Name: characterization of cell membrane extensions and studying their roles in cancer cell adhesion dynamics
Uploaded: 2018-03-26T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Characterization of Cell Membrane Extensions and Studying Their Roles in Cancer Cell Adhesion Dynamics at JoVE.com

وتمول "المؤسسة منحة أوهسي" هذا العمل.

1-ملحق خصائص الخلية
<ol><li>الحفاظ على SW 13 وسويسري-الأجسام القريبة من الأرض، والخلايا DKK3 سويسري في قياسية هوميديفيد حاضنة في 37.0 درجة مئوية و 5% CO2 في "تعديل النسر المتوسطة" دولبيكو تستكمل مع 10% مصل بقرى الجنين و 10,000 يو/مليلتر البنسلين وستربتوميسين (سميت 'نمو متوسطة').<ol>
<li>عد الخلايا باستخدا...

<ol>
	<li>Libe, R., Fratticci, A., Bertherat, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adrenocortical+cancer:+pathophysiology+and+clinical+management.">Adrenocortical cancer: pathophysiology and clinical management.</a> Endocrine-related cancer. 14 (1), 13-28 (2007).</li><li>Veeck, J., Dahl, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+the+Wnt+pathway+in+cancer:+the+emerging+role+of+Dickkopf-3.">Targeting the Wnt pathway in cancer: the emerging role of Dickkopf-3.</a> Biochimica et biophysica acta. 1825 (1), 18-28 (2012).</li><li>Friedl, P., Gilmour, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collective+cell+migration+in+morphogenesis,+regeneration+and+cancer.">Collective cell migration in morphogenesis, regeneration and cancer.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 10 (7), 445-457 (2009).</li><li>Jacquemet, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=L-type+calcium+channels+regulate+filopodia+stability+and+cancer+cell+invasion+downstream+of+integrin+signalling.">L-type calcium channels regulate filopodia stability and cancer cell invasion downstream of integrin signalling.</a> Nat Commun. 7, 13297 (2016).</li><li>Machesky, L. M., Li, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fascin:+Invasive+filopodia+promoting+metastasis.">Fascin: Invasive filopodia promoting metastasis.</a> Commun Integr Biol. 3 (3), 263-270 (2010).</li><li>Petrie, R. J., Harlin, H. M., Korsak, L. I., Yamada, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activating+the+nuclear+piston+mechanism+of+3D+migration+in+tumor+cells.">Activating the nuclear piston mechanism of 3D migration in tumor cells.</a> J Cell Biol. 216 (1), 93-100 (2017).</li><li>Korah, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epigenetic+silencing+of+RASSF1A+deregulates+cytoskeleton+and+promotes+malignant+behavior+of+adrenocortical+carcinoma.">Epigenetic silencing of RASSF1A deregulates cytoskeleton and promotes malignant behavior of adrenocortical carcinoma.</a> Molecular cancer. 12, 87 (2013).</li><li>Cheng, J. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+FOXO1-mediated+dedifferentiation+blocking+role+for+DKK3+in+adrenocortical+carcinogenesis.">A novel FOXO1-mediated dedifferentiation blocking role for DKK3 in adrenocortical carcinogenesis.</a> BMC cancer. 17 (1), 164 (2017).</li><li>Barry, D. J., Durkin, C. H., Abella, J. V., Way, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Open+source+software+for+quantification+of+cell+migration,+protrusions,+and+fluorescence+intensities.">Open source software for quantification of cell migration, protrusions, and fluorescence intensities.</a> J Cell Biol. 209 (1), 163-180 (2015).</li><li>Cliffe, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+3D+analysis+of+complex+single+border+cell+behaviors+in+coordinated+collective+cell+migration.">Quantitative 3D analysis of complex single border cell behaviors in coordinated collective cell migration.</a> Nat Commun. 8, 14905 (2017).</li></ol>

هنا يصف لنا في المختبر كمي أسلوب لوصف ملحقات الخلية بسهولة، وشلالات حفرة قليلة، وإمكانية تكرار نتائج موثوقة يمكن تطبيقها لمختلف ظروف الاختبار. وعلاوة على ذلك، يمكن إجراء فحوصات الالتصاق و/أو حركية بسيطة وقابلة للقياس في نفس الوقت للربط بين الأهمية الوظيفية المحتملة للتغيرات الملاح?...

WNT Dysregulated مما يشير إلى دور حاسم في الأورام الخبيثة البطاني1. الأساليب المستخدمة في هذه الدراسة التحقيق ما إذا كان تكميم أفواه DKK3، منظم سلبية من إشارات WNT، يمثل حدثاً dedifferentiation في قشرة الغدة الكظرية ويعزز تشكيل الورم في السياق التغييرات مرجع الخلية-ملحق. DKK3 هو كاتشين 38 يفرز بروتين سكري مع ببتيد إشارة الطرفي ن وقد أظهرت الدراسات السابقة أن التعبير القسري أدت إلى توقيف دورة الخلية وتثبيط السلوك العدواني الخبيث وعكس الظهارية الوسيطة 2من المرحلة الانتقالية.
السلوك الخبيث لسرطان البطاني (لجنة التنسيق الإدارية)، وغيرها من أنواع السرطان، في جزء منه، وتتأثر قدرة الخلايا السرطانية على الواجهة مع الأسطح المحيطة بها، بما في ذلك المصفوفة خارج الخلية، الذي بدوره يسهل غزو الخلايا السرطانية و 3من الهجرة. يتم شرحها دور ملحقات غشاء الخلية المحددة في تطور السرطان يتزايد في سياقات مختلفة، في المقام الأول عن طريق تشكيل فيلوبوديا. على سبيل المثال، قد وجد overexpression قنوات الكالسيوم من نوع L للحث على تشكيل فيلوبوديا والنهوض بورم الخلايا غزو4. وبالمثل، فاسسين، أكتين ملزمة البروتين الحد الأدنى المعرب عنها في أنسجة طبيعية، أيضا overexpressed في الخلايا السرطانية بالاشتراك مع تشكيل فيلوبوديا5. تشكيل لوبوبوديا تمكن الليفية غير الخبيثة لترحيل نحو فعال من خلال مصفوفة خارج الخلوية، ومع ذلك، فقد ثبت أن الخلايا فيبروساركوما تعتمد على نشاط أية بدلاً من لوبوبوديا لتسهيل الهجرة الخلية و 6من الغزو. وقد أظهرنا ذلك الورم المكثفات، بما في ذلك رأس رابطة مجال الأسرة 1 إيسوفورم (RASSF1A) و DKK3، يمكن أن تعمل لتغيير عناصر سيتوسكيليتال وتشجيع تشكيل لاميليبوديا وحركت خصائص الغازية7،8.
على هذا النحو، من المهم لتوصيف تأثيرات الجينات المشتركة في التسرطن وعلاقتها بغشاء الخلية ملحق التعديلات، على وجه التحديد تقييم تشكيل فيلوبوديا، ولوبوبوديا، ولاميليبوديا تحت ظروف الاختبار. دولة من بين أحدث التقنيات الحالية تشمل استخدام أساليب متطورة على نحو متزايد الفحص المجهري، ووسم الفلورسنت، و/أو خوارزميات الحاسوب المعقدة للحصول على البيانات وتفسيرها. بينما هذه الأساليب توفير أدوات تحليلية جديدة وقوية، تعقيدها يحد من استخدامها على نطاق واسع وقدرة على التكيف في تجارب البيولوجيا الخلية. وعلاوة على ذلك، القياس الكمي الدقيق ومراقبة التغيرات في الخلية ملحق مورفولوجيا لا يقاس عادة9،10. وفي المقابل، نقدم تقنية هنا أن يوضحها بدقة الخلية ملحق التعديلات باستخدام التقنيات المجهرية القياسية وأساليب التكيف مع سهولة في المختبر . هذه الأساليب أيضا تحديد كمية كل نوع خلية التمديد في وقت واحد لكل خلية تحليل وتحديد التغييرات الشاملة في مرجع ملحق غشاء الخلية. ونحن أيضا إظهار كيف يمكن أن تتصل هذه التغييرات على خصائص التصاق الخلية.
على سبيل مثال تجريبية، سوف نستخدم خط خلية التي تم إنشاؤها مسبقاً من 13 SW، عينت SW-DDK3، الذي قد تم transfected ثابت مع بلازميد DKK3/pCMV6-دخول ناقلات ومؤثراً أوفيريكسبريسيس DKK3، عامل التفريق في الغدة الكظرية. SW 13 عدم transfected الخلايا والخلايا SW 13 ستابلي transfected مع متجه فارغة (pCMV6-الإدخال)، عينت SW-الأجسام القريبة من الأرض، كضوابط تجريبية.

<table width="653">
	<tbody>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="width:216px;height:63px;">Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium (DMEM)</td>
			<td style="width:115px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:119px;">11965-092</td>
			<td style="width:203px;">Supplemented with fetal bovine serum and penicllin and streptomycin</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="width:216px;height:42px;">Deulbeco&#39;s Phosphate Buffered Saline</td>
			<td style="width:115px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">D8537</td>
			<td>1X solution, used directly</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:216px;height:21px;">3.7% formaldehyde&#160;</td>
			<td style="width:115px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">F8775</td>
			<td>Dilute stock solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:216px;height:21px;">0.05% crystal violet&#160;</td>
			<td style="width:115px;">Harleco</td>
			<td style="width:119px;">192-12</td>
			<td>Dilute stock solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:216px;height:21px;">De-ionized water</td>
			<td style="width:115px;">NA</td>
			<td style="width:119px;">NA</td>
			<td>NA</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="width:216px;height:42px;">Microscope with 400X magnification&#160;</td>
			<td style="width:115px;">NA</td>
			<td style="width:119px;">NA</td>
			<td>NA</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">6-well plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353046</td>
			<td>NA</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="width:216px;height:43px;">Cell dissociation solution non-enzymatic 1X</td>
			<td style="width:115px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">C5914&#160;</td>
			<td>1X solution, used directly</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

characterization of cell membrane extensions and studying their roles in cancer cell adhesion dynamics

مرجع ملحق غشاء الخلية ينظم مختلف السلوكيات الخبيثة خلايا السرطان، بما في ذلك قدراتها لاصقة والمهاجرة. القدرة على دقة تصنيف وتحديد ملحقات الخلية وقياس الأثر على قدرة لاصقة في خلية أمر حاسم لتحديد كيف الخلية مما يشير إلى أحداث تأثير سرطان الخلية السلوك والعدوانية. وهنا يصف لنا في المختبر تصميم واستخدام الخلية الكمي أسلوب التوسيع بالاقتران مع مقايسة قدرة التصاق في نموذج المنشأة في المختبر لسرطان البطاني (لجنة التنسيق الإدارية). على وجه التحديد، نقوم باختبار آثار DKK3، القامع ورم المفترضة، وعامل المؤيدة تمايز، على النمط الظاهري تمديد غشاء خط الخلية لجنة التنسيق الإدارية، SW 13. أننا نقترح هذه الاختبارات تقديم بسيط نسبيا، ويمكن الاعتماد عليها، والمقاييس بسهولة التفسير لتدابير هذه الخصائص في ظروف تجريبية مختلفة.

استخدام الاختبارات المذكورة أعلاه، تم اختبار آثار أوفيريكسبريسيون DKK3 على خلية ملحق مورفولوجيا وخصائص التصاق الخلية في خط الخلية لجنة التنسيق الإدارية المنشأة SW-13، في المختبر. الخلايا overexpressing DKK3 تم إنشاؤها بواسطة ستابلي ترانسفيكتينج الخلايا SW 13 مع حركة DDK المعلمة DK...

Watch this Scientific Journal Video about Characterization of Cell Membrane Extensions and Studying Their Roles in Cancer Cell Adhesion Dynamics at JoVE.com

Characterization of Cell Membrane Extensions and Studying Their Roles in Cancer Cell Adhesion Dynamics

وتوضح هذه الدراسة فائدة وسهولة قياس تمديد الكمية غشاء الخلية وارتباطها بقدرة التصاق الخلايا. وكمثال ممثل، نعرض هنا أن البروتين المتصلة ديككوبف 3 (DKK3) ويشجع تشكيل لوبوبوديا زيادة وخلية أدهيسيفينيس في سرطان البطاني الخلايا في المختبر.

وصف ملحقات غشاء الخلية ودراسة أدوارهم في ديناميات التصاق خلايا السرطان

The cell membrane&#39;s extension repertoire modulates various malignant behaviors of cancer cells, including their adhesive and migratory potentials. The ...

Research

JoVE Journal

Cancer Research

A Protocol for Rapid Post-mortem Cell Culture of Diffuse Intrinsic Pontine Glioma (DIPG)

A Protocol for Rapid Post-mortem Cell Culture of Diffuse Intrinsic Pontine Glioma DIPG

بروتوكول للثقافة السريع بعد الوفاة خلية من منتشر الجوهرية جسري بالورم الدبقي (DIPG)

Diffuse Intrinsic Pontine Glioma (DIPG) is a childhood brainstem tumor that carries a universally fatal prognosis. Because surgical resection is not a ...

Target Cell Pre-enrichment and Whole Genome Amplification for Single Cell Downstream Characterization

الخلية الهدف الجينوم قبل التخصيب وكله التضخيم لتوصيف المصب خلية مفردة

Rare target cells can be isolated from a high background of non-target cells using antibodies specific for surface proteins of target cells. A recently ...

3-D Cell Culture System for Studying Invasion and Evaluating Therapeutics in Bladder Cancer

نظام الثقافة خلية ثلاثية الأبعاد لدراسة الغزو وتقييم المداواة في سرطان المثانة

Bladder cancer is a significant health problem. It is estimated that more than 16,000 people will die this year in the United States from bladder cancer. ...

Mesenchymal Stem Cell Isolation from Pulp Tissue and Co-Culture with Cancer Cells to Study Their Interactions

عزل الخلايا الجذعية الوسيطة من أنسجة اللب والثقافة المشتركة مع الخلايا السرطانية لدراسة التفاعلات الخاصة بها

Cancer as a multistep process and complicated disease is not only regulated by individual cell proliferation and growth but also controlled by tumor ...

Flow Cytometric Analysis of Mitochondrial Reactive Oxygen Species in Murine Hematopoietic Stem and Progenitor Cells and MLL-AF9 Driven Leukemia

تحليل مقياس التدفق لأنواع الأكسجين التفاعلي الميتوكوندريا في الجذعية المكونة للدم وخلايا البروجينوتريو وابيضاض الدم المدفوع MLL-AF9

We present a flow cytometric approach for analyzing mitochondrial ROS in various live bone marrow (BM)-derived stem and progenitor cell populations from ...

Establishment of Gastric Cancer Patient-derived Xenograft Models and Primary Cell Lines

إنشاء نماذج Xenograft المستمدة من سرطان المعدة وخطوط الخلايا الأولية

The use of preclinical models to advance our understanding of tumor biology and investigate the efficacy of therapeutic agents is key to cancer research. ...

Semi-automatic PD-L1 Characterization and Enumeration of Circulating Tumor Cells from Non-small Cell Lung Cancer Patients by Immunofluorescence

شبه التلقائي PD-L1 توصيف وتعداد الخلايا السرطانية المتداولة من غير الصغيرة خلية سرطان الرئة المرضى عن طريق الفلورة المناعية

Circulating tumor cells (CTCs) derived from the primary tumor are shed into the bloodstream or lymphatic system. These rare cells (1&#8722;10 cells per mL ...

Radiosensitivity of Cancer Stem Cells in Lung Cancer Cell Lines

الحساسية الإشعاعية للخلايا الجذعية السرطانية في خطوط خلايا سرطان الرئة

The presence of cancer stem cells (CSCs) has been associated with relapse or poor outcomes after radiotherapy. Studying radioresistant CSCs may provide ...

Comparing Metastatic Clear Cell Renal Cell Carcinoma Model Established in Mouse Kidney and on Chicken Chorioallantoic Membrane

مقارنة النقيلي واضحة خلية الخلايا الكلوية نموذج سرطان الخلايا المنشأة في الكلى الماوس وعلى غشاء Chorioallantoic الدجاج

Metastatic clear cell renal cell carcinoma (ccRCC) is the most common subtype of kidney cancer. Localized ccRCC has a favorable surgical outcome. However, ...

Quantification of Tumor Cell Adhesion in Lymph Node Cryosections

القياس الكمي لالتصاق خلايا الورم في أقسام التبريد في العقدة الليمفاوية

Tumor-draining lymph nodes (LNs) are not merely filters of tumor-produced waste. They are one of the most common regional sites of provisional residence ...