Name: characterization of cell membrane extensions and studying their roles in cancer cell adhesion dynamics
Uploaded: 2018-03-26T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Characterization of Cell Membrane Extensions and Studying Their Roles in Cancer Cell Adhesion Dynamics at JoVE.com

ОГСЕ Грант фонда финансирование этой работы.

1. клетки расширение характеристики
<ol><li>Поддерживать SW-13, SW-нео и SW-DKK3 клетки в стандартной увлажненные инкубатор 37.0 ° c и 5% CO2 в среде орла изменения Дульбекко дополненные плода бычьим сывороточным 10% и 10 000 ед/мл пенициллина и стрептомицина (обозначенного как «средство роста»).<ol>
<l...

<ol>
	<li>Libe, R., Fratticci, A., Bertherat, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adrenocortical+cancer:+pathophysiology+and+clinical+management.">Adrenocortical cancer: pathophysiology and clinical management.</a> Endocrine-related cancer. 14 (1), 13-28 (2007).</li><li>Veeck, J., Dahl, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+the+Wnt+pathway+in+cancer:+the+emerging+role+of+Dickkopf-3.">Targeting the Wnt pathway in cancer: the emerging role of Dickkopf-3.</a> Biochimica et biophysica acta. 1825 (1), 18-28 (2012).</li><li>Friedl, P., Gilmour, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collective+cell+migration+in+morphogenesis,+regeneration+and+cancer.">Collective cell migration in morphogenesis, regeneration and cancer.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 10 (7), 445-457 (2009).</li><li>Jacquemet, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=L-type+calcium+channels+regulate+filopodia+stability+and+cancer+cell+invasion+downstream+of+integrin+signalling.">L-type calcium channels regulate filopodia stability and cancer cell invasion downstream of integrin signalling.</a> Nat Commun. 7, 13297 (2016).</li><li>Machesky, L. M., Li, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fascin:+Invasive+filopodia+promoting+metastasis.">Fascin: Invasive filopodia promoting metastasis.</a> Commun Integr Biol. 3 (3), 263-270 (2010).</li><li>Petrie, R. J., Harlin, H. M., Korsak, L. I., Yamada, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activating+the+nuclear+piston+mechanism+of+3D+migration+in+tumor+cells.">Activating the nuclear piston mechanism of 3D migration in tumor cells.</a> J Cell Biol. 216 (1), 93-100 (2017).</li><li>Korah, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epigenetic+silencing+of+RASSF1A+deregulates+cytoskeleton+and+promotes+malignant+behavior+of+adrenocortical+carcinoma.">Epigenetic silencing of RASSF1A deregulates cytoskeleton and promotes malignant behavior of adrenocortical carcinoma.</a> Molecular cancer. 12, 87 (2013).</li><li>Cheng, J. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+FOXO1-mediated+dedifferentiation+blocking+role+for+DKK3+in+adrenocortical+carcinogenesis.">A novel FOXO1-mediated dedifferentiation blocking role for DKK3 in adrenocortical carcinogenesis.</a> BMC cancer. 17 (1), 164 (2017).</li><li>Barry, D. J., Durkin, C. H., Abella, J. V., Way, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Open+source+software+for+quantification+of+cell+migration,+protrusions,+and+fluorescence+intensities.">Open source software for quantification of cell migration, protrusions, and fluorescence intensities.</a> J Cell Biol. 209 (1), 163-180 (2015).</li><li>Cliffe, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+3D+analysis+of+complex+single+border+cell+behaviors+in+coordinated+collective+cell+migration.">Quantitative 3D analysis of complex single border cell behaviors in coordinated collective cell migration.</a> Nat Commun. 8, 14905 (2017).</li></ol>

Здесь мы описываем в vitro количественный метод для характеристики клеток расширения с легкостью, несколько Пит Фолс и надежный воспроизводимости результатов, которые могут применяться для различных условий теста. Кроме того простой, количественно адгезии и/или подвижности анализ?...

Dysregulated WNT сигнализации играет важную роль в адренокортикальной злокачественных1. Методы, используемые в данном исследовании расследовать ли глушителей из DKK3, негативный регулятор WNT сигнализации, представляет собой событие дифференцировке в коры надпочечников и способствует формированию опухоли в контексте изменения клеток расширение репертуара. DKK3 — 38 кДа выделяется гликопротеин с пептидной сигнал N-стержня и предыдущие исследования показали его насильственного выражение привели к аресту клеточного цикла, тормозится агрессивное поведение злокачественных и вспять эпителия мезенхимальных 2переход.
Злокачественные поведение адренокортикальной карциномы (АКК) и другие виды рака, в части, под влиянием опухолевых клеток способность взаимодействовать с окружающих поверхностей, включая внеклеточного матрикса, который в свою очередь облегчает вторжение клеток опухоли и миграции3. Время роль конкретных клеточной мембраны расширений в прогрессии рака чаще проявляется в различных контекстах, главным образом через формирование filopodia. Например чтобы побудить filopodia формирования и поощрения опухолевых клеток вторжения4было установлено гиперэкспрессия L-типа кальциевых каналов. Аналогично Башчаршия, актина, связывая протеин минимально выраженные в нормальной ткани, также гиперэкспрессия в раковых клетках в ассоциации с filopodia формирования5. Lobopodia формирования позволяет незлокачественных фибробластов эффективно перенести через внеклеточных матрицы, однако, было показано, что клетки фибросаркома полагаются на металлопротеиназы деятельности вместо lobopodia для облегчения миграции клеток и вторжения6. Мы показали, что опухолевые супрессоры, включая рас Ассоциация домена семьи 1 изоформы (RASSF1A) и DKK3, может работать для изменения цитоскелета элементов и поощрения формирования lamellipodia и загнать в угол инвазивные свойства7,8.
Таким образом важно, чтобы характеризовать эффекты генов, участвующих в канцерогенеза и их отношения к клеточной мембраны расширение изменения, в частности оценки формирования filopodia, lobopodia и lamellipodia в условиях испытания. Текущее состояние оф-арт методы включают в себя использование микроскопии все более изощренные методы, люминесцентные маркировки и/или сложных компьютерных алгоритмов для сбора данных и интерпретации. Хотя эти методы предоставляют новые и мощные аналитические инструменты, их сложность ограничивает их широкого использования и адаптации в биологии клеток экспериментов. Кроме того точную количественную оценку и наблюдение изменений в морфологии клеток расширение не является обычно измеренных9,10. Напротив мы представляем технику, которая точно количественно изменения расширения клеток с помощью стандартных микроскопические и легко могут быть приспособлены в vitro методов. Эти методы также количественную оценку каждой ячейки тип расширения одновременно для каждой ячейки проанализированы и определить общие изменения в репертуаре расширение клеточной мембраны. Мы также показать, как эти изменения могут относиться к адгезионные свойства ячейки.
В качестве примера экспериментальный мы будем использовать ранее созданные ячейки линия SW-13 места для SW-DDK3, которая была стабильно transfected с pCMV6-вход/DKK3 плазмиды векторов и конститутивно overexpresses DKK3, дифференцирующим фактором в надпочечников. Non-transfected SW-13 клетки и клетки SW-13, стабильно transfected с пустой вектор (pCMV6-вход), Места для SW-нео, будет служить экспериментальных элементов управления.

<table width="653">
	<tbody>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="width:216px;height:63px;">Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium (DMEM)</td>
			<td style="width:115px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:119px;">11965-092</td>
			<td style="width:203px;">Supplemented with fetal bovine serum and penicllin and streptomycin</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="width:216px;height:42px;">Deulbeco&#39;s Phosphate Buffered Saline</td>
			<td style="width:115px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">D8537</td>
			<td>1X solution, used directly</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:216px;height:21px;">3.7% formaldehyde&#160;</td>
			<td style="width:115px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">F8775</td>
			<td>Dilute stock solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:216px;height:21px;">0.05% crystal violet&#160;</td>
			<td style="width:115px;">Harleco</td>
			<td style="width:119px;">192-12</td>
			<td>Dilute stock solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:216px;height:21px;">De-ionized water</td>
			<td style="width:115px;">NA</td>
			<td style="width:119px;">NA</td>
			<td>NA</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="width:216px;height:42px;">Microscope with 400X magnification&#160;</td>
			<td style="width:115px;">NA</td>
			<td style="width:119px;">NA</td>
			<td>NA</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">6-well plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353046</td>
			<td>NA</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="width:216px;height:43px;">Cell dissociation solution non-enzymatic 1X</td>
			<td style="width:115px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">C5914&#160;</td>
			<td>1X solution, used directly</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

characterization of cell membrane extensions and studying their roles in cancer cell adhesion dynamics

Расширение репертуара клеточной мембраны модулирует различных злокачественных поведение раковых клеток, включая их клей и мигрирующих потенциалов. Способность точно классифицировать и подсчитать ячейки расширений и измерить эффект на клетки клей потенциала имеет решающее значение для определения как клетки сигнализации поведение клеток рака влияние события и агрессивность. Здесь мы описываем в vitro разработки и использования клеток количественного определения метода расширения в сочетании с assay способности адгезии в установленных в vitro модели для адренокортикальной карциномы (АКК). В частности мы тестируем воздействия DKK3, подавитель предполагаемого опухоли и про дифференциация фактором, на фенотип расширение мембраны клеточной линии АКК, SW-13. Мы предлагаем эти анализы предоставлять относительно простые, надежные и легко интерпретировать данные метрик для мер эти характеристики в различных экспериментальных условиях.

Используя выше анализов, эффекты Сверхэкспрессия DKK3 на расширение морфологии клеток и клеток адгезионные свойства были протестированы в установленных АКК клеточная линия SW-13, в пробирке. Клеток, экспрессирующих DKK3 вызвал стабильно transfecting SW-13 клетки с Myc-DDK тегами ...

Watch this Scientific Journal Video about Characterization of Cell Membrane Extensions and Studying Their Roles in Cancer Cell Adhesion Dynamics at JoVE.com

Characterization of Cell Membrane Extensions and Studying Their Roles in Cancer Cell Adhesion Dynamics

Это исследование свидетельствует о полезности и простота расширения измерение количественных клеточной мембраны и его корреляция клей способности клеток. Как пример мы показываем здесь что связанных с Dickkopf белком 3 (DKK3) способствует формированию более lobopodia и адгезии клеток в Адренокортикальной рак клеток в пробирке.

Характеристика расширений клеточной мембраны и изучения их роли в динамике адгезии клеток рака

The cell membrane&#39;s extension repertoire modulates various malignant behaviors of cancer cells, including their adhesive and migratory potentials. The ...

Research

JoVE Journal

Cancer Research

A Protocol for Rapid Post-mortem Cell Culture of Diffuse Intrinsic Pontine Glioma (DIPG)

A Protocol for Rapid Post-mortem Cell Culture of Diffuse Intrinsic Pontine Glioma DIPG

Протокол для быстрой Посмертное культуре клеток диффузной Характеристическая Понтийской глиомы (DIPG)

Diffuse Intrinsic Pontine Glioma (DIPG) is a childhood brainstem tumor that carries a universally fatal prognosis. Because surgical resection is not a ...

Target Cell Pre-enrichment and Whole Genome Amplification for Single Cell Downstream Characterization

Целевые ячейки предварительного обогащения и весь геном усилители на одну ячейку вниз по течению характеристика

Rare target cells can be isolated from a high background of non-target cells using antibodies specific for surface proteins of target cells. A recently ...

3-D Cell Culture System for Studying Invasion and Evaluating Therapeutics in Bladder Cancer

3-D клетки культуры системы для изучения вторжения и оценки терапии рака мочевого пузыря

Bladder cancer is a significant health problem. It is estimated that more than 16,000 people will die this year in the United States from bladder cancer. ...

Mesenchymal Stem Cell Isolation from Pulp Tissue and Co-Culture with Cancer Cells to Study Their Interactions

Мезенхимальных стволовых клеток изолированно от ткани пульпы и культуры совместно с раковых клеток, чтобы изучить их взаимодействия

Cancer as a multistep process and complicated disease is not only regulated by individual cell proliferation and growth but also controlled by tumor ...

Flow Cytometric Analysis of Mitochondrial Reactive Oxygen Species in Murine Hematopoietic Stem and Progenitor Cells and MLL-AF9 Driven Leukemia

Поток Цитометрический анализ митохондриальных реактивных видов кислорода в Мурин гематопоитических стволовых и прародителей клеток и MLL-AF9 Driven лейкемии

We present a flow cytometric approach for analyzing mitochondrial ROS in various live bone marrow (BM)-derived stem and progenitor cell populations from ...

Establishment of Gastric Cancer Patient-derived Xenograft Models and Primary Cell Lines

Создание желудка рака пациента полученных Ксенотрансплантат Модели и первичные линии клеток

The use of preclinical models to advance our understanding of tumor biology and investigate the efficacy of therapeutic agents is key to cancer research. ...

Semi-automatic PD-L1 Characterization and Enumeration of Circulating Tumor Cells from Non-small Cell Lung Cancer Patients by Immunofluorescence

Полуавтоматический PD-L1 Характеристика и перечисление циркулирующих опухолевых клеток от немелкоклеточных больных раком легких по иммунофлуоресценции

Circulating tumor cells (CTCs) derived from the primary tumor are shed into the bloodstream or lymphatic system. These rare cells (1&#8722;10 cells per mL ...

Radiosensitivity of Cancer Stem Cells in Lung Cancer Cell Lines

Радиочувствительность стволовых клеток рака в линиях клеток рака легких

The presence of cancer stem cells (CSCs) has been associated with relapse or poor outcomes after radiotherapy. Studying radioresistant CSCs may provide ...

Comparing Metastatic Clear Cell Renal Cell Carcinoma Model Established in Mouse Kidney and on Chicken Chorioallantoic Membrane

Сравнение метастатической ясной клеточной почечной карциномы модели, созданной в мышиной почки и на куриные хориоаллантоический Membrane

Metastatic clear cell renal cell carcinoma (ccRCC) is the most common subtype of kidney cancer. Localized ccRCC has a favorable surgical outcome. However, ...

Quantification of Tumor Cell Adhesion in Lymph Node Cryosections

Количественная оценка прижатки опухолевых клеток в криосекциях лимфатических узлов

Tumor-draining lymph nodes (LNs) are not merely filters of tumor-produced waste. They are one of the most common regional sites of provisional residence ...