Name: characterization of cell membrane extensions and studying their roles in cancer cell adhesion dynamics
Uploaded: 2018-03-26T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Characterization of Cell Membrane Extensions and Studying Their Roles in Cancer Cell Adhesion Dynamics at JoVE.com

타다 부여 재단 자금이 작품.

1. 셀 확장 특성
<ol><li>SW-13, SW-신, 그리고 남서 DKK3 세포는 표준 습도 인큐베이터 37.0 ° c, 5% CO2 Dulbecco의 수정이 글 중간에 보충 10% 태아 둔감 한 혈 청 및 10000 U/mL 페니실린과 스 ('성장 매체'로 지정)에 유지 합니다.<ol>
<li>Hemocytometer를 사용 하 여 셀을 계산 하 고 별도 6 잘 플레이트에 SW, SW-신, 그리고 남서 DKK3 라인에 대 한 잘 당 5000 셀 접시 하룻밤 불 임 유리 coverslips에 성장 매체에 성장.</...

<ol>
	<li>Libe, R., Fratticci, A., Bertherat, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adrenocortical+cancer:+pathophysiology+and+clinical+management.">Adrenocortical cancer: pathophysiology and clinical management.</a> Endocrine-related cancer. 14 (1), 13-28 (2007).</li><li>Veeck, J., Dahl, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+the+Wnt+pathway+in+cancer:+the+emerging+role+of+Dickkopf-3.">Targeting the Wnt pathway in cancer: the emerging role of Dickkopf-3.</a> Biochimica et biophysica acta. 1825 (1), 18-28 (2012).</li><li>Friedl, P., Gilmour, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collective+cell+migration+in+morphogenesis,+regeneration+and+cancer.">Collective cell migration in morphogenesis, regeneration and cancer.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 10 (7), 445-457 (2009).</li><li>Jacquemet, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=L-type+calcium+channels+regulate+filopodia+stability+and+cancer+cell+invasion+downstream+of+integrin+signalling.">L-type calcium channels regulate filopodia stability and cancer cell invasion downstream of integrin signalling.</a> Nat Commun. 7, 13297 (2016).</li><li>Machesky, L. M., Li, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fascin:+Invasive+filopodia+promoting+metastasis.">Fascin: Invasive filopodia promoting metastasis.</a> Commun Integr Biol. 3 (3), 263-270 (2010).</li><li>Petrie, R. J., Harlin, H. M., Korsak, L. I., Yamada, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activating+the+nuclear+piston+mechanism+of+3D+migration+in+tumor+cells.">Activating the nuclear piston mechanism of 3D migration in tumor cells.</a> J Cell Biol. 216 (1), 93-100 (2017).</li><li>Korah, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epigenetic+silencing+of+RASSF1A+deregulates+cytoskeleton+and+promotes+malignant+behavior+of+adrenocortical+carcinoma.">Epigenetic silencing of RASSF1A deregulates cytoskeleton and promotes malignant behavior of adrenocortical carcinoma.</a> Molecular cancer. 12, 87 (2013).</li><li>Cheng, J. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+FOXO1-mediated+dedifferentiation+blocking+role+for+DKK3+in+adrenocortical+carcinogenesis.">A novel FOXO1-mediated dedifferentiation blocking role for DKK3 in adrenocortical carcinogenesis.</a> BMC cancer. 17 (1), 164 (2017).</li><li>Barry, D. J., Durkin, C. H., Abella, J. V., Way, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Open+source+software+for+quantification+of+cell+migration,+protrusions,+and+fluorescence+intensities.">Open source software for quantification of cell migration, protrusions, and fluorescence intensities.</a> J Cell Biol. 209 (1), 163-180 (2015).</li><li>Cliffe, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+3D+analysis+of+complex+single+border+cell+behaviors+in+coordinated+collective+cell+migration.">Quantitative 3D analysis of complex single border cell behaviors in coordinated collective cell migration.</a> Nat Commun. 8, 14905 (2017).</li></ol>

여기 우리는 생체 외에서 양적 방법 용이성, 몇 구 덩이-폭포, 그리고 다양 한 테스트 조건에 대 한 적용할 수 있는 안정적인 재현성 셀 확장의 특성을 설명 합니다. 또한, 간단 하 고, 정량 접착 및 운동 성 분석 실험 세포 막 확장에 관찰된 변경의 잠재적인 기능적 중요성을 상관 관계를 동시에 수행할 수 있습니다.
그러나, 이러한 방법을 몇 가지 잠재적인 제한이 발생?...

Dysregulated WNT 신호 adrenocortical 악성1에 중요 한 역할을 한다. 이 연구에 사용 하는 방법 조사 여부 DKK3의 입을, WNT 신호의 부정적인 레 귤 레이 터 부 신 피 질에서 dedifferentiation 이벤트 나타내고 셀 확장 레 퍼 토리 변화의 맥락에서 종양의 형성을 촉진 한다. DKK3 38 kDa 분 비는 N 맨끝 신호 펩 티 드와 당단백질 이며 그 적용된 식 세포 주기 검거 귀착되 공격적인 악성 행동을 저해 및 엽 상피 반전 이전 학문은 설명 했다 전환2.
Adrenocortical 암 (ACC) 및 다른 암 악성 동작, 부분에서 주변 표면으로 인터페이스 하는 종양 세포의 기능에 의해 영향을 포함 하 여 기질에 종양 세포 내 습을 촉진 하 고 마이그레이션3. 암 진행에 특정 세포 막 확장의 역할은 filopodia 형성을 통해 주로 다양 한 문맥에서 점점 시연 되 고. 예를 들어 L-타입 칼슘 채널의 overexpression filopodia 형성을 유도 하 여 종양 세포 침공4홍보 발견 되었습니다. 마찬가지로, Fascin, 최소한 단백질 바인딩 하는 걸 정상 조직에서 표현 이기도 overexpressed filopodia 형성5와 협회에서 암 세포에 합니다. 그러나 Lobopodia 대형 엑스트라 세포 매트릭스를 통해 효과적으로 마이그레이션할 비 악성 섬유 아 세포,, 그것은 보였다 fibrosarcoma 셀 셀 마이그레이션을 촉진 하기 위하여 lobopodia 대신 metalloproteinase 활동에 의존 하 고 침략6. 우리는 종양으로 나타났습니다 진압, Ras 연결 도메인 가족 1 isoform (RASSF1A)를 포함 하 여 및 DKK3, 함수 cytoskeletal 요소를 변경 하 고 lamellipodia 형성 증진과 침략 속성7,8방해 구를 두 다 수 있습니다.
이와 같이, 그것은 발암 및 세포 막 확장 변경, 특히 filopodia, lobopodia, 및 lamellipodia 테스트 조건 하에서 형성 평가의 관계에 관련 된 유전자의 영향을 특성에 중요 한. 현재 상태-최첨단 기술을 데이터 수집 및 해석에 대 한 점점 더 정교한 현미경 방법, 형광 라벨, 복잡 한 컴퓨터 알고리즘의 사용을 포함 합니다. 이러한 방법은 새롭고 강력한 분석 도구를 제공 하는 동안 그들의 광범위 한 사용과 세포 생물학 실험에 그들의 복잡도 제한 합니다. 또한, 정확한 정량화 및 셀 확장 형태에 변화의 관찰 아니다 일반적으로 측정된9,10. 반면, 여기 셀 확장 변경 표준 현미경 기술과 쉽게 적응할 수 있는 생체 외에서 메서드를 사용 하 여 정확 하 게 단정 하는 기술을 소개 합니다. 이러한 메서드는 또한 동시에 분석 하는 각 셀에 대 한 각 셀 확장 종류 계량 하 고 세포 막 확장 레 퍼 토리에 전반적인 변화를 결정 합니다. 우리는 또한 어떻게 이러한 변화 세포 접착 속성에 관련 된 수 보여줍니다.
실험 예를 들어, 우리는 소프트웨어-13, SW-DDK3, pCMV6-항목/DKK3 플라스 미드 벡터와 안정적으로 페 되었습니다 하 고 constitutively DKK3, 아드레날린 선에 차별화 요소를 overexpresses 지정의 이전에 만든된 셀 라인을 사용 합니다. 비 페 SW-13 셀과 남서-13 셀 안정적으로 빈 벡터 (pCMV6-항목), 소프트웨어-네오, 지정 된 페 실험 컨트롤 될 것입니다.

<table width="653">
	<tbody>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="width:216px;height:63px;">Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium (DMEM)</td>
			<td style="width:115px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:119px;">11965-092</td>
			<td style="width:203px;">Supplemented with fetal bovine serum and penicllin and streptomycin</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="width:216px;height:42px;">Deulbeco&#39;s Phosphate Buffered Saline</td>
			<td style="width:115px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">D8537</td>
			<td>1X solution, used directly</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:216px;height:21px;">3.7% formaldehyde&#160;</td>
			<td style="width:115px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">F8775</td>
			<td>Dilute stock solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:216px;height:21px;">0.05% crystal violet&#160;</td>
			<td style="width:115px;">Harleco</td>
			<td style="width:119px;">192-12</td>
			<td>Dilute stock solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:216px;height:21px;">De-ionized water</td>
			<td style="width:115px;">NA</td>
			<td style="width:119px;">NA</td>
			<td>NA</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="width:216px;height:42px;">Microscope with 400X magnification&#160;</td>
			<td style="width:115px;">NA</td>
			<td style="width:119px;">NA</td>
			<td>NA</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">6-well plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353046</td>
			<td>NA</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="width:216px;height:43px;">Cell dissociation solution non-enzymatic 1X</td>
			<td style="width:115px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">C5914&#160;</td>
			<td>1X solution, used directly</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

characterization of cell membrane extensions and studying their roles in cancer cell adhesion dynamics

세포 막의 확장 레 퍼 토리 그들의 접착제와 철새 잠재력을 포함 하 여 암 세포의 다양 한 악성 동작을 조절 한다. 정확 하 게 분류 셀 확장을 계량 하 고 세포의 접착 능력에 미치는 영향을 측정 하는 능력은 어떻게 셀 신호 이벤트 영향 암 세포 행동 및 공격 성을 결정 하는 중요 한. 여기, 우리가 시험관에서 설계 및 방법의 사용은 셀 확장 정량화 함께에서 설립 체 외에 모델에 접착 용량 분석 결과와 adrenocortical 암 (ACC)에 대 한 설명. 특히, 우리는 효과 DKK3의 putative 종양 억제기와 프로 차별화 요소, ACC 셀 라인, 소프트웨어-13의 막 확장 표현 형에 테스트합니다. 비교적 간단 하 고 신뢰할 수 있는, 제공 하기 위해 이러한 분석을 제안 하 고 쉽게 해석할 통계를 다양 한 실험 조건에서 이러한 특성을 측정 합니다.

위의 분석 실험을 사용 하 여 셀 확장 형태학 및 세포 접착 속성에 DKK3 overexpression의 효과 설립된 ACC 셀 라인 SW-13, 체 외에서테스트 되었습니다. 셀 DKK3 overexpressing는 안정적으로 남서 13 셀 Myc DDK 태그 pCMV6-항목/DKK3 플라스 미드 벡터 및 소프트웨어 DKK3로 지정 된 transfecting에 의해 생성 되었다. 마찬가지로, 안정적으로 빈 벡터 pCMV6 항목과 transfected 세포 transfection 고 뿌?...

Watch this Scientific Journal Video about Characterization of Cell Membrane Extensions and Studying Their Roles in Cancer Cell Adhesion Dynamics at JoVE.com

Characterization of Cell Membrane Extensions and Studying Their Roles in Cancer Cell Adhesion Dynamics

이 연구는 유틸리티 양적 세포 막 확장 측정 및 셀의 접착 능력의 상관 관계의 용이성을 보여 줍니다. 대표적인 예로 우리 보여 여기 그 Dickkopf 관련 단백질 3 (DKK3) 증가 lobopodia 형성을 촉진 하 고 adrenocortical 암 접착 력 셀 세포 생체 외에서.

세포 막 확장 하 고 공부 하는 암 세포 접착 역동성에 있는 그들의 역할의 특성

The cell membrane&#39;s extension repertoire modulates various malignant behaviors of cancer cells, including their adhesive and migratory potentials. The ...

Research

JoVE Journal

Cancer Research

A Protocol for Rapid Post-mortem Cell Culture of Diffuse Intrinsic Pontine Glioma (DIPG)

A Protocol for Rapid Post-mortem Cell Culture of Diffuse Intrinsic Pontine Glioma DIPG

확산 내장 뇌교 신경 교종의 신속한 사후 세포 배양을위한 프로토콜 (DIPG)

Diffuse Intrinsic Pontine Glioma (DIPG) is a childhood brainstem tumor that carries a universally fatal prognosis. Because surgical resection is not a ...

연구

암 연구학

Target Cell Pre-enrichment and Whole Genome Amplification for Single Cell Downstream Characterization

단일 셀 다운스트림 특성화에 대 한 대상 셀 사전 농축 및 전체 게놈 증폭

Rare target cells can be isolated from a high background of non-target cells using antibodies specific for surface proteins of target cells. A recently ...

3-D Cell Culture System for Studying Invasion and Evaluating Therapeutics in Bladder Cancer

침공을 공부 하 고 방광 암에서 치료제를 평가 하기 위한 3 차원 셀 문화 시스템

Bladder cancer is a significant health problem. It is estimated that more than 16,000 people will die this year in the United States from bladder cancer. ...

Mesenchymal Stem Cell Isolation from Pulp Tissue and Co-Culture with Cancer Cells to Study Their Interactions

펄프 조직 문화와 공동 암 세포와 그들의 상호 작용을 공부 하에서 중간 엽 줄기 세포 분리

Cancer as a multistep process and complicated disease is not only regulated by individual cell proliferation and growth but also controlled by tumor ...

Flow Cytometric Analysis of Mitochondrial Reactive Oxygen Species in Murine Hematopoietic Stem and Progenitor Cells and MLL-AF9 Driven Leukemia

뮤린 조혈 줄기 및 선조 세포 및 MLL-AF9 구동 백혈병에서 미토콘드리아 반응성 산소 종의 유동 세포 분석

We present a flow cytometric approach for analyzing mitochondrial ROS in various live bone marrow (BM)-derived stem and progenitor cell populations from ...

Establishment of Gastric Cancer Patient-derived Xenograft Models and Primary Cell Lines

위암 환자 유래 이종이식 모델 및 1차 세포주 구축

The use of preclinical models to advance our understanding of tumor biology and investigate the efficacy of therapeutic agents is key to cancer research. ...

Semi-automatic PD-L1 Characterization and Enumeration of Circulating Tumor Cells from Non-small Cell Lung Cancer Patients by Immunofluorescence

면역형광에 의한 비소세포 폐암 환자의 순환 종양 세포의 반자동 PD-L1 특성화 및 열거

Circulating tumor cells (CTCs) derived from the primary tumor are shed into the bloodstream or lymphatic system. These rare cells (1&#8722;10 cells per mL ...

Radiosensitivity of Cancer Stem Cells in Lung Cancer Cell Lines

폐암 세포줄에 있는 암 줄기 세포의 방과성

The presence of cancer stem cells (CSCs) has been associated with relapse or poor outcomes after radiotherapy. Studying radioresistant CSCs may provide ...

Comparing Metastatic Clear Cell Renal Cell Carcinoma Model Established in Mouse Kidney and on Chicken Chorioallantoic Membrane

마우스 신장과 닭 융모알란투암 막에 설립된 전이성 맑은 세포 신장 세포 암종 모델 비교

Metastatic clear cell renal cell carcinoma (ccRCC) is the most common subtype of kidney cancer. Localized ccRCC has a favorable surgical outcome. However, ...

Quantification of Tumor Cell Adhesion in Lymph Node Cryosections

림프절 저온 절에서 종양 세포 접착의 정량화

Tumor-draining lymph nodes (LNs) are not merely filters of tumor-produced waste. They are one of the most common regional sites of provisional residence ...