celular.

Preparação de células de leucemia linfoblástica aguda primária em fases diferentes de ciclo celular por Elutriation centrífuga

The ability to synchronize cells has been central to advancing our understanding of cell cycle regulation. Common techniques employed include serum ...

The overall goal of this procedure, is to isolate cells into different cell cycle phases using centrifugal elutriation. This method can help answer key questions in the cancer therapeutics field. Because the isolation of cells into separate phases, allows for the interrogation of phase dependent affects of anti-cancer compounds.The main advantage of this technique is that it allows for separation of cells into specific phases using physical properties, rather than chemical perturbations. To start the experiment, install the strobe assembly into the centrifuge such that the power cord is fed out of the chamber through the port on the left. Adjust the strobe flash lamp so that it lines up with the viewing window, when the centrifuge is closed.Secure the assembly in place, by tightening two phillips head screws, at the top of each bracket. And then by tightening the thumb screws at the bottom of the bracket. Plug the power cord into the strobe power port, located at the back of the centrifuge.Next, set the rotors straight down onto the centrifuge drive hub, and firmly secure it with a T handle hex wrench. Then, place the assembly containing the elutriation chamber, counterbalance, rotating seal assembly, and a mounting plate onto the rotor. Push down evenly, placing one hand on the elutriation chamber, and the other hand on the counterbalance, until the bolts on the rotor snap into place.Place the pin, located at one end of the cable, into the hole in the rotating seal assembly. And secure the eyehole, at the other end, with one of the phillips head screws, affixed onto the bracket to connect the anchoring cable. To assemble the flow system, to pump buffer into and out of the elutriation chamber, connect size 16 tubing to a variable speed pump.Insert one free end of this tubing through a port at the top left of the centrifuge chamber, such that it enters into the chamber. Attach a fitting to the free end of this tube, and then insert the fitting into the input hole of the rotating seal assembly. Lastly, insert the output tubing, through a port, to attach it to the transfer tube at the top of the rotating seal assembly.Once the elutriation system is assembled, sterilize it by placing the other free end of the input tubing into a 500 milliliter bottle, filled with 5%bleach. And placing the output tubing into an empty one liter waste bottle. Next, turn on the pump, and allow the bleach to flow all the way through the elutriation system, until it is pumped out into the waste bottle.Now, turn the centrifuge on and allow it to come to the maximum designated speed to release bubbles and back pressure. Once the set speed is reached, stop the centrifuge. After the rotor has stopped completely, open the lid and inspect the chamber for any leaks.Next, in a similar fashion, as previously described, run sterile water through the system for 10 minutes. After flushing with water, replace the water reservoir with a sterile glass bottle filled with 100 milliliters of elutriation buffer. Place the input tubing into this bottle, so that it is at the very bottom.Start the centrifuge, and allow the buffer to flow through the system. After the reservoir bottle is close to empty, and water is fully flushed out of the system, move the output tubing from the waste bottle into the reservoir so that buffer is continuously recycled through the system. Finally, switch on the strobe lamp, and turn the elutriation knob to the extreme left.Now, adjust the viewing window by slowly turning the knob to the right, so that the elutriation chamber is clearly seen, and the strobe light is in sync with the rotor's speed. Prepare the cell sample as described in the text protocol. Add the resuspended cells into the reservoir bottle containing the recycling elutriation buffer.Allow the cells to enter into the system and reach equilibrium within the elutriation chamber. To ensure that all cells are retained in the chamber, take a drop of the eluent on a glass slide, and view it under a microscope. If the sample is devoid of intact cells, it confirms the retention in the chamber.Once all the cells have entered into the chamber, and a distinct boundary at the whitest part of the chamber, containing cells and equilibrium is seen, begin collecting fractions. Move the output tubing to a pre-chilled 50 milliliter conical tube, labeled W1.Collect 50 milliliters of elutriation buffer in this tube and store on ice. Soon after collecting the W1 fraction, lower the centrifuge speed to 821 G.And move the output tube to the conical tube, labeled W2, and collect 50 milliliters more at this speed.Continue changing the speed, and collecting fractions. Make sure there is medium in the reservoir tank, and always store the collected fractions on ice. After all fractions have been collected, stop the centrifuge, and collect 50 milliliters in a conical tube, labeled stop.Pellet cells collected in each of the fractions, and using downstream analysis, such as flow cytometry, or western blotting, as required. A line graph displaying the average diameter of cells in successive elutriation fractions, is shown. Note that the larger the cell diameter, the higher the fraction number at which it elutes.Results from fluorescents activated cells sorting analysis, show the DNA content of cells in each of the 20 elutriation fractions. Early fractions, F1 to F5, contain almost exclusively cells with 2N DNA content representing cells in G1 phase. A mixture of cells in G1 and S phases, was seen in intermediate fractions, F6 to F9.And cells with 4N DNA content, representing cells in G2 to M, were observed starting in F10.Shown here, are western blot results from probing the levels of cell cycle related proteins in pooled fractions of cells in G1 phase, and G2 to M phase. The G2 to M Pool had higher levels of Phospho-Rb and Cyclin B one, compared to the G1 Pool, as expected. Cyclin D one signal was weak, but nonetheless was detectable in the G1 Pool, and undetectable in the G2 to M Pool.Once mastered, this technique can be done in three hours if it is performed properly. While attempting this procedure, it is important to remember to take your time, and make sure that the elutriation system is assembled properly, and that all materials and solutions are prepared. Following this procedure, other methods such as cell cycle analysis, cell viability assays and immunoblots can be performed in order to interrogate how therapeutic compounds may be acting in a cell cycle phase dependent manner.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Comprehensive Protocol to Sample and Process Bone Marrow for Measuring Measurable Residual Disease and Leukemic Stem Cells in Acute Myeloid Leukemia

Protocolo abrangente de amostra e da medula óssea do processo de medição de doença Residual mensurável e células leucêmicas em leucemia mieloide aguda

Response criteria in acute myeloid leukemia (AML) has recently been re-established, with morphologic examination utilized to determine whether patients ...

Pesquisa do câncer

Flow Cytometry to Estimate Leukemia Stem Cells in Primary Acute Myeloid Leukemia and in Patient-derived-xenografts, at Diagnosis and Follow Up

Fluxo Cytometry para estimar leucemia células-tronco na leucemia mieloide aguda primária e no paciente-derivada-xenografts, diagnóstico e segue até

Acute myeloid leukemia (AML) is a heterogeneous, and if not treated, fatal disease. It is the most common cause of leukemia-associated mortality in ...

Generation and Isolation of Cell Cycle-arrested Cells with Complex Karyotypes

Geração e isolamento de células de ciclo celular-preso com cariótipos complexos

Chromosome mis-segregation leads to aneuploidy, a condition in which cells harbor an imbalanced chromosome number. Several lines of evidence strongly ...

Assessment of the Metabolic Profile of Primary Leukemia Cells

Avaliação do perfil metabólico das células de leucemia primária

The metabolic requirement of cancer cells can negatively influence survival and treatment efficacy. Nowadays, pharmaceutical targeting of metabolic ...

Flow Cytometric Analysis of Mitochondrial Reactive Oxygen Species in Murine Hematopoietic Stem and Progenitor Cells and MLL-AF9 Driven Leukemia

Análise Citométrica de fluxo de espécies reativas de oxigênio mitocondrial em células tronco e progenitoras hematopoiéticas Murinas e leucemia acionada por MLL-AF9

We present a flow cytometric approach for analyzing mitochondrial ROS in various live bone marrow (BM)-derived stem and progenitor cell populations from ...

Establishment of Gastric Cancer Patient-derived Xenograft Models and Primary Cell Lines

Estabelecimento de modelos de xenoenxertos derivados de câncer gástrico e linhas celulares primárias

The use of preclinical models to advance our understanding of tumor biology and investigate the efficacy of therapeutic agents is key to cancer research. ...

Semi-automatic PD-L1 Characterization and Enumeration of Circulating Tumor Cells from Non-small Cell Lung Cancer Patients by Immunofluorescence

Caracterização e enumeração semiautomáticas de PD-L1 de células tumorais circulantes de pacientes com câncer de pulmão de células não pequenas por imunofluorescência

Circulating tumor cells (CTCs) derived from the primary tumor are shed into the bloodstream or lymphatic system. These rare cells (1&#8722;10 cells per mL ...

Cell Cycle-specific Measurement of &#947;H2AX and Apoptosis After Genotoxic Stress by Flow Cytometry

Medição específica do ciclo celular de γH2AX e apoptose após estresse genotóxico por citometria de fluxo

The presented method or slightly modified versions have been devised to study specific treatment responses and side effects of various anti-cancer ...

Subcellular Fractionation of Primary Chronic Lymphocytic Leukemia Cells to Monitor Nuclear/Cytoplasmic Protein Trafficking

Fraccionamento subcelular de células crônicas primárias de leucemia linfocítica para monitorar o tráfico de proteínas nucleares/citoplasmáticas

Nuclear export of macromolecules is often deregulated in cancer cells. Tumor suppressor proteins, such as p53, can be rendered inactive due to aberrant ...

Two Flow Cytometric Approaches of NKG2D Ligand Surface Detection to Distinguish Stem Cells from Bulk Subpopulations in Acute Myeloid Leukemia

Duas abordagens citométricas de fluxo de detecção de superfície de ligante NKG2D para distinguir células-tronco de subpopulações a granel em leucemia mielóide aguda

Within the same patient, absence of NKG2D ligands (NKG2DL) surface expression was shown to distinguish leukemic subpopulations with stem cell properties ...