Name: a primary human trophoblast model to study the effect of inflammation associated with maternal obesity on regulation of autophagy in the placenta
Uploaded: 2017-09-27T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Primary Human Trophoblast Model to Study the Effect of Inflammation Associated with Maternal Obesity on Regulation of Autophagy in the Placenta at JoVE.com

Авторы благодарят женщин, кто пожертвовал их плаценты для этого исследования. Мы также благодарим труда и отдел доставки на OHSU и матери и плода исследовательская группа для координации сбора плаценты. Мы благодарны Эрик ван, к.т.н., и Келли Куо, MD за поддержку и помощь с экспериментальными методами и оптимизации.
Эта работа финансировалась по НИЗ HD076259A (AM) и Ана GRNT29960007 (AM).

роль162 были собраны из группы труда и доставки в университетском госпитале под протоколом, утвержденным институционального обзора Совет Oregon Health и науки университета в Портленде, штат Орегон, с осознанного согласия от больных.
 1. коллекции плацентарной ткани <ol><li>По...

<ol>
	<li>Gregor, M. F., Hotamisligil, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+mechanisms+in+obesity.">Inflammatory mechanisms in obesity.</a> Annu. Rev. Immunol. 29, 415-445 (2011).</li><li>van Horssen, R., Ten Hagen, T. L. M., Eggermont, A. M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TNF-alpha+in+cancer+treatment:+molecular+insights,+antitumor+effects,+and+clinical+utility.">TNF-alpha in cancer treatment: molecular insights, antitumor effects, and clinical utility.</a> Oncologist. 11 (4), 397-408 (2006).</li><li>Yogev, Y., Catalano, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pregnancy+and+obesity.">Pregnancy and obesity.</a> Obstet. Gynecol. Clin. North Am. 36 (2), 285-300 (2009).</li><li>Basu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pregravid+obesity+associates+with+increased+maternal+endotoxemia+and+metabolic+inflammation.">Pregravid obesity associates with increased maternal endotoxemia and metabolic inflammation.</a> Obesity (Silver Spring). 19 (3), 476-482 (2011).</li><li>Muralimanoharan, S., Guo, C., Myatt, L., Maloyan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sexual+dimorphism+in+miR-210+expression+and+mitochondrial+dysfunction+in+the+placenta+with+maternal+obesity.">Sexual dimorphism in miR-210 expression and mitochondrial dysfunction in the placenta with maternal obesity.</a> Int J Obes (Lond). 39 (8), 1274-1281 (2015).</li><li>Myatt, L., Maloyan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Obesity+and+placental+function.">Obesity and placental function.</a> Semin. Reprod. Med. 34 (1), 42-49 (2016).</li><li>Aune, D., Saugstad, O. D., Henriksen, T., Tonstad, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maternal+body+mass+index+and+the+risk+of+fetal+death,+stillbirth,+and+infant+death:+a+systematic+review+and+meta-analysis.">Maternal body mass index and the risk of fetal death, stillbirth, and infant death: a systematic review and meta-analysis.</a> JAMA. 311 (15), 1536-1546 (2014).</li><li>Eriksson, J. G., Kajantie, E., Osmond, C., Thornburg, K., Barker, D. J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Boys+live+dangerously+in+the+womb.">Boys live dangerously in the womb.</a> Am. J. Hum. Biol. 22 (3), 330-335 (2010).</li><li>Kliman, H. J., Knobil, E., Neill, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trophoblast+to+human+placenta.">Trophoblast to human placenta.</a> Enc. Reprod. 4, 834-846 (1999).</li><li>Kliman, H. J., Nestler, J. E., Sermasi, E., Sanger, J. M., Strauss, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification,+characterization,+and+in+vitro+differentiation+of+cytotrophoblasts+from+human+term+placentae.">Purification, characterization, and in vitro differentiation of cytotrophoblasts from human term placentae.</a> Endocrinology. 118 (4), 1567-1582 (1986).</li><li>Bax, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrastructural+changes+and+immunocytochemical+analysis+of+human+placental+trophoblast+during+short-term+culture.">Ultrastructural changes and immunocytochemical analysis of human placental trophoblast during short-term culture.</a> Placenta. 10 (2), 179-194 (1989).</li><li>Le Bellego, F., Vaillancourt, C., Lafond, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+culture+of+term+human+cytotrophoblast+cells+and+in+vitro+methods+for+studying+human+cytotrophoblast+cells'+calcium+uptake.">Isolation and culture of term human cytotrophoblast cells and in vitro methods for studying human cytotrophoblast cells' calcium uptake.</a> Methods Mol. Biol. 550, 73-87 (2009).</li><li>Muralimanoharan, S., Gao, X., Weintraub, S., Myatt, L., Maloyan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sexual+dimorphism+in+activation+of+placental+autophagy+in+obese+women+with+evidence+for+fetal+programming+from+a+placenta-specific+mouse+model.">Sexual dimorphism in activation of placental autophagy in obese women with evidence for fetal programming from a placenta-specific mouse model.</a> Autophagy. 12 (5), 752-769 (2016).</li><li>Matsunaga, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two+Beclin+1-binding+proteins,+Atg14L+and+Rubicon,+reciprocally+regulate+autophagy+at+different+stages.">Two Beclin 1-binding proteins, Atg14L and Rubicon, reciprocally regulate autophagy at different stages.</a> Nat. Cell. Biol. 11 (4), 385-396 (2009).</li><li>Zhong, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+regulation+of+autophagic+activity+by+Atg14L+and+Rubicon+associated+with+Beclin+1-phosphatidylinositol-3-kinase+complex.">Distinct regulation of autophagic activity by Atg14L and Rubicon associated with Beclin 1-phosphatidylinositol-3-kinase complex.</a> Nat. Cell. Biol. 11 (4), 468-476 (2009).</li><li>Yang, C. -. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autophagy+Protein+Rubicon+Mediates+Phagocytic+NADPH+Oxidase+Activation+in+Response+to+Microbial+Infection+or+TLR+Stimulation.">Autophagy Protein Rubicon Mediates Phagocytic NADPH Oxidase Activation in Response to Microbial Infection or TLR Stimulation.</a> Cell Host &amp; Microbe. 11 (3), 264-276 (2012).</li><li>Yang, C. -. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Autophagy+Regulator+Rubicon+Is+a+Feedback+Inhibitor+of+CARD9-Mediated+Host+Innate+Immunity.">The Autophagy Regulator Rubicon Is a Feedback Inhibitor of CARD9-Mediated Host Innate Immunity.</a> Cell Host &amp; Microbe. 11 (3), 277-289 (2012).</li><li>Zi, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rubicon+deficiency+enhances+cardiac+autophagy+and+protects+mice+from+lipopolysaccharide-induced+lethality+and+reduction+in+stroke+volume.">Rubicon deficiency enhances cardiac autophagy and protects mice from lipopolysaccharide-induced lethality and reduction in stroke volume.</a> J. Cardiovasc. Pharmacol. 65 (3), 252-261 (2015).</li><li>Mele, J., Muralimanoharan, S., Maloyan, A., Myatt, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+mitochondrial+function+in+human+placenta+with+increased+maternal+adiposity.">Impaired mitochondrial function in human placenta with increased maternal adiposity.</a> Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab. 307 (5), E419-E425 (2014).</li><li>Mor, G., Cardenas, I., Abrahams, V., Guller, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation+and+pregnancy:+the+role+of+the+immune+system+at+the+implantation+site.">Inflammation and pregnancy: the role of the immune system at the implantation site.</a> Ann N Y Acad Sci. 1221 (1), 80-87 (2011).</li><li>Resi, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+inflammation+and+adipose+tissue+matrix+remodeling+precede+physiological+adaptations+to+pregnancy.">Molecular inflammation and adipose tissue matrix remodeling precede physiological adaptations to pregnancy.</a> Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab. 303 (7), E832-E840 (2012).</li><li>Levine, B., Mizushima, N., Virgin, H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autophagy+in+immunity+and+inflammation.">Autophagy in immunity and inflammation.</a> Nature. 469 (7330), 323-335 (2011).</li><li>Virgin, H. W., Levine, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autophagy+genes+in+immunity.">Autophagy genes in immunity.</a> Nat. Immunol. 10 (5), 461-470 (2009).</li><li>Sagrillo-Fagundes, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+Primary+Trophoblast+Cell+Culture+Model+to+Study+the+Protective+Effects+of+Melatonin+Against+Hypoxia/reoxygenation-induced+Disruption.">Human Primary Trophoblast Cell Culture Model to Study the Protective Effects of Melatonin Against Hypoxia/reoxygenation-induced Disruption.</a> JoVE. (113), (2016).</li><li>Segovia, S. A., Vickers, M. H., Gray, C., Reynolds, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maternal+obesity,+inflammation,+and+developmental+programming.">Maternal obesity, inflammation, and developmental programming.</a> Biomed. Res. Int. , 418975 (2014).</li><li>Komatsu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+necrosis+factor-alpha+in+serum+of+patients+with+inflammatory+bowel+disease+as+measured+by+a+highly+sensitive+immuno-PCR.">Tumor necrosis factor-alpha in serum of patients with inflammatory bowel disease as measured by a highly sensitive immuno-PCR.</a> Clin. Chem. 47 (7), 1297-1301 (2001).</li><li>Matsunaga, K., Noda, T., Yoshimori, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Binding+Rubicon+to+cross+the+Rubicon.">Binding Rubicon to cross the Rubicon.</a> Autophagy. 5 (6), 876-877 (2009).</li></ol>

Плацента, ответственным за регулирование роста плода, экспонаты нарушенной функцией в ожирением среды6. Несмотря на высокие метаболические требования трофобласты плаценты с материнской ожирения экспонат неблагополучных митохондриальное дыхание6,<sup cla...

Ожирение является воспалительных состояние, характеризующееся хроническим низкосортных воспаления, вытекающие из избыток жировой ткани и наличия питательных веществ. В ожирение провоспалительных цитокинов повышенный уровень метаболизма тканей, а также системно в обращении. Надежные совокупность доказательств показал, что TNFα значительно повышается в параметре ожирения с последствиями в сопротивление инсулина и метаболический дисфункции1. Активация TNFα также способствует патогенеза заболеваний в условиях, таких как рак и аутоиммунные заболевания, что делает его привлекательным терапевтического цели2.
Воспаление в ожирении усугубляется вследствие беременности, также провоспалительных государства3,4. Ранее было показано, что содержание плацентарного TNFα увеличивается с материнской ожирения в беременности с женского плода. Кроме того TNFα лечения препятствует митохондриальное дыхание клеток трофобласта женщин, но не мужчин, предполагая, что TNFα участвует в регулировании плацентарной метаболизм в сексуально диморфных образом5. Материнская тучность ассоциируется с увеличением числа различных осложнений во время беременности, включая мертворождение, с мужской плодов, будучи наиболее восприимчивы3,6,7,8 . Из-за его ключевую роль в интерфейсе матери и плода изменения функциональных возможностей через плаценту в ожирением внутриутробной среды в ответ на воспалительные сигнализации могут играть важную роль в посредничестве итоги ожирением беременностей.
Cytotrophoblasts и syncytiotrophoblasts в ворсинчатых ткани плаценты являются критическими для эндокринных сигнализации и питательных веществ и кислорода обмен между матерью и развивающегося плода9. Сбои в функциональные возможности ворсинчатых cytotrophoblasts (в дальнейшем именуемый трофобласты) может поставить под угрозу здоровье плода и развития. Этот протокол описывает метод для выборки ворсинчатых ткани из плаценты человека срок путем рассечения прочь хорионический и базальных плит наряду с оптимизированной процедуры для изоляции трофобласты культуры главной ячейки. Этот протокол является производным от установленным методологиям, с участием ферментативного пищеварения ворсинчатых ткани выпустить клетки из внеклеточного матрикса, следуют плотность дифференциального центрифугирования изолировать трофобласты10, 11,12. Этот подход, в котором первичный трофобласты от плаценты от худой беременности относятся с культура СМИ дополнена TNFα для имитации один компонент воспалительных окружение, связанных с материнской ожирения детали протокола. Наконец описан простой процедуры для уборки всего lysates клетки от TNFα-лечение трофобласты следуют западной blotting обнаружить изменения в экспрессии генов.
Хотя эта модель не пилки obesogenic в утробе матери окружающей среды во всей ее полноте, она обеспечивает управляемая система, которая позволяет разобрать индивидуального вклада TNFα-опосредованной воспаления в ответ трофобласты Материнская тучность. Эта модель дает возможность обнаружить или подтвердить молекулярных целей, непосредственно регулируются TNFα сигнализации в трофобласты, а также позволяет проверить, если изменения в картин выражения гена наблюдается в естественных условиях в плаценты с материнской ожирение может быть результатом TNFα-опосредованной воспаления.
Чтобы проверить эффект TNFα-опосредованной воспаления на регулирование autophagy в человека трофобласты был реализован подход, описанный здесь. Трофобласты с ожирением беременностей с мужской плодов выставку нарушается autophagic оборот или autophagosome созревания13. Белок, называемый Рубикон (запуск домена Beclin1-взаимодействующих и хвоща богатые белковые), который локализован для лизосомы и поздно endosomes, был недавно описан как «тормоз» в процессе autophagic оборот потому, что он функционирует как отрицательный Регулятор autophagosome созревания14,15. В самом деле Рубикон является редким примером белок, который сдерживает autophagy, что делает его ценным терапевтических цели. Очень мало информации имеется о патофизиологические значение Рубикон, за исключением его роли в врожденный иммунный ответ на микробы16,17 и cardiomyocyte защиты18. Используя протокол, описанный здесь, он найден что Рубикон upregulated в женской первичной трофобласты в ответ на лечение с увеличением концентрации TNFα до 250 пг/мл. Регулирование Рубикон могут играть роль в как женский плод тариф лучше, чем мужчины в беременности с материнской ожирения. Изложив воспаления, связанные с материнской ожирения ex vivo , подвергая человека трофобласты экзогенных TNFα обеспечивает платформу для изучения последствий страдают ожирением внутриутробной среды на регулирование критических путей в трофобласты и, следовательно, функция плаценты.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>10X HBSS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14185-052</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2 (anhyd.)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C1016-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO4 (anhyd.)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M7506-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hepes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP310-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15090-046</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNAse</td>
			<td>Worthington Biochemical Corp.</td>
			<td>LS002139</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protease/Phosphatase inhibitors</td>
			<td>Thermofisher Scientific</td>
			<td>88668</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris HCl</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15506-017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15576-028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S7653-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SDS</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP166-600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium deoxycholate.</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>AAJ6228822</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>X100-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iscove&#8217;s Modified Dulbecco&#8217;s Medium (IMDM)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12440-046</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>35-010-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neonatal Calf Serum (NCS)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>26010-074</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin (Pen/Strep)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% Formalin</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>23-427-098</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D2650-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TNF&#945;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>SRP3177-50UG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline (PBS)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>70013-032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>K2EDTA vacutainer blood collection tubes</td>
			<td>BD</td>
			<td>366450</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Percoll (Density Gradient Media, DGM)</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>17-0891-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6 well plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353046</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell strainers</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22363549</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Safe-Lock Tubes 2.0 mL, natural</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22363352</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue</td>
			<td>Corning</td>
			<td>25-900-Cl</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bio-Rad Mini-PROTEAN Tetra System</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>1658001FC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bio-Rad Mini Trans-Blot Cell</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>1658033</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TGX FastCast Acrylamide Kit, 12%</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>1610175</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini-Protean 3 Multi-Casting Chamber</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>1654112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4X Laemmli Sample Buffer</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>1610747</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Mercaptoethanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M3148-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>1610718</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween-20</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P7949-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Instant Nonfat Dry Milk</td>
			<td>Carnation</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rubicon (D9F7) Rabbit mAb</td>
			<td>Cell Signalling Technology</td>
			<td>8465S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monoclonal Anti-&#946;-Actin antibody produced in mouse</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A2228-100UL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody</td>
			<td>Cell Signalling Technology</td>
			<td>7074S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mouse IgG, HRP-linked Antibody</td>
			<td>Cell Signalling Technology</td>
			<td>7076S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SuperSignal West Pico PLUS Chemiluminescent Substrate</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>34578</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a primary human trophoblast model to study the effect of inflammation associated with maternal obesity on regulation of autophagy in the placenta

Материнская тучность ассоциируется с повышенным риском неблагоприятных перинатальных исходов, которые скорее всего опосредовано скомпрометированных плацентарной функция, которая может объясняться, в части, регуляции autophagy. Аномальные изменения в выражении autophagy регуляторов в плаценты с ожирением беременности может регулироваться воспалительные процессы, связанные с ожирением и беременности. Описанные здесь — это протокол для выборки ворсинчатых ткани и изоляции ворсинчатых cytotrophoblasts из плаценты человека термин культуры главной ячейки. Это сопровождается метод для моделирования воспалительных окружение в ожирением внутриутробной среды, рассматривая первичной трофобласты от худой беременностей с провоспалительных цитокинов, который возводится в ожирение и фактора некроза опухоли альфа (TNFα), беременности. Посредством осуществления протокола, описанные здесь, установлено, что воздействие экзогенных TNFα регулирует выражение Рубикон, негативный регулятор autophagy, в от худой беременностей с женский плод трофобласты. Хотя целый ряд биологических факторов в ожирением внутриутробной среды поддерживать потенциал, чтобы модулировать критических путей в трофобласты, эта система ex vivo является особенно полезным для определения, если выражение моделей наблюдаемого в естественных условиях в человеческой плаценты с материнской ожирения являются прямым результатом TNFα сигнализации. В конечном счете такой подход дает возможность разобрать регулирования и молекулярных последствия воспаления, связанные с материнской ожирения на autophagy и других важнейших клеточных путей в трофобласты, которые имеют потенциал для воздействия плацентарный функции.

Срок человеческой плаценты от худой (до беременности массы тела (ИМТ) &#60; 25) матерей с неосложненной беременности, перевозящих потомства были собраны и попробовать в течение 15 минут о доставки путем операции кесарева сечения (без труда). Плаценты были рассмотрены за отс...

Watch this Scientific Journal Video about A Primary Human Trophoblast Model to Study the Effect of Inflammation Associated with Maternal Obesity on Regulation of Autophagy in the Placenta at JoVE.com

A Primary Human Trophoblast Model to Study the Effect of Inflammation Associated with Maternal Obesity on Regulation of Autophagy in the Placenta

Представленные здесь — это протокол для отбора проб тканей человека плацентарной ворсинок, следуют изоляции cytotrophoblasts для начальных клеточной культуры. Лечение трофобласты с TNFα резюмирует воспаления в ожирением внутриутробной среды и облегчает открытие молекулярных целей регулируется воспаление плаценты с материнской ожирения.

Первичного человека трофобласта модель для изучения эффекта воспаления, связанные с материнской ожирения по регулированию Autophagy в плаценту

Maternal obesity is associated with an increased risk of adverse perinatal outcomes that are likely mediated by compromised placental function that can be ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Biomarkers in an Animal Model for Revealing Neural, Hematologic, and Behavioral Correlates of PTSD

Биомаркеры в животной модели для выявления нервных, гематологических, и поведенческие корреляты посттравматического стрессового расстройства

Identification of biomarkers representing the evolution of the pathophysiology of Post Traumatic Stress Disorder (PTSD) is vitally important, not only for ...

Utilizing Transcranial Magnetic Stimulation to Study the Human Neuromuscular System

Использование транскраниальной магнитной стимуляции по изучению прав нервно-мышечной системы

Transcranial magnetic stimulation (TMS) has been in use for more than 20 years 1, and has grown exponentially in popularity over the past decade.  While ...

Human Neuroendocrine Tumor Cell Lines as a Three-Dimensional Model for the Study of Human Neuroendocrine Tumor Therapy

Человека нейроэндокринной опухоли клеточных линий в качестве трехмерных моделей по изучению прав нейроэндокринные опухоли терапия

Neuroendocrine tumors (NETs) are rare tumors, with an incidence of two per 100,&#x200A;000 individuals per year, and they account for 0.5% of all human ...

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

Экзайтотоксическим Стимуляция мозга Microslices как<em&gt; В пробирке</em&gt; Модель инсульта

Examining molecular mechanisms involved in neuropathological conditions, such as ischemic stroke, can be difficult when using whole animal systems. As ...

Using Saccadometry with Deep Brain Stimulation to Study Normal and Pathological Brain Function

Использование Saccadometry с Глубокая стимуляция мозга для изучения нормальной и патологической функции мозга

The oculomotor system involves a large number of brain areas including parts of the basal ganglia, and various neurodegenerative diseases including ...

Phosphorus-31 Magnetic Resonance Spectroscopy: A Tool for Measuring In Vivo Mitochondrial Oxidative Phosphorylation Capacity in Human Skeletal Muscle

Phosphorus-31 Magnetic Resonance Spectroscopy: A Tool for Measuring In Vivo Mitochondrial Oxidative Phosphorylation Capacity in Human Skeletal Muscle

Фосфор-31 спектроскопии магнитного резонанса: Прибор для измерения<em&gt; В Vivo</em&gt; Митохондриальной окислительное фосфорилирование потенциала в скелетных мышцах человека

Skeletal muscle mitochondrial oxidative phosphorylation (OXPHOS) capacity, which is critically important in health and disease, can be measured in vivo ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

Изометрические сократимости измерение верхней брыжеечной артерии мыши, с помощью проволоки миография

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Effect of Artificial Tear Formulations on the Metabolic Activity of Human Corneal Epithelial Cells after Exposure to Desiccation

Влияние искусственных слезных формулировок на метаболическую активность эпителиальных клеток роговицы человека после воздействия высыхания

Artificial lipid-containing tear formulations are developed to reduce tear evaporation by the restoration of a deficient tear lipid layer. Artificial tear ...

A Murine Model of Fetal Exposure to Maternal Inflammation to Study the Effects of Acute Chorioamnionitis on Newborn Intestinal Development

Мурин модель плода воздействия материнского воспаления для изучения последствий острого хориоамнионит на развитие кишечника новорожденных

Chorioamnionitis is a common precipitant of preterm birth and is associated with many of the morbidities of prematurity, including necrotizing ...

Design and Development of a Model to Study the Effect of Supplemental Oxygen on the Cystic Fibrosis Airway Microbiome

Проектирование и разработка модели для изучения влияния дополнительного кислорода на микробиом дыхательных путей муковисцидоза

Airway microbial communities are thought to play an important role in the progression of cystic fibrosis (CF) and other chronic pulmonary diseases. ...