Name: sample preparation and imaging of exosomes by transmission electron microscopy
Uploaded: 2018-01-04T13:00:00
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इस शोध का समर्थन बायो & #38; नेशनल रिसर्च फाउंडेशन (एनआरएफ) के मेडिकल टेक्नोलॉजी डेवलपमेंट प्रोग्राम & #38; कोरियन सरकार (MSIP & #38; MOHW) (No. 2016M3A9B6904244) द्वारा वित्तपोषित । हम भी exosome के शुद्धिकरण के लिए औषधीय अभिसरण अनुसंधान केंद्र के सदस्यों को धंयवाद ।

1. ब्लॉक तैयारी, अनुभाग, धुंधला और Exosome की इमेजिंग
<ol>
	<li>HCT116 कोशिकाओं की संस्कृति supernatant से exosomes गोली १००,००० x जी के लिए १.५ ज23पर केंद्रापसारक द्वारा । संस्कृति supernatant निकालें और ध्यान से शुद्ध exosome गोली 1 के ?...

<ol>
	<li>Friend, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Observations+on+cell+lines+derived+from+a+patient+with+Hodgkin's+disease.">Observations on cell lines derived from a patient with Hodgkin's disease.</a> Cancer Res. 38 (8), 2581-2591 (1978).</li><li>Dvorak, H. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+shedding+and+coagulation.">Tumor shedding and coagulation.</a> Science. 212 (4497), 923-924 (1981).</li><li>Zaborowski, M. P., Balaj, L., Breakefield, X. O., Lai, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+Vesicles:+Composition,+Biological+Relevance,+and+Methods+of+Study.">Extracellular Vesicles: Composition, Biological Relevance, and Methods of Study.</a> Bioscience. 65 (8), 783-797 (2015).</li><li>Yanez-Mo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+properties+of+extracellular+vesicles+and+their+physiological+functions.">Biological properties of extracellular vesicles and their physiological functions.</a> J Extracell Vesicles. 4, 27066 (2015).</li><li>Wu, Y., Deng, W., Klinke, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exosomes:+improved+methods+to+characterize+their+morphology,+RNA+content,+and+surface+protein+biomarkers.">Exosomes: improved methods to characterize their morphology, RNA content, and surface protein biomarkers.</a> Analyst. 140 (19), 6631-6642 (2015).</li><li>Gyorgy, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Membrane+vesicles,+current+state-of-the-art:+emerging+role+of+extracellular+vesicles.">Membrane vesicles, current state-of-the-art: emerging role of extracellular vesicles.</a> Cell Mol Life Sci. 68 (16), 2667-2688 (2011).</li><li>Barile, L., Vassalli, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exosomes:+Therapy+delivery+tools+and+biomarkers+of+diseases.">Exosomes: Therapy delivery tools and biomarkers of diseases.</a> Pharmacol Ther. , (2017).</li><li>Vlassov, A. V., Magdaleno, S., Setterquist, R., Conrad, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exosomes:+current+knowledge+of+their+composition,+biological+functions,+and+diagnostic+and+therapeutic+potentials.">Exosomes: current knowledge of their composition, biological functions, and diagnostic and therapeutic potentials.</a> Biochim Biophys Acta. 1820 (7), 940-948 (2012).</li><li>Villarroya-Beltri, C., Baixauli, F., Gutierrez-Vazquez, C., Sanchez-Madrid, F., Mittelbrunn, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sorting+it+out:+regulation+of+exosome+loading.">Sorting it out: regulation of exosome loading.</a> Semin Cancer Biol. 28, 3-13 (2014).</li><li>Thery, C., Ostrowski, M., Segura, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Membrane+vesicles+as+conveyors+of+immune+responses.">Membrane vesicles as conveyors of immune responses.</a> Nat Rev Immunol. 9 (8), 581-593 (2009).</li><li>Camussi, G., Deregibus, M. C., Bruno, S., Cantaluppi, V., Biancone, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exosomes/microvesicles+as+a+mechanism+of+cell-to-cell+communication.">Exosomes/microvesicles as a mechanism of cell-to-cell communication.</a> Kidney Int. 78 (9), 838-848 (2010).</li><li>Zaharie, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exosome-Carried+microRNA-375+Inhibits+Cell+Progression+and+Dissemination+via+Bcl-2+Blocking+in+Colon+Cancer.">Exosome-Carried microRNA-375 Inhibits Cell Progression and Dissemination via Bcl-2 Blocking in Colon Cancer.</a> J Gastrointestin Liver Dis. 24 (4), 435-443 (2015).</li><li>Fuhrmann, G., Neuer, A. L., Herrmann, I. 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W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+particle+electron+microscopy+reconstruction+of+the+exosome+complex+using+the+random+conical+tilt+method.">Single particle electron microscopy reconstruction of the exosome complex using the random conical tilt method.</a> J Vis Exp. (49), (2011).</li><li>Wang, J., Yao, Y., Wu, J., Li, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+analysis+of+exosomes+secreted+from+macrophages+extracted+by+different+methods.">Identification and analysis of exosomes secreted from macrophages extracted by different methods.</a> Int J Clin Exp Pathol. 8 (6), 6135-6142 (2015).</li><li>Thery, C., Amigorena, S., Raposo, G., Clayton, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+exosomes+from+cell+culture+supernatants+and+biological+fluids.">Isolation and characterization of exosomes from cell culture supernatants and biological fluids.</a> Curr Protoc Cell Biol. , 22 (2006).</li><li>Mazzeo, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exosome+secretion+by+eosinophils:+A+possible+role+in+asthma+pathogenesis.">Exosome secretion by eosinophils: A possible role in asthma pathogenesis.</a> J Allergy Clin Immunol. 135 (6), 1603-1613 (2015).</li><li>Sokolova, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterisation+of+exosomes+derived+from+human+cells+by+nanoparticle+tracking+analysis+and+scanning+electron+microscopy.">Characterisation of exosomes derived from human cells by nanoparticle tracking analysis and scanning electron microscopy.</a> Colloids Surf B Biointerfaces. 87 (1), 146-150 (2011).</li><li>Sharma, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural-mechanical+characterization+of+nanoparticle+exosomes+in+human+saliva,+using+correlative+AFM,+FESEM,+and+force+spectroscopy.">Structural-mechanical characterization of nanoparticle exosomes in human saliva, using correlative AFM, FESEM, and force spectroscopy.</a> ACS Nano. 4 (4), 1921-1926 (2010).</li><li>Raposo, G., Stoorvogel, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+vesicles:+exosomes,+microvesicles,+and+friends.">Extracellular vesicles: exosomes, microvesicles, and friends.</a> J Cell Biol. 200 (4), 373-383 (2013).</li><li>Bosch, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trehalose+prevents+aggregation+of+exosomes+and+cryodamage.">Trehalose prevents aggregation of exosomes and cryodamage.</a> Sci Rep. 6, 36162 (2016).</li><li>Lobb, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+exosome+isolation+protocol+for+cell+culture+supernatant+and+human+plasma.">Optimized exosome isolation protocol for cell culture supernatant and human plasma.</a> J Extracell Vesicles. 4, 27031 (2015).</li><li>Kim, S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caspase-8+controls+the+secretion+of+inflammatory+lysyl-tRNA+synthetase+in+exosomes+from+cancer+cells.">Caspase-8 controls the secretion of inflammatory lysyl-tRNA synthetase in exosomes from cancer cells.</a> J Cell Biol. , (2017).</li><li>Conde-Vancells, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+and+comprehensive+proteome+profiling+of+exosomes+secreted+by+hepatocytes.">Characterization and comprehensive proteome profiling of exosomes secreted by hepatocytes.</a> J Proteome Res. 7 (12), 5157-5166 (2008).</li><li>Kadiu, I., Narayanasamy, P., Dash, P. K., Zhang, W., Gendelman, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biochemical+and+biologic+characterization+of+exosomes+and+microvesicles+as+facilitators+of+HIV-1+infection+in+macrophages.">Biochemical and biologic characterization of exosomes and microvesicles as facilitators of HIV-1 infection in macrophages.</a> J Immunol. 189 (2), 744-754 (2012).</li><li>Gong, J., Korner, R., Gaitanos, L., Klein, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exosomes+mediate+cell+contact-independent+ephrin-Eph+signaling+during+axon+guidance.">Exosomes mediate cell contact-independent ephrin-Eph signaling during axon guidance.</a> J Cell Biol. 214 (1), 35-44 (2016).</li><li>Melo, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glypican-1+identifies+cancer+exosomes+and+detects+early+pancreatic+cancer.">Glypican-1 identifies cancer exosomes and detects early pancreatic cancer.</a> Nature. 523 (7559), 177-182 (2015).</li><li>Valadi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exosome-mediated+transfer+of+mRNAs+and+microRNAs+is+a+novel+mechanism+of+genetic+exchange+between+cells.">Exosome-mediated transfer of mRNAs and microRNAs is a novel mechanism of genetic exchange between cells.</a> Nat Cell Biol. 9 (6), 654-659 (2007).</li><li>van Niel, G., Heyman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+epithelial+cell+cytoskeleton+and+intracellular+trafficking.+II.+Intestinal+epithelial+cell+exosomes:+perspectives+on+their+structure+and+function.">The epithelial cell cytoskeleton and intracellular trafficking. II. Intestinal epithelial cell exosomes: perspectives on their structure and function.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 283 (2), G251-G255 (2002).</li></ol>

यह लेख विस्तृत exosome की संरचना और उसके विशिष्ट प्रोटीन के लेबल देख के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करता है । नकारात्मक धुंधला exosome इमेजिंग17के लिए सबसे अच्छी विधि के रूप में माना गया है । इस पारंपरिक त?...

Extracellular बुलबुले (ईवीएस) लिपिड bilayer बुलबुले कोशिकाओं द्वारा स्रावित कर रहे हैं, और उनके आकार 30 और ३०० एनएम के बीच पर्वतमाला । ईवीएस पहले १९७८ में रिपोर्ट किया गया है Hodgkin रोग1के साथ रोगियों के बुलबुले से सबूत के साथ । इन बुलबुले के आकार में ४० से १२० nanometers होने की सूचना थी । १९८० में, यह बताया गया कि ईवीएस जमावट प्रणाली और घनास्त्रता, कैंसर रोगियों में एक रक्त वाहिनियों के अंदर एक खून का थक्का के गठन में शामिल कर रहे हैं2. 30 साल के बाद, ईवीएस को ट्यूमर के आक्रमण को बढ़ावा देने के लिए एक महत्वपूर्ण कारक होने की सूचना दी गई है, प्रतिरक्षा भागने, और angiogenesis3। इसके अलावा, ईवीएस के कार्य सूजन के क्षेत्रों में सेलुलर बातचीत में नियामकों के रूप में अध्ययन किया गया है, प्रतिरक्षा विकार, स्नायविक रोग, और कैंसर4. चूंकि ईवीएस प्रोटीन, mRNA, और microRNA5के रूप में विशिष्ट अणुओं होते हैं, निदान और चिकित्सकीय में अपने संभावित आवेदन6,7विश्लेषण किया गया है । ईवीएस exosomes, prostasomes, oncosomes, dexosomes, microparticles, promininosomes, argosomes, और exosome-बुलबुले की तरह, अपने सेलुलर मूल और जैविक समारोह3के आधार पर सहित उपसमूहों से बना एक वर्ग हैं । इसके अलावा, उनकी उत्पत्ति के आधार पर, इन ईवीएस microvesicles (शेड microvesicles, १००-१००० एनएम) और exosomes (30-300 एनएम)8, 9 में विभाजित किया जा सकता है । इनमें से, exosome प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया10, कैंसर11,12, और संक्रामक रोग13के लिए एक सेल कम्युनिकेटर के रूप में सूचित किया गया है ।
प्रारंभिक निदान के लिए एक exosomes के रूप में ब्याज तेजी से बढ़ती जा रही है, और exosomes के शुद्धिकरण और लक्षण वर्णन आणविक इमेजिंग तकनीक के साथ किया जाना चाहिए । अलग आकार और exosomes के morphologies, उनके मूल और समारोह के आधार पर14, ऐसे इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी के रूप में उच्च संकल्प, के साथ सूक्ष्म तकनीक द्वारा प्रतिष्ठित किया जा सकता है । अधिकांश exosomes नकारात्मक सना हुआ संचरण इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी (उनि)15,16,17, और इन परिणामों की पुष्टि की गई पूरे माउंट में एक विशिष्ट प्रोटीन के immunolabeling द्वारा किए गए थे पुटिका 18. कई अनुसंधान समूहों स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी, परमाणु बल माइक्रोस्कोपी19,20, और क्रायो-उनि21,22के माध्यम से संरचना की सूचना दी है । हालांकि, जबकि इन तकनीकों exosome संरचना का अध्ययन करने के लिए उपयोगी होते हैं, वे exosome अंदर स्थित विशिष्ट प्रोटीन की स्थिति देख के लिए अपर्याप्त हैं । इसलिए, हम एक विशिष्ट है प्रोटीन लेबलिंग के साथ इमेजिंग exosomes के लिए एक प्रोटोकॉल की शुरुआत की । हम exosome में प्रोटीन के विस्तृत स्थान का पता लगाने के लिए ब्लॉक तैयारी, ultrathin अनुभाग, और immunostaining लागू । इस नकारात्मक धुंधला और पूरे माउंट immunostaining, जो परंपरागत रूप से exosome के लक्षण वर्णन के लिए प्रयोग किया जाता है के साथ तुलना की गई ।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="583">
	<tbody>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Glutaraldehyde</td>
			<td style="width:81px;">EMS</td>
			<td style="width:119px;">16200</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Sodium cacodylate&#160;</td>
			<td>EMS</td>
			<td style="width:119px;">12300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Osmium tetroxide 1 g crystal</td>
			<td>EMS</td>
			<td style="width:119px;">19100</td>
			<td>Use only in fume hood</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">acetone</td>
			<td>JUNSEI</td>
			<td>1B2031</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Spurr medium</td>
			<td>TED PELLA</td>
			<td style="width:119px;">18108</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Ultra-microtome</td>
			<td style="width:81px;">Leica</td>
			<td style="width:119px;">UCT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Uranyl acetate</td>
			<td>EMS</td>
			<td style="width:119px;">22400</td>
			<td>Hazardous chemical</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Lead citrate</td>
			<td>EMS</td>
			<td style="width:119px;">17900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Transmission Electron Microscopy</td>
			<td style="width:81px;">Hitachi</td>
			<td style="width:119px;">H7600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">nickel grid</td>
			<td style="width:81px;">EMS</td>
			<td style="width:119px;">G200-Ni</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Copper grid</td>
			<td>EMS</td>
			<td style="width:119px;">G200-Cu</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">glycine</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>022K5404</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Phosphate buffer saline</td>
			<td style="width:81px;">SIGMA</td>
			<td style="width:119px;">P4417</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Bovine serum albumin</td>
			<td style="width:81px;">Aurion</td>
			<td style="width:119px;">25557</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">1st Antibody</td>
			<td style="width:81px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">purification in manually&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Purified anti-human CD274 (B7-H1, PD-L1) Antibody</td>
			<td style="width:81px;">BioLegend</td>
			<td style="width:119px;">329710</td>
			<td style="width:167px;">Whole mount Immumogold</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Purified Mouse IgG2b, &#954; Isotype Ctrl</td>
			<td style="width:81px;">BioLegend</td>
			<td style="width:119px;">401202</td>
			<td style="width:167px;">Whole mount Immumogold (Control)</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">2nd Anti-mouse igG conjugated 9-11 nm gold particle</td>
			<td style="width:81px;">sigma</td>
			<td style="width:119px;">G7652</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">silver paint</td>
			<td style="width:81px;">CANS</td>
			<td style="width:119px;">CTP100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">aluminum stub</td>
			<td style="width:81px;">EMS</td>
			<td style="width:119px;">75622</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">FIB-SEM</td>
			<td style="width:81px;">Zeiss</td>
			<td style="width:119px;">AURIGA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Transmission Electron Microscopy</td>
			<td style="width:81px;">JEOL</td>
			<td style="width:119px;">JEM2200FS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Glow discharger</td>
			<td style="width:81px;">JEOL</td>
			<td style="width:119px;">JFC1100E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Carbon grid</td>
			<td>EMS</td>
			<td style="width:119px;">121119</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Paraformaldehyde</td>
			<td>EMS</td>
			<td style="width:119px;">19210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">Formvar carbon coated Copper Grid (200 meh)</td>
			<td style="width:81px;">EMS</td>
			<td style="width:119px;">FCF200-CU</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">Formvar carbon coated&#160; Nickel Grid (200 mesh)</td>
			<td style="width:81px;">EMS</td>
			<td style="width:119px;">FCF200-NI</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
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sample preparation and imaging of exosomes by transmission electron microscopy

Exosomes नैनो-आकार extracellular बुलबुले शरीर के तरल पदार्थ से स्रावित होते हैं और उन्हें गुप्त कोशिकाओं की विशेषताओं का प्रतिनिधित्व करने के लिए जाना जाता है । सामग्री और स्रावित बुलबुले के आकृति विज्ञान सेल व्यवहार या शारीरिक स्थिति को प्रतिबिंबित, उदाहरण के लिए सेल विकास, प्रवास, दरार, और मौत. exosomes ' भूमिका अत्यधिक आकार पर निर्भर हो सकता है, और exosomes का आकार 30 से ३०० एनएम के लिए बदलता है । exosome इमेजिंग के लिए सबसे व्यापक रूप से इस्तेमाल किया विधि नकारात्मक धुंधला है, जबकि अंय परिणाम क्रायो-संचरण इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी, स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी, और परमाणु शक्ति माइक्रोस्कोपी पर आधारित हैं । ठेठ exosome की आकृति विज्ञान नकारात्मक धुंधला के माध्यम से मूल्यांकन एक कप आकार है, लेकिन आगे विवरण अभी तक स्पष्ट नहीं कर रहे हैं । एक अच्छी तरह से संरचनात्मक अध्ययन के माध्यम से विशेषता exosome चिकित्सा और दवा क्षेत्रों में विशेष रूप से आवश्यक है । इसलिए, फ़ंक्शन-निर्भर आकृति विज्ञान exosome की विस्तृत संरचना में एक विशिष्ट प्रोटीन लेबलिंग जैसे इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी तकनीक द्वारा सत्यापित किया जाना चाहिए । विस्तृत संरचना का निरीक्षण करने के लिए, ultrathin खोदी छवियों और exosomes के नकारात्मक दाग छवियों की तुलना में थे । इस प्रोटोकॉल में, हम नकारात्मक धुंधला, पूरे माउंट bliss-धुंधला, ब्लॉक तैयारी, पतले सेक्शन, और bliss-गोल्ड लेबलिंग सहित exosomes के इमेजिंग के लिए ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी का सुझाव देते हैं ।

वर्तमान में, exosomes आकार और आकार श्रेणियों में संचरण इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी द्वारा वर्गीकृत कर रहे हैं । चित्रा 2 पूरे माउंट स्थिति में नकारात्मक दाग exosome और प्रतिरक्षा लेबल exosome स?...

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Sample Preparation and Imaging of Exosomes by Transmission Electron Microscopy

ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी द्वारा Exosomes की नमूना तैयारी और इमेजिंग

यह प्रोटोकॉल विस्तृत संरचना के लिए ऋणात्मक धुंधलान, ultrathin सेक्शनिंग सहित ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी के लिए आवश्यक विभिन्न तकनीकों का वर्णन करता है, और exosomes में विशिष्ट प्रोटीन की स्थिति निर्धारित करने के लिए bliss-गोल्ड ्र ।

Exosomes are nano-sized extracellular vesicles secreted by body fluids and are known to represent the characteristics of cells that secrete them. The ...

Research

JoVE Journal

Biology

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

भ्रूण की इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी के लिए तैयार ड्रोसोफिला भ्रूण दिल ट्यूब

The morphogenesis of the Drosophila  embryonic heart tube has emerged as a valuable model system for studying cell migration, cell-cell adhesion and cell ...

Sample Preparation for Single Virion Atomic Force Microscopy and Super-resolution Fluorescence Imaging

एकल वीरीय परमाणु बल माइक्रोस्कोपी और सुपर-रेजोल्यूशन फ्लोरेसेंस इमेजिंग के लिए नमूना तैयारी

Immobilization of virions to glass surfaces is a critical step in single virion imaging. Here we present a technique&#160;adopted from single molecule ...

Cryo-electron Microscopy Specimen Preparation By Means Of a Focused Ion Beam

एक केंद्रित आयन बीम क्रायो इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी नमूना तैयार करना का साधन

Here we present a protocol used to prepare cryo-TEM samples of Aspergillus niger spores, but which can easily be adapted for any number of microorganisms ...

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

वयस्क माउस Calvarial अस्थि मज्जा में hematopoietic स्टेम और पूर्वपुस्र्ष कोशिकाओं के Vivo 4 आयामी ट्रैकिंग में

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

Tandem High-pressure Freezing and Quick Freeze Substitution of Plant Tissues for Transmission Electron Microscopy

मिलकर उच्च दबाव बर्फ़ीली और ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी के लिए संयंत्र के ऊतकों के त्वरित रुक प्रतिस्थापन

Since the 1940s transmission electron microscopy (TEM) has been providing biologists with ultra-high resolution images of biological materials. Yet, ...

Do's and Don'ts of Cryo-electron Microscopy: A Primer on Sample Preparation and High Quality Data Collection for Macromolecular 3D Reconstruction

MACROMOLECULAR 3D पुनर्निर्माण के लिए एक नमूना तैयार करने पर प्राइमर और उच्च गुणवत्ता वाले डेटा संग्रह: क्रायो-इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी की है और don&#39;ts

Cryo-electron microscopy (cryoEM) entails flash-freezing a thin layer of sample on a support, and then visualizing the sample in its frozen hydrated state ...

Preparation and Observation of Thick Biological Samples by Scanning Transmission Electron Tomography

तैयारी और मोटी जैविक नमूने का अवलोकन स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन टोमोग्राफी ट्रांसमिशन द्वारा

This report describes a protocol for preparing thick biological specimens for further observation using a scanning transmission electron microscope. It ...

Miniaturized Sample Preparation for Transmission Electron Microscopy

ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी के लिए लघुकृत नमूना तैयारी

Due to recent technological progress, cryo-electron microscopy (cryo-EM) is rapidly becoming a standard method for the structural analysis of protein ...

Biological Sample Preparation by High-pressure Freezing, Microwave-assisted Contrast Enhancement, and Minimal Resin Embedding for Volume Imaging

उच्च दबाव ठंड, माइक्रोवेव की सहायता के विपरीत वृद्धि, और मात्रा इमेजिंग के लिए ंयूनतम राल Embedding द्वारा जैविक नमूना तैयारी

The described sample preparation technique is designed to combine the best quality of ultrastructural preservation with the most suitable contrast for the ...