Name: quantitative whole-mount immunofluorescence analysis of cardiac progenitor populations in mouse embryos
Uploaded: 2017-10-12T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Quantitative Whole-mount Immunofluorescence Analysis of Cardiac Progenitor Populations in Mouse Embryos at JoVE.com

이 작품은 NIH/NHLBI R56 HL128646 및 Mindich 보건 개발 연구소 (MCHDI) (노스다코타)에 ISMMS에 의해 투자 되었다. E.B.는 NIH/NIDCR Traineeship T32 HD075735에 의해 지원 됩니다. 현미경 및 이미지 분석 Tisch 암 연구소의 마운트 시 나이 P30 CA196521-암 센터 지원 그랜트에 의해 부분에서 지원 되는 시내산에서 아이 칸 의학 학교에서 현미경 코어에서 수행 되었다.

여기에서 설명한 모든 방법을 승인 기관 동물 관리 및 사용 위원회는 아이 칸의과 시내산에서.
 1. 수확 및 처리 심장 초승달 단계 배아 <ol><li>비옥한 스 터 드 남성으로 비옥한 여성 마우스 친구.</li>
	<li>확인 질 결합의 존재에 대 한 플러그 무딘 프로브 또는 집게를 사용 하 여. 플러그 감지 당일 정오 배아 간주 됩니다 하루 (E) (참조 그림 1A 전체 타임 ...

<ol>
	<li>Kretzschmar, K., Watt, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lineage+tracing.">Lineage tracing.</a> Cell. 148, 33-45 (2012).</li><li>Tam, P., Parameswaran, M., Kinder, S., Weinberger, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+allocation+of+epiblast+cells+to+the+embryonic+heart+and+other+mesodermal+lineages:+the+role+of+ingression+and+tissue+movement+during+gastrulation.">The allocation of epiblast cells to the embryonic heart and other mesodermal lineages: the role of ingression and tissue movement during gastrulation.</a> Dev Camb Engl. 124, 1631-1642 (1997).</li><li>Lawson, K., Meneses, J., Pedersen, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clonal+analysis+of+epiblast+fate+during+germ+layer+formation+in+the+mouse+embryo.">Clonal analysis of epiblast fate during germ layer formation in the mouse embryo.</a> Dev Camb Engl. , 891-911 (1991).</li><li>Kinder, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+orderly+allocation+of+mesodermal+cells+to+the+extraembryonic+structures+and+the+anteroposterior+axis+during+gastrulation+of+the+mouse+embryo.">The orderly allocation of mesodermal cells to the extraembryonic structures and the anteroposterior axis during gastrulation of the mouse embryo.</a> Dev Camb Engl. 126, 4691-4701 (1999).</li><li>Keegan, B. R., Meyer, D., Yelon, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organization+of+cardiac+chamber+progenitors+in+the+zebrafish+blastula.">Organization of cardiac chamber progenitors in the zebrafish blastula.</a> Development. 131, 3081-3091 (2004).</li><li>Saiz, N., Williams, K., Seshan, V., Hadjantonakis, A. -. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Asynchronous+fate+decisions+by+single+cells+collectively+ensure+consistent+lineage+composition+in+the+mouse+blastocyst.">Asynchronous fate decisions by single cells collectively ensure consistent lineage composition in the mouse blastocyst.</a> Nat Commun. 7, 13463 (2016).</li><li>Saiz, N., Kang, M., Schrode, N., Lou, X., Hadjantonakis, A. -. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+Analysis+of+Protein+Expression+to+Study+Lineage+Specification+in+Mouse+Preimplantation+Embryos.">Quantitative Analysis of Protein Expression to Study Lineage Specification in Mouse Preimplantation Embryos.</a> J. Vis. Exp. , e53654 (2016).</li><li>Cullen-McEwen, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+tools+for+analysis+of+the+ureteric+tree+in+the+developing+mouse+kidney.">Imaging tools for analysis of the ureteric tree in the developing mouse kidney.</a> Methods Mol. Biol. 1075, 305-320 (2014).</li><li>Montgomery, S. C., Cox, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole+Mount+Dissection+and+Immunofluorescence+of+the+Adult+Mouse+Cochlea.">Whole Mount Dissection and Immunofluorescence of the Adult Mouse Cochlea.</a> J Vis Exp. , (2016).</li><li>Calderon, D., Bardot, E., Dubois, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Probing+Early+Heart+Development+to+Instruct+Stem+Cell+Differentiation+Strategies.">Probing Early Heart Development to Instruct Stem Cell Differentiation Strategies.</a> Dev. Dyn. , (2016).</li><li>Meilhac, S., Lescroart, F., Blanpain, C., Buckingham, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+Cell+Lineages+that+Form+the+Heart.">Cardiac Cell Lineages that Form the Heart.</a> Cold Spring Harb Perspect. Med. 4, a013888-a013888 (2014).</li><li>Kelly, R., Buckingham, M., Moorman, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+Fields+and+Cardiac+Morphogenesis.">Heart Fields and Cardiac Morphogenesis.</a> Cold Spring Harb Perspect. Med. 4, a015750-a015750 (2014).</li><li>Cai, C. -. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isl1+Identifies+a+Cardiac+Progenitor+Population+that+Proliferates+Prior+to+Differentiation+and+Contributes+a+Majority+of+Cells+to+the+Heart.">Isl1 Identifies a Cardiac Progenitor Population that Proliferates Prior to Differentiation and Contributes a Majority of Cells to the Heart.</a> Dev Cell. 5, 877-889 (2003).</li><li>Sbalzarini, I. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Seeing+is+believing:+Quantifying+is+convincing:+Computational+image+analysis+in+biology.">Seeing is believing: Quantifying is convincing: Computational image analysis in biology.</a> Adv. Anat. Embryol. Cell Biol. 219, 1-39 (2016).</li><li>Myers, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Why+bioimage+informatics+matters.">Why bioimage informatics matters.</a> Nat. Methods. 9, 659-660 (2012).</li><li>North, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Seeing+is+believing?+A+beginners'+guide+to+practical+pitfalls+in+image+acquisition.">Seeing is believing? A beginners' guide to practical pitfalls in image acquisition.</a> J. Cell Biol. 172, 9-18 (2006).</li><li>Eliceiri, K. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+imaging+software+tools.">Biological imaging software tools.</a> Nat. Methods. 9, 697-710 (2012).</li><li>Horn, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mind+bomb+1+is+required+for+pancreatic+&#946;-cell+formation.">Mind bomb 1 is required for pancreatic &#946;-cell formation.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 109, 7356-7361 (2012).</li><li>Bardot, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Foxa2+identifies+a+cardiac+progenitor+population+with+ventricular+differentiation+potential.">Foxa2 identifies a cardiac progenitor population with ventricular differentiation potential.</a> Nat Commun. 8, 14428 (2017).</li><li>Adams, M. W., Loftus, A. F., Dunn, S. E., Joens, M. S., Fitzpatrick, J. A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light+sheet+fluorescence+microscopy+(LSFM).">Light sheet fluorescence microscopy (LSFM).</a> Curr. Protoc. Cytom. 2015, (2015).</li><li>Shaner, N. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+monomeric+red,+orange+and+yellow+fluorescent+proteins+derived+from+Discosoma+sp.+red+fluorescent+protein.">Improved monomeric red, orange and yellow fluorescent proteins derived from Discosoma sp. red fluorescent protein.</a> Nat. Biotechnol. 22, 1567-1572 (2004).</li><li>Johnson, S., Rabinovitch, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+imaging+of+excised+tissue+using+vital+dyes+and+confocal+microscopy.">Ex vivo imaging of excised tissue using vital dyes and confocal microscopy.</a> Curr. Protoc. Cytom. , (2012).</li><li>Burtscher, I., Lickert, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Foxa2+regulates+polarity+and+epithelialization+in+the+endoderm+germ+layer+of+the+mouse+embryo.">Foxa2 regulates polarity and epithelialization in the endoderm germ layer of the mouse embryo.</a> Development. 136, 1029-1038 (2009).</li><li>Baron, M. H., Mohn, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+embryonic+explant+culture+system+for+analysis+of+hematopoietic+and+vascular+development.">Mouse embryonic explant culture system for analysis of hematopoietic and vascular development.</a> Methods Mol. Med. 105, 231-256 (2005).</li></ol>

위의 프로토콜 후 이식 마우스 배아의 높은 품질의 전체 마운트 면역 형광 이미지에서 양적 데이터를 얻기 위한 전략을 설명 합니다. 올바르게 수행 하는 경우이 단계를 통해 생성 된 3 차원 체적 데이터 태아 내의 여러 도메인의 비교 및 intersectional 분석에 사용할 수 있습니다. 잘 설립 참조 구조에 비해 소설 세포 인구를 조사할 때 설명 하는 접근을 마스킹 표면 신호 특정 사용입니다.
<p class="j...

Organogenesis의 연구는 오랫동안 발전 태아에 전체적 이벤트의 관찰에 의존 했다. 이러한 연구는 자주 정의 참조 인구의 라벨 형광 염료 또는 조합에서 혈통 추적 기자 들의 사용에 의존 합니다. 1 이러한 라벨의 상대적 위치를 비교 하 여 정보 출처, 운동, 또는 관심의 인구의 궁극적인 기여에 얻을 수 수 있습니다. 이식 및 운명 매핑 실험 다음 개발된 배아에 기여에 대 한 검사의 관심, 셀의 시작 지점을 정의 하 형태학 랜드마크 또는 비 운동 계보에 염료의 주입을 사용 합니다. 2 , 3 , 4 , 5 유전 계보 추적 실험 실험 조작 없이 라벨 세포 인구에 사용 되는 잘 정의 된 기자 대립 유전자와 동일한 개념을 사용 합니다. 이러한 접근 키 높은 공간 해상도, 실험의 위치 및 참조 레이블을 확인 하는 기능입니다. 이러한 방식을 사전 이식 개발에 뛰어난 진행 굴복 했다 고 explant organogenesis 연구. 6 , 7 , 8 , 9
심장 morphogenesis 기반이 발달 이벤트 최근 몇 년 동안에서 점점 더 잘 설명 되었습니다. 10 연구의이 분야의 주요 발견 중 하나는 고유 마커의 식에 의해 구별 될 수 있다 조상 인구 수의 설명 이다. 11 이 인구는 첫번째와 두 번째 심장 필드 (FHF SHF), 배아 날 (E) 8.25 마우스 개발에 태아의 앞쪽 측면에서 심장 초승달 내 존재는 포함 됩니다. 12 이 인구 넓은 필드 현미경 검사 법, 면역 형광 분석, 조직 수준 정보 및 직렬 단면화를 제공 하 높은 세포 해상도을 제공의 결합을 통해 검사 자주 2 차원 공간 정보입니다. 13 따라서, 이러한 연구는 크게 고급 심장 개발에 대 한 우리의 이해 하는 동안 사용할 수 있는 방법을 제한 morphogenesis의 깊이 정량 분석에 검사 하는 방법에 대 한 필요성을 만들어,이 단계는 이러한 인구 전체 유기 체 수준에서의 조직.
최근 confocal 현미경 검사 법 및 3D 이미지 분석 허용 셀 및 구조에서 현장에서 의 고해상도 높은 처리량 알고리즘 개조를 비교적 쉽게 따라서 성패 상세한 연구에 대 한 복잡 한 세포 구조입니다. 14 컴퓨팅 파워의 증가와 큰 데이터 관리 알고리즘, 데이터 집합, 이미지의 크기의 지 수 증가 처리 하기 위해 필요한 두 개발 분석 이제 자동화할 수 있습니다 완전히. 15 영상 데이터 세트의 자동 분석 수 있는 이점이 되 고의 편견, 하지만 입력된 데이터 집합;의 품질 안정 그것은 절대적, 다음, 최고의 품질, 편견된 분석을 지키는 모범 사례 수집 및 이미지 사전 처리 하는 동안 사용 됩니다. 16 프로토콜 수 완전히 자동화 되 고 재현성에 대 한 공유와 독점 소프트웨어에 의해 사용 되는 알고리즘은 쉽게 친숙 현대 독점을가지고 과학자 들에 의해 사용 되는 라이브러리를 통해 사용할 수 또는 오픈 소스 개발자 도구입니다. 17
다음 프로토콜 organogenesis, 심장 개발 하는 동안 심장 초승달의 형성에의 한 잘 정의 된 모델에 이러한 분석을 수행 하기 위해 필요한 단계를 설명 합니다. 특히,이 프로토콜 (1) 수확 하는 방법에 설명 합니다 및 심장 초승달 단계 태아를 해 부, (2) 참조 (Nkx2-5)에 대 한 전체 마운트 면역 형광 검사 수행 및 실험 (Foxa2Cre:YFP18,19) 마커, (3) 준비 하 고 배아 confocal 현미경 검사 법을 사용 하 여 이미지 그리고 마지막으로 (4) 분석 하 고 계량 고급 3 차원 접근을 사용 하 여 결과 이미지. 심장 초승달에 적절 한 수정, 예를 들어, 사용 된다 초기 somite 단계 배아를 gastrula에서 여러 계보의 분석을 위해이 프로토콜을 사용할 수 있습니다.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Blunt probe</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-9580</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-8100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine forceps</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-5015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection scissors</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-5912</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saponin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>84510</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A8022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton</td>
			<td>RPI</td>
			<td>A4490</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-Nkx2-5</td>
			<td>Santa Cruz Biotech</td>
			<td>sc-8697</td>
			<td>Used at 1:100-1:500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chicken anti-GFP</td>
			<td>abcam</td>
			<td>ab13970</td>
			<td>Used at 1:500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-Islet1</td>
			<td>abcam</td>
			<td>ab109517</td>
			<td>Used at 1:100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-Hcn4</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>AB5808</td>
			<td>Used at 1:100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>488 anti-chicken</td>
			<td>Jackson Immunoresearch</td>
			<td>703-546-155</td>
			<td>Reconstituted in water and stored at -20 &#176;C in final concentration of 50% glycerol. Used at 1:500.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>555 anti-goat</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A21432</td>
			<td>Used at 1:500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>647 anti-rabbit</td>
			<td>Jackson Immunoresearch</td>
			<td>711-606-152</td>
			<td>Reconstituted in water and stored at -20 &#176;C in final concentration of 50% glycerol. Used at 1:500.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D9542</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>n-Propyl gallate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>2370</td>
			<td>Stock solution is 20% w/v in DMSO. Working solution prepared by mixing 1 part 10x PBS with 9 parts 100% glycerol and slowly adding 0.1 part stock solution.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superfrost Plus microscopy slides</td>
			<td>VWR Scientific</td>
			<td>48311-703</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>22x22 mm coverslips</td>
			<td>VWR Scientific</td>
			<td>48366-227</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaris 8.4.1</td>
			<td>Bitplane</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

quantitative whole-mount immunofluorescence analysis of cardiac progenitor populations in mouse embryos

적 발전 이미징 기술 사용 하 여 광범위 하 게 배아 개발의 증가 된 이해에 기여 하고있다. 사전 이식 개발 및 organogenesis는 연구의 두 영역을 크게이 진보, 사전 이식 배아 이미징 또는 vivo 장기 전 직접 얻을 수 있는 데이터의 높은 품질에서 benefitted 있다. 사전 이식 배아는 특히 높은 공간 해상도와 데이터 굴복 했다, 하는 동안 후기 3 차원 개조를 덜 의무가 있다. 운명 매핑 또는 유전 계보 추적 함께 알려진된 미 발달 구조에 대 한 높은-품질 3 차원 또는 체적 데이터를 가져오는 embryogenesis 동안 일어나 전체적 사건의 보다 포괄적인 분석을 위해 수 있게 됩니다.
이 프로토콜 있도록 라벨, 시각화, 및 개발 심장 초승달 내 조상 세포 인구의 정량화에 대 한 키 구조 형성 심장 개발 하는 동안 전체 마운트 면역 형광 접근 방식을 설명 합니다. 접근 같은 디자인은 모두 세포 및 조직 수준의 정보를 얻을 수 있는 방법. Confocal 현미경 검사 법 및 이미지 처리를 사용 하 여이 프로토콜 허용 함으로써 지역화 및 특정 조상 인구 중의 조직 분석 하는 기능을 제공 하는 심장 초승달의 3 차원 공간 재구성 심장 개발의이 중요 한 단계. 중요 한 것은, 참조 항 체의 사용은 심장 초승달의 연속 마스킹 및 초승달 일대의 후속 양적 측정에 대 한 수 있습니다. 이 프로토콜만 초기 심장 개발의 상세한 검사를 사용 하지 않습니다 하지만 적응과 초기 somite 단계 마우스 배아를 gastrula에 대부분 기관 시스템에 적용 되어야 합니다.

최종 데이터 분석의 품질 크게 (1) 무결성과 해 부 배아 및 (2) 높은 특이성 항 체의 사용, (3) 적절 한 설치 매개 변수를 이미징의 형태에 따라 달라 집니다. 손상 된 배아는 표면 생성 프로세스를 혼동 하 고 정량 분석을 방해 합니다. 제대로 해 부 및 무대 태아의 예는 그림 2B에 표시 됩니다. 배아는 항 체 자주 바인딩하는 것입니다 비-특히 노른자위 낭...

Watch this Scientific Journal Video about Quantitative Whole-mount Immunofluorescence Analysis of Cardiac Progenitor Populations in Mouse Embryos at JoVE.com

Quantitative Whole-mount Immunofluorescence Analysis of Cardiac Progenitor Populations in Mouse Embryos

여기, 우리는 전체 마운트 면역 형광 검사 및 초기 단계 마우스 배아의 양적 volumetric 분석 이미지 기반에 대 한 프로토콜을 설명합니다. 우리는 질적 및 양적 개발, 심장 구조를 평가 하 고 다른 기관 체계에 광범위 하 게 적응할 수 있을 수 있습니다 제안에 대 한 강력한 접근으로이 방법을 제시.

마우스 배아에서 심장 조상 인구의 양적 전체 마운트 면역 형광 분석

The use of ever-advancing imaging techniques has contributed broadly to our increased understanding of embryonic development. Pre-implantation development ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Analysis of Cardiomyocyte Development using Immunofluorescence in Embryonic Mouse Heart

배아 마우스 마음에 면역 형광을 이용하여 심근 개발 분석

During heart development, the generation of myocardial-specific structural and functional units including sarcomeres, contractile myofibrils, intercalated ...

연구

발생학

Quantitative Analysis of Protein Expression to Study Lineage Specification in Mouse Preimplantation Embryos

단백질 발현의 정량 분석​​은 마우스 착상 전의 배아에서 리니지 사양을 공부하기

This protocol presents a method to perform quantitative, single-cell in situ analyses of protein expression to study lineage specification in mouse ...

Multi-target Chromogenic Whole-mount In Situ Hybridization for Comparing Gene Expression Domains in Drosophila Embryos

Multi-target Chromogenic Whole-mount In Situ Hybridization for Comparing Gene Expression Domains in Drosophila Embryos

멀티 타겟 원체 전체 마운트<em&gt; 현장에서</em&gt; 하이브리드에서 유전자 발현의 도메인을 비교<em&gt; 초파리</em&gt; 배아

To analyze gene regulatory networks active during embryonic development and organogenesis it is essential to precisely define how the different genes are ...

Organ Culture and Whole Mount Immunofluorescence Staining of Mouse Wolffian Ducts

오르간 문화와 마우스 Wolffian 덕트의 전체 마운트 면역 형광 염색법

Tubal morphogenesis is a fundamental requirement for the development of most mammalian organs, including the male reproductive system. The epididymis, an ...

Visualizing Multiciliated Cells in the Zebrafish Through a Combined Protocol of Whole Mount Fluorescent In Situ Hybridization and Immunofluorescence

Visualizing Multiciliated Cells in the Zebrafish Through a Combined Protocol of Whole Mount Fluorescent In Situ Hybridization and Immunofluorescence

Multiciliated 셀 전체 마운트 형광 제자리에서 교 잡 및 면역 형광의 결합 된 프로토콜을 통해 Zebrafish에 시각화

In recent years, the zebrafish embryo has emerged as a popular model to study developmental biology due to traits such as ex utero embryo development and ...

Whole Mount Immunofluorescence and Follicle Quantification of Cultured Mouse Ovaries

전체 산 면역 형광 및 교양된 마우스 난소의 여 포 정량화

Research in the field of mammalian reproductive biology often involves evaluating the overall health of ovaries and testes. Specifically, in females, ...

Visualizing the Node and Notochordal Plate In Gastrulating Mouse Embryos Using Scanning Electron Microscopy and Whole Mount Immunofluorescence

노드 및 스캐닝 전자 현미경 검사 법, 면역 형광 산 전체를 사용 하 여 Gastrulating 마우스 배아에서 Notochordal 접시를 시각화

The post-implantation mouse embryo undergoes major shape changes after the initiation of gastrulation and morphogenesis. A hallmark of morphogenesis is ...

Analysis of Cardiac Chamber Development During Mouse Embryogenesis Using Whole Mount Epifluorescence

전체 산 Epifluorescence를 사용 하 여 마우스 Embryogenesis 동안 심장 챔버의 분석

The goal of this protocol is to describe a method for the dissection of mouse embryos and visualization of embryonic mouse ventricular chambers during ...

Whole Mount Immunohistochemistry in Zebrafish Embryos and Larvae

제브라피시 배아와 애벌레의 전체 마운트 면역항암화학

Immunohistochemistry is a widely used technique to explore protein expression and localization during both normal developmental and disease states. ...

Visualization and Analysis of Pharyngeal Arch Arteries using Whole-mount Immunohistochemistry and 3D Reconstruction

전체 마운트 면역 조직 화학 및 3D 재건을 사용하여 인두 아치 동맥의 시각화 및 분석

Improper formation or remodeling of the pharyngeal arch arteries (PAAs) 3, 4, and 6 contribute to some of the most severe forms of congenital heart ...