Name: characterization of cell membrane extensions and studying their roles in cancer cell adhesion dynamics
Uploaded: 2018-03-26T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Characterization of Cell Membrane Extensions and Studying Their Roles in Cancer Cell Adhesion Dynamics at JoVE.com

Ohse Grant Vakfı Bu eser finanse.

1. hücre uzantısı özellikleri
<ol><li>SW-13, SW-Neo ve CO2 ' Dulbecco'nın modifiye kartal orta % 10 fetal sığır serum ve 10.000 U/mL penisilin ve streptomisin ('büyüme aracı olarak' belirlenmiş) ile desteklenmiş bir standart oksijen kuluçka 37,0 ° C'de ve %5 SW-DKK3 hücreleri korumak.<ol>
<li>Bir hemasitometre kullanarak hücreleri saymak ve iyi SW-13, SW-Neo ve SW-DKK3 hat başına 5000 hücre ayrı 6-şey kalıplara plaka ve gecede büyüme aracı olarak steril cam coverslips üzerinde büy...

<ol>
	<li>Libe, R., Fratticci, A., Bertherat, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adrenocortical+cancer:+pathophysiology+and+clinical+management.">Adrenocortical cancer: pathophysiology and clinical management.</a> Endocrine-related cancer. 14 (1), 13-28 (2007).</li><li>Veeck, J., Dahl, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+the+Wnt+pathway+in+cancer:+the+emerging+role+of+Dickkopf-3.">Targeting the Wnt pathway in cancer: the emerging role of Dickkopf-3.</a> Biochimica et biophysica acta. 1825 (1), 18-28 (2012).</li><li>Friedl, P., Gilmour, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collective+cell+migration+in+morphogenesis,+regeneration+and+cancer.">Collective cell migration in morphogenesis, regeneration and cancer.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 10 (7), 445-457 (2009).</li><li>Jacquemet, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=L-type+calcium+channels+regulate+filopodia+stability+and+cancer+cell+invasion+downstream+of+integrin+signalling.">L-type calcium channels regulate filopodia stability and cancer cell invasion downstream of integrin signalling.</a> Nat Commun. 7, 13297 (2016).</li><li>Machesky, L. M., Li, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fascin:+Invasive+filopodia+promoting+metastasis.">Fascin: Invasive filopodia promoting metastasis.</a> Commun Integr Biol. 3 (3), 263-270 (2010).</li><li>Petrie, R. J., Harlin, H. M., Korsak, L. I., Yamada, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activating+the+nuclear+piston+mechanism+of+3D+migration+in+tumor+cells.">Activating the nuclear piston mechanism of 3D migration in tumor cells.</a> J Cell Biol. 216 (1), 93-100 (2017).</li><li>Korah, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epigenetic+silencing+of+RASSF1A+deregulates+cytoskeleton+and+promotes+malignant+behavior+of+adrenocortical+carcinoma.">Epigenetic silencing of RASSF1A deregulates cytoskeleton and promotes malignant behavior of adrenocortical carcinoma.</a> Molecular cancer. 12, 87 (2013).</li><li>Cheng, J. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+FOXO1-mediated+dedifferentiation+blocking+role+for+DKK3+in+adrenocortical+carcinogenesis.">A novel FOXO1-mediated dedifferentiation blocking role for DKK3 in adrenocortical carcinogenesis.</a> BMC cancer. 17 (1), 164 (2017).</li><li>Barry, D. J., Durkin, C. H., Abella, J. V., Way, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Open+source+software+for+quantification+of+cell+migration,+protrusions,+and+fluorescence+intensities.">Open source software for quantification of cell migration, protrusions, and fluorescence intensities.</a> J Cell Biol. 209 (1), 163-180 (2015).</li><li>Cliffe, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+3D+analysis+of+complex+single+border+cell+behaviors+in+coordinated+collective+cell+migration.">Quantitative 3D analysis of complex single border cell behaviors in coordinated collective cell migration.</a> Nat Commun. 8, 14905 (2017).</li></ol>

Burada hücre uzantıları kolaylığı, birkaç çukur-falls ve çeşitli test koşulları uygulanabilir güvenilir tekrarlanabilirlik ile karakterize bir vitro nicel yöntemi açıklanmaktadır. Ayrıca, basit, ölçülebilir yapışma ve/veya hareketliliği deneyleri fonksiyonel önemini potansiyel: hücre zarı uzantılarında gözlenen değişiklikler ilişkilendirmek için aynı anda gerçekleştirilebilir.
Ancak, bu yöntemlerin olası bazı sınırlamalar takdim edebilir miyim...

Dysregulated WNT sinyal Adrenokortikal maligniteler1' de kritik bir rol oynamaktadır. Bu çalışmada kullanılan yöntemleri DKK3 susturmak, WNT sinyal, negatif bir regülatör adrenal korteks dedifferentiation olayını temsil eder ve bağlamında tümör oluşumu hücre-uzantı repertuar değişir teşvik olup olmadığını araştırmak. DKK3 38 kDa ile bir N-terminal sinyal peptid glikoprotein salgılanan ve önceki çalışmalar zorunlu ifadesini hücre döngüsü tutuklama sonuçlandı, saldırgan kötü huylu davranış inhibe ve Mezenkimal epitel ters göstermiştir olduğunu geçiş2.
Adrenokortikal Karsinom (ACC) ve diğer kanser Malign davranışını tümör hücreleri çevreleyen yüzeyler ile arayüz yeteneği etkisinde bölümünde sırayla tümör hücre işgali kolaylaştırır hücre dışı matriks dahil olmak üzere ve geçiş3. Öncelikle filopodia oluşumu ile çeşitli bağlamlarda belirli hücre zarı kanseri ilerleme uzantılarında rolünün giderek gösterilen. Örneğin, overexpression L tipi kalsiyum kanal filopodia oluşumu teşvik ve tümör hücre işgali4teşvik bulundu. Benzer şekilde, Fascin, en az bağlayıcı protein bağlıdır bir aktin dokusu normal ifade de kanser hücrelerinin filopodia oluşumu5ile birlikte overexpressed mevcuttur. Lobopodia oluşumu sağlar etkili ekstra hücresel matris ile geçirmek non-Malign fibroblastlar, Fibrosarkom hücreleri metalloproteinaz etkinliği hücre geçişi kolaylaştırmak için lobopodia yerine itimat gösterilmiştir ancak, ve istila6. Biz o tümörü göstermiştir bastırıcılarının Ras Derneği etki alanı aile 1 izoformu (RASSF1A) de dahil olmak üzere ve DKK3, hücre iskeleti öğeleri değiştirebilir ve lamellipodia oluşumu teşvik ve invaziv özellikleri7,8taş koymak için işlev görebilir.
Bu nedenle, bu genlerin karsinojenezis ve hücre zarının uzantısı değişiklikler, özellikle filopodia, lobopodia ve lamellipodia oluşumu test koşullarında değerlendirilmesi ile ilişkilerini katılan etkileri karakterize etmek için önemlidir. Geçerli state-of-art teknikleri veri toplama ve yorumu giderek karmaşık mikroskobu yöntemleri, floresan etiketleme ve/veya karmaşık bilgisayar algoritmaları kullanımını içerir. Bu yöntemler yeni ve güçlü analitik araçlar sağlarken, kendi karmaşıklığı onların yaygın kullanımı ve adaptasyon hücre biyolojisi deneylerde sınırlar. Ayrıca, kesin miktar ve hücre uzantısı Morfoloji değişimler gözlenmesi değil genellikle ölçülen9,10. Buna ek olarak, biz doğru bir şekilde standart mikroskobik teknikler ve kolayca adapte vitro yöntemleri kullanarak hücre uzantısı değişiklikler quantifies bir teknik tanıtmak. Bu yöntemler aynı zamanda her hücre uzantı türü aynı anda her hücre analiz için sayısal ve hücre zarının uzantısı repertuar genel değişiklikleri belirlemek. Biz de nasıl bu değişiklikler hücre adezyon özellikleri için ilgili olabilir gösterir.
Deneysel örnek olarak, önceden oluşturulmuş hücre kültürünü SW-13, SW-DDK3, stabil pCMV6-giriş/DKK3 plazmid vektörleri ile transfected ve yapısal DKK3, böbrek üstü bezi bir farklılaştırıcı faktör overexpresses belirlenmiş kullanacağız. Sigara transfected SW-13 hücreleri ve stabil SW-Neo, belirlenmiş boş ile vektör (pCMV6-giriş), transfected SW-13 hücreleri deneysel denetimler olarak görev yapacak.

<table width="653">
	<tbody>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="width:216px;height:63px;">Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium (DMEM)</td>
			<td style="width:115px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:119px;">11965-092</td>
			<td style="width:203px;">Supplemented with fetal bovine serum and penicllin and streptomycin</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="width:216px;height:42px;">Deulbeco&#39;s Phosphate Buffered Saline</td>
			<td style="width:115px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">D8537</td>
			<td>1X solution, used directly</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:216px;height:21px;">3.7% formaldehyde&#160;</td>
			<td style="width:115px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">F8775</td>
			<td>Dilute stock solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:216px;height:21px;">0.05% crystal violet&#160;</td>
			<td style="width:115px;">Harleco</td>
			<td style="width:119px;">192-12</td>
			<td>Dilute stock solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:216px;height:21px;">De-ionized water</td>
			<td style="width:115px;">NA</td>
			<td style="width:119px;">NA</td>
			<td>NA</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="width:216px;height:42px;">Microscope with 400X magnification&#160;</td>
			<td style="width:115px;">NA</td>
			<td style="width:119px;">NA</td>
			<td>NA</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">6-well plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353046</td>
			<td>NA</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="width:216px;height:43px;">Cell dissociation solution non-enzymatic 1X</td>
			<td style="width:115px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">C5914&#160;</td>
			<td>1X solution, used directly</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

characterization of cell membrane extensions and studying their roles in cancer cell adhesion dynamics

Hücre zarı'nın uzantısı repertuar onların ya da göçmen potansiyelleri de dahil olmak üzere kanser hücrelerinin çeşitli kötü huylu davranışlar modüle. Nasıl hücre sinyallemesi olayların etkisi kanser hücre davranış ve saldırganlık belirlemek için kritik doğru şekilde sınıflandırmak ve hücre uzantıları ölçmek ve bir hücrenin yapışkanlı kapasitesi üzerindeki etkisini ölçmek için yeteneğidir. Burada, vitro tasarım ve bir hücre uzantısı quantification yöntemiyle birlikte kurulan vitro modelinde bir yapışma kapasite tahlil Adrenokortikal Karsinom (ACC) için kullanımını açıklar. Özellikle, DKK3, sözde Tümör baskılayıcı ve bir yanlısı farklılaşma faktörü üzerine etkileri membran uzantısı fenotip ACC hücre satırının SW-13 test ediyoruz. Biz nispeten basit, güvenilir sağlamak için bu deneyleri teklif ve kolay yorumlanabilir ölçümleri bu özellikleri çeşitli deneysel koşullarda ölçer.

Yukarıdaki deneyleri kullanarak, hücre uzantısı morfoloji ve hücre adezyon özellikleri DKK3 overexpression etkileri kurulan ACC hücre hattında SW-13, vitrotest edildi. DKK3 overexpressing hücreleri stabil Myc-DDK etiketli pCMV6-giriş/DKK3 plazmid Vektörler ve SW-DKK3 belirlenmiş hücrelerle SW-13 transfecting tarafından üretildi. Benzer şekilde, stabil boş vektör pCMV6-giriş ile transfected hücreleri transfection ve passaging denetimi olarak oluşturulan ve SW-...

Watch this Scientific Journal Video about Characterization of Cell Membrane Extensions and Studying Their Roles in Cancer Cell Adhesion Dynamics at JoVE.com

Characterization of Cell Membrane Extensions and Studying Their Roles in Cancer Cell Adhesion Dynamics

Bu çalışmada yardımcı programı ve kolaylığı nicel hücre zarı uzantısı ölçüm ve hücre yapışkanlı kapasite için onun korelasyon gösterir. Temsil edici bir örnek olarak, biz burada Dickkopf ilgili biraz protein 3 (DKK3) artan lobopodia oluşumu teşvik ve vitroAdrenokortikal Karsinom hücre adhesiveness hücreleri göstermek.

Hücre zarının uzantıları ve rolleri kanser hücre adezyon dinamikleri eğitim karakterizasyonu

The cell membrane&#39;s extension repertoire modulates various malignant behaviors of cancer cells, including their adhesive and migratory potentials. The ...

Research

JoVE Journal

Cancer Research

A Protocol for Rapid Post-mortem Cell Culture of Diffuse Intrinsic Pontine Glioma (DIPG)

A Protocol for Rapid Post-mortem Cell Culture of Diffuse Intrinsic Pontine Glioma DIPG

Diffüz İçsel Pontine Glioma Hızlı post-mortem Hücre Kültürü için Protokol (DIPG)

Diffuse Intrinsic Pontine Glioma (DIPG) is a childhood brainstem tumor that carries a universally fatal prognosis. Because surgical resection is not a ...

Target Cell Pre-enrichment and Whole Genome Amplification for Single Cell Downstream Characterization

Hedef hücre ön zenginleştirme ve tüm genom amplifikasyon tek hücre aşağı akım karakterizasyonu için

Rare target cells can be isolated from a high background of non-target cells using antibodies specific for surface proteins of target cells. A recently ...

3-D Cell Culture System for Studying Invasion and Evaluating Therapeutics in Bladder Cancer

3-b hücre kültür sistemi istila eğitim ve Mesane kanserinde tedavi değerlendirmek için

Bladder cancer is a significant health problem. It is estimated that more than 16,000 people will die this year in the United States from bladder cancer. ...

Mesenchymal Stem Cell Isolation from Pulp Tissue and Co-Culture with Cancer Cells to Study Their Interactions

Mezenkimal kök hücre izolasyon hamuru doku ve kanser hücreleri ile ortak kültür ilişkileri incelemek için

Cancer as a multistep process and complicated disease is not only regulated by individual cell proliferation and growth but also controlled by tumor ...

Flow Cytometric Analysis of Mitochondrial Reactive Oxygen Species in Murine Hematopoietic Stem and Progenitor Cells and MLL-AF9 Driven Leukemia

Murine Hematopoetik Kök ve Progenitor Hücrelerde Mitokondriyal Reaktif Oksijen Türlerinin Akış Sitometrik Analizi ve MLL-AF9 Tahrikli Lösemi

We present a flow cytometric approach for analyzing mitochondrial ROS in various live bone marrow (BM)-derived stem and progenitor cell populations from ...

Establishment of Gastric Cancer Patient-derived Xenograft Models and Primary Cell Lines

Mide kanseri hasta-türetilen xenograft modelleri ve primer hücre hatları kurulması

The use of preclinical models to advance our understanding of tumor biology and investigate the efficacy of therapeutic agents is key to cancer research. ...

Semi-automatic PD-L1 Characterization and Enumeration of Circulating Tumor Cells from Non-small Cell Lung Cancer Patients by Immunofluorescence

İmmünfluoresans Ile Küçük Hücreli Olmayan Akciğer Kanseri Hastalarından Dolaşımdaki Tümör Hücrelerinin Yarı Otomatik PD-L1 Karakterizasyonu ve Numaralandırılması

Circulating tumor cells (CTCs) derived from the primary tumor are shed into the bloodstream or lymphatic system. These rare cells (1&#8722;10 cells per mL ...

Radiosensitivity of Cancer Stem Cells in Lung Cancer Cell Lines

Akciğer Kanseri Hücre Hatlarında Kanser Kök Hücrelerinin Radyosensitivite

The presence of cancer stem cells (CSCs) has been associated with relapse or poor outcomes after radiotherapy. Studying radioresistant CSCs may provide ...

Comparing Metastatic Clear Cell Renal Cell Carcinoma Model Established in Mouse Kidney and on Chicken Chorioallantoic Membrane

Fare Böbreği ve Tavuk Koryoallantoik Membranda Kurulan Metastatik Berrak Hücreli Renal Hücreli Karsinom Modelinin Karşılaştırılması

Metastatic clear cell renal cell carcinoma (ccRCC) is the most common subtype of kidney cancer. Localized ccRCC has a favorable surgical outcome. However, ...

Quantification of Tumor Cell Adhesion in Lymph Node Cryosections

Lenf Nodu Kriyosiyonlarında Tümör Hücre Adezyonunun Ölçülmesi

Tumor-draining lymph nodes (LNs) are not merely filters of tumor-produced waste. They are one of the most common regional sites of provisional residence ...