Name: standardized method for high-throughput sterilization of arabidopsis seeds
Uploaded: 2017-10-17T15:00:00
Duration: 8 min 13 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Standardized Method for High-throughput Sterilization of Arabidopsis Seeds at JoVE.com

Мы хотели бы поблагодарить за помощь в подготовке экспериментальных материалов Гаури Датта. Мы признательны также Bettina Wittler и Джеймс Манн для критического обзора рукописи. Эта работа была поддержана NSF грантов DBI-1049341 и MCB-1143813.

<ol>
	<li>Weigel, D., Glazebrook, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Arabidopsis: a laboratory manual. , (2002).</li><li>Koornneef, M., Meinke, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+development+of+Arabidopsis+as+a+model+plant.">The development of Arabidopsis as a model plant.</a> Plant J. 61 (6), 909-921 (2010).</li><li>The Arabidopsis Genome Initiative. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=+Analysis+of+the+genome+sequence+of+the+flowering+plant+Arabidopsis+thaliana."> Analysis of the genome sequence of the flowering plant Arabidopsis thaliana.</a> Nature. 408 (6814), 796-815 (2000).</li><li>Rivero, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Handling+Arabidopsis+plants:+growth,+preservation+of+seeds,+transformation,+and+genetic+crosses.">Handling Arabidopsis plants: growth, preservation of seeds, transformation, and genetic crosses.</a> Methods Mol Biol. 1062, 3-25 (2014).</li><li>Yamada, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Empirical+analysis+of+transcriptional+activity+in+the+Arabidopsis+genome.">Empirical analysis of transcriptional activity in the Arabidopsis genome.</a> Science. 302 (5646), 842-846 (2003).</li><li>Alonso, J. M., Stepanova, A. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arabidopsis+transformation+with+large+bacterial+artificial+chromosomes.">Arabidopsis transformation with large bacterial artificial chromosomes.</a> Methods Mol Biol. 1062, 271-283 (2014).</li><li>Savage, L. J., Imre, K. M., Hall, D. A., Last, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+essential+Arabidopsis+nuclear+genes+encoding+plastid-targeted+proteins.">Analysis of essential Arabidopsis nuclear genes encoding plastid-targeted proteins.</a> PLoS One. 8 (9), e73291 (2013).</li><li>Podar, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plant+growth+and+cultivation.">Plant growth and cultivation.</a> Methods Mol Biol. 953, 23-45 (2013).</li><li>Xu, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+agar-plate+method+for+studying+root+growth+and+response+of+Arabidopsis+thaliana.">An improved agar-plate method for studying root growth and response of Arabidopsis thaliana.</a> Sci Rep. 3, 1273 (2013).</li><li>Clough, S. J., Bent, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Floral+dip:+a+simplified+method+for+Agrobacterium-mediated+transformation+of+Arabidopsis+thaliana.">Floral dip: a simplified method for Agrobacterium-mediated transformation of Arabidopsis thaliana.</a> Plant J. 16, (1998).</li><li>Cederholm, H. M., Benfey, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+sensitivities+to+phosphate+deprivation+suggest+that+RGF+peptides+play+disparate+roles+in+Arabidopsis+thaliana+root+development.">Distinct sensitivities to phosphate deprivation suggest that RGF peptides play disparate roles in Arabidopsis thaliana root development.</a> New Phytol. 207 (3), 683-691 (2015).</li><li>Ye, G. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arabidopsis+ovule+is+the+target+for+Agrobacterium+in+planta+vacuum+infiltration+transformation.">Arabidopsis ovule is the target for Agrobacterium in planta vacuum infiltration transformation.</a> Plant J. 19 (3), 249-257 (1999).</li><li>Kuromori, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+collection+of+11+800+single-copy+Ds+transposon+insertion+lines+in+Arabidopsis.">A collection of 11 800 single-copy Ds transposon insertion lines in Arabidopsis.</a> Plant J. 37 (6), 897-905 (2004).</li><li>Fiers, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+14-amino+acid+CLV3,+CLE19,+and+CLE40+peptides+trigger+consumption+of+the+root+meristem+in+Arabidopsis+through+a+CLAVATA2-dependent+pathway.">The 14-amino acid CLV3, CLE19, and CLE40 peptides trigger consumption of the root meristem in Arabidopsis through a CLAVATA2-dependent pathway.</a> Plant Cell. 17 (9), 2542-2553 (2005).</li><li>Stepanova, A. N., Alonso, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PCR-based+screening+for+insertional+mutants.">PCR-based screening for insertional mutants.</a> Methods Mol Biol. 323, 163-172 (2006).</li><li>O'Malley, R. C., Alonso, J. M., Kim, C. J., Leisse, T. J., Ecker, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+adapter+ligation-mediated+PCR+method+for+high-throughput+mapping+of+T-DNA+inserts+in+the+Arabidopsis+genome.">An adapter ligation-mediated PCR method for high-throughput mapping of T-DNA inserts in the Arabidopsis genome.</a> Nat Protoc. 2 (11), 2910-2917 (2007).</li><li>L&#243;pez-Ribera, I., Vicient, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+ultrasonication+to+increase+germination+rates+of+Arabidopsis+seeds.">Use of ultrasonication to increase germination rates of Arabidopsis seeds.</a> Plant Methods. 13 (31), (2017).</li></ol>

Авторы не имеют ничего сообщать.

Когда выращивания арабидопсиса семена на стерильную СМИ, должны применяться некоторые формы стерилизации. Bleach и хлора газовой стерилизации лечения привести аналогичные всхожесть темпы и формы торможение роста. Ни один из методов стерилизации вызывает значительное снижение в всхожесть семян с высокой всхожести потенциал; Однако отбеливатель стерилизации рекомендуется для линий с более низким потенциалом прорастания (20-70%), из-за малого, хотя и незначительное, улучшение всхожесть по сравнению с газовой стерилизации (Рисунок 3А).
Стерилизационные Arabidopsis семена с отбеливателем концентрации от 40-100% для до 10 мин обеспечивает удовлетворительный всхожесть проценты и эффективные формы подавления. Хотя концентрации отбеливатель, менее чем в 40% обеспечивают адекватные стерилизации для большинства много семян, используя 40% концентрации или выше гарантии эффективной стерилизации даже сильно загрязненные семян лотов. Это важно не превышать 10 мин стерилизации при использовании отбеливателя концентрации равных или выше 80% чтобы избежать высокой семенной смертности и дефекты в развитии рассады.
Лечение Arabidopsis семена с концентрации газа хлора 6,1% или 16,5% для 1 h результаты ставок высокой всхожести и адекватные формы ликвидации. Низкая хлора концентрация газа (2,1%) могут успешно использоваться, увеличивая продолжительность стерилизации до 3 ч.
Когда несколько строк нужно стерилизовать, рекомендуется жидкий стерилизации в растворе хлорки 50% за 10 мин. Для большего числа линий газовой стерилизации с концентрацией газа 6,1% за 1 ч это лучший вариант, так как многие линии можно стерилизовать быстро и легко с менее манипуляции.
Наши результаты обеспечивают стандартизированные условия для стерилизации большое количество семян различных генотипов и семена с нижней всхожесть потенциал. Единственным ограничением этих методов стерилизации является, что они не могут применяться к семена с прорастания цены менее чем 20% из-за обширных семян смертности. Альтернативные методы, такие как sonication17, повысить всхожесть в отсутствие стерилизации может быть полезно в тех случаях.

Резуховидка Таля (Арабидопсиса) является основной модельный организм для фундаментальных и прикладных исследований в завод биологии1,2,3. Хотя стандартные условия для выращивания арабидопсиса роста были хорошо установленных4, эффект стерилизации семян на жизнеспособности семян не были протестированы тщательно. Твердые СМИ в пластин или коробки обычно используется для облегчения роста Arabidopsis саженцев для многих экспериментальных приложений, таких как идентификация гомозиготных смертоносных мутантов в разделению населения, наблюдения за стрелять и корень фенотипы в начале этапы, изоляции патогеном бесплатно ткани, сбор большого количества Рассада ткани, выбор трансформантов или лекарственно-растений и оценки всхожести1,2,3,4 . Семена собирают из растений, выращенных в парник или рост палата иногда заражены с микроорганизмами и пыли. Рост Arabidopsis саженцев на различных типах стерильных СМИ требует предварительного семян стерилизации для удаления микробного загрязнения, такие как грибки и бактерии, присутствующие на поверхности семян. Использование режима стерилизации эффективной семян имеет решающее значение для баланса высокой всхожести, минимальное загрязнение и роста энергичные растений.
Два наиболее распространенных методов, используемых для стерилизации семян Arabidopsis основаны на коммерческие дезинфицирующие средства (жидкой фазы) и хлора (пара фаза). Различные процедуры использовались для обоих жидкой фазы стерилизации1,4,5,6,,78,9 , 10 и паровой фазы стерилизации Arabidopsis семена8,10,11,12,13,14,15 ,16. Однако хотя эти процедуры были эффективным в выполнении стерилизации семян используемых генотипов, подробный анализ влияния различных стерилизации лечения на семена различных генотипов не сообщалось. Таким образом для определения условий, в которых эффективной стерилизации сочетается с высоким всхожесть требуется оптимизация этих процедур стерилизации.
Арабидопсис биологических центр ресурсов (ABRC) имеет уникальную) проверить жизнеспособность семян целого ряда различных генотипов в коллекции и b) воспользуйтесь процедур контроля качества, применения внутри страны и в ответ на отзывы пользователей о прорастания семян. Эксперименты, представленные здесь заключаются для определения влияния различных методов стерилизации на прорастание семян диапазон Arabidopsis генотипов. Оптимизированный стерилизацию, которые приводят к высокой семенной всхожесть ставок при сохранении минимальный возбудителя загрязнения представлены для отбеливателя и хлора газовой стерилизации.

standardized method for high-throughput sterilization of arabidopsis seeds

Резуховидка Таля Саженцы (арабидопсиса) часто нужно выращивать на стерильную СМИ. Это требует предварительного семян стерилизации для предотвращения роста микробиологических загрязнений на поверхности семян. В настоящее время Arabidopsis семена стерилизуются, с использованием двух различных стерилизации методов в условиях, которые отличаются между лабораториями и не были стандартизированы, часто приводит только частично эффективной стерилизации или чрезмерного семян смертности. Большинство из этих методов, также не легко масштабируемая большое количество линий семян различных генотипов. Технологии для высокой пропускной способности анализа Arabidopsis продолжают размножаться, стандартизированные методы стерилизации большого количества семян различных генотипов становятся существенно важное значение для проведения этих видов экспериментов. Ответ количество линий Arabidopsis на двух разных стерилизации методов оценивалась, основанные на всхожесть семян и уровня загрязнения семян с микробы и другие патогены. Лечение включает разные концентрации стерилизации агентов и время воздействия, объединены, чтобы определить оптимальные условия для выращивания арабидопсиса семян стерилизации. Оптимизированный протоколы были разработаны для двух разных стерилизации методы: bleach (жидкой фазы) и хлора (Cl2) газ (пара фаза), оба приводит к высокой семенной всхожесть цены и минимальный микробной контаминации. Полезность этих протоколов была проиллюстрирована тестирование дикого типа и мутантов семена с диапазоном всхожесть потенциалов. Наши результаты показывают, что семена можно эффективно стерилизовать с помощью либо метода без чрезмерного семян смертности, несмотря на пагубные последствия стерилизации были замечены на семена с ниже, чем потенциал для оптимального прорастания. Кроме того была разработана уравнение для включения исследователей применить условия стерилизации газом стандартизированных хлора в герметичные контейнеры различных размеров. Протоколы, описанные здесь позволяют простой, эффективной и недорогой семян стерилизации для большого числа линий арабидопсиса.

Арабидопсис семена, собранных из открытых поле, Теплице или рост палата иногда заражены различные микроорганизмы, как грибов и бактерий в1,4. Таким образом прорастания семян на стерильную СМИ может быть особенно сложным из-за загрязнения плит, особенно когда снабжения семенами ограничен. Оптимизированный протокол для отбеливателя и хлора газовой стерилизации, результаты которого представлены ниже, свести к минимуму эту проблему и сохраняет жизнеспособность семян, необходимых для высокопроизводительных приложений.
Эффекты отбеливатель стерилизации на прорастание семян Arabidopsis Col-0
Bleach является наиболее часто используемым агент для стерилизации семян в многочисленных видов растений. Оптимальная концентрация стерилизации агента и время экспозиции варьируется от видов. Ряд протоколов были заняты с помощью отбеливателя для стерилизации Arabidopsis семена1,4,5,6,,78,9 , 10. четыре различных концентраций отбеливатель с пяти различных выдержка, периоды были проверены, и результаты представлены в Рисунок 1. Процедуры были применены в Колумбии одичал тип (Col-0) семена. Эффект концентрация отбеливателя на прорастание семян Col-0 варьируется в зависимости от времени стерилизации как свидетельствует значительное взаимодействие между отбеливатель концентрации и времени стерилизации (рис. 1, P &#60; 0,001, ANOVA-дисперсионный анализ).
В экспериментах с стерилизации раз между 5 и 10 мин лечения с всех отбеливателя концентрацией привели к столь же высокую всхожесть семян Col-0 (рис. 1). Также высокую всхожесть темпы наблюдались для бытовой отбеливатель концентрации 40% и 50% для всех раз стерилизации. Лечение с 80% и 100% отбеливатель для периодов длиннее 10 минут привел к значительному уменьшение всхожесть, по сравнению с короче замачивания раз (P &#60; 0,01, ANOVA). Кроме того, для 80% и 100% отбеливание лечение 20 мин, прорастание был значительно сократилось по сравнению с соответствующей 40% и 50% отбеливание лечение (P &#60; 0,001, ANOVA).
Семена отображаются различные уровни отбеливания и съежившегося при использовании высокой отбеливатель концентрации за 15 минут или дольше. В дополнение к относительно высоким (до 32%) семян смертности, проросшие семена, стерилизовать в этих условиях, часто показали рост дефектов, отражение в провал семядоли и гипокотиля разворачиваться и удлиненное, что приводит к развития ареста. Большинство методов лечения (14 из 20) были полностью плесень бесплатно, что приводит к общей плесень уровне среднем 0,21% ± 0,003 (Таблица 1).
Лечения с 50% отбеливателя и выдержки времени 10 мин был выбран как лучший режим стерилизации потому, что он в сочетании с хорошим торможение роста поверхности патогена высокой всхожести. Эта процедура была выбрана для тестирования эффект стерилизации отбеливателя на различных мутантных линий, как описано ниже.
Эффекты хлора газовой стерилизации на прорастание семян Col-0
Для оптимизации условий стерилизации газ хлор, три различные концентрации хлора были использованы для стерилизации Col-0 семена для двух периодов времени (Таблица 2). Концентрация газа было рассчитано на объем концентрированной HCl и объем контейнера стерилизации, используя следующее уравнение:
<img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/56587/56587eq2.jpg">
Эта формула была получена с помощью закона идеального газа предполагая 12,3 М HCl, температуре 23 ° C и нормальном атмосферном давлении 101,3 кПа.
Было показано, что эффект концентрации газа хлора на прорастание семян Col-0 зависит от времени стерилизации как указано существенного взаимодействия между временем и концентрации факторов (рис. 2A, P &#60; 0,01, ANOVA) . Концентрация газа хлора не оказало существенного влияния на прорастание семян Col-0, подвергаются стерилизации 1 ч. С этого времени стерилизации, все концентрации хлора аналогичным образом способствует высокий уровень прорастания, выше 85% (P &#62; 0,05, ANOVA). С другой стороны, 3 h Лонг стерилизации привело к значительным снижением всхожесть наибольшей концентрации хлора, по сравнению с двумя более низких концентраций газа (P &#60; 0,05, ANOVA). Эти результаты показывают, что лечение Arabidopsis семян с какой-либо из проверенных хлора концентрации газа за 1 ч или концентрации газа ниже 16,5% за 3 ч, одинаково эффективны в деле сохранения жизнеспособности семян, поскольку прорастание ставки всегда были более более 82%. Однако стерилизации семян для 3 h с 16,5% газа пагубно для прорастания семян.
Количество плесени был также зависит от концентрации газа и времени экспозиции. Рост плесени был эффективно препятствует с относительно высокой концентрации 6,1% и 16,5% хлора для 1 h длительного лечения и все концентрации газа для 3 h (Рисунок 2Б).
На основе этих результатов, лечение с концентрацией газа 6,1% за 1 ч (Таблица 2) была выбрана в качестве лучших паровой фазы стерилизации условие для проверки эффекта газовой стерилизации на различных мутантных линий, так как он в сочетании высокой всхожести ставка ( 85%) с очень низким уровнем загрязнения плесень (0,02%).
Эффекты отбеливателя и хлора газовой стерилизации на семена с различными всхожесть потенциальных
Статистический анализ показал, что ответ всхожесть методов стерилизации зависит от прорастания потенциал линии (рис. 3A, P &#60; 0,01, ANOVA). Отбеливатель ни хлора газовой стерилизации уменьшена всхожесть семян с высокой всхожести потенциальных (группы 4 и 5). Ни лечения оказали воздействие на уже низкий всхожесть группы с низким всхожестьпотенциал (Группа 1). В отличие от хлора газовой стерилизации привело к значительному сокращению примерно 12-18% (P &#60; 0,01, ANOVA) в всхожесть семян с промежуточным всхожесть потенциалом (группы 2 и 3). Отбеливатель стерилизации также снизилась всхожесть на 13% группы 2, но он не уменьшить всхожесть 3 группы. Хотя без существенных различий в всхожесть отбеливателя и хлор газ лечения в любой группе прорастания (рис. 3A, P &#62; 0.442, ANOVA), семена, стерилизации с помощью отбеливателя имели несколько выше всхожесть, чем газ стерилизации семян во всех группах прорастания.
Стерилизации лечения значительно изменила (P &#60; 0,001, ANOVA) процентов семян, пострадавших от плесени (рис. 3B). Обе хлор газ и отбеливатель стерилизации привело к менее плесени (P &#60; 0,05, ANOVA) по сравнению с не стерилизации. Нет никакой разницы в уровне плесень, обнаружен между газом и отбеливатель стерилизации в любой группе (рис. 3Б, P &#62; 0,4, ANOVA).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56587/56587fig1.jpg"> 
Рисунок 1: эффекты отбеливателя концентрацией и стерилизации времени на прорастание семян Arabidopsis Col-0. Значения являются средства ± SD, полученные из 5 независимых репликаций эксперимента. * Указывает на существенные различия по сравнению с 5 мин, замачивания продолжительность для диапазона концентраций отбеливатель (P &#60; 0,01, ANOVA). #показывает значительные различия по 80% и 100% отбеливатель концентрации по сравнению с 40% и 50% на 20 мин период времени (P &#60; 0,01, ANOVA). <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56587/56587fig1large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56587/56587fig2.jpg"> 
Рисунок 2: эффекты хлора газа время концентрации и стерилизации на семена Arabidopsis Col-0. (A) всхожесть и (B) плесень уровне. Планки погрешностей представляют собой средства ± SD, полученные от 5 биологических и 5 технических репликаций эксперимента. Средства, которые не разделяют письмо значительно отличаются (P &#60; 0,05, ANOVA). <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56587/56587fig2large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56587/56587fig3.jpg"> 
Рисунок 3: эффекты отбеливателя и хлора газовой стерилизации на семена с различными всхожесть потенциальные. (A) всхожесть и (B) плесень уровне. 100 линий Солка T-ДНК были разделены на пять групп в соответствии их всхожесть потенциал определяется как всхожесть в отсутствие любого агента стерилизации. Группы, основанные на всхожесть были следующим образом: Группа 1 (0-20%), Группа 2 (21-50%), Группа 3 (51-70%), Группа 4 (71-90%) и Группа 5 (91-100%). Линии были выбраны случайным образом и их всхожесть потенциал не зависит от генотипа. Значения являются средства ± SD, полученные от трех независимых репликаций эксперимента. Буквы («a», «ab», «c» и т.д.) выше каждое значение указывают статистические группировки категории средств. Средства, которые не разделяют письмо значительно отличаются (P &#60; 0,05, ANOVA). <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56587/56587fig3large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td rowspan="2">Время стерилизации (мин)</td>
			<td colspan="4">Концентрация отбеливателя (%)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>40</td>
			<td>50</td>
			<td>80</td>
			<td>100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5</td>
			<td>0.00%</td>
			<td>0.00%</td>
			<td>0.00%</td>
			<td>2.13%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8</td>
			<td>0.00%</td>
			<td>0.00%</td>
			<td>0.00%</td>
			<td>0.00%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10</td>
			<td>0.00%</td>
			<td>0,50%</td>
			<td>0.00%</td>
			<td>0,36%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15</td>
			<td>0.00%</td>
			<td>0.00%</td>
			<td>0.00%</td>
			<td>0,68%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20</td>
			<td>0,19%</td>
			<td>0,28%</td>
			<td>0.00%</td>
			<td>0.00%</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Таблица 1: Плесень уровне Блич стерилизации семян Col-0.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Блич</td>
			<td>HCl</td>
			<td>Время</td>
			<td rowspan="2">% Хлора (мол Cl2/mol всего газа)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>(мл)</td>
			<td>(мл)</td>
			<td>(h)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25</td>
			<td>1</td>
			<td>1</td>
			<td>2.1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25</td>
			<td>1</td>
			<td>3</td>
			<td>2.1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100</td>
			<td>3</td>
			<td>1</td>
			<td>6.1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100</td>
			<td>3</td>
			<td>3</td>
			<td>6.1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>200</td>
			<td>9</td>
			<td>1</td>
			<td>16,5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>200</td>
			<td>9</td>
			<td>3</td>
			<td>16,5</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Таблица 2: Хлора (Cl2) газовой стерилизации лечения на Columbia одичал тип семян с помощью контейнера 7 Л.
Справочная таблица 1: Запрограммированы для выполнения вычислений для различных объемов контейнерных и % Cl2таблицы. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56587/Supplemental_Table _1.xlsx" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы загрузить этот файл.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Standardized Method for High-throughput Sterilization of Arabidopsis Seeds at JoVE.com

Standardized Method for High-throughput Sterilization of Arabidopsis Seeds

Стандартный метод стерилизации высок объём Arabidopsis семян

Целью данного исследования было определить последствия отбеливателя и хлора газовой стерилизации на прорастание семян генотипов диапазон Arabidopsis, выращенных на стерильную СМИ. Оптимизированный стерилизации протоколы были разработаны для предотвращения роста микробных загрязнителей обеспечивая выживание удовлетворительного семян.

Arabidopsis thaliana (Arabidopsis) seedlings often need to be grown on sterile media. This requires prior seed sterilization to prevent the growth of ...

Research

JoVE Journal

Biology

A High-Throughput Method For Zebrafish Sperm Cryopreservation and In Vitro Fertilization

A High-Throughput Method For Zebrafish Sperm Cryopreservation and In Vitro Fertilization

Высокая пропускная метод для криоконсервации спермы и данио рерио In Vitro Оплодотворение

This is a method for zebrafish sperm cryopreservation that is an adaptation of the Harvey method (Harvey et al., 1982).  We have introduced two changes to ...

A Rapid High-throughput Method for Mapping Ribonucleoproteins (RNPs) on Human pre-mRNA

A Rapid High-throughput Method for Mapping Ribonucleoproteins RNPs on Human pre-mRNA

Быстрое высокой пропускной метод картирования рибонуклеопротеиды (мяРНП) по правам пре-мРНК

Sequencing RNAs that co-immunoprecipitate (co-IP) with RNA binding proteins has increased our understanding of splicing by demonstrating that binding ...

High-throughput Saccharification Assay for Lignocellulosic Materials

Высокая пропускная способность осахаривания Пробирной для лигноцеллюлозной материалы

Polysaccharides that make up plant lignocellulosic biomass can be broken down to produce a range of sugars that subsequently can be 
used in establishing ...

Ice-Cap: A Method for Growing Arabidopsis and Tomato Plants in 96-well Plates for High-Throughput Genotyping

Ice-Cap: A Method for Growing Arabidopsis and Tomato Plants in 96-well Plates for High-Throughput Genotyping

Ice-Кап: метод выращивания Arabidopsis И томатов в 96-луночных планшетах для высокопроизводительного генотипирования

It is becoming common for plant scientists to develop projects that require the genotyping of large numbers of plants. The first step in any genotyping ...

High-throughput Crystallization of Membrane Proteins Using the Lipidic Bicelle Method

Высокая пропускная способность кристаллизации мембранных белков, используя метод липидный Bicelle

Membrane proteins (MPs) play a critical role in many physiological processes such as pumping specific molecules across the otherwise impermeable membrane ...

A High-throughput Method for Measurement of Glomerular Filtration Rate in Conscious Mice

Высокая пропускная метод измерения скорости клубочковой фильтрации в сознании Мыши

The measurement of  glomerular filtration rate (GFR) is the gold standard in kidney function  assessment. Currently, investigators determine GFR by ...

Efficient and Rapid Isolation of Early-stage Embryos from Arabidopsis thaliana Seeds

Efficient and Rapid Isolation of Early-stage Embryos from Arabidopsis thaliana Seeds

Эффективной и быстрой изоляции на ранней стадии эмбрионы из<em&gt; Arabidopsis THALIANA</em&gt; Семена

In flowering plants, the embryo develops within a nourishing tissue - the endosperm - surrounded by the maternal seed integuments (or seed coat). As a ...

High-throughput Titration of Luciferase-expressing Recombinant Viruses

Высокая пропускная Титрование люциферазы экспрессирующих рекомбинантные вирусы

Standard plaque assays to determine infectious viral titers can be time consuming, are not amenable to a high volume of samples, and cannot be done with ...

Recovery of Adult Zebrafish Hearts for High-throughput Applications

Восстановление взрослых данио сердца для высокой пропускной приложений

Use of the zebrafish model system for studying development, regeneration, and disease is expanding toward use of adult hearts for cell dissociation and ...

High-throughput Screening for Chemical Modulators of Post-transcriptionally Regulated Genes

Высокопроизводительный скрининг для химических модуляторов посттранскрипционно регулируемых генов

Both transcriptional and post-transcriptional regulation have a profound impact on genes expression. However, commonly adopted cell-based screening assays ...