Name: stereotactically-guided ablation of the rat auditory cortex, and localization of the lesion in the brain
Uploaded: 2017-10-11T12:30:00
Duration: 9 min 29 s
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इस शोध को अर्थव्यवस्था और प्रतिस्पर्धात्मकता मंत्रालय (MINECO) ने स्पेन की सरकार, SAF2016-78898-C2-2-R से अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था ।

इस अध्ययन में दोनों स्पेनी विनियमों (रॉयल फरमान 53/2013-कानून 32/2007) और यूरोपीय संघ के दिशा निर्देशों के साथ सख्त अनुसार किया गया था (निर्देश 2010/63/EU) बायोमेडिकल रिसर्च में जानवरों की देखभाल और उपयोग पर. 
 1. चूहे की तैयारी नोट: हम किसी भी हार्मोनल परिवर्तन से बचने के लिए पुरुष चूहों में प्रयोगों का प्रदर्शन किया. 
<ol> <li> Anesthetize के मिश्रण का उपयोग करते हुए पशु ketamine हाइडरोक्लॉराइड (30 मिलीग्राम/) और xylazine हाइडरोक्लॉराइड (5 मिलीग्राम/इंजेक्शन पेशी; इस खुराक के साथ, चूहे के आसपास के लिए गहरा anesthetized होना चाहिए 1 ज. </li>
	<li> चुटकी चूहा & #39; s पाँव; एक वापसी पलटा के अभाव इंगित करता है कि पशु पूरी तरह से बेहोश है. अगर चूहा चुटकी का जवाब है, प्रारंभिक खुराक के एक तिहाई पर पूरक संज्ञाहरण दे । </li>
	<li> खोपड़ी दाढ़ी और povidone-आयोडीन के साथ शल्य क्षेत्र को संक्रमित । </li>
	<li> के तापमान को बनाए रखने के लिए एक हीटिंग पैड पर पशु जगह ३८ & #176; ग और स्थिर पशु & #39; एस एक stereotaxic फ्रेम में सिर दो कान सलाखों और एक काटने पट्टी का उपयोग कर । सावधानी का प्रयोग करें कान सलाखों के साथ कान झिल्ली भेदी से बचने के लिए । </li>
	<li> प्रत्येक आंख को नेत्र जेल या सीरम खारा की एक बूंद लगाने से आंखों की रक्षा । </li>
</ol> 2. चूहे की अस्थाई हड्डी में एसी के स्थान <ol> <li> एक स्केलपेल का उपयोग कर, midline के साथ एक चीरा बनाने के लिए खोपड़ी बेनकाब और periosteum की सतह को कवर cranium । </li>
	<li> एक बाँझ कपास टिप का उपयोग करने के लिए धीरे खोपड़ी की सतह को कवर करने के लिए किसी भी रक्त को हटाने के लिए bregma, लैंब्डा, और कर्ण 0 Paxinos और वाटसन एटलस के अनुसार चूहे की कल्पना मस्तिष्क < सुप वर्ग = "xref" > २२ . </li>
	<li> एक स्केलपेल के साथ खोपड़ी पर अपने पृष्ठीय प्रविष्टि के पास लौकिक मांसपेशी में एक चीरा बनाओ । एक सुई और टांका सामग्री का उपयोग कर बाहर मांसपेशियों खींचो, और स्टीरियोटैक्टिक फ्रेम करने के लिए टांका सामग्री को ठीक; यह लौकिक हड्डी का पर्दाफाश होगा । अगर खून बह रहा है, ठंड बाँझ खारा के साथ कुल्ला. </li>
	<li> स्टीरियोटैक्टिक micromanipulator में एक बाँझ सीधे सुई जगह है, यकीन है कि यह पूरी तरह से सुरक्षित है बना रही है. </li>
	<li> धीरे सुई कम जब तक यह खोपड़ी की सतह के ऊपर सही है, ताकि सुई की नोक 0 कर्ण के लिए सेट है । इस बिंदु को शूंय के रूप में सेट करें, और इस बिंदु से निर्देशांक निर्धारित । </li>
	<li> ब्याज के मस्तिष्क क्षेत्र पर निर्भर करता है, स्टीरियोटैक्टिक निर्देशांक बदलती हैं । चूहे की Paxinos और वाटसन एटलस का उपयोग करके इन निर्देशांक का निर्धारण मस्तिष्क < सुप वर्ग = "xref" > २२ . निर्देशांक निर्धारित कर रहे हैं एक बार, उन निर्देशांक मैच के लिए सुई ले जाएँ. </li>
	<li> निंनलिखित चार बिंदुओं के निर्देशांक का उपयोग कर एसी लक्ष्य: a: a/P =-५.८ mm, M/L = +/-६.४ mm; B: A/P =-२.७ mm, M/L = +/-६.४ mm; C: A/P =-२.७ mm, M/L = +/-८.६७ mm; D: A/P =-५.८ mm, M/L = +/-८.६७ mm. कम लौकिक हड्डी के ऊपर सही करने के लिए इन चार बिंदुओं में से प्रत्येक कल्पना को सुई । एक मार्कर पेन का उपयोग करना, लौकिक हड्डी पर अंक चिह्नित और एक आयत आकर्षित करने के क्रम में उन्हें कनेक्ट; आयत हड्डी में एक खिड़की के खोलने के लिए एक गाइड के रूप में काम करेगा (< मजबूत वर्ग = "xfig" > चित्रा 1 ). </li>
</ol> 3. एसी <ol> <li> के सर्जिकल जोखिम एक इलेक्ट्रिक ड्रिल और एक छोटा सा ड्रिल बिट (०.६ mm & #216;) का उपयोग कर खिड़की खोलो । ८,००० rpm पर आयत की परिधि ड्रिल जब तक हड्डी दूर देता है । subcortical संरचनाओं को नुकसान को रोकने के लिए ठंड बाँझ खारा के साथ धोने के द्वारा ड्रिलिंग सतह शांत । जब हड्डी रास्ता देता है, प्रतिरोध में एक बूंद का पता लगाया जा सकता है । मस्तिष्क ड्रिल नहीं करने के लिए सावधान रहें । </li>
	<li> जब सीमा ढीली कर रहे हैं, ठीक संदंश के साथ कवर हड्डी खींच और यह ठंड बाँझ खारा में दुकान. </li>
</ol> 4. एसी के पृथक <ol> <li> एक शल्य माइक्रोस्कोप (10x) का उपयोग कर, धीरे एक microsurgical चाकू के साथ मेनिन्जेस में कटौती और उंहें दो महीन संदंश का उपयोग कर हटा दें । अगर खून बह रहा है, ठंड बाँझ खारा के साथ कुल्ला. </li>
	<li> धीरे एक बाँझ 20 जी कुंद टिप सुई करने के लिए युग्मित एक शल्य सक्शन डिवाइस (दबाव-०.२४ पट्टी) का उपयोग कर एसी महाप्राण । इस बिंदु महत्वपूर्ण है और बहुत ध्यान से प्रदर्शन की जरूरत है: महाप्राण केवल छह cortical परतों और नहीं अंतर्निहित सफेद बात है । </li>
	<li> महाप्राण तक छिद्रित धमनियों का रक्तस्राव बंद हो जाता है. </li>
	<li> जब आकांक्षा समाप्त हो गया है, निकाली हड्डी के साथ घायल क्षेत्र को कवर और एक अवशोषित hemostatic धुंध लागू होते हैं । </li>
	<li> चलो लौकिक मांसपेशी अपनी मूल स्थिति ठीक है, और फिर घाव क्लिप्स (9 मिमी) का उपयोग कर त्वचा टांका । एंटीबायोटिक मरहम लागू करें (सामग्री के तालिका देखें) । घाव में दो बार तीन दिन के लिए दैनिक मरहम लागू करने के लिए जारी रखें । 
	नोट: प्रत्येक आवेदन घाव पर लागू एक पतली परत के होते हैं. </li>
	<li> चूहे के पीछे में buprenorphine इंजेक्शन (०.०५ मिलीग्राम/सर्जरी के बाद एक एनाल्जेसिक 1 ज के रूप में, और फिर हर 8 ज के दौरान ७२ h. </li>
	<li> हीटिंग पैड पर जानवर रखने जब तक यह जाग, और इसे अपने आवास पिंजरे में वापस करने के लिए ठीक हो । </li>
	<li> घर जानवरों व्यक्तिगत रूप से टांका क्षेत्र को छूने से पिंजरे साथियों को रोकने के लिए, और कुछ संवर्धन आइटम प्रदान करते हैं । संक्रमण को रोकने के लिए रोजाना चूरा बदलें, और ध्यान से जांच लें कि जानवर ठीक से रिकवर करता है और असुविधा के कोई संकेत नहीं दिखाता है । </li>
</ol> 5. टिशू संग्रह सावधानी: जब हैंडलिंग paraformaldehyde (पीएफए), दोनों ठोस और जलीय, व्यक्तिगत सुरक्षा उपकरण (पीपीई) पहनते हैं और एक सुरक्षा कैबिनेट का उपयोग करें । 
 नोट: ७५० मिलीलीटर formaldehyde समाधान को भंग करके तैयार करें 4% (w/v) पीएफए में 1x फॉस्फेट बफ़र्ड समाधान (पंजाब) गर्मी का उपयोग (५५ & #176; C). फ़िल्टर काग़ज़ के साथ formaldehyde समाधान फ़िल्टर करें । NaCl के ८.५ g को भंग करके गजरा & #39; s समाधान तैयार करना, KCl के ०.२५ ग्राम, और ०.२ ग्राम NaHCO 3 में १,००० मिलीलीटर पानी (Solution pH = ६.९) । 
<ol> <li> पशु जब तक यह अध्ययन के लिए आवश्यक है के लिए जीवित रहने दो । जब एसी ablated चूहे के साथ किया अनुसंधान पूरा हो गया है, टर्मिनली यह anaesthetize सोडियम pentobarbital की ०.१ मिलीलीटर की इंट्रा पेरिटोनियल इंजेक्शन द्वारा (६० मिलीग्राम/ पैर की अंगुली चुटकी और वापसी पलटा के अभाव द्वारा संज्ञाहरण की गहराई का आकलन करें । </li>
	<li> जब जानवर गहरा anesthetized है, तो एक intracardiac छिड़काव < सुप class = "xref" > 23 के १२५ एमएल के रिंगर & #39; s समाधान के बाद ७५० मिलीलीटर formaldehyde के एक सुई गेज का उपयोग करके अंदर व्यास के १.८ मिमी. </li>
	<li> जब छिड़काव समाप्त हो जाता है, तो सर्वप्रथम ग्रीवा ग्रीवा पर चूहे decapitate. </li>
	<li> सिर से त्वचा और मांसपेशियों को हटाने और खोपड़ी बेनकाब करने के लिए कैंची का उपयोग करें । फोरमेन मैग्नम को काटने और खोलने के लिए कैंची का उपयोग करें और खोपड़ी के पीछे निकालें । </li>
	<li> स्पेंसर कैंची का उपयोग कर कक्षीय हड्डी में एक आड़ा काट कर, और खोपड़ी के शीर्ष किनारों के साथ काटने के लिए rongeurs का उपयोग करने के लिए मस्तिष्क का पर्दाफाश. मस्तिष्क को नुकसान न हो इसके लिए सावधान रहें । </li>
	<li> एक बार दिमाग के सामने आ जाए तो ध्यान से दूर बाडी मेटर का प्रयोग कर फाइन पॉइंटेड संदंश । के तहत धीरे स्कूप और मस्तिष्क तरक्की के लिए एक उंगली का प्रयोग करें । मस्तिष्क बढ़ाएं और नसों में कटौती करें यूनटआईएल यह मुफ़्त है । formaldehyde समाधान में मस्तिष्क विसर्जित करें और इसे 4 & #176; C के लिए 24 ज. </li> पर स्टोर
</ol> 6. एसी घावों के स्थानीयकरण <ol> <li> पद-निर्धारण के बाद, ध्यान से मस्तिष्क की पार्श्व सतह को उजागर करने वाले एक sagittal चूहे मस्तिष्क मैट्रिक्स में ब्रेन प्लेस. </li>
	<li> एक कैमरा धारक का उपयोग कर प्रांतस्था सतह के ऊपर एक कैमरे 21 सेमी जगह, & #34 का चयन करें; सुपर मेक्रो शूटिंग & #34; मोड, और मस्तिष्क की सतह की एक तस्वीर ले लो । </li>
	<li> मस्तिष्क की पृष्ठीय सतह को उजागर एक कोरोनरी चूहे मस्तिष्क मैट्रिक्स में दिमाग जगह है, और एक और तस्वीर ले लो । </li>
	<li> एक छवि संपादक कार्यक्रम का उपयोग कर, छवियों को खोलने और उंहें ५०% पैमाने पर उनके साथ काम करने के लिए आसान बनाने के लिए । Paxinos और वाट्सन निर्देशांक < सुप वर्ग = "xref" > 19 के अनुसार चित्र पर bregma, लैंब्डा, और उपकर्ण 0 संदर्भों को पहचानें, और चित्रों में उनकी स्थिति चिह्नित करें (< सशक्त वर्ग = "xfig" > चित्र 2 ). मस्तिष्क के पार्श्व चित्र पर पृथक के समोच्च ड्रा । परिधि की गणना. </li>
	<li> जहां प्राथमिक (A1) और द्वितीयक क्षेत्रों (पृष्ठीय और Ventral Cortices) AC के स्थित हैं, वे निर्देशांक मैप को आयात करें < सुप क्लास = "xref" > 18 एडिटर प्रोग्राम की फाइल जहां आप तस्वीरों के साथ काम कर रहे हैं । नक्शे पर क्लिक करें और यह ablated मस्तिष्क के पार्श्व तस्वीर को मिलाना के लिए खींचें. 
	<ol> <li> समंवय मानचित्र के bregma और लैंब्डा संदर्भ बनाने के bregma और लैंब्डा पार्श्व मस्तिष्क के चित्र में पहचान के संदर्भ के साथ मेल । </li>
		<li> rhinal विदर का उपयोग करने के लिए एक संदर्भ के रूप में मस्तिष्क के चित्र को मैप करने के लिए समायोजित करें, और उन्हें मेल करने के लिए (< मजबूत वर्ग = "xfig" > चित्रा बी ). </li>
	</ol> </li> <li> एसी के कब्जे वाले क्षेत्र के सापेक्ष घाव के प्रतिशत की गणना करें । </li> </ol>

<ol>
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लेखकों की घोषणा है कि अनुसंधान किसी भी व्यावसायिक या वित्तीय संबंधों कि ब्याज की एक संभावित संघर्ष के रूप में लगाया जा सकता है के अभाव में आयोजित किया गया ।

एक सफल मस्तिष्क सर्जरी दो कारकों पर टिका: पशु जीवित रखने के दौरान और प्रक्रिया के बाद, और सही ब्याज के क्षेत्र का पता लगाने । यह सुनिश्चित करना कि चूहे सर्जरी के दौरान गहरा anesthetized है (वापसी पलटा परीक्षण), और पर्याप्त एनाल्जेसिक और गैर ototoxic एंटीबायोटिक दवाओं के अस्तित्व में मदद करनी चाहिए प्राप्त करता है । इसके अतिरिक्त, चूहा एक हीटिंग पैड पर रखा जाना चाहिए जब तक यह संज्ञाहरण से हाइपोथर्मिया से बचने के लिए जाग । Suturing संक्रमण के लिए संवेदनशीलता कम हो जाएगा, और उचित तकनीक महत्वपूर्ण है: जानवरों उनके घाव क्लिप पर ले जाएगा, तो वे घाव पर बहुत तनाव रखने के बिना हटाने को रोकने के लिए काफी तंग प्रत्यारोपित किया जाना चाहिए ।
सही एसी (या किसी अंय cortical क्षेत्र) का पता लगाने के लिए, यह bregma, लैंब्डा की स्थिति का निर्धारण करने के लिए महत्वपूर्ण है, और उपकर्ण 0 लक्षित क्षेत्र की सीमा की गणना करने के लिए उन्हें संदर्भ के रूप में उपयोग करने के लिए. निर्देशांक की गणना में कोई गलती एसी या अन्य आसपास के क्षेत्रों की अवांछित आकांक्षा के आंशिक पृथक में परिणाम होगा. इस प्रकार, सुई टिप केवल 0 कर्ण पर हड्डी को छूने चाहिए, और फिर अनुवाद antero-पीछे और medio-पार्श्व निर्देशांक क्या इस प्रोटोकॉल में वर्णित है के अनुसार ।
इस पांडुलिपि में हमने यह भी बताया है कि सर्जिकल का पर्दाफाश कैसे करें और एसी ablate । वहां तीन महत्वपूर्ण कदम हैं: ड्रिलिंग प्रक्रिया, खोलने और मेनिन्जेस के हटाने, और आकांक्षा द्वारा पृथक । ड्रिलिंग ंयूनतम दबाव के साथ एक कम गति से प्रदर्शन किया जाना चाहिए, के रूप में एक उच्च ड्रिलिंग गति गर्मी है कि आसपास के subcortical संरचनाओं को प्रभावित कर सकते है उत्पंन करता है । हालांकि, एक कम गति को बनाए रखने और ठंड बाँझ खारा के साथ ड्रिलिंग क्षेत्र ठंडा किसी भी नुकसान को रोकने चाहिए । इसके अलावा, न्यूनतम दबाव खोपड़ी के अचानक तोड़ और अंतर्निहित प्रांतस्था के लिए बाद में चोट से बचने के लिए आवश्यक है । खोलने और मेनिन्जेस कि एसी को कवर हटाने ध्यान से रक्त वाहिकाओं को तोड़ने से बचने के लिए किया जाना चाहिए । अगर खून बह रहा है, जल्दी और देर से रोग का निदान आम तौर पर प्रतिकूल है और यह संदिग्ध है कि क्या इस तरह के एक जानवर एक विश्वसनीय अध्ययन के लिए शामिल किए जाने के मानदंडों को पूरा करती है । हम इस मामले में इच्छामृत्यु की सलाह देते हैं । अंत में, आकांक्षा (शायद एक प्रभावी घाव प्रदर्शन में सबसे कठिन पहलू), भूरे रंग की बात करने के लिए प्रतिबंधित किया जाना चाहिए । वहां दो संकेतक है कि सफेद पदार्थ की उपस्थिति का पता लगाने में मदद कर सकते हैं: (1) रंग के विपरीत में एक परिवर्तन, सफेद पदार्थ के रूप में ग्रे मामले से उज्जवल है; और (२) वेध धमनियों से रक्तस्राव की समाप्ति.
मस्तिष्क में प्रदर्शन किसी भी हेरफेर के बाद, यह स्थानीयकरण, आकार, और बाद में विश्लेषण और पशु से प्राप्त डेटा के सत्यापन के लिए प्रांतस्था में की गई प्रक्रिया के विस्तार का आकलन करने के लिए आवश्यक है । इस पांडुलिपि में, हम विस्तार कैसे प्रांतस्था में प्रदर्शन पृथक स्थानीयकरण का उपयोग कर पहले हमारे समूह18द्वारा वर्णित समंवय नक्शा । इस नक्शे ऊतकीय वर्गों के धारावाहिक धारा पुनर्निर्माण से प्राप्त संरचनात्मक संदर्भ का उपयोग कर निर्माण किया गया था, Paxinos और वाटसन के साथ संबद्ध चूहा मस्तिष्क22. तदनुसार, नक्शा प्राथमिक (A1) और माध्यमिक cortices (एसी के पृष्ठीय और Ventral) के बीच अंतर । इस समंवय नक्शा का मुख्य लाभ यह है कि यह एक sagittal मस्तिष्क मैट्रिक्स में रखा मस्तिष्क की पार्श्व सतह से लिया चित्र superimposing द्वारा घाव के तेजी से स्थानीयकरण की अनुमति देता है । एक और लाभ यह है कि शरीर रचना विज्ञान में कम अनुभव के साथ प्रयोगशालाओं यह अपने पशु मॉडलों के लिए अनुकूल द्वारा नक्शे का उपयोग कर सकते हैं । यह केवल bregma, लैंब्डा, और एक नियंत्रण perfused मस्तिष्क में 0 संदर्भों के बीच दूरी निर्धारित करने के लिए आवश्यक है, और नक्शे ऊपर या नीचे तदनुसार स्केल । नक्शे के लिए मस्तिष्क के चित्र को समायोजित करने के लिए संदर्भ के रूप में Rhinal विदर का प्रयोग करें । पृथक की गहराई का निर्धारण इस निर्देशांक मानचित्र में नहीं किया जा सकता, इसलिए इसे मस्तिष्क ऊतकीय वर्गों में निर्धारित किया जाना चाहिए.
एसी के सर्जिकल जोखिम के साथ स्टीरियोटैक्टिक तरीकों का संयोजन है कि आसानी से किसी भी अन्वेषक जो चूहे में एसी लक्ष्य इच्छाओं द्वारा अनुकूलित किया जा सकता है बुनियादी तरीके हैं । यह एक तीव्र प्रयोग या एक है कि स्थाई उपकरणों के आरोपण की आवश्यकता के लिए हो सकता है । इसके अलावा, एसी के सर्जिकल पृथक पहले सुनवाई में जीर्ण cortical अभाव के प्रभाव का अध्ययन करने के लिए एक मॉडल के रूप में इस्तेमाल किया गया है । एसी ablations भी प्रभाव है कि एकतरफा एसी ablations अंय cortical क्षेत्रों में डालती है, या स्ट्रोक के एक मॉडल के रूप में सेवा का अध्ययन किया जा सकता है । इस प्रकार, प्रयोगात्मक डिजाइन यहां वर्णित उपयोगी तरीकों कि प्रयोगात्मक डिजाइन की एक विस्तृत श्रृंखला के लिए व्यक्तिगत रूप से या संयोजन में लागू किया जा सकता है ।

चूहे एक श्रवण तंत्रिका विज्ञान में सबसे अधिक इस्तेमाल किया पशु मॉडलों में से एक है । अपने व्यवहार की मजबूती यह प्रति दिन परीक्षणों के सैकड़ों के लिए काम करने में सक्षम बनाता है । इसकी संवेदनशीलता और1,2सुनवाई के लिए वर्णक्रमीय तीक्ष्णता, और अपने केंद्रीय प्रणाली के संरचनात्मक और कार्यात्मक संगठन, अन्य स्तनधारियों के तुलनीय3, चूहे की एक विस्तृत श्रृंखला का विश्लेषण करने के लिए एक उपयुक्त पशु मॉडल बनाने श्रवण तंत्रिका विज्ञान में अनुसंधान विषय. चूहे श्रवण प्रांतस्था (एसी), विशेष रूप से, कई संरचनात्मक और शारीरिक अध्ययन है कि इसकी संरचना, संगठन को समझने की कोशिश की है का विषय रहा है, और ध्वनि प्रसंस्करण में भूमिका3। आजकल, एसी अनुभव में रुचि neuroscientists के बीच लोकप्रिय हो गया है निर्भरता प्लास्टिक, श्रवण बोध, ग्रहणशील क्षेत्र संगठन के synaptic आधार है, और subcortical श्रवण में ध्वनि प्रसंस्करण के cortical नियंत्रण नाभिक4,5,6,7,8,9. चुनौतियों का पता है कि इन नए दृष्टिकोण मुद्रा, प्रक्रियाओं है कि सही पता लगाने और शल्य चिकित्सा के एसी का पर्दाफाश कर सकते है अनुसंधान के प्रयासों को तेज करेगा । स्टीरियोटैक्टिक तकनीक यह आसान शरीर विज्ञान परीक्षण के बिना मस्तिष्क के भीतर विशिष्ट क्षेत्रों स्थानीयकृत करने के लिए बनाते हैं । मस्तिष्क का आकार थोड़ा जानवरों के बीच बदलता है, किसी भी मस्तिष्क क्षेत्र के स्थान स्टीरियोटैक्टिक का उपयोग कर निर्धारित किया जा सकता है, चूहे मस्तिष्क की खोपड़ी पर स्थलों से निर्देशांक सेट.
एसी के प्रतिबंधित पृथक प्रांतस्था के संवेदी क्षेत्र के सर्जिकल हटाने की सुनवाई के साथ सबसे सीधे संबंधित है । इस तरह के ठंडा या स्थानीय lidocaine इंजेक्शन10,11,12के रूप में एसी की गतिविधि ब्लॉक करने के लिए इस्तेमाल किया अंय तरीकों के विपरीत, समारोह के जीर्ण नुकसान में एसी परिणाम के सर्जिकल पृथक । इस प्रकार, एसी ablations cortical अभाव के दीर्घकालिक प्रभाव का अध्ययन करने के लिए अधिक उपयुक्त हैं, साथ ही घाव प्लास्टिक के बाद की घटना । एसी के सर्जिकल ablations के साथ स्टीरियोटैक्टिक तरीकों का संयोजन सफलतापूर्वक शारीरिक, व्यवहार का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया गया है, और cortical नियंत्रण अभाव के आणविक प्रभाव13,14,15 ,16,17,18,19. उदाहरण के लिए, द्विपक्षीय एसी ablations के साथ एक चूहा मॉडल श्रवण चौंक पलटा और श्रवण brainstem प्रतिक्रियाओं में cortical पृथक के प्रभाव का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया गया है (ABR)16. हाल ही में, हम प्रभाव की तुलना में है कि एकतरफा बनाम द्विपक्षीय ablations चूहे एसी का उत्पादन ABR थ्रेसहोल्ड, आयाम में, और चोट के बाद अलग समय अंक पर विलंब18. इसके अलावा, प्रतिबंधात्मक एसी पृथक के चूहे मॉडल अवर collicus13,14,15 और भीतरी कान17 में corticofugal मार्ग अध कि पतन के प्रभाव का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया गया है ,19. इस तरह के एक हेरफेर मस्तिष्क में किया जाता है के बाद, यह स्थानीयकरण, आकार, और प्रांतस्था में किए गए घावों के विस्तार का आकलन करने के लिए आवश्यक है । हालांकि बहुत उपयोगी है, tonotopic नक्शे के मुख्य सीमा के आधार पर न्यूरॉनिक प्रतिक्रियाओं20,21 electrophysiological चूहे मस्तिष्क में श्रवण क्षेत्रों का पता लगाने के लिए आवश्यक तकनीक हैं. के बाद से नहीं सभी प्रयोगशालाओं आवश्यक उपकरण और/या विशेषज्ञता इस तरह की रिकॉर्डिंग करने के लिए, हम एक समंवय नक्शा एसी के cytoarchitectural सीमा के हस्तांतरण के आधार पर निर्माण किया है मस्तिष्क की सतह18की एक छवि के लिए । इस नक्शे बहुत फिजियोलॉजी परीक्षण के बिना एसी का पता लगाने के लिए उपयोगी हो सकता है ।
वर्तमान प्रोटोकॉल stereotactically निर्देशित स्थान, शल्य चिकित्सा जोखिम, और चूहों में एसी के पृथक के लिए एक विधि का वर्णन है । यह भी वर्णन करता है कि कैसे हमारे समंवय नक्शा18 का उपयोग करने के लिए आसानी से ablated दिमाग की सतह के एक चित्र पर घाव के विस्तार स्थानीयकृत ।

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Stereotaxic frame</td>
			<td>David Kopf Ins.</td>
			<td>900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical microscope</td>
			<td>WILD M650 Heerbrugg</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pad</td>
			<td>DAGA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dental micromotor</td>
			<td>W&#38;H elco</td>
			<td>5118</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diamond burr</td>
			<td>B Braun</td>
			<td>GD021R</td>
			<td>0.6 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical suction device</td>
			<td>Atmos</td>
			<td>Atmoforte E2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Merial</td>
			<td></td>
			<td>30 mg/kg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Bayer</td>
			<td></td>
			<td>5 mg/kg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micromanipulator</td>
			<td>Narishige</td>
			<td>SM-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td>Lawton</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Povidone iodine</td>
			<td>Meda</td>
			<td>Betadine</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sterile saline serum</td>
			<td>B.Braun</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20G sterile needle</td>
			<td>Terumo Neolus</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton tips</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture material</td>
			<td>B.Braun</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic Ointment</td>
			<td>Quadriderm (Betametasona, Gentamicina, Clotrimazol) - Schering-Plough</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>dimeda</td>
			<td>10.331.12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical needles</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>501940</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine</td>
			<td>Indivior UK</td>
			<td>Buprex</td>
			<td>0.01-0.05 mg/kg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissor</td>
			<td>dimeda</td>
			<td>08.120.15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spencer scissor</td>
			<td>dimeda</td>
			<td>08.804.14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rongeurs</td>
			<td>Lawton</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsurgical knife</td>
			<td>MSP</td>
			<td>7503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absorbable hemostatic gauze</td>
			<td>Surgicel</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saggital rat Brain Matrix</td>
			<td>Activational systems Inc.</td>
			<td>RBM-1000DV / RBM 4000C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium pentobarbital</td>
			<td>Vetoquinol</td>
			<td></td>
			<td>0.1 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Camera</td>
			<td>Olympus 5.1 MP</td>
			<td>C-5060 wide zoom</td>
			<td>lens F2.8-4.8</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wound clips</td>
			<td>Reflex 9</td>
			<td></td>
			<td>9 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Canvas 12</td>
			<td>ACD Systems</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>needle gauge</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>diameter 1.8 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Separatory funnel</td>
			<td>labbox</td>
			<td>11409</td>
			<td>500 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GluA2 primer Forward</td>
			<td>GeneBank</td>
			<td>NM_017261</td>
			<td>CGGCAGCTCAGCTAAAAACT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GluA2 primer Reverse</td>
			<td>GeneBank</td>
			<td>NM_017261</td>
			<td>TTGTAGCTGGTGGCTGTTGA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GluA3 primer Forward</td>
			<td>GeneBank</td>
			<td>NM_032990</td>
			<td>ATTGCTGATGGTGCAATGAC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GluA3 primer Reverse</td>
			<td>GeneBank</td>
			<td>NM_032990</td>
			<td>TTTGCATTGTCGCAAGTCTC</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

stereotactically-guided ablation of the rat auditory cortex, and localization of the lesion in the brain

चूहा श्रवण प्रांतस्था (एसी) श्रवण तंत्रिका विज्ञान जांचकर्ताओं जो अनुभव में रुचि रखते है निर्भरता प्लास्टिक, श्रवण अवधारणात्मक प्रक्रिया के बीच लोकप्रिय होता जा रहा है, और subcortical श्रवण नाभिक में ध्वनि प्रसंस्करण के नियंत्रण cortical । नई चुनौतियों का पता करने के लिए, एक प्रक्रिया को सही पता लगाने और शल्य चिकित्सा श्रवण प्रांतस्था बेनकाब इस अनुसंधान के प्रयास में तेजी लाने होगा । स्टीरियोटैक्टिक न्यूरोसर्जरी नियमित रूप से पशु मॉडल में पूर्व नैदानिक अनुसंधान में प्रयोग किया जाता है एक सुई या इलेक्ट्रोड प्रांतस्था के भीतर एक पूर्व निर्धारित स्थान पर engraft । निंनलिखित प्रोटोकॉल में, हम एक उपंयास रास्ते में स्टीरियोटैक्टिक तरीकों का उपयोग करें । हम चार चूहे के लौकिक हड्डी की सतह पर समंवय अंक की पहचान के लिए एक खिड़की है कि, एक बार खोला, सही दोनों प्राथमिक (A1) और माध्यमिक (पृष्ठीय और Ventral) एसी के cortices उजागर को परिभाषित करता है । इस विधि का प्रयोग, हम तो एक शल्य प्रदर्शन एसी का पृथक । इस तरह के एक हेरफेर किया जाता है के बाद, यह स्थानीयकरण, आकार, और प्रांतस्था में किए गए घावों के विस्तार का आकलन करने के लिए आवश्यक है । इस प्रकार, हम भी एक विधि का वर्णन करने के लिए आसानी से एसी पृथक गुजाइश का उपयोग कर एक समंवय नक्शा मस्तिष्क की सतह के लिए एसी की cytoarchitectural सीमा को स्थानांतरित द्वारा निर्माण किया । stereotactically का संयोजन-निर्देशित स्थान और एसी के पृथक में घायल क्षेत्र के स्थानीयकरण के साथ एक समंवय नक्शा गुजाइश पशु से प्राप्त जानकारी के सत्यापन की सुविधा है, और एक बेहतर विश्लेषण की ओर जाता है और डेटा की समझ ।

हम एक stereotactically निर्देशित स्थान, शल्य चिकित्सा एक्सपोजर, और तीन Wistar चूहों में एसी के एकतरफा पृथक प्रदर्शन किया । घाव के स्थानीयकरण की पुष्टि की है कि ablations तीन चूहों में प्रदर्शन एसी (प्राथमिक, पृष्ठीय, और ventral cortices) के प्रमुख उपभागों अतिक्रमण, और कुल एसी क्षेत्र (चित्र बी) के ८० से १००% की एक सीमा शामिल है ।
प्रोटोकॉल यहां वर्णित करने के लिए प्रतिबंधात्मक एसी ablations पहले हमारी प्रयोगशाला में इस्तेमाल किया गया है subcortical श्रवण नाभिक में cortical नियंत्रण अभाव के दीर्घकालिक प्रभावों का अध्ययन करने के लिए, साथ ही साथ प्लास्टिक की बाद की घटना । इन अध्ययनों में, एसी ablations के प्रोटोकॉल शारीरिक (ABR) लागू करने के द्वारा मान्य किया गया था, व्यवहार (चौंकाने प्रतिक्रियाओं, पल्स निषेध; पीपीआई), और आणविक (डीएनए microarrays, qPCR, और पश्चिमी दाग) तरीकों13,14,15,16,17,18,19। यहां, हमारे प्रोटोकॉल की प्रभावकारिता प्रदर्शित करने के लिए, हम तीन एसी ablated चूहों एक सप्ताह के लिए जीवित है, और ऊतक संग्रह कदम के दौरान cochleae एकत्र करने के लिए सबसे अधिक प्रासंगिक AMPA वयस्क में मौजूद यूनिटों की अभिव्यक्ति में परिवर्तन का अध्ययन कोक्लीअ , GluA2 और GluA3, qPCR द्वारा । एसी ablated चूहों और शम नियंत्रण जानवरों से टेप के बीच तुलना जहां सभी सर्जरी प्रक्रिया पर नहीं cortical पृथक प्रदर्शन किया गया था एक नीचे GluA2 के लिए विनियमन दिखाया, और एक अप-दोनों GluA3 में cochleae के लिए विनियमन (चित्रा 3) , जो हमारे पिछले अध् ययन19के साथ समझौते में है ।
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56429/56429fig1.jpg"> 
चित्रा 1: तीन अलग सर्जिकल कदम पर चूहे लौकिक हड्डी की छवियां । (क) एसी के stereotaxic निर्देशांक के अस्थायी हड्डी के लिए स्थानांतरण. चार बिंदुओं के निर्देशांक हैं: a: a/P =-५.८ mm, M/L = +/-६.४ mm; B: A/P =-२.७ mm, M/L = +/-६.४ mm; C: A/P =-२.७ mm, M/L = +/-८.६७ mm; D: a/P =-५.८ mm, M/L = +/-८.६७ mm. (ख) निर्देशांक लौकिक हड्डी की सतह पर एक आयत आकर्षित करने के लिए एक संदर्भ के रूप में उपयोग किया जाता है कि एक खिड़की के उद्घाटन का मार्गदर्शन करेंगे । (C) ड्रिलिंग के बाद हड्डी में खोली गई विंडो को दिखाता है । रक्त वाहिकाओं के साथ मेनिन्जेस मस्तिष्क की सतह पर मनाया जा सकता है । आर: rostral, डी: पृष्ठीय । <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56429/56429fig1large.jpg" target="_blank">कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56429/56429fig2.jpg"> 
चित्रा 2: चूहे मस्तिष्क में घावों का पता लगाने के लिए प्रक्रिया. (एक) लैंब्डा और Bregma में stereotactically प्रत्यारोपित सुइयों के साथ एक एसी ablated मस्तिष्क की पृष्ठीय सतह की तस्वीर (Paxinos और वाटसन के अनुसार19निर्देशांक) । बिंदीदार लाइनों Bregma और 9 सेमी x 9 सेमी ग्रिड में 0 कर्ण की स्थिति के निशान, साथ ही साथ मस्तिष्क की पृष्ठीय सतह में । (ख) ablated ब्रेन आरोपित के पार्श्व सतह के फोटोग्राफ के लिए एसी का समंवय नक्शा । घाव की परिधि के चित्र में लाल रंग में लेबल है । एसी क्षेत्र की परिधि के नक्शे में काले रंग में लेबल है । इस उदाहरण में, एसी के कब्जे वाले कुल क्षेत्रफल के संबंध में एसी पृथक का प्रतिशत ८४.७९% है । एसी: श्रवण प्रांतस्था, आइए: अन्तर कर्ण, FR: Rhinal विदर. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56429/56429fig2large.jpg" target="_blank">कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56429/56429fig3.jpg"> 
चित्रा 3: AMPA रिसेप्टर उप के mRNA स्तर में परिवर्तन GluA2 और GluA3 के बाद एकतरफा एसी ablations 7 दिनों के बाद घाव. परिणाम गुना परिवर्तन के अर्थ ± मानक विचलन के रूप में प्रस्तुत कर रहे हैं । GluA2 टेप के लिए परिवर्तन नीले रंग में प्रतिनिधित्व कर रहे हैं । GluA3 टेप के लिए परिवर्तन लाल रंग में प्रस्तुत कर रहे हैं । GluA2 में एक महत्वपूर्ण कमी और GluA3 में वृद्धि दोनों cochleae में मनाया जाता है (ipsi-और contralateral को पृथक) सर्जरी के बाद 7 दिनों में कोई cortical ablations के साथ अन्तर्वासना नियंत्रण के सापेक्ष; यह हमारे पिछले परिणाम19के साथ समझौते में है । <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56429/56429fig3large.jpg" target="_blank">कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।</a>

Watch this Scientific Journal Video about Stereotactically-guided Ablation of the Rat Auditory Cortex, and Localization of the Lesion in the Brain at JoVE.com

Stereotactically-guided Ablation of the Rat Auditory Cortex, and Localization of the Lesion in the Brain

Stereotactically-निर्देशित पृथक चूहे श्रवण प्रांतस्था, और मस्तिष्क में घावों के स्थानीयकरण

हम stereotactically के लिए एक विधि का वर्णन-निर्देशित स्थान, जोखिम, और चूहों में श्रवण प्रांतस्था के पृथक. पृथक के स्थानीयकरण एक समंवय नक्शा गुजाइश का उपयोग कर मूल्यांकन किया है ।

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Research

JoVE Journal

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