Name: a primary human trophoblast model to study the effect of inflammation associated with maternal obesity on regulation of autophagy in the placenta
Uploaded: 2017-09-27T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Primary Human Trophoblast Model to Study the Effect of Inflammation Associated with Maternal Obesity on Regulation of Autophagy in the Placenta at JoVE.com

يشكر المؤلفون النساء الذين تبرعوا مشيمة لهذه الدراسة. ونشكر أيضا بتسليم إدارة OHSU والأم والجنين من فريق البحث والعمل لتنسيق جمع مشيمة. نحن ممتنون لاريك وانغ، دكتوراه، وكيلي كو، العضو المنتدب للدعم والمساعدة بطرق تجريبية والتحسين.
تم تمويل هذا العمل من قبل HD076259A المعاهد الوطنية للصحة (صباحا) واها GRNT29960007 (ص).

مترافق جمعت من وحدة تسليم مستشفى الجامعة والعمل تحت بروتوكول أقرته المؤسسية استعراض المجلس لولاية أوريغون للصحة والعلوم في جامعة في بورتلاند، أوريغون، مع الموافقة المستنيرة من المرضى.
 1-"جمع الأنسجة المشيمية" <ol><li>إعداد ملاحظة: يجب أن تكون جميع المعدات التي و...

<ol>
	<li>Gregor, M. F., Hotamisligil, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+mechanisms+in+obesity.">Inflammatory mechanisms in obesity.</a> Annu. Rev. Immunol. 29, 415-445 (2011).</li><li>van Horssen, R., Ten Hagen, T. L. M., Eggermont, A. M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TNF-alpha+in+cancer+treatment:+molecular+insights,+antitumor+effects,+and+clinical+utility.">TNF-alpha in cancer treatment: molecular insights, antitumor effects, and clinical utility.</a> Oncologist. 11 (4), 397-408 (2006).</li><li>Yogev, Y., Catalano, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pregnancy+and+obesity.">Pregnancy and obesity.</a> Obstet. Gynecol. Clin. North Am. 36 (2), 285-300 (2009).</li><li>Basu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pregravid+obesity+associates+with+increased+maternal+endotoxemia+and+metabolic+inflammation.">Pregravid obesity associates with increased maternal endotoxemia and metabolic inflammation.</a> Obesity (Silver Spring). 19 (3), 476-482 (2011).</li><li>Muralimanoharan, S., Guo, C., Myatt, L., Maloyan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sexual+dimorphism+in+miR-210+expression+and+mitochondrial+dysfunction+in+the+placenta+with+maternal+obesity.">Sexual dimorphism in miR-210 expression and mitochondrial dysfunction in the placenta with maternal obesity.</a> Int J Obes (Lond). 39 (8), 1274-1281 (2015).</li><li>Myatt, L., Maloyan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Obesity+and+placental+function.">Obesity and placental function.</a> Semin. Reprod. Med. 34 (1), 42-49 (2016).</li><li>Aune, D., Saugstad, O. D., Henriksen, T., Tonstad, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maternal+body+mass+index+and+the+risk+of+fetal+death,+stillbirth,+and+infant+death:+a+systematic+review+and+meta-analysis.">Maternal body mass index and the risk of fetal death, stillbirth, and infant death: a systematic review and meta-analysis.</a> JAMA. 311 (15), 1536-1546 (2014).</li><li>Eriksson, J. G., Kajantie, E., Osmond, C., Thornburg, K., Barker, D. J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Boys+live+dangerously+in+the+womb.">Boys live dangerously in the womb.</a> Am. J. Hum. Biol. 22 (3), 330-335 (2010).</li><li>Kliman, H. J., Knobil, E., Neill, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trophoblast+to+human+placenta.">Trophoblast to human placenta.</a> Enc. Reprod. 4, 834-846 (1999).</li><li>Kliman, H. J., Nestler, J. E., Sermasi, E., Sanger, J. M., Strauss, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification,+characterization,+and+in+vitro+differentiation+of+cytotrophoblasts+from+human+term+placentae.">Purification, characterization, and in vitro differentiation of cytotrophoblasts from human term placentae.</a> Endocrinology. 118 (4), 1567-1582 (1986).</li><li>Bax, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrastructural+changes+and+immunocytochemical+analysis+of+human+placental+trophoblast+during+short-term+culture.">Ultrastructural changes and immunocytochemical analysis of human placental trophoblast during short-term culture.</a> Placenta. 10 (2), 179-194 (1989).</li><li>Le Bellego, F., Vaillancourt, C., Lafond, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+culture+of+term+human+cytotrophoblast+cells+and+in+vitro+methods+for+studying+human+cytotrophoblast+cells'+calcium+uptake.">Isolation and culture of term human cytotrophoblast cells and in vitro methods for studying human cytotrophoblast cells' calcium uptake.</a> Methods Mol. Biol. 550, 73-87 (2009).</li><li>Muralimanoharan, S., Gao, X., Weintraub, S., Myatt, L., Maloyan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sexual+dimorphism+in+activation+of+placental+autophagy+in+obese+women+with+evidence+for+fetal+programming+from+a+placenta-specific+mouse+model.">Sexual dimorphism in activation of placental autophagy in obese women with evidence for fetal programming from a placenta-specific mouse model.</a> Autophagy. 12 (5), 752-769 (2016).</li><li>Matsunaga, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two+Beclin+1-binding+proteins,+Atg14L+and+Rubicon,+reciprocally+regulate+autophagy+at+different+stages.">Two Beclin 1-binding proteins, Atg14L and Rubicon, reciprocally regulate autophagy at different stages.</a> Nat. Cell. Biol. 11 (4), 385-396 (2009).</li><li>Zhong, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+regulation+of+autophagic+activity+by+Atg14L+and+Rubicon+associated+with+Beclin+1-phosphatidylinositol-3-kinase+complex.">Distinct regulation of autophagic activity by Atg14L and Rubicon associated with Beclin 1-phosphatidylinositol-3-kinase complex.</a> Nat. Cell. Biol. 11 (4), 468-476 (2009).</li><li>Yang, C. -. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autophagy+Protein+Rubicon+Mediates+Phagocytic+NADPH+Oxidase+Activation+in+Response+to+Microbial+Infection+or+TLR+Stimulation.">Autophagy Protein Rubicon Mediates Phagocytic NADPH Oxidase Activation in Response to Microbial Infection or TLR Stimulation.</a> Cell Host &amp; Microbe. 11 (3), 264-276 (2012).</li><li>Yang, C. -. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Autophagy+Regulator+Rubicon+Is+a+Feedback+Inhibitor+of+CARD9-Mediated+Host+Innate+Immunity.">The Autophagy Regulator Rubicon Is a Feedback Inhibitor of CARD9-Mediated Host Innate Immunity.</a> Cell Host &amp; Microbe. 11 (3), 277-289 (2012).</li><li>Zi, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rubicon+deficiency+enhances+cardiac+autophagy+and+protects+mice+from+lipopolysaccharide-induced+lethality+and+reduction+in+stroke+volume.">Rubicon deficiency enhances cardiac autophagy and protects mice from lipopolysaccharide-induced lethality and reduction in stroke volume.</a> J. Cardiovasc. Pharmacol. 65 (3), 252-261 (2015).</li><li>Mele, J., Muralimanoharan, S., Maloyan, A., Myatt, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+mitochondrial+function+in+human+placenta+with+increased+maternal+adiposity.">Impaired mitochondrial function in human placenta with increased maternal adiposity.</a> Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab. 307 (5), E419-E425 (2014).</li><li>Mor, G., Cardenas, I., Abrahams, V., Guller, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation+and+pregnancy:+the+role+of+the+immune+system+at+the+implantation+site.">Inflammation and pregnancy: the role of the immune system at the implantation site.</a> Ann N Y Acad Sci. 1221 (1), 80-87 (2011).</li><li>Resi, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+inflammation+and+adipose+tissue+matrix+remodeling+precede+physiological+adaptations+to+pregnancy.">Molecular inflammation and adipose tissue matrix remodeling precede physiological adaptations to pregnancy.</a> Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab. 303 (7), E832-E840 (2012).</li><li>Levine, B., Mizushima, N., Virgin, H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autophagy+in+immunity+and+inflammation.">Autophagy in immunity and inflammation.</a> Nature. 469 (7330), 323-335 (2011).</li><li>Virgin, H. W., Levine, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autophagy+genes+in+immunity.">Autophagy genes in immunity.</a> Nat. Immunol. 10 (5), 461-470 (2009).</li><li>Sagrillo-Fagundes, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+Primary+Trophoblast+Cell+Culture+Model+to+Study+the+Protective+Effects+of+Melatonin+Against+Hypoxia/reoxygenation-induced+Disruption.">Human Primary Trophoblast Cell Culture Model to Study the Protective Effects of Melatonin Against Hypoxia/reoxygenation-induced Disruption.</a> JoVE. (113), (2016).</li><li>Segovia, S. A., Vickers, M. H., Gray, C., Reynolds, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maternal+obesity,+inflammation,+and+developmental+programming.">Maternal obesity, inflammation, and developmental programming.</a> Biomed. Res. Int. , 418975 (2014).</li><li>Komatsu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+necrosis+factor-alpha+in+serum+of+patients+with+inflammatory+bowel+disease+as+measured+by+a+highly+sensitive+immuno-PCR.">Tumor necrosis factor-alpha in serum of patients with inflammatory bowel disease as measured by a highly sensitive immuno-PCR.</a> Clin. Chem. 47 (7), 1297-1301 (2001).</li><li>Matsunaga, K., Noda, T., Yoshimori, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Binding+Rubicon+to+cross+the+Rubicon.">Binding Rubicon to cross the Rubicon.</a> Autophagy. 5 (6), 876-877 (2009).</li></ol>

المشيمة، المسؤولة عن تنظيم نمو الجنين، يسلك الدالة الشبهة في البيئة السمنة6. على الرغم من مطالب الأيضية العالية تروفوبلاستس، يحمل مشيمة مع السمنة الأمهات التنفس المتقدرية مختلة6،19. التغييرات في استقلاب المشيمة قد تسهم في ازدياد نسبة الإصابة ب...

السمنة حالة التهاب تتميز بالتهاب مزمن منخفض التخصيب، النابعة من الأنسجة الدهنية الزائدة وتوافر المغذيات. في السمنة، السيتوكينات proinflammatory مرتفعة في الأنسجة الأيضية وكذلك عناصره في الدورة الدموية. وقد أظهرت مجموعة قوية من الأدلة أن TNFα إلى حد كبير مرتفعة في الإعداد للسمنة مع الآثار في مقاومة الأنسولين والخلل الأيضي1. كما يساهم تنشيط TNFα إمراضية المرض في ظروف مثل السرطان والمناعة الذاتية، مما يجعل هدف علاجي جذاباً2.
ويتفاقم التهاب في السمنة قبل الحمل، وأيضا proinflammatory دولة3،4. لقد ثبت سابقا أن المشيمة TNFα المحتوى يزيد مع أديبوسيتي الأم في الحمل مع الأجنة الإناث. وعلاوة على ذلك، يمنع العلاج TNFα التنفس المتقدرية في الخلايا تروفوبلست الإناث ولكن ليس من الذكور، مما يوحي بأن TNFα تشارك في تنظيم الأيض المشيمية في ديمبرافيك جنسياً نحو5. بدانة الأمهات يرتبط بازدياد نسبة الإصابة بمجموعة متنوعة من مضاعفات أثناء الحمل، بما في ذلك حالات الاملاص، مع الأجنة الذكور يجري الأكثر عرضه3،،من67،8 . بسبب دورها الرئيسي في الواجهة الأم الجنين، التغيرات في القدرة الوظيفية للمشيمة في البيئة داخل الرحم السمنة استجابة لإشارات تحريضية قد تلعب دوراً مهما في التوسط لنتائج الحمل يعانون من السمنة المفرطة.
سيتوتروفوبلاستس وسينسيتيوتروفوبلاستس في الأنسجة فيلوس المشيمة حاسمة بالنسبة لإشارات الغدد الصماء وتبادل المغذيات والأكسجين بين الأم و الجنين النامي9. اضطرابات في القدرة الوظيفية في فيلوس سيتوتروفوبلاستس (يشار إليه فيما يلي trophoblasts) قد تعرض للخطر صحة الجنين والتنمية. يصف هذا البروتوكول وسيلة لأخذ عينات أنسجة فيلوس من المشيمة البشرية مصطلح بتشريح بعيداً من لوحات المشيمة والقاعدية جنبا إلى جنب مع إجراء أمثل لعزل تروفوبلاستس لثقافة الخلية الابتدائية. يتم اشتقاق هذا البروتوكول من المنهجيات المحددة التي تنطوي على الهضم الأنزيمي فيلوس الأنسجة لتحرير الخلايا في المصفوفة خارج الخلية متبوعاً بالطرد المركزي كثافة التفاضلية لعزل تروفوبلاستس10، 11،12. تفاصيل البروتوكول هذا نهج الذي تعامل trophoblasts الأولية من مشيمة من الحمل الهزيل مع وسائط الثقافة تستكمل مع TNFα محاكاة عنصر واحد من الوسط التحريضية المرتبطة بالسمنة الأمهات. وأخيراً، يرد وصف إجراءات بسيطة لحصاد ليساتيس خلية الإجمالي من تعامل TNFα trophoblasts تليها الغربية النشاف للكشف عن التغييرات في التعبير الجيني.
حين الخص هذا النموذج لا أوبيسوجينيك البيئة في الرحم في مجملها، يوفر نظام الخاضعة للرقابة أن يسمح أحد لتحليل خارج مساهمة فردية من التهاب بوساطة TNFα trophoblasts ' وردا على بدانة الأمهات. هذا النموذج يتيح الفرصة لاكتشاف أو تأكيد الأهداف الجزيئية التي تنظم مباشرة مما يشير إلى TNFα في تروفوبلاستس على حد سواء، فضلا عن يسمح أحد لاختبار ما إذا كانت التغيرات في أنماط التعبير الجيني لوحظت في فيفو في مشيمة مع الأمهات السمنة قد تكون نتيجة لالتهاب بوساطة TNFα.
تم تنفيذ النهج المذكور هنا لاختبار أثر وساطة TNFα التهاب على تنظيم أوتوفاجي في تروفوبلاستس البشرية. تروفوبلاستس من الحمل السمنة مع معرض الأجنة الذكور تعطل دوران أوتوفاجيك، أو أوتوفاجوسومي نضوج13. بروتين يسمى خطوة جريئة (تشغيل المجال البروتين التفاعل Beclin1 والغنية سيستين يحتوي على)، الذي هو مترجم إلى ليسوسوميس واندوسوميس الراحل، ومؤخرا وصفت بأنها "فرامل" في عملية دوران أوتوفاجيك لأنه يعمل كصورة سلبية منظم أوتوفاجوسومي نضوج14،15. في الواقع، هو خطوة جريئة مثال نادرة من البروتين الذي يقيد أوتوفاجي، مما يجعلها هدفا قيماً علاجية. يتوفر سوى القليل من المعلومات حول أهمية الفيزيولوجية المرضية لخطوة جريئة، باستثناء دورها في الاستجابة المناعية الفطرية للميكروبات16،17 وكارديوميوسيتي حماية18. باستخدام بروتوكول الموصوفة هنا، أنها وجدت أن خطوة جريئة من أوبريجولاتيد في تروفوبلاستس الابتدائي الإناث في الاستجابة للعلاج مع زيادة تركيزات TNFα ما يصل إلى 250 بيكوغرام/مل. تنظيم خطوة جريئة قد تلعب دوراً في كيفية تشويه الأجنة أجرة أفضل من الذكور في حالات الحمل مع السمنة الأمهات. أتصدى التهاب المرتبطة بالسمنة الأمهات السابقين فيفو بتعريض البشرية تروفوبلاستس إلى TNFα خارجية توفر منبرا لدراسة أثر البيئة داخل الرحم يعانون من السمنة المفرطة بشأن تنظيم المسارات الحرجة في trophoblasts واستطراداً، وظيفة المشيمة.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>10X HBSS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14185-052</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2 (anhyd.)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C1016-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO4 (anhyd.)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M7506-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hepes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP310-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15090-046</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNAse</td>
			<td>Worthington Biochemical Corp.</td>
			<td>LS002139</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protease/Phosphatase inhibitors</td>
			<td>Thermofisher Scientific</td>
			<td>88668</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris HCl</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15506-017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15576-028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S7653-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SDS</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP166-600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium deoxycholate.</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>AAJ6228822</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>X100-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iscove&#8217;s Modified Dulbecco&#8217;s Medium (IMDM)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12440-046</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>35-010-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neonatal Calf Serum (NCS)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>26010-074</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin (Pen/Strep)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% Formalin</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>23-427-098</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D2650-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TNF&#945;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>SRP3177-50UG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline (PBS)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>70013-032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>K2EDTA vacutainer blood collection tubes</td>
			<td>BD</td>
			<td>366450</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Percoll (Density Gradient Media, DGM)</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>17-0891-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6 well plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353046</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell strainers</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22363549</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Safe-Lock Tubes 2.0 mL, natural</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22363352</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue</td>
			<td>Corning</td>
			<td>25-900-Cl</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bio-Rad Mini-PROTEAN Tetra System</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>1658001FC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bio-Rad Mini Trans-Blot Cell</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>1658033</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TGX FastCast Acrylamide Kit, 12%</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>1610175</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini-Protean 3 Multi-Casting Chamber</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>1654112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4X Laemmli Sample Buffer</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>1610747</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Mercaptoethanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M3148-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>1610718</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween-20</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P7949-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Instant Nonfat Dry Milk</td>
			<td>Carnation</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rubicon (D9F7) Rabbit mAb</td>
			<td>Cell Signalling Technology</td>
			<td>8465S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monoclonal Anti-&#946;-Actin antibody produced in mouse</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A2228-100UL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody</td>
			<td>Cell Signalling Technology</td>
			<td>7074S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mouse IgG, HRP-linked Antibody</td>
			<td>Cell Signalling Technology</td>
			<td>7076S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SuperSignal West Pico PLUS Chemiluminescent Substrate</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>34578</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a primary human trophoblast model to study the effect of inflammation associated with maternal obesity on regulation of autophagy in the placenta

بدانة الأمهات يرتبط بزيادة خطر الإصابة بنتائج الفترة المحيطة بالولادة الضارة التي يرجح أن لعبت دور الوسيط فيها وظيفة المشيمية الخطر الذي يمكن أن يعزى إلى، في جزء منه، التقلبات أوتوفاجي. التغيرات الشاذة في التعبير عن أوتوفاجي المنظمين في المشيمة من الحمل يعانون من السمنة المفرطة قد ينظمها التحريضية العمليات المرتبطة بالسمنة والحمل. الموصوفة هنا بروتوكول لأخذ عينات أنسجة فيلوس وعزله فيلوس سيتوتروفوبلاستس من المشيمة البشرية مصطلح لثقافة الخلية الأولية. ويعقب ذلك طريقة لمحاكاة الوسط التحريضية في البيئة داخل الرحم السمنة بعلاج تروفوبلاستس الأولى من الحمل الهزيل مع سيتوكين proinflammatory التي هي مرتفعة في السمنة وعامل نخر الورم ألفا (TNFα)، الحمل. من خلال تنفيذ البروتوكول الموصوفة هنا، تبين أن التعرض للخارجية TNFα ينظم التعبير عن خطوة جريئة، منظم سلبية من أوتوفاجي، في تروفوبلاستس من الحمل الهزيل مع الأجنة الإناث. بينما تحتفظ مجموعة متنوعة من العوامل البيولوجية في البيئة داخل الرحم يعانون من السمنة المفرطة يمكن أن تعدل المسارات الحرجة في تروفوبلاستس، هذا النظام السابقين فيفو مفيدة بشكل خاص لتحديد إذا كان التعبير أنماط الملحوظ في فيفو في المشيمة البشرية مع الأمهات السمنة نتيجة مباشرة للإشارات TNFα. وفي نهاية المطاف، هذا النهج يتيح الفرصة لتحليل النتائج المترتبة على التنظيمية والجزيئية لالتهاب المرتبطة بالسمنة الأمهات أوتوفاجي وأخرى مسارات الخلوية حاسمة في تروفوبلاستس التي لها القدرة على التأثير وظيفة المشيمة.

مصطلح مشيمة الآدمي من العجاف (مؤشر كتلة الجسم قبل الحمل (BMI) &#60; 25) جمعت الأمهات ذوات الحمول غير المصحوبة بمضاعفات حمل ذرية الإناث وأخذ عينات منها خلال 15 دقيقة الولادة بالعملية القيصرية (لا العمل). وبحثت في المشيمة لعدم وجود تكلسات والتنمية النموذجية: وزنها بين 300-600 غرام مع ?...

Watch this Scientific Journal Video about A Primary Human Trophoblast Model to Study the Effect of Inflammation Associated with Maternal Obesity on Regulation of Autophagy in the Placenta at JoVE.com

A Primary Human Trophoblast Model to Study the Effect of Inflammation Associated with Maternal Obesity on Regulation of Autophagy in the Placenta

قدم هنا بروتوكول لأخذ عينات أنسجة فيلوس المشيمة البشرية متبوعاً بعزل سيتوتروفوبلاستس لثقافة الخلية الأولية. معاملة trophoblasts مع TNFα يجمل التهاب في البيئة داخل الرحم يعانون من السمنة المفرطة، ويسهل اكتشاف أهداف جزيئية ينظمها التهاب في المشيمة مع السمنة الأمهات.

نموذج تروفوبلست بشرية الأولية لدراسة تأثير التهاب المرتبطة بالسمنة الأمهات على تنظيم أوتوفاجي في المشيمة

Maternal obesity is associated with an increased risk of adverse perinatal outcomes that are likely mediated by compromised placental function that can be ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Biomarkers in an Animal Model for Revealing Neural, Hematologic, and Behavioral Correlates of PTSD

المؤشرات الحيوية في نموذج حيواني لكشف الاقتران العصبية، الدموية، والسلوكية للPTSD

Identification of biomarkers representing the evolution of the pathophysiology of Post Traumatic Stress Disorder (PTSD) is vitally important, not only for ...

Utilizing Transcranial Magnetic Stimulation to Study the Human Neuromuscular System

استخدام التنشيط المغناطيسي عبر الجمجمة لدراسة النظام العصبي العضلي الإنسان

Transcranial magnetic stimulation (TMS) has been in use for more than 20 years 1, and has grown exponentially in popularity over the past decade.  While ...

Human Neuroendocrine Tumor Cell Lines as a Three-Dimensional Model for the Study of Human Neuroendocrine Tumor Therapy

الإنسان الخلية السرطانية الهرموني العصبي خطوط بمثابة نموذج ثلاثي الأبعاد لدراسة الإنسان علاج ورم الغدد الصم العصبية

Neuroendocrine tumors (NETs) are rare tumors, with an incidence of two per 100,&#x200A;000 individuals per year, and they account for 0.5% of all human ...

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

excitotoxic المواد تحفيز الدماغ باعتبارها Microslices<em&gt; في المختبر</em&gt; نموذج من السكتة الدماغية

Examining molecular mechanisms involved in neuropathological conditions, such as ischemic stroke, can be difficult when using whole animal systems. As ...

Using Saccadometry with Deep Brain Stimulation to Study Normal and Pathological Brain Function

باستخدام Saccadometry مع ديب تحفيز الدماغ لدراسة العادية والمرضية وظيفة الدماغ

The oculomotor system involves a large number of brain areas including parts of the basal ganglia, and various neurodegenerative diseases including ...

Phosphorus-31 Magnetic Resonance Spectroscopy: A Tool for Measuring In Vivo Mitochondrial Oxidative Phosphorylation Capacity in Human Skeletal Muscle

Phosphorus-31 Magnetic Resonance Spectroscopy: A Tool for Measuring In Vivo Mitochondrial Oxidative Phosphorylation Capacity in Human Skeletal Muscle

الفوسفور 31 الرنين المغناطيسي الطيفي: أداة لقياس<em&gt; في فيفو</em&gt; القدرة الميتوكوندريا الفسفرة التأكسدية في العضلات الهيكلية البشرية

Skeletal muscle mitochondrial oxidative phosphorylation (OXPHOS) capacity, which is critically important in health and disease, can be measured in vivo ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

متساوي القياس كونتراكتيليتي القياس الشريان المساريقي العلوي الماوس باستخدام أسلاك ميوجرافي

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Effect of Artificial Tear Formulations on the Metabolic Activity of Human Corneal Epithelial Cells after Exposure to Desiccation

تأثير تركيبات المسيل للدموع الاصطناعية على النشاط الأيضي للخلايا الظهارية القرنية البشرية بعد التعرض للديسيكيشن

Artificial lipid-containing tear formulations are developed to reduce tear evaporation by the restoration of a deficient tear lipid layer. Artificial tear ...

A Murine Model of Fetal Exposure to Maternal Inflammation to Study the Effects of Acute Chorioamnionitis on Newborn Intestinal Development

نموذج مورين للتعرض الجنين لالتهاب الأم لدراسة آثار التهاب المشيمة الحاد على نمو الأمعاء حديثي الولادة

Chorioamnionitis is a common precipitant of preterm birth and is associated with many of the morbidities of prematurity, including necrotizing ...

Design and Development of a Model to Study the Effect of Supplemental Oxygen on the Cystic Fibrosis Airway Microbiome

تصميم وتطوير نموذج لدراسة تأثير الأكسجين التكميلي على ميكروبيوم مجرى الهواء التليف الكيسي

Airway microbial communities are thought to play an important role in the progression of cystic fibrosis (CF) and other chronic pulmonary diseases. ...