Name: analyzing the communication between monocytes and primary breast cancer cells in an extracellular matrix extract (ecme)-based three-dimensional system
Uploaded: 2018-01-08T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analyzing the Communication Between Monocytes and Primary Breast Cancer Cells in an Extracellular Matrix Extract ECME-based Three-dimensional System at JoVE.c

עבודה זו נתמכה על ידי CONACyT FONSEC הסוכן המיוחד/איאמאסאס/ISSSTE פרויקט מס 233061 כדי Ezequiel מ פואנטס-Pananá ועל ידי Fondo Apoyo דה לה Investigación, בית החולים הקניות de México פדריקו גומז (פרויקט מספר לו-2014-053). נה אספינוזה-Sánchez הוא דוקטורנט מן פרוגרמה de Doctorado en Biomédicas עצמה, למד נאסיונאל Autónoma de México (UNAM) ואחווה שהתקבלו 231663 מ- CONACYT. נה E-S, גם להכיר את התמיכה הכספית שסופקו על-ידי המכון המקסיקני של ביטוח לאומי (איאמאסאס).

דגימות מחולים BrC התקבלו מהבנק רקמות של Unidad de Investigación en Virología y גרועה, החולים הקניות de México פדריקו גומז. מחקר זה אושרה על ידי מדעי, אתיות, biosecurity לסקור לוחות של גומז פדריקו החולים הקניות de México: Comité דה Investigación, Comité de Ética en Investigación, Comité דה Bioseguridad. כל המטופלים פרוספקטיבי נרשמו, הודיעו על מהות המחקר...

<ol>
	<li>Rich, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+stem+cells:+understanding+tumor+hierarchy+and+heterogeneity.">Cancer stem cells: understanding tumor hierarchy and heterogeneity.</a> Medicine (Baltimore). 95 (1), 2-7 (2016).</li><li>Wang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+tumor+microenvironment+in+tumorigenesis.">Role of tumor microenvironment in tumorigenesis.</a> J Cancer. 8 (5), 761-773 (2017).</li><li>Quail, D. F., Joyce, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microenvironmental+regulation+of+tumor+progression+and+metastasis.">Microenvironmental regulation of tumor progression and metastasis.</a> Nat Med. 19 (11), 1423-1437 (2013).</li><li>Sica, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophage+polarization+in+tumour+progression.">Macrophage polarization in tumour progression.</a> Semin Cancer Biol. 18 (5), 349-355 (2008).</li><li>Mantovani, A., Marchesi, F., Malesci, A., Laghi, L., Allavena, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumour-associated+macrophages+as+treatment+targets+in+oncology.">Tumour-associated macrophages as treatment targets in oncology.</a> Nat Rev Clin Oncol. , (2017).</li><li>Petersen, O. W., Ronnov-Jessen, L., Howlett, A. R., Bissell, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interaction+with+basement+membrane+serves+to+rapidly+distinguish+growth+and+differentiation+pattern+of+normal+and+malignant+human+breast+epithelial+cells.">Interaction with basement membrane serves to rapidly distinguish growth and differentiation pattern of normal and malignant human breast epithelial cells.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 89 (19), 9064-9068 (1992).</li><li>Debnath, J., Muthuswamy, S. K., Brugge, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphogenesis+and+oncogenesis+of+MCF-10A+mammary+epithelial+acini+grown+in+three-dimensional+basement+membrane+cultures.">Morphogenesis and oncogenesis of MCF-10A mammary epithelial acini grown in three-dimensional basement membrane cultures.</a> Methods. 30 (3), 256-268 (2003).</li><li>Debnath, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+apoptosis+in+creating+and+maintaining+luminal+space+within+normal+and+oncogene-expressing+mammary+acini.">The role of apoptosis in creating and maintaining luminal space within normal and oncogene-expressing mammary acini.</a> Cell. 111 (1), 29-40 (2002).</li><li>Muthuswamy, S. K., Li, D., Lelievre, S., Bissell, M. J., Brugge, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ErbB2,+but+not+ErbB1,+reinitiates+proliferation+and+induces+luminal+repopulation+in+epithelial+acini.">ErbB2, but not ErbB1, reinitiates proliferation and induces luminal repopulation in epithelial acini.</a> Nat Cell Biol. 3 (9), 785-792 (2001).</li><li>Sameni, M., Dosescu, J., Moin, K., Sloane, B. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+imaging+of+proteolysis:+stromal+and+inflammatory+cells+increase+tumor+proteolysis.">Functional imaging of proteolysis: stromal and inflammatory cells increase tumor proteolysis.</a> Mol Imaging. 2 (3), 159-175 (2003).</li><li>Sameni, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MAME+models+for+4D+live-cell+imaging+of+tumor:+microenvironment+interactions+that+impact+malignant+progression.">MAME models for 4D live-cell imaging of tumor: microenvironment interactions that impact malignant progression.</a> J Vis Exp. (60), (2012).</li><li>Jedeszko, C., Sameni, M., Olive, M. B., Moin, K., Sloane, B. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualizing+protease+activity+in+living+cells:+from+two+dimensions+to+four+dimensions.">Visualizing protease activity in living cells: from two dimensions to four dimensions.</a> Curr Protoc Cell Biol. 4, 20 (2008).</li><li>Chimal-Ramirez, G. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MMP1,+MMP9,+and+COX2+expressions+in+promonocytes+are+induced+by+breast+cancer+cells+and+correlate+with+collagen+degradation,+transformation-like+morphological+changes+in+MCF-10A+acini,+and+tumor+aggressiveness.">MMP1, MMP9, and COX2 expressions in promonocytes are induced by breast cancer cells and correlate with collagen degradation, transformation-like morphological changes in MCF-10A acini, and tumor aggressiveness.</a> Biomed Res Int. 2013, 279505 (2013).</li><li>Espinoza-Sanchez, N. A., Chimal-Ramirez, G. K., Mantilla, A., Fuentes-Panana, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-1beta,+IL-8,+and+Matrix+Metalloproteinases-1,+-2,+and+-10+Are+Enriched+upon+Monocyte-Breast+Cancer+Cell+Cocultivation+in+a+Matrigel-Based+Three-Dimensional+System.">IL-1beta, IL-8, and Matrix Metalloproteinases-1, -2, and -10 Are Enriched upon Monocyte-Breast Cancer Cell Cocultivation in a Matrigel-Based Three-Dimensional System.</a> Front Immunol. 8, 205 (2017).</li><li>Li, Y., Wang, L., Pappan, L., Galliher-Beckley, A., Shi, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-1beta+promotes+stemness+and+invasiveness+of+colon+cancer+cells+through+Zeb1+activation.">IL-1beta promotes stemness and invasiveness of colon cancer cells through Zeb1 activation.</a> Mol Cancer. 11, 87 (2012).</li><li>Gallagher, S., Winston, S. E., Fuller, S. A., Hurrell, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunoblotting+and+immunodetection.">Immunoblotting and immunodetection.</a> Curr Protoc Mol Biol. 10, 18 (2008).</li><li>Troeberg, L., Nagase, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zymography+of+metalloproteinases.">Zymography of metalloproteinases.</a> Curr Protoc Protein Sci. 21, 15 (2004).</li><li>Arevalo-Romero, H., Meza, I., Vallejo-Flores, G., Fuentes-Panana, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Helicobacter+pylori+CagA+and+IL-1beta+Promote+the+Epithelial-to-Mesenchymal+Transition+in+a+Nontransformed+Epithelial+Cell+Model.">Helicobacter pylori CagA and IL-1beta Promote the Epithelial-to-Mesenchymal Transition in a Nontransformed Epithelial Cell Model.</a> Gastroenterol Res Pract. 2016, 4969163 (2016).</li><li>Reed, J. R., Leon, R. P., Hall, M. K., Schwertfeger, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-1beta+and+fibroblast+growth+factor+receptor+1+cooperate+to+induce+cyclooxygenase-2+during+early+mammary+tumourigenesis.">Interleukin-1beta and fibroblast growth factor receptor 1 cooperate to induce cyclooxygenase-2 during early mammary tumourigenesis.</a> Breast Cancer Res. 11 (2), 21 (2009).</li><li>Ma, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidermal+growth+factor+(EGF)+and+interleukin+(IL)-1beta+synergistically+promote+ERK1/2-mediated+invasive+breast+ductal+cancer+cell+migration+and+invasion.">Epidermal growth factor (EGF) and interleukin (IL)-1beta synergistically promote ERK1/2-mediated invasive breast ductal cancer cell migration and invasion.</a> Mol Cancer. 11, 79 (2012).</li><li>Grande, S. M., Bannish, G., Fuentes-Panana, E. M., Katz, E., Monroe, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tonic+B-cell+and+viral+ITAM+signaling:+context+is+everything.">Tonic B-cell and viral ITAM signaling: context is everything.</a> Immunol Rev. 218, 214-234 (2007).</li><li>Benton, G., Arnaoutova, I., George, J., Kleinman, H. K., Koblinski, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matrigel:+from+discovery+and+ECM+mimicry+to+assays+and+models+for+cancer+research.">Matrigel: from discovery and ECM mimicry to assays and models for cancer research.</a> Adv Drug Deliv Rev. 79-80, 3-18 (2014).</li><li>Worthington, P., Pochan, D. J., Langhans, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peptide+Hydrogels+-+Versatile+Matrices+for+3D+Cell+Culture+in+Cancer+Medicine.">Peptide Hydrogels - Versatile Matrices for 3D Cell Culture in Cancer Medicine.</a> Front Oncol. 5, 92 (2015).</li><li>Tibbitt, M. W., Anseth, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrogels+as+extracellular+matrix+mimics+for+3D+cell+culture.">Hydrogels as extracellular matrix mimics for 3D cell culture.</a> Biotechnol Bioeng. 103 (4), 655-663 (2009).</li><li>Schlaermann, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+human+gastric+primary+cell+culture+system+for+modelling+Helicobacter+pylori+infection+in+vitro.">A novel human gastric primary cell culture system for modelling Helicobacter pylori infection in vitro.</a> Gut. 65 (2), 202-213 (2016).</li><li>Pompaiah, M., Bartfeld, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gastric+Organoids:+An+Emerging+Model+System+to+Study+Helicobacter+pylori+Pathogenesis.">Gastric Organoids: An Emerging Model System to Study Helicobacter pylori Pathogenesis.</a> Curr Top Microbiol Immunol. 400, 149-168 (2017).</li><li>Takebe, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascularized+and+functional+human+liver+from+an+iPSC-derived+organ+bud+transplant.">Vascularized and functional human liver from an iPSC-derived organ bud transplant.</a> Nature. 499 (7459), 481-484 (2013).</li><li>Takasato, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Directing+human+embryonic+stem+cell+differentiation+towards+a+renal+lineage+generates+a+self-organizing+kidney.">Directing human embryonic stem cell differentiation towards a renal lineage generates a self-organizing kidney.</a> Nat Cell Biol. 16 (1), 118-126 (2014).</li></ol>

תאים אפיתל לגדול קונפורמציה מרחבית תלת-ממד, האינטראקציה שלהם עם החלבונים ECM מכריע בשביל לרקמות הומאוסטזיס. מחקרים סרטן רבים התבססו על התאים גדלו ב monolayers (2D), למרות שהם כבר קריטי להבנת היבטים רבים של היווצרות הגידול והתקדמות, monolayers לא מסכם את הדברים המאפיינים שמטילה על תאים, ECM עבור מופע: הגב?...

הגידול ביולוגיה היא הרבה יותר מסובכים ממה שסברו קודם לכן. הרכבה ראיות מראה כי תאים סרטניים הם יותר מאשר גרידא בתפזורת של תאים מתרבים לא מבוקרת; במקום זאת, נראה תאים אמצעים שונים כדי לבצע פונקציות שונות הצגת הארגון גבוהה וההיררכיה בתוך הגידול1. תאים סרטניים נמצאים גם תקשורת אינטימית עם תאים שאינם טרנספורמציה: מקרופאגים, fibroblasts, לימפוציטים, adipocytes, תאי אנדותל, בין שאר התאים כולם שקועים חלבונים לגרדום, פוליסכרידים המהווים את ECM. אינטראקציות ישיר ועקיף רבים נוצרים בין תאים טרנספורמציה והפך הלא ועם ה-ECM, אשר משפיעה על המחלה תסריט2,3. בחוזקה. במקרה הספציפי של BrC, זה חשוב במיוחד לנתח את התקשורת של תאים BrC עם תאמי, בהתחשב בעובדה כי תאמי נמצאו לשחק תפקיד קריטי באבולוציה של הגידול, הגדלת הסיכון של גרורות, של הישנות המחלה4 ,5.
כדי לנתח אינטראקציות אינטרה-tumoral ותוצאות אפשריות שלהם, גישות חדשות 3D במבחנה פותחו בהתבסס על השימוש של תמציות ECM המספקים microenvironment הרבה יותר מורכב, יותר קרוב למציאות של הגידול ביולוגיה, לעומת תרביות תאים חד שכבתי קונבנציונלי שבו התאים גדלים קשור פלסטיק. פיטרסון, Bissell6 מסופקים הדגם הראשון של nonmalignant, ממאירים בתאי אפיתל החלב תרבותי על קרום המרתף laminin עשיר והיו הראשונים לתאר את המבנים 3D organotypic כי להפלות אדם nonmalignant תאים אפיתל בשד מהקבצים המקבילים ממאיר. עשור לאחר מכן, המודל שפותח על ידי Debnath, Muthuswamy, וסיפק Brugge-7,-8,-9 כלי חשוב להבהיר המסלולים ביולוגי נחשף במהלך שינוי ממאיר של הבלוטות acini, כזה כמו היווצרות acini גדולים עקב התפשטות בלתי מבוקרת, delocalization של חלבונים צומת חזק כמו עדות קיטוב תא לקוי וירידה acini לומן בשל התנגדות תא anoikis, סוג של מוות תאים מתוכנת המתרחשת ב anchorage תלוית תאים כאשר הם להתנתק מהתכונה ECM שמסביב. הדגמים של Sameni, Jedeszko, סלואן התמקדו פעילות הפרוטאוליטי הדמיה על ידי תאים, אשר קשורה קשר הדוק invasiveness, עוד תכונה קריטית של גידול ממאיר10,11,12. מודלים אלה מסתמכים על מטריצות חלבון מעורבב עם חלבונים שונים מתרצה-קרינה פלואורסצנטית מצעים (DQ-ג'לטין, DQ-קולגן, DQ-קולגן הרביעי), באותות פלואורסצנט אשר מעידים על השפלה הפרוטאוליטי של קולגן. דגמי תלת-ממד משמשים גם ללמוד מאפייני תא גזע של שניהם טרנספורמציה ו תאים סרטניים, אשר תא אגרגטים, הנקרא גם spheroids, יכול להיות בתרבית ההשעיה או בחלבונים ECM כמו חוקר על מנגנונים תאית התמיינות, א-סימטרי חלוקת התא, הדבקות לתא ו תא תנועתיות13,14. הפלישה מבחני לאפשר בדיקה של התוקפנות מהותי של הגידול וזיהוי של מולקולות זה לשמש chemoattractants במהלך תהליך פולשני ה-15. באופן כללי, תלת-ממד מודלים מייצגים של גיוון סבירים במבחנה תרבית תאים המשקפים באופן הדוק יותר רקמה נורמלית ולא oncogenic מורפוגנזה.
עיצבנו מערכת תרבות משותפת תא 3D המבוססת על מודלים הנ ל7,10,11, באמצעות שני האדם מסחרי BrC שורות תאים של פוטנציאל תוקפני ידוע (סוגי luminal, טריפל-שלילי), ראשי תאים explanted מחולים BrC. לראשונה פיתחנו מודל איפה כוחניות (MCF-7) או תאים (מד א-MB-231) BrC אגרסיבי היו בתרבית במשותף עם U937 ומונוציטים ב תמצית מטריצה חוץ-תאית (ECME)-מערכת תלת-ממד שמותר באינטראקציה ישירה תאים תאים מבוססת. תרבויות שיתוף אלה שימשו כדי לקבוע כיצד התקשורת בין שושלות תא שני אלה השפיעו על שעתוק של קבוצת גנים הקשורים לסרטן התנהגות תוקפנית. עלייה משמעותית של cyclooxygenase-2 (COX-2) תעתיק נצפתה כי בד בבד עם ייצור מוגבר של אחד המוצרים שלה, פרוסטגלנדין E2 (PGE2), ממצא זה הדגיש את תפקידה של דלקת התקדמות סרטן. שעתוק מוגברת של MMP נצפתה גם זה בקורלציה עם proteolysis קולגן רבתי כאשר תאים מד א-MB-231 אגרסיבי היו תרבותי משותף עם U937 ומונוציטים בתרבויות המכילות קולגן DQ הרביעי. ראוי לציין, תרבויות המשנה שלנו לא תמכו ההנחה כי מנגנוני אינטראקציה עם תא-תא יש צורך קולגן השפלה. זה די הציע כי התקשורת בין שושלות תא שני היה מתווך על ידי מולקולות המופרש. יתר על כן, supernatants שנקטפו מבחני תרבות שיתוף אלה הכילו גורמים מסיסים מאורגן acini הבלוטות הנוצרת על-ידי שאינם הפך MCF-10A תאים13. נמצא כי אגרסיבי, תאים BrC הראשי מופרש רמות גבוהות של מונוציט chemotactic מולקולות MCP-1, GM-CSF ולאחר RANTES. לפיכך, אנו המתוארים תרבות 3D שבו תאים הופרדו תא מוסיף תרבות כדי למנוע תא-תא אינטראקציות. תרבויות אלה שימשו כדי לטפל התקשורת עקיף בין תאים BrC ומונוציטים. אלה מבחני, כוחניות ותוקפנית מסחרי BrC שורות תאים, התאים BrC הראשי של שלושה סוגים שונים של האדם ומונוציטים: U937 מסחרי ותאי THP-1, ומונוציטים הראשי (PMs) מבודד מהדם ההיקפי של תורמים בריא (כל ומונוציטים שימשו במצב שלא הופעל) שימשו. ריכוז מוגבר של ציטוקינים דלקתיים IL-1β ו- IL-8 נצפו כדי להעשיר בתרבות משותף. בדומה לכך, נמצא כי MMP-1, MMP-2 ו- MMP-10 היו גם גדל ב BrC תאים-מונוציט תרבויות המשנה, ובכך חיזוק הממצאים הקודמים14. כתב יד זה, זרימת עבודה-מדוקדק של ראשי בידוד תאים BrC ובדיקה בתרבויות 3D מוצגת יחד עם נציג תוצאות. עבודה זו מהווה דוגמה טובה של הפוטנציאל הגדול המספקים במבחנה תא 3D מערכות לחקור היבטים ספציפיים של הגידול הביולוגיה.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1108px;" width="1108">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">U937</td>
			<td style="width:260px;">American Type Culture Collection ATCC&#160;</td>
			<td style="width:143px;">CRL-1593.2</td>
			<td style="width:463px;">Monocytic cell line/histiocytic lymphoma&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">THP-1</td>
			<td>American Type Culture Collection ATCC&#160;</td>
			<td style="width:143px;">TIB-202</td>
			<td>Monocytic cell line/acute monocytic leukemia&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">MCF-10A</td>
			<td>American Type Culture Collection ATCC&#160;</td>
			<td>CRL-10317</td>
			<td>Non-transformed breast cell line</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">MCF-7</td>
			<td>American Type Culture Collection ATCC&#160;</td>
			<td style="width:143px;">HTB-22</td>
			<td>Breast Cancer Cell line</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">T47D</td>
			<td>American Type Culture Collection ATCC&#160;</td>
			<td style="width:143px;">HTB-133</td>
			<td>Breast Cancer Cell line</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">HS578T</td>
			<td>American Type Culture Collection ATCC&#160;</td>
			<td style="width:143px;">HTB-126</td>
			<td>Breast Cancer Cell line</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">MDA-MB-231</td>
			<td>American Type Culture Collection ATCC&#160;</td>
			<td style="width:143px;">HTB-26</td>
			<td>Breast Cancer Cell line</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">RPMI 1640 medium</td>
			<td style="width:260px;">GIBCO BRL Life Technologies</td>
			<td style="width:143px;">11875-093</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">DMEM High Glucose&#160;</td>
			<td style="width:260px;">GIBCO BRL Life Technologies</td>
			<td style="width:143px;">11964-092</td>
			<td>4.5 g/L glucose</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">DMEM/F12</td>
			<td style="width:260px;">GIBCO BRL Life Technologies</td>
			<td style="width:143px;">11039-021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Antibiotic/Antimycotic</td>
			<td style="width:260px;">GIBCO BRL Life Technologies</td>
			<td style="width:143px;">15240-062</td>
			<td>100 U/mL penicillin, 100 &#181;g/mL streptomycin, and 0.25 &#181;g/mL Fungizone</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Fetal Bovine Serum</td>
			<td style="width:260px;">GIBCO BRL Life Technologies</td>
			<td style="width:143px;">16000-044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Horse serum&#160;</td>
			<td style="width:260px;">GIBCO BRL Life Technologies</td>
			<td>16050114</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">0.05% Trypsin-EDTA 1X</td>
			<td style="width:260px;">GIBCO BRL Life Technologies</td>
			<td style="width:143px;">25300-062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PBS 1X (Phosphate Buffered Saline</td>
			<td style="width:260px;">GIBCO BRL Life Technologies</td>
			<td>20012-027</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Epidermal Growth Factor (EGF)</td>
			<td>PeproTech</td>
			<td>AF-100-15 (1.00mg)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Insulin</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH</td>
			<td>I1882-100MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hydrocortisone</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH</td>
			<td>H088-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cholera toxin Vibrio cholerae</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH</td>
			<td>C8052-1MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">Matrigel&#160;</td>
			<td>Corning Inc</td>
			<td>356237</td>
			<td style="width:463px;">Engelbreth-Holm-Swarm (EHS) mouse sarcoma, extracellular matrix extract, Store at -20&#176;C until use at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">GM-CSF</td>
			<td>PeproTech</td>
			<td>300-03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">MCP-1</td>
			<td>PeproTech</td>
			<td>300-04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">RANTES</td>
			<td>PeproTech</td>
			<td>300-06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">IL-8</td>
			<td>PeproTech</td>
			<td>200-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">IL-1&#946;</td>
			<td>PeproTech</td>
			<td>200-01B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Crystal-violet</td>
			<td>Hycel M&#233;xico</td>
			<td>541</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Paraformaldehyde</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH</td>
			<td>P6148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">Transwell permeable supports (inserts)</td>
			<td>Corning Inc</td>
			<td style="width:143px;">3422</td>
			<td>6.5 mm diameter, 8 &#181;m pore size/24-well plates&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">Transwell permeable supports (inserts)</td>
			<td>Thermofisher Scientific</td>
			<td style="width:143px;">140620</td>
			<td>6.5 mm diameter, 0.4 &#181;m pore size/24-well plates&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Monocyte Isolation Kit II Human&#160;</td>
			<td style="width:260px;">Miltenyi Biotec</td>
			<td style="width:143px;">130-091-153</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">LS Columns</td>
			<td style="width:260px;">Miltenyi Biotec</td>
			<td style="width:143px;">130-042-401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:243px;">Human Cytokine/Chemokine Magnetic Bead Panel Kit 96 Well Plate Assay</td>
			<td style="width:260px;">EMD Millipore</td>
			<td style="width:143px;">HCYTOMAG-60K</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:243px;">Magpix with xPonent software (laser based fluorescent analytical test instrumentation)</td>
			<td style="width:260px;">Luminex Corporation</td>
			<td style="width:143px;">40-072</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">Lab-Tek chamber slide with cover (8 well)</td>
			<td style="width:260px;">Nalge Nunc International</td>
			<td style="width:143px;">177402</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">Glass bottom microwell 35mm petri&#160; dishes</td>
			<td style="width:260px;">MatTek Corp.</td>
			<td style="width:143px;">P35G-1.5-14-C</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

analyzing the communication between monocytes and primary breast cancer cells in an extracellular matrix extract (ecme)-based three-dimensional system

מוטבע על מטריצה חוץ-תאית (ECM), תאים אפיתל רגיל ואמצעים בצורה אינטימית לתקשר עם תאים hematopoietic ו- hematopoietic, ובכך מאוד המשפיעים על התוצאה הומאוסטזיס ומחלות הרקמות. סרטן השד, הקשורים מקרופאגים (תאמי) משחק תפקיד קריטי התקדמות המחלה, גרורות, הישנות; לכן, הבנת המנגנונים של מונוציט chemoattraction כדי microenvironment את הגידול ואת האינטראקציות שלהם עם תאים סרטניים חשוב לשלוט במחלה. כאן, אנו מספקים תיאור מפורט של מערכת תלת מימדי (3D) תרבות משותפת של תאים סרטניים (BrC) בשד האנושי ומונוציטים אנושי. BrC התאים המיוצרים הבזליים רמות גבוהות של הפעלת מוסדר, T-cell נורמלי הביע והוא מופרש (RANTES), מונוציט chemoattractant חלבון-1 (MCP-1), ופקטור המושבה-מגרה גרנולוציט-מקרופאג (G-CSF), בעוד תרבות משותפת עם ומונוציטים, בטא אינטרלויקין (IL)-1 ציטוקינים פרו-דלקתיים (IL-1β) ו- IL-8 היו מועשר יחד עם מטריקס metalloproteinases (MMP)-1, MMP-2 ו- MMP-10. Microenvironment משתית את הגידול קידם התנגדות anoikis MCF-10A מבנים דמויי acini 3D, chemoattraction של monocytes ופלישה של תאים BrC אגרסיבי. הפרוטוקולים המובאת כאן חלופה נוספת במחיר נוח ללמוד תקשורת אינטרה-הגידול, הן דוגמה הפוטנציאל הגדול המספקים במבחנה תא 3D מערכות לחקור תכונות ספציפיות של הגידול הביולוגיה הקשורים הגידול התוקפנות.

ניתוח מורפולוגי של תאים BrC בתרבויות 3D:
המורפולוגיה של גדל בתרבויות 3D ב צפיפויות נמוך וגבוה התאים BrC העיקרי היה למד במשך 5 ימים. במהלך 48 ה הראשונה תאים לדבוק ECME, לשמור על צפיפות נמוכה. בנקודת זמן זו, זה בבירור ניתן להערכה כי תאים להצי?...

Watch this Scientific Journal Video about Analyzing the Communication Between Monocytes and Primary Breast Cancer Cells in an Extracellular Matrix Extract ECME-based Three-dimensional System at JoVE.c

Analyzing the Communication Between Monocytes and Primary Breast Cancer Cells in an Extracellular Matrix Extract ECME-based Three-dimensional System

ניתוח התקשורת בין ומונוציטים ו תאים סרטניים בשד ראשי במטריצה חוץ-תאית לחלץ (ECME)-מבוסס מערכת תלת מימדי

כאן, אנו מתארים שיטה תלת מימדי התרבות לנתח המורפולוגיה של ראשי תאים סרטניים בשד, כמו גם כדי לחקור את יחסי הגומלין ישירים ועקיפים ומונוציטים לבין התוצאות כגון קולגן השפלה, גיוס תאים חיסוניים, תא הפלישה, קידום של דלקת הקשורים לסרטן.

Embedded in the extracellular matrix (ECM), normal and neoplastic epithelial cells intimately communicate with hematopoietic and non-hematopoietic cells, ...

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Analyzing the Communication Between Monocytes and Primary Breast Cancer Cells in an Extracellular Matrix Extract (ECME)-based Three-dimensional System

Utilizing Functional Genomics Screening to Identify Potentially Novel Drug Targets in Cancer Cell Spheroid Cultures

ניצול הקרנת Genomics פונקציונלית כדי לזהות מטרות תרופה חדשנית פוטנציאלי תרבויות אליפטית תא סרטני

The identification of functional driver events in cancer is central to furthering our understanding of cancer biology and indispensable for the discovery ...

Moving Upwards: A Simple and Flexible In Vitro Three-dimensional Invasion Assay Protocol

Moving Upwards: A Simple and Flexible In Vitro Three-dimensional Invasion Assay Protocol

נעים כלפי מעלה: פשוט וגמיש במבחנה הפלישה תלת מימדי Assay פרוטוקול

Although 3D invasion assays have been developed, the challenge remains to study cells without affecting the integrity of their microenvironment. ...

A Preclinical Mouse Model of Osteosarcoma to Define the Extracellular Vesicle-mediated Communication Between Tumor and Mesenchymal Stem Cells

דגם פרה העכבר של אוסטאוסרקומה כדי להגדיר את התקשורת חוץ-תאית שלפוחית בתיווך בין גידול בתאי גזע Mesenchymal

Within the tumor microenvironment, resident or recruited mesenchymal stem cells (MSCs) contribute to malignant progression in multiple cancer types. Under ...

Fabrication of Tongue Extracellular Matrix and Reconstitution of Tongue Squamous Cell Carcinoma In Vitro

Fabrication of Tongue Extracellular Matrix and Reconstitution of Tongue Squamous Cell Carcinoma In Vitro

ייצור של הלשון מטריצה חוץ-תאית, שיחזור של הלשון קרצינומה של תאים קשקשיים במבחנה

In order to construct an effective and realistic model for tongue squamous cell carcinoma (TSCC) in vitro, the methods were created to produce ...

A Three-dimensional Thymic Culture System to Generate Murine Induced Pluripotent Stem Cell-derived Tumor Antigen-specific Thymic Emigrants

תלת מימדי הרתי תרבות מערכת לייצר Murine המושרה תא גזע Pluripotent-הגידול הנגזר אנטיגן-מהגרים ספציפיים הרתי

The inheritance of pre-rearranged T cell receptors (TCRs) and their epigenetic rejuvenation make induced pluripotent stem cell (iPSC)-derived T cells a ...

Three-Dimensional Bone Extracellular Matrix Model for Osteosarcoma

עצם תלת-ממדי מטריצה חוץ-תאית מודל אוסטאוסרקומה

Osteosarcoma (OS) is the most common and a highly aggressive primary bone tumor. It is characterized with anatomic and histologic variations along with ...

Capturing Small Molecule Communication Between Tissues and Cells Using Imaging Mass Spectrometry

לכידת תקשורת מולקולה קטנה בין רקמות ותאים באמצעות הדמיה ספקטרומטר מסה

Imaging mass spectrometry (IMS) has routinely been applied to three types of samples: tissue sections, spheroids, and microbial colonies. These sample ...

Fully Human Tumor-based Matrix in Three-dimensional Spheroid Invasion Assay

מטריקס מבוסס על גידול אדם במלואו באופן שלוש מימדי הפלישה ספרואיד שיטת

Two-dimensional cell culture-based assays are commonly used in in vitro cancer research. However, they lack several basic elements that form the tumor ...

Differentiation of Mouse Breast Epithelial HC11 and EpH4 Cells

הבידול של השד העכבר האפיתל HC11 ו EpH4 תאים

Cadherins play an important role in the regulation of cell differentiation as well as neoplasia. Here we describe the origins and methods of the induction ...

Modeling Breast Cancer in Human Breast Tissue using a Microphysiological System

דוגמנות סרטן השד ברקמת השד האנושית באמצעות מערכת מיקרופיזיולוגית

Breast cancer (BC) remains a leading cause of death for women. Despite more than $700 million invested in BC research annually, 97% of candidate BC drugs ...