Name: development of an electrochemical dna biosensor to detect a foodborne pathogen
Uploaded: 2018-06-03T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Development of an Electrochemical DNA Biosensor to Detect a Foodborne Pathogen at JoVE.com

Yazarlar Universiti Putra Malezya destek kabul etmek istiyorum.

Not: kullanılan tüm kimyasal ve biyokimyasal reaktifleri analitik nitelikte olmalıdır ve daha fazla arıtma kullanılır. Tüm çözümler steril deiyonize su kullanarak hazırlayın. Otoklav sterilizasyon öncesinde tüm cam.
Dikkat: Lütfen denetimleri (duman hood, torpidoda) mühendislik kullanımı da dahil olmak üzere laboratuvar faaliyetleri gerçekleştirirken tüm uygun güvenlik yöntemleri kullanın ve kişisel koruyucu donanımları (koruyucu gözlük, eldiven, önlük, tam uzu...

Bir dönüştürücü (nükleik asit veya DNA burada) için uygun biyolojik tanıma öğeler seçimi, elektrokimyasal biyoalgılayıcı bu tip başarılı geliştirme için bir çerçeve içinde önemli adımlardır dönüştürücü algılama tabakası oluşturmak için kimyasal bir yaklaşım; iletim malzeme; DNA immobilizasyon ve hibridizasyon duruma getirilmesi; ve gerçek numuneleri kullanılarak geliştirilen biyoalgılayıcı doğrulama.
Hassas ve seçici elektrokimyasal DNA biyoalgıla...

Son yıllarda genel ve bilimsel tartışmaların önemli bir konu, gıda zehirlenmesi 3 aracıları ile ilişkili: mikroorganizmaların1, kimyasal madde2ve parazitler3. Kontamine gıda ciddi sağlık sonuçları insanlar, özellikle zayıf bağışıklık sistemi, yaşlı, hamile kadınlar, bebekler ve küçük çocuklar4olanların daha yüksek risk grubundaki neden olabilir. İle daha--dan bir milyon yılda Afrika, Asya ve Latin Amerika 5 yaşın altındaki çocuklarda meydana gelen akut ishal durumlarında, gıda zehirlenmesi büyük küresel hastalık5,6 ve Dünya Sağlık Örgütü kurdu mikroorganizmaların en önemli katkıda bulunan7olarak. Vibrio parahaemolyticus en çok tanınan öldürücü suşları arasında öne çıkmaktadır. Genellikle, nehir ağzı, kıyı ve deniz ortamlarının8' bulundu, hangi yüksek tuz ortamlarda aktif hale gelir ve yetersiz mishandled pişmiş veya çiğ deniz yenen ciddi bir insan gastroenterit tipine neden bir Ayagin Gram-negatif bakteri olduğunu ürünleri9. Ayrıca, mevcut tıbbi durumlar bazı kişilerde yara enfeksiyonu, septisemi veya kulak enfeksiyonu V. parahaemolyticus10' dan doğan eğilimli onları. Parahaemolyticus V. hemolysins virülans faktörleri hastalık patogenezinde katkıda iki türlere ayrılmıştır: tdh genler tarafından kodlanmış opsonins doğrudan hemolysin (TDH) ve trh genler11tarafından kodlanmış TDH ile ilgili hemolysin. V. parahaemolyticus virülans işaretleri (tdh ile trh gen) çoğunlukla Klinik numune yerine çevre örnekler bulunur.
Parahaemolyticus koşullar, geniş bir dizi altında hayatta yeteneği hızla yanıt çevresel değişiklikler12' ye sahip olur. Onun toksisite hücre kitle13ile paralel olarak arttıkça onun yayılmasını önleme mekanizması tehlike potansiyeli dozu artarken. Daha da kötüsü, iklim değişikliği onların hücre nüfus büyüme14hızlandırmak için yeterli koşulları ile bu bakterilerin sağlamaktadır. Yüksek frekansı nedeniyle, bilhassa ticaret ve bu ürünler büyük miktarlarda15,16 ' nerede bulunurlar olduğundan deniz ürünleri imalatı gıda tedarik zinciri boyunca izlenmesi V. parahaemolyticus ihtiyacı Dünya çapında. Şu anda bakteri tespit ve izole bir dizi biyokimyasal testleri, zenginleştirme ve seçmeli medya17, immunomagnetic jelleştirici enzim bağlı gibi yöntemleri kullanarak assay (ELISA)18, darbe alan jel elektroforez (PFGE) 19, lateks aglutinasyon test ve polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) testleri20. Bu yöntemler genellikle kalifiye personel, sofistike aletleri ve kirlenme hakkında bilgileri hemen vermeyin zahmetli teknikler gerektirir. Bu ciddi bir şekilde derhal zararlı kirlenmesine ve bünyesinde uygulamalar algılama olasılığını kısıtlar. Hızlı algılama araçları olağanüstü bir meydan kalır.
Bir zaman tasarrufu, düşük maliyetli, pratik ve gerçek zamanlı analiz yöntemi21,22,23,24 sunduğundan Biosensing gıda kaynaklı patojenler tespiti için umut verici bir seçenek olarak ortaya çıkıyor . Ancak, birçok olumlu sonuçlar analit algılama çivili örnekleri ve standart çözüm biyosensörler kullanarak rağmen hala var. sulu karışımları veya organik özler25gerçek örnekler için uygulanan araştırma eksikliği Son zamanlarda, elektrokimyasal biyosensörler doğrudan ve/veya dolaylı Deoksiribonükleik asit (DNA) algılama kullanarak tamamlayıcı hedef hibridizasyon olay26 üzerinden onların özel algılama nedeniyle bilim adamları arasında artan ilgi almış , 27 , 28 , 29. bu benzersiz yaklaşımları ile karşılaştırıldığında böylece küçültme ve ticari kullanım için gelecek vaat eden bir teknoloji sunan biyosensörler, enzim tabanlı daha stabildir. İşte parahaemolyticus V. yüksek seçicilik, duyarlılık ve pratiklik, hibridizasyon sırasında DNA dizisi özgüllük dayalı algılayabilir hızlı bir araç oluşturmak için hedef çalışma bildirdi. Kimlik stratejileri polylactic asit-sağlamlık altın nano tanecikleri (PLA-AuNPs)30 ve serigrafi karbon elektrotlar (SPCEs) ile birlikte hibridizasyon göstergesi varlığında, metilen mavisi (MB) içerir. Gelişmiş algılama yapı potansiyelini daha fazla bakteri DNA lysate ve taze cockle örnekleri kullanarak keşfedilmeden.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Acetic acid</td>
			<td>Merck</td>
			<td>100056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroform</td>
			<td>Merck</td>
			<td>102445</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diaminoethane tetraacetic acid</td>
			<td>Promega</td>
			<td>E5134</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dibasic sodium phosphate&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S9763</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disodium hydrogen phosphate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>255793</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>16368</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gold (III) chloride trihydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>520918</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrochloric acid</td>
			<td>Merck</td>
			<td>100317</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methylene blue</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M44907</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monobasic sodium phosphate, monohydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S3522</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-buffered saline</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5119</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly(lactic acid) resin, commercial grade 4042D</td>
			<td>NatureWorks</td>
			<td>4042D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium chloride</td>
			<td>R&#38;M Chemicals</td>
			<td>59435</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium dihydrogen phosphate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P9791</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium hexacyanoferrate III</td>
			<td>R&#38;M Chemicals</td>
			<td>208019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium acetate anhydrous salt</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S2889</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S9888</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trisodium citrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S1804</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris(hydroxymethyl) aminomethane</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>T395-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris-Base</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP152-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2X PCR Master Mix with Dual-Dye</td>
			<td>Norgen Biotek</td>
			<td>28240</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose gel</td>
			<td>Merck</td>
			<td>101236</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bolton Agar</td>
			<td>Merck</td>
			<td>100079</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bolton Broth</td>
			<td>Merck</td>
			<td>100079</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CHROMagar Vibrio</td>
			<td>CHROMagar</td>
			<td>VB910</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dNTPs</td>
			<td>Promega</td>
			<td>U1511</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nuclease-free water</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>R0581</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin methylene blue agar&#160;</td>
			<td>Merck</td>
			<td>101347</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GelRed</td>
			<td>Biotium</td>
			<td>41001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>Merck</td>
			<td>104092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Go Taq Buffer</td>
			<td>Promega</td>
			<td>M7911</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Loading dye 100 bp DNA ladder</td>
			<td>Promega</td>
			<td>G2101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Loading dye 1kb DNA ladder</td>
			<td>Promega</td>
			<td>G5711</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium chloride</td>
			<td>Promega</td>
			<td>91176</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mannitol egg yolk polymyxin agar</td>
			<td>Merck</td>
			<td>105267</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>McConkey Agar</td>
			<td>Merck</td>
			<td>105465</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nutrient Broth</td>
			<td>Merck</td>
			<td>105443</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Taq polymerase</td>
			<td>Merck</td>
			<td>71003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypticase Soy Broth</td>
			<td>Merck</td>
			<td>105459</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypticase Soy Agar</td>
			<td>Merck</td>
			<td>105458</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

development of an electrochemical dna biosensor to detect a foodborne pathogen

Vibrio parahaemolyticus (V. parahaemolyticus) insan mortalite ve morbidite oranı önemli ölçüde etkileyen küresel olarak, halk sağlığı sorunları büyük bir oranda katkıda ortak bir gıda kaynaklı patojen var. Parahaemolyticus tespiti kültür tabanlı yöntemleri, immünolojik deneyleri ve moleküler tabanlı yöntemleri gibi geleneksel yöntemlerle karmaşık örnek işlem gerektirir ve zaman alıcı, sıkıcı ve pahalı. Son zamanlarda, biyosensörler umut verici ve kapsamlı algılama yöntemi ile hızlı algılama, maliyet-etkililik ve pratiklik avantajları olduğu kanıtlanmıştır. Bu araştırma parahaemolyticus V. yüksek seçicilik ve DNA hibridizasyon kullanılmasının duyarlılık ile algılama hızlı bir yöntem geliştirmeye odaklanmaktadır. Çalışma, sentezlenmiş polylactic asit-sağlamlık altın nano tanecikleri (PLA-AuNPs) karakterizasyonu kullanarak x-ışını kırınım (XRD), ultraviyole görünür spektroskopisi (UV-VIS), transmisyon elektron mikroskobu (TEM), alan emisyon elde edildi Elektron mikroskobu (FESEM) ve çevrimsel Voltammetry (CV) tarama. Biz de daha fazla istikrar, hassasiyet ve tekrarlanabilirlik PLA-AuNPs in test dışarı taşıdı. PLA AuNPs sulu çözüm ses yapısını stabilize nano tanecikleri kurdu bulduk. Biz de duyarlılık daha küçük bir ücret transferi direnç (Rct) değer ve aktif yüzey alanı (0,41 cm2) artış sonucunda geliştirilmiş gözlenen. Bizim DNA biyoalgılayıcı gelişimi PLA-AuNPs ve redoks göstergesi olarak metilen mavisi (MB) kullanarak bir Serigrafi karbon elektrot (SPCE) değişiklik dayanıyordu. İmmobilizasyon ve hibridizasyon olayları fark nabız voltammetry (DPV) tarafından değerlendirildi. Tamamlayıcı, tamamlayıcı bulduk ve uyumsuz oligonucleotides özellikle tarafından uydurma biyoalgılayıcı ayırt edildi. Ayrıca çeşitli gıda kaynaklı patojenlere karşı olan çalışmalar ve parahaemolyticus V. kimlik taze istiridye içinde güvenilir bir şekilde duyarlı algılama gösterdi.

AuNPs oluşumu ile sodyum sitrat mevcut sulu çözüm renk değişikliği ile ortaya çıktı. Bu rengi açık sarı bir derin yakut kırmızı değiştirmek için neden oldu. PLA-AuNPs nesil yüzey plasmon rezonans (SPR) en yüksek büyüme bulunduğu yaklaşık 540 UV-vis spectra (Şekil 1) üzerinden teyit edildi nm. Oluşumu ve PLA-AuNPs varlığını parçacık boyutu37bağlı olarak 500-600 nm dalga boyu aralıkları belirtilen. ...

Watch this Scientific Journal Video about Development of an Electrochemical DNA Biosensor to Detect a Foodborne Pathogen at JoVE.com

Development of an Electrochemical DNA Biosensor to Detect a Foodborne Pathogen

Gıda kaynaklı patojen tespit etmek için bir elektrokimyasal DNA biyoalgılayıcı gelişimi

Vibrio parahaemolyticus algılamak için polylactic asit-sağlamlık, altın nano tanecikleri değiştirilme tarihi, Serigrafi karbon elektrot oluşan bir elektrokimyasal DNA biyoalgılayıcı geliştirilmesi için bir protokol sunulmuştur.

Vibrio parahaemolyticus (V. parahaemolyticus) is a common foodborne pathogen that contributes to a large proportion of public health problems globally, ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Fabrication of Electrochemical-DNA Biosensors for the Reagentless Detection of Nucleic Acids, Proteins and Small Molecules

Nükleik Asitler, Proteinler ve Küçük Moleküller Reagentless Algılama Elektrokimyasal DNA Biyosensörler Fabrikasyon

As medicine is currently practiced, doctors send specimens to a central laboratory for testing and thus must wait hours or days to 
receive the results. ...

Design of a Cyclic Pressure Bioreactor for the Ex Vivo Study of Aortic Heart Valves

Design of a Cyclic Pressure Bioreactor for the Ex Vivo Study of Aortic Heart Valves

Devirli Basınç Biyoreaktör Tasarım Ex vivo</emAort Kalp Vanalar> Eğitim

The aortic valve, located between the left ventricle and the aorta, allows for unidirectional blood flow, preventing backflow into the ventricle. Aortic ...

Hollow Microneedle-based Sensor for Multiplexed Transdermal Electrochemical Sensing

Multiplexed Transdermal Elektrokimyasal Algılama Hollow microneedle tabanlı Sensör

The development of a minimally invasive multiplexed monitoring system for rapid analysis of biologically-relevant molecules could offer individuals ...

Bacterial Detection &amp; Identification Using Electrochemical Sensors

Bacterial Detection & Identification Using Electrochemical Sensors

Elektrokimyasal Sensörler kullanarak Bakteriyel Algılama ve Tanıma

Electrochemical  sensors are widely used for rapid and accurate measurement of blood glucose and  can be adapted for detection of a wide variety of ...

High-throughput, Automated Extraction of DNA and RNA from Clinical Samples using TruTip Technology on Common Liquid Handling Robots

Ortak Liquid Handling Robotlar TruTip Teknoloji kullanarak Klinik Örneklerden DNA ve RNA yüksek verimlilik, Otomatik Ekstraksiyon

TruTip is a simple nucleic acid extraction  technology whereby a porous, monolithic binding matrix is inserted into a  pipette tip. The geometry of the ...

Biosensor for Detection of Antibiotic Resistant Staphylococcus Bacteria

Antibiyotik Dirençli Stafilokok bakteri tespiti için biyosensör

A structurally transformed lytic bacteriophage having a broad host range of Staphylococcus aureus strains and a penicillin-binding protein (PBP 2a) ...

Sensing of Barrier Tissue Disruption with an Organic Electrochemical Transistor

Organik Elektrokimyasal Transistör Bariyer Doku bozulması ve Algılama

The gastrointestinal tract is an example of barrier tissue that provides a physical barrier against entry of pathogens and toxins, while allowing the ...

A Microfluidic-based Electrochemical Biochip for Label-free DNA Hybridization Analysis

Etiket-serbest DNA Hibridizasyon Analiz için mikroakışkan tabanlı Elektrokimyasal Biochip

Miniaturization of analytical benchtop procedures into the micro-scale provides significant advantages in regards to reaction time, cost, and integration ...

Development of an In Vitro Ocular Platform to Test Contact Lenses

Development of an In Vitro Ocular Platform to Test Contact Lenses

Bir Gelişimi<em&gt; İn Vitro</em&gt; Göz Platformu Lensler Test

Currently, in vitro evaluations of contact lenses (CLs) for drug delivery are typically performed in large volume vials,1-6 which fail to mimic ...

The Use of a &#946;-lactamase-based Conductimetric Biosensor Assay to Detect Biomolecular Interactions

The Use of a ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â²-lactamase-based Conductimetric Biosensor Assay to Detect Biomolecular Interactions

Biyomoleküler etkileşimleri algılamak için bir Conductimetric Biyoalgılayıcı β-lactamase tabanlı tahlil kullanımı

Biosensors are becoming increasingly important and implemented in various fields such as pathogen detection, molecular diagnosis, environmental ...