Name: an automated rapid iterative negative geotaxis assay for analyzing adult climbing behavior in a drosophila model of neurodegeneration
Uploaded: 2017-09-12T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about An Automated Rapid Iterative Negative Geotaxis Assay for Analyzing Adult Climbing Behavior in a Drosophila Model of Neurodegeneration at JoVE.com

हम ब्लूमिंगटन स्टॉक सेंटर और उड़ान शेयरों के लिए वियना Drosophila RNAi केंद्र धंयवाद । अंगूठी तंत्र के लिए पेटेंट शंघाई उंनत अनुसंधान संस्थान, चीनी विज्ञान अकादमी के अंतर्गत आता है । RflyDetection सॉफ्टवेयर के लिए अनुरोध फू-डी हुआंग करने के लिए किया जाना चाहिए (लेखक सूची देखें) । यह काम चीन के नेशनल बेसिक रिसर्च प्रोग्राम (९७३ प्रोग्राम 2013CB945602) और नेशनल नेचुरल साइंस फाउंडेशन ऑफ चाइना (३१२७०८२५ और ३११७१०४३) से अनुदान द्वारा समर्थित था । हम चर्चा और टिप्पणियों के लिए हो लैब सदस्यों धंयवाद ।

1. फ्लाई कलेक् शन <ol> <li> 25 & #176; C, ७०% आर्द्रता पर मानक मक्खी भोजन पर मक्खियों को बनाए रखने, और एक 12 ज/12 ज प्रकाश/अंधेरे चक्र. </li>
	<li> एकत्र यूएएस-Dicer2; डीडीसी-GAL4 फ्लाई virginsunder कार्बन डाइऑक्साइड (CO 2 ) संज्ञाहरण. </li>
	<l...

<ol>
	<li>Ali, Y. O., Escala, W., Ruan, K., Zhai, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assaying+locomotor,+learning,+and+memory+deficits+in+Drosophila+models+of+neurodegeneration.">Assaying locomotor, learning, and memory deficits in Drosophila models of neurodegeneration.</a> J Vis Exp. (49), (2011).</li><li>Nichols, C. D., Becnel, J., Pandey, U. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+to+assay+Drosophila+behavior.">Methods to assay Drosophila behavior.</a> J Vis Exp. (61), (2012).</li><li>Madabattula, S. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+Analysis+of+Climbing+Defects+in+a+Drosophila+Model+of+Neurodegenerative+Disorders.">Quantitative Analysis of Climbing Defects in a Drosophila Model of Neurodegenerative Disorders.</a> J Vis Exp. (100), e52741 (2015).</li><li>Podratz, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+automated+climbing+apparatus+to+measure+chemotherapy-induced+neurotoxicity+in+Drosophila+melanogaster.">An automated climbing apparatus to measure chemotherapy-induced neurotoxicity in Drosophila melanogaster.</a> Fly (Austin). 7 (3), 187-192 (2013).</li><li>Gargano, J. W., Martin, I., Bhandari, P., Grotewiel, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+iterative+negative+geotaxis+(RING):+a+new+method+for+assessing+age-related+locomotor+decline+in+Drosophila.">Rapid iterative negative geotaxis (RING): a new method for assessing age-related locomotor decline in Drosophila.</a> Exp Gerontol. 40 (5), 386-395 (2005).</li><li>Liu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+rapid+iterative+negative+geotaxis+assay+and+its+use+in+a+genetic+screen+for+modifiers+of+Abeta(42)-induced+locomotor+decline+in+Drosophila.">Automated rapid iterative negative geotaxis assay and its use in a genetic screen for modifiers of Abeta(42)-induced locomotor decline in Drosophila.</a> Neurosci Bull. 31 (5), 541-549 (2015).</li><li>Shen, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SH2B1+is+Involved+in+the+Accumulation+of+Amyloid-beta42+in+Alzheimer's+Disease.">SH2B1 is Involved in the Accumulation of Amyloid-beta42 in Alzheimer's Disease.</a> J Alzheimers Dis. 55 (2), 835-847 (2017).</li><li>Song, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Auxilin+Underlies+Progressive+Locomotor+Deficits+and+Dopaminergic+Neuron+Loss+in+a+Drosophila+Model+of+Parkinson's+Disease.">Auxilin Underlies Progressive Locomotor Deficits and Dopaminergic Neuron Loss in a Drosophila Model of Parkinson's Disease.</a> Cell Rep. 18 (5), 1132-1143 (2017).</li><li>Zhang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Downregulation+of+RBO-PI4KIII&#945;+Facilitates+A&#946;42+Secretion+and+Ameliorates+Neural+Deficits+in+A&#946;42-Expressing+Drosophila.">Downregulation of RBO-PI4KIII&#945; Facilitates A&#946;42 Secretion and Ameliorates Neural Deficits in A&#946;42-Expressing Drosophila.</a> J Neurosci. 37 (19), 4928-4941 (2017).</li><li>Riemensperger, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+single+dopamine+pathway+underlies+progressive+locomotor+deficits+in+a+Drosophila+model+of+Parkinson+disease.">A single dopamine pathway underlies progressive locomotor deficits in a Drosophila model of Parkinson disease.</a> Cell Rep. 5 (4), 952-960 (2013).</li></ol>

स्वचालित अंगूठी परख यहां वर्णित एक उच्च मक्खियों के एक साथ मक्खी के सैकड़ों के लिए नकारात्मक geotaxis व्यवहार का प्रवाह विश्लेषण सक्षम बनाता है । वयस्क चढ़ाई का विश्लेषण करने के लिए पहले मौजूदा रणनीतियों ?...

प्रोटोकॉल और तरीकों की एक किस्म Drosophila वयस्क चढ़ाई व्यवहार का विश्लेषण करने के लिए विकसित किया गया है । बल्कि श्रमसाध्य, पारंपरिक विश्लेषण ज्यादातर एक व्यक्ति की शीशी में एक मक्खी डाल शामिल है और एक मैनुअल बल का उपयोग करता है तुल्यकालन के लिए नीचे मक्खियों1,2,3,4। यह थकाऊ और समय लेने वाली है, बड़े उच्च प्रवाह अध्ययन के लिए अनुपयुक्त है, और मैनुअल के लिए नीचे मक्खियों के रूप में के रूप में अच्छी तरह से अंय सीमाओं नल इस्तेमाल बल के संभावित रूपों है । परख में सुधार करने के लिए, एक तेजी से चलने नकारात्मक Geotaxis (अंगूठी) परख विकसित की है जो एक ही समय में कई मक्खियों पर उच्च प्रवाह विश्लेषण की अनुमति देता है5। हालांकि, परख अभी भी एक मैंयुअल रूप से करने के लिए मक्खी कार्रवाई सिंक्रनाइज़ बल लागू की आवश्यकता है । अंगूठी परख के हमारे संस्करण, पिछले परख पर संशोधित, एक धातु के आधार पर कई मक्खी युक्त शीशियों स्वचालित रूप से एक बिजली के मोटर द्वारा नियंत्रित करने के लिए उड़ान भरने के तुल्यकालन6ड्राइव की मेजबानी भी शामिल है । रिकॉर्डिंग पर, तुल्यकालन के बाद तुरंत चढ़ाई तो एक आत्म डिजाइन सॉफ्टवेयर का उपयोग कर विश्लेषण दर्ज की गई है । हमारे स्वचालित अंगूठी परख एक ही मक्खी से डेटा इकट्ठा करने में थकाऊ और परिश्रम गहन प्रक्रिया समाप्त हो गया है, एक समय में एक, और डेटा अधिग्रहण प्रक्रिया सक्षम करने के लिए और अधिक कुशल हो । इसके अलावा, स्वचालित अंगूठी परख है अल्जाइमर और पार्किंसंस रोग अंतर्निहित तंत्र स्पष्ट करने के लिए अध्ययन की एक संख्या में कार्यरत है, उच्च दक्षता के साथ दृष्टिकोण मांय कर रहा है7,8,9 .
इस अनुच्छेद में, हम स्वचालित अंगूठी परख प्रदर्शन का उपयोग कर डीडीसी-Gal4 चालित RNAi मक्खियों । डीडीसी-Gal4 एक Gal4 लाइन विशेष रूप से dopaminergic (डीए) और serotonergic ंयूरॉंस में व्यक्त कर रही है, इस प्रकार हरकत घाटे के साथ जुड़े लक्ष्य जीन प्रभाव का विश्लेषण करने के लिए एक महान उपकरण का प्रतिनिधित्व neurodegeneration10के साथ । इसके अलावा, हम यूएएस-Dicer2, एक मक्खी लाइन है कि RNAi क्षमता को बढ़ाता है, को शामिल करने के लिए यूएएस-Dicer2 उत्पंन; डीडीसी-Gal4 टूल लाइन । RNAi मक्खियों हम का उपयोग करने का चयन auxilin (aux) RNAi v16182 (auxR१६१८२), एक जीन है कि हम पहले से मक्खी हरकत गतिविधि8पर एक प्रभाव प्रदर्शित करने के लिए पहचान की है । auxGFP मक्खियों भी aux एक्सप्रेस पर प्रभाव का विश्लेषण करने के लिए तैयार हैं । हम कैसे स्वचालित अंगूठी परख का उपयोग करने के लिए नकारात्मक geotaxis मक्खी उपाय दिखाने के लिए, परिणाम वर्तमान, और किसी भी परिणाम से प्राप्त निहितार्थ पर चर्चा करेंगे ।

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Forma Environmental Chamber</td>
			<td>Thermo&#160;</td>
			<td>3949</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbon dioxide cylinders</td>
			<td>FuLian GAS Technology</td>
			<td>GB/T6052</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HDR-Camcorder</td>
			<td>SONY</td>
			<td>HDR-CX220E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Binocular stereomicroscope</td>
			<td>Xin Zhen</td>
			<td>SMZ-168BL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic scales</td>
			<td>MinQiao</td>
			<td>SL1002N</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Refrigerator</td>
			<td>Haier</td>
			<td>SC-350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar-agar powder</td>
			<td>Sinopharm</td>
			<td>10000561</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>Sinopharm</td>
			<td>10010518</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corn meal</td>
			<td>Sinopharm</td>
			<td>5464654</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brown sugar</td>
			<td>LiuCaiYuan</td>
			<td>45467936</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Instant dry yeast</td>
			<td>AB MAURI</td>
			<td>20886</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AuxR16182</td>
			<td>VDRC</td>
			<td>7187</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UAS-Dicer2</td>
			<td>Bloomington</td>
			<td>24650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UAS-mCD8GFP</td>
			<td>Bloomington</td>
			<td>32185</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DDC-Gal4</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>A gift from Fude Huang</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AuxGFP</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>A gift from Henry Chang</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an automated rapid iterative negative geotaxis assay for analyzing adult climbing behavior in a drosophila model of neurodegeneration

Neurodegenerative रोग अक्सर आंदोलन की क्षमता का एक प्रगतिशील हानि के साथ जुड़े रहे हैं, कम जीवन अवधि, और उंर पर निर्भर neurodegeneration । इन सेलुलर घटनाओं के तंत्र को समझने के लिए, और एक दूसरे के साथ उनके कारण संबंधों, Drosophila melanogaster, अपने परिष्कृत आनुवंशिक उपकरणों और विविध व्यवहार सुविधाओं के साथ, आकलन के लिए रोग मॉडल के रूप में इस्तेमाल कर रहे हैं neurodegenerative phenotypes. यहां हम एक उच्च प्रवाह विधि का वर्णन करने के लिए Drosophila वयस्क नकारात्मक geotaxis व्यवहार का विश्लेषण, संभव मोटर neurodegeneration के साथ जुड़े दोषों के लिए एक संकेत के रूप में । एक स्वचालित मशीन डिजाइन और मक्खी एक प्रारंभिक बिजली के आवेग का उपयोग कर तुल्यकालन ड्राइव विकसित की है, बाद में सेकंड के एक पाठ्यक्रम पर नकारात्मक geotaxis व्यवहार की रिकॉर्डिंग मिनट के लिए अनुमति । डिजिटल रिकॉर्ड किए गए वीडियो से छवियां तब सांख्यिकीय डेटा हेरफेर के लिए स्व-डिज़ाइन RflyDetection सॉफ़्टवेयर के साथ संसाधित की जाती हैं । मैंयुअल रूप से नियंत्रित नकारात्मक geotaxis एक मक्खी पर आधारित परख से अलग है, यह सटीक, तेज, और उच्च प्रवाह प्रोटोकॉल एक साथ मक्खियों के सैकड़ों से अधिक से डेटा अधिग्रहण की अनुमति देता है, एक कुशल दृष्टिकोण प्रदान करने के लिए अग्रिम हमारे neurodegeneration के साथ जुड़े हरकत घाटे के अंतर्निहित तंत्र में समझौता.

यह लेख मक्खी नकारात्मक geotaxis व्यवहार का आकलन करने में एक स्वचालित अंगूठी परख के उपयोग को दर्शाता है । पिछले अंगूठी परख के विपरीत, हमारे परख एक स्वचालित उपकरण है कि एक बिजली के लिए कार्रवाई मक्...

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An Automated Rapid Iterative Negative Geotaxis Assay for Analyzing Adult Climbing Behavior in a Drosophila Model of Neurodegeneration

यह कदम दर कदम प्रोटोकॉल एक स्वचालित बहु-सिलेंडर प्रणाली है कि मक्खियों के सैकड़ों मेजबान और एक बिजली के मोटर द्वारा अपनी कार्रवाई सिंक्रनाइज़ का उपयोग कर Drosophila नकारात्मक geotaxis व्यवहार का विश्लेषण करती है । तुल्यकालन पर, मक्खी नकारात्मक geotaxis व्यवहार परख, डिजिटल दर्ज की गई है, और स्वयं का उपयोग कर RflyDetection सॉफ्टवेयर डिजाइन का विश्लेषण किया ।

एक स्वचालित रैपिड चलने नकारात्मक Geotaxis परख Neurodegeneration के एक Drosophila मॉडल में वयस्क चढ़ाई व्यवहार का विश्लेषण के लिए

Neurodegenerative diseases are frequently associated with a progressive loss of movement ability, reduced life span, and age-dependent neurodegeneration. ...

Research

JoVE Journal

Behavior

An Automated Rapid Iterative Negative Geotaxis Assay for Analyzing Adult Climbing Behavior in a Drosophila Model of Neurodegeneration

Contextual and Cued Fear Conditioning Test Using a Video Analyzing System in Mice

चूहों में एक वीडियो विश्लेषण प्रणाली का प्रयोग प्रासंगिक और cued डर कंडीशनिंग टेस्ट

The contextual and cued fear conditioning test is one of the behavioral tests that assesses the ability of mice to learn and remember an association ...

Experimental Assessment of Mouse Sociability Using an Automated Image Processing Approach

माउस सुशीलता के प्रायोगिक आकलन एक स्वचालित इमेज प्रोसेसिंग दृष्टिकोण का उपयोग

Mouse is the preferred model organism for testing drugs designed to increase sociability. We present a method to quantify mouse sociability in which the ...

Automated Analysis of a Nematode Population-based Chemosensory Preference Assay

निमेटोड जनसंख्या आधारित केमोसेन्सरी पसंद परख के स्वचालित विश्लेषण

The nematode, Caenorhabditis elegans' compact nervous system of only 302 neurons underlies a diverse repertoire of behaviors. To facilitate the dissection ...

A Burrowing/Tunneling Assay for Detection of Hypoxia in Drosophila melanogaster Larvae

A Burrowing/Tunneling Assay for Detection of Hypoxia in Drosophila melanogaster Larvae

Drosophila melanogaster लार्वा में हाइपोक्सिया का पता लगाने के लिए एक Burrowing/सुरंग परख

Oxygen deprivation in animals can result from exposure to low atmospheric oxygen levels or from internal tissue damage that interferes with oxygen ...

An Automated T-maze Based Apparatus and Protocol for Analyzing Delay- and Effort-based Decision Making in  Free Moving Rodents

एक स्वचालित टी-भूलभुलैया आधारित तंत्र और प्रोटोकॉल देरी का विश्लेषण करने के लिए और प्रयास आधारित मुक्त चलती कुतर में बनाने का निर्णय

Many neurological and psychiatric patients demonstrate difficulties and/or deficits in decision making. Rodent models are helpful to produce a deeper ...

Automated, Long-term Behavioral Assay for Cognitive Functions in Multiple Genetic Models of Alzheimer's Disease, Using IntelliCage

स्वचालित, अल्जाइमर रोग के कई आनुवंशिक मॉडल में संज्ञानात्मक कार्यों के लिए दीर्घकालिक व्यवहार परख, IntelliCage का उपयोग

Multiple factors&#8212;such as aging and genes&#8212;are frequently associated with cognitive decline. Genetically modified mouse models of cognitive ...

An Automated Method to Determine the Performance of Drosophila in Response to Temperature Changes in Space and Time

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अंतरिक्ष और समय में तापमान में परिवर्तन के जवाब में Drosophila के प्रदर्शन को निर्धारित करने के लिए एक स्वचालित विधि

Temperature is a ubiquitous environmental factor that affects how species distribute and behave. Different species of Drosophila fruit flies have specific ...

An Improved Assay and Tools for Measuring Mechanical Nociception in Drosophila Larvae

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ड्रोसोफिला लार्वा में यांत्रिक एनओसी को मापने के लिए एक बेहतर परख और उपकरण

Published assays for mechanical nociception in Drosophila have led to variable assessments of behavior. Here, we fabricated, for use with Drosophila ...

Iterative Development of an Innovative Smartphone-Based Dietary Assessment Tool: Traqq

एक अभिनव स्मार्टफोन आधारित आहार मूल्यांकन उपकरण का पुनरावर्तक विकास: Traqq

To collect dietary intake data in a fast and reliable manner, a flexible and innovative smartphone application (app) called Traqq was developed ...

A High Throughput Microplate Feeder Assay for Quantification of Consumption in Drosophila

A High Throughput Microplate Feeder Assay for Quantification of Consumption in Drosophila

ड्रोसोफिला में खपत की मात्रा के लिए एक उच्च थ्रूपुट माइक्रोप्लेट फीडर परख

Quantifying food intake in Drosophila is used to study the genetic and physiological underpinnings of consumption-associated traits, their environmental ...