Name: differential effects of lipid-lowering drugs in modulating morphology of cholesterol particles
Uploaded: 2017-11-10T15:00:00
Duration: 9 min 15 s
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Diese Arbeit wurde durch eine Plaxgen Forschung finanziert Stipendium an SM (PLX-1008). Wir danken für das Sammeln von Serumproben von Atherosklerose Untertanen unter Zustimmung der IRB Palo Alto Medical Research Foundation Research Institute.

1. Vorbereitung der Fluoreszenz-markierten Cholesterin und Lipidsenker Hinweis: fluoreszierende beschriftet Cholesterin Aggregate und Statine wurden vorbereitet, wie im vorherigen Artikel beschrieben 21. Informationen von Reagenzien, imaging Durchflusszytometer, Chemie-Analysatoren und Datenanalyse-Software in dieser Studie verwendeten Tabelle der Materialien finden.
<ol><li>Solubilisieren Leuchtstofflampen beschriftet lyophilisierter Cholesterin (1 mg, Ex / Em = 495 nm/507 nm) Pulver in 1 mL 100 % Alkohol.</li>
	<li>Die Probe für 3 min bei 2.040 x g Zentrifugieren und verwenden Sie die Überstände mit löslichen Fluoreszenz-markierten Cholesterin Aggregate in der Plaque Array Assays.</li>
	<li>Zur Herstellung von Medikamenten, individuell solubilisieren Pulver (2 mg) von Simvastatin, Lovastatin, Atorvastatin, Ezetimib und Omega-3-Fettsäure in 1 ml 100 % Alkohol.</li>
	<li>Nach Zentrifugation für 3 min bei 2.040 x g, verwenden Sie die Überstände, die Drogen in der Probe enthalten.</li>
	<li>In ähnlicher Weise anderweitig individuell Pulver (2 mg) von Fluvastatin, Rosuvastatin, Niacin, und fibrate in 1 mL entionisiertem Wasser zu einer Stammlösung von 2 mg/mL.</li>
	<li>Nach Zentrifugation für 3 min bei 2.040 x g, verwenden Sie die Überstände mit Drogen in der Plaque Array Assays.</li>
</ol> 2. Plaque-Array-Assay für Prüfungs-In vitro- Cholesterin-Partikel-Bildung <ol><li>Verwendung Chemie Analyzer-1 (siehe Tabelle der Materialien), um die Plaque-Array-Assay für Cholesterin-Partikel-Bildung einzurichten. Führen Sie den Assay in rundem Boden, eiweißarme Bindung 96-Well-Platte mit den Reagenzien, die in Abschnitt 1 vorbereitet. Das endgültige Reaktionsvolumen in jede Vertiefung in 200 µL pflegen und führen alle Assays in dreifacher Ausfertigung.
	<ol><li>Zuerst, Last 194,5 µL Phosphat gepufferte Kochsalzlösung (PBS) in jede Vertiefung.</li>
		<li>Jeweils gut 2,5 µL (5 µg) jeder lipidsenkenden Medikamenten-Lösung hinzufügen und schütteln Sie die Platte für 30 s, indem es auf Chemie Analyzer-1 Reaktion Platte um das Medikament gleichmäßig in Lösung zu mischen. Kein Medikament wird hinzugefügt, um die negativen Kontrollproben.</li>
		<li>Schließlich jede Vertiefung 2 µL (2 µg) Leuchtstofflampen beschriftet Cholesterin aggregierte Lösung hinzu und schütteln Sie die Platte für 30 s, indem es auf Chemie Analyzer-1 Reaktion Platte.</li>
		<li>Inkubieren Sie die Platte auf einem Lab-Shaker für 2 h bei 37 ° C und 200 u/min eingestellt.</li>
		<li>Nach der Inkubation erwerben Bilder von Partikeln durch bildgebende Durchflusszytometrie.</li>
	</ol></li></ol> 3. Bilder von Cholesterin Partikel mittels Imaging Flow Cytometry Erfassung <ol><li>öffnen die Datenvorlage Akquisition, die richtigen Einstellungen zu laden. Klicken Sie &#34; Datei &#34;, und wählen Sie dann &#34; geöffnete Vorlage &#8230; &#34; und wählen Sie die Vorlagendatei.</li>
	<li>Klicken Sie &#34; Flush, Lock, Last &#34;, das Instrument für Probenbeladung vorzubereiten.</li>
	<li>Wenn die &#34; laden Probe &#34; Dialog öffnet sich, klicken Sie auf &#34; OK &#34; 50 µL der Proben von jedem gut vorbereitet in Abschnitt 2 in der bildgebenden Durchflusszytometer laden.</li>
	<li>Klicken Sie &#34; laufen | Setup &#34;, die Partikel im Bereich Bildverarbeitung in Echtzeit anzeigen.</li>
	<li>Wenn die Partikel in der imaging-Bereich in guten Fokus sind klicken Sie auf &#34; ausführen | Erwerben, &#34;, Bilder der einzelnen Objekte gleichzeitig in einer Hochdurchsatz-Weise für Dunkelfeld (Side Scatter/SSC), Hellfeld (BF), grüne Fluoreszenz und gelbe Fluoreszenz erwerben.</li>
	<li>Wiederholen Sie die Schritte 3.2-3.5 um 5.000-10.000 Partikel von jeder Probe erwerben.</li>
	<li>Analysieren alle raw-Bilddateien mit der Bildanalyse-Software zur Bestimmung der Fluoreszenzintensität Objekt und morphologische Varianten.
	<ol><li>Klicken Sie auf die &#34; Tools &#34; Schaltfläche am oberen Rand der Bildanalyse-Software, und wählen Sie dann &#34; Batch-Daten-Dateien &#34; aus dem Dropdown-Menü öffnet die die &#34; Chargen &#34; Fenster.</li>
		<li>In der &#34; Chargen &#34; Fenster, klicken Sie auf die &#34; Batch hinzufügen &#34; Schaltfläche, öffnet die &#34; definieren eine Charge &#34; Fenster.</li>
		<li>In der &#34; definieren einen Batch &#34; Fenster, klicken Sie auf die &#34; Dateien hinzufügen &#34; Taste und wählen Sie die raw-Bild-Dateien, klicken Sie auf die &#34; Vorlage &#34; Taste und wählen Sie die entsprechenden Daten-Analyse-Template-Datei, und wählen Sie dann &#34; "OK" &#34; und &#34; einreichen Chargen &#34; Verarbeitung und Analyse der raw-Bilddateien beginnen.</li>
	</ol></li></ol> 4. Plaque Array Assays basierte Auswertung von lipidsenkenden Medikamenten Wirkung auf gereinigt Cholesterin-Partikel <ol><li>wie unter Punkt 2.1 beschrieben durchführen den Cholesterin Partikel Bildung Assay mit gereinigtem VLDL, LDL und HDL-Lipoproteine/Partikel. Führen Sie Plaque Array Assays in eine 96-Well-Platte.
	<ol><li>Zuerst, laden alle Vertiefungen mit PBS; verwenden Sie eine 200 µL Endvolumen für jedes gut.</li>
	</ol></li> <li>Für negative Kontrolle hinzufügen 4 µg VLDL, LDL oder HDL Proteine/Partikel einzeln in jedem auch ohne Drogen und schütteln Sie die Platte für 30 s.
	<ol><li>Für die Prüfung der Lipid-senkende Wirkung, hinzufügen 4 µg VLDL, LDL oder HDL Proteine/Partikel individuell zu jedem gut und schütteln Sie die Platte für 30 s.</li>
		<li>Für Brunnen mit 4 µg VLDL, LDL und HDL hinzugefügt, fügen 2,5 µL (5 µg) Ezetimib, Lovastatin, Simvastatin oder Niacin-Lösung und schütteln Sie die Platte für 30 s indem man sie in Chemie Analyzer-1.</li>
		<li>Schließlich alle Brunnen 2 µL (2 µg) Fluoreszenz-markierten Cholesterin aggregierte Lösung hinzu und schütteln Sie die Platte für 30 s, indem es auf Chemie Analyzer-1 Reaktion Platte.</li>
	</ol></li> <li>Die Platte für 2 h in einem Labor-Shaker set bei 37 ° C und 200 u/min inkubieren.</li>
	<li>Erwerben die Proben unter Verwendung bildgebender Durchflusszytometrie nach Schritte 3.1-3.5.</li>
	<li>Raw-Bilddateien mit Bildanalyse-Software, wie unter Punkt 3.7 beschrieben zu analysieren.</li>
	<li>In der Analyse-Vorlage verwenden das folgende gating Schema zur Identifizierung von Cholesterin-Partikel-Subpopulationen.
	<ol><li>Auf einem Grundstück von Grünkanal gesättigt Pixelzahl (x-Achse) und Dunkelfeld-Kanal gesättigten Pixelzahl (y-Achse), Objekte mit einer oder mehreren gesättigten Pixel in jedem Kanal ablehnen.</li>
		<li>Zeichnen die Objekte/Partikel ohne gesättigten Pixel mit Grünkanal Intensität (x-Achse) und SSC Intensität (y-Achse): Gegenstände fallen in eine der drei Regionen (VLDL, LDL, HDL) anhand ihrer Grünkanal und SSC Intensitäten. 
		Hinweis: Diese Tore wurden erstellt, basierend auf Daten aus Experimente mit gereinigten VLDL, LDL und HDL Partikel/Proteine ohne die Droge durchgeführt.</li>
	</ol></li> <li>Um die Lipid-senkenden Medikament Wirkung für jede Probe ermitteln, berechnen Sie total Lipoprotein Partikel Konzentrationen sowie der Prozentsatz der einzelnen Teilgesamtheit (VLDL, LDL, HDL) als beschrieben Schritt 6.5.
	<ol><li>Berechnen die Partikel Konzentrationen (Partikel/mL) mit Hilfe der folgenden Gleichung: <img alt="Equation" src="/files/ftp_upload/56596/56596eq1.jpg" /> Hinweis: die VLDL, LDL und HDL Anspritzung Regionen in den Fluoreszenz-Dot-Plot erkennen ~ 80 % von ihren jeweiligen Untergruppen, und die restlichen ~ 20 % der Partikel überschneiden sich mit anderen gating Regionen.</li>
	</ol></li></ol> 5. Messung der Lipid-Konzentrationen im Serumproben <ol><li>für die Bestimmung der Konzentrationen von LDL, HDL, Cholesterin und Triglyceriden durch Chemie Analyzer-2, verwenden Serumproben aus Alter abgestimmt Normal und Dyslipidämie Themen.</li>
	<li>Definieren Sie abnormale Konzentration von LDL, HDL, Cholesterin und Triglyceride, die basierend auf ihrer Konzentration identifiziert darüber hinaus die obere und untere Referenzwerte in Serumproben.</li>
	<li>Folgen die normalen Referenz-Wert-EmpfehlungenDED vom Reagenz Hersteller: Cholesterin (4-200 mg/dL), HDL (3.0-65 mg/dL), LDL (4-100 mg/dL) und Triglyceride (9-200 mg/dL).</li>
	<li>Identifizieren, die einen abnormalen Wert haben, wie unter dem niedrigeren Referenzwert oder über die höheren Referenz für Cholesterin und Triglyceride Wert, und sie für das Screening in an- und Abwesenheit von lipidsenkenden Medikamenten Serumproben.</li>
</ol> 6. Analyse der Wirkung von Drogen auf Cholesterin-Partikel-Bildung in Serumproben <ol><li>Gebrauch der Chemie Analyzer-1, um die Plaque-Array-Assay für Cholesterin-Partikel-Bildung in Serumproben einzurichten. Führen Sie den Assay in rundem Boden, eiweißarme Bindung 96-Well-Platte. Verwenden Sie eine endgültige Reaktionsvolumen von 200 µL/Well und führen alle Assays in dreifacher Ausfertigung.</li>
	<li>Die Platte durch das Laden von Reagenzien in gewissem Sinne schrittweise vorbereiten.
	<ol><li>Bereiten die Kontroll-Vertiefungen.</li>
		<li>Last 193 µL PBS in jede Vertiefung.</li>
		<li>Fügen 2,5 % (V/V) Patientenserum (nur eine Serumprobe pro Well) und schütteln Sie die Platte für 30 s, indem es auf Chemie Analyzer Reaktion Platte.</li>
		<li>Add 2 µL (2 µg) Fluoreszenz-markierten Cholesterinspiegel aggregieren Lösung in jede Vertiefung und schütteln Sie die Platte für 30 s, indem es auf eine Chemie-Analysator-1 Reaktion-Platte.</li>
	</ol></li> <li>Bereiten die Brunnen mit Drogen.
	<ol><li>Last 191 µL PBS in jede Vertiefung.</li>
		<li>Fügen 2,5 % (V/V) Patientenserum (nur eine Serumprobe pro Well) und schütteln Sie die Platte für 30 s, indem es auf eine Chemie-Analysator-1 Reaktion-Platte.</li>
		<li>Add 2 µL Ezetimib, Lovastatin, Simvastatin oder Niacin-Lösung (4 µg) in alle Vertiefungen mit Ausnahme der Negativkontrolle Brunnen. Fügen Sie nur ein Medikament pro Bohrloch und schütteln die Platte für 30 s, indem es auf eine Chemie-Analysator-1 Reaktion-Platte.</li>
		<li>Add 2 µL der Fluoreszenz-markierten Cholesterin aggregieren Lösung (2 µg) in jede Vertiefung und schütteln Sie die Platte für 30 s, indem es auf Chemie Analyzer-1 Reaktion Platte.</li>
	</ol></li> <li>Laden Sie Medikamente nur nach alle Wells (Steuern und Medikament behandelten) mit ihren jeweiligen Serumproben geladen wurden, und fügen Sie Fluoreszenz-markierten Cholesterinspiegel am Ende dieses Schrittes.</li>
	<li>Die Platte für 2 h in einem Labor-Shaker set bei 37 ° C und 200 u/min inkubieren.</li>
	<li>Erwerben die Proben durch bildgebende Durchflusszytometer folgenden Einstellungen beschrieben Schritte 3.1-3.6.</li>
	<li>Das Bild Analyse Software für Batch-Verarbeitung alle Image-Dateien, die über die gleiche Vorlage wie 3.7 beschrieben.
	<ol><li>Die Datenanalyse durch Tore auf dem Grundstück zu zeichnen, wie 4.5 und 4.6 beschrieben.</li>
	</ol></li> <li>An die Lipid-senkenden Medikament Wirkung/Antwort (niedrig, moderat und hoch) für jede Probe bestimmen, zu berechnen, die total Lipoprotein Partikelkonzentration sowie den Prozentsatz der die Gesamtzahl Partikeln bestehend aus VLDL, LDL und HDL Subpopulationen.</li>
	<li>Plotten der VLDL, LDL und HDL Populationen auf ein Histogramm des Objekts &#39; s Hellfeld Bild, Breite (Länge - Breite) und Tor in entweder kugelförmig oder lineare Regionen subtrahiert: Objekte mit (Länge - Breite) &#8804; 2 µm fallen in die kugelförmige Region für die Berechnung des Anteils von Kugelsternhaufen und lineare geprägt Partikel.</li>
	<li>Vergleichen Sie den Prozentsatz von Kugelsternhaufen und linear geformten LDL und HDL Cholesterin Partikel für jede Serumprobe inkubiert, mit und ohne jedes Medikament identifiziert. Unter dreifacher Werte für jede Serumprobe, akzeptieren der Prozentsatz der kugelige und lineare Form LDL und HDL-Partikel, die in SD ±2 Bereich zur Bestimmung von der Drogenwirkung fallen.</li>
</ol>

<ol>
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T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+changing+face+of+HDL+and+the+best+way+to+measure+it.">The changing face of HDL and the best way to measure it.</a> Clin. Chem. 63, 196-210 (2017).</li></ol>

Dr. Madasamy erhielt Zuschüsse von Plaxgen, Inc. und hat ein konkurrierendes finanzielles Interesse. Die anderen Autoren haben keine finanziellen Interessenkonflikte offenlegen.

Im Allgemeinen sind die Verteilung und die funktionellen Eigenschaften der VLDL, LDL und HDL-Cholesterin-Partikel in den Blutkreislauf hauptsächlich durch metabolische, genetische, epidemiologischen, Mobilfunk und Plasma Faktoren22,23bestimmt. In der vorliegenden Studie untersucht die Auswirkungen der Lipid-modifizierende Drogen im Puffer ergab, dass hoch lipophile Drogen wie Ezetimib, Simvastatin, Lovastatin und Atorvastatin eine höhere Ebene Komplexität auf die Morphologie der Cholesterin-Partikel induziert im Vergleich zu der unteren Ebene Wirkung mit hoch hydrophilen Rosuvastatin und Fluvastatin Drogen beobachtet. Diese Ergebnisse sind in guter Übereinstimmung mit unseren früheren Studie beschreibt eine nicht-enzymatische Mechanismus Wirkung von Statinen LDL und HDL Cholesterin-Partikel-Bildung in den Puffer und Serum Proben21Modulation. Dementsprechend zeigten die Ergebnisse aus dieser Studie ein nicht-enzymatische Wirkmechanismus von Ezetimib, Niacin, fibrate, und Omega-3-Fettsäure-Drogen, die eine direkte Rolle bei der Modulation der Cholesterin-Partikel-Bildung spielen können. Es ist möglich, dass die Wechselwirkungen zwischen Medikamenten und Cholesterin Aggregate führt bis zur Montage von Großformat-Cholesterin-Partikel, die 2-60 µm2, sind kugelförmig und linearen Strang Morphologien ausstellen.
Außerdem empfehlen die erzielten Ergebnisse mit gereinigtem Lipoprotein Partikel Wechselwirkungen zwischen Cholesterin Aggregate und Plasma Faktoren einschließlich VLDL, LDL und HDL Proteine, die die Kompositionen und die morphologischen Eigenschaften des Cholesterins verändern kann Partikel. Die Droge Behandlungsergebnisse mit gereinigtem Lipoprotein Partikel zeigten eine höhere Ebene Drogenwirkung auf VLDL-Partikel-Bildung im Vergleich zu ihrer Wirkung auf LDL-Cholesterin-Partikel-Bildung beobachtet. Die Lovastatin, Simvastatin und Ezetimib Medikamente dienten als Pro-Drogen und ihre Dosen in den Tests können höher sein als die physiologischen Konzentrationen.
Interessant, geformte screening von Serumproben zeigte Variationen der Drogenwirkung auf die Profile der VLDL, LDL und HDL-Cholesterin-Partikel-Bildung zu verändern, insbesondere deren Auswirkungen auf die Formationen der lineare LDL und HDL-Partikel. Diese Medikamente induzierte Reduktion auf lineare geformte LDL und HDL Cholesterin Partikel Bildung in Dyslipidämie und normalen Serumproben Alter abgestimmt. Die Arzneimittelwirkungen beobachtet auf die Verringerung der linear geformten Partikeln Bildung lag in Ezetimib, Simvastatin, Lovastatin und Niacin. Die Identifizierung von Cholesterin-Partikel mit kugelförmigen und linearen Strang Morphologien in Normal und Dyslipidämie Serumproben deutet darauf hin, dass Teilchen mit ähnlichen Morphologien in in Vivo Bedingungen bilden können. Frühere Studien haben das Vorhandensein von Scheibe und nadelartige Cholesterin-Kristalle in den atherosklerotischen Plaques Menschen- und ApoE- / - und LDLR- / - Mäusen Modelle24,25,26 identifiziert. ,27,28.
Die HDL-Partikel im Blut zirkulierenden vorhanden sein, da eine heterogene Mischung und das Niveau der klein und groß HDL-Partikel sowie funktionelle Aktivität wichtige Faktoren sind, die ihre Herz-Kreislauf-Schutz wirken über den umgekehrten Cholesterin-transport Weg29,30. Jüngste Studien haben deutlich gemacht, dass die Bedeutung der Identifizierung von HDL-Cholesterin Partikel Unterfraktionen für die Aufklärung ihrer Rolle in mehrere biologische Funktionen wie Cholesterin Efflux, entzündungshemmende, Anti-thrombotische und anti-oxidativen31 . Darüber hinaus haben eine Reihe von Studien die Wirkung der lipidsenkenden Therapie bei der Steigerung von eines niedrigen Niveau von HDL im Plasma1,5,21moderieren berichtet. Entsprechend liefern der Ergebnisse aus dieser Studie neue Erkenntnisse auf morphologische Merkmale der Cholesterin-Partikel. Insbesondere die Erkennung von einer höheren Ebene linear geformten HDL Cholesterin-Partikel in Serumproben von Dyslipidämie Themen legt nahe, dass sie die verlässliche Biomarker für die Diagnose und Bewertung der Auswirkungen der Lipid-modifizierende möglicherweise Drogen bei Patienten. Weitere ist Untersuchung jedoch erforderlich, mit großen klinischen Proben, um die Cholesterin-Partikel mit verschiedenen Morphologien und deren Zuordnung zu CVD besser zu verstehen.
In der Plaque Array Assays für die Prüfung der Drogenwirkung auf Montage von Cholesterin-Partikel, verwendeten wir 2 µg der Fluoreszenz bezeichnet Cholesterin Aggregate und 5 µgof Droge, weil: (1) Drogen kompetitiv an beiden Fluoreszenz bezeichnet Cholesterin binden und endogene Lipide in die Serumproben vorhanden; (2) von jeder Probe erwarben wir 5.000 bis 10.000 Cholesterin-Partikel, die in großen Größen und Formen von ~ 2-60 µ2montiert werden; (3) Wir beobachteten eine große Unterschiede der Droge Reaktion zwischen Serumproben inkubiert mit Drogen (Dosen 300 ng zu 5 µg) und ~ 1-5 % von ihnen inkubiert mit hohen Dosen zeigten keine nachweisbaren Änderungen im Profil der Cholesterin-Partikel-Bildung; und (4) die Interaktion zwischen Cholesterin Aggregate und Lipidsenker wird durch ein nicht-enzymatische Prozess vermittelt. Daher können die Konzentrationen der im Test verwendeten Reagenzien höher als ihre physiologischen Ebene sein.
Zusammenfassend haben wir erfolgreich demonstriert die Vorteile einer in-vitro- bildgebendes Verfahren beschrieben in dieser Studie zur Bestimmung der Wirkung eines breiten Spektrums von lipidsenkenden Medikamenten auf modulierenden Morphologie und Zusammensetzung des Cholesterins Partikel. Der Ansatz der Visualisierung und Quantifizierung der Morphologie der Lipid-Teilchen durch den Einsatz einer Konstellation von Bild-Analyse-Algorithmen kann helfen, die Diagnose der Atherosklerose und Ergebnisse der lipidsenkenden Therapie bei Patienten zu bewerten.

Zahlreiche klinische Studien haben bewiesen, wohltuende Wirkung der Lipid-senkende Medikamente bei der Verringerung der Plasmaspiegel von Low-Density-Lipoproteine (LDL) Cholesterin und einem niedrigen bis moderaten Anstieg der High-density-Lipoprotein (HDL) Cholesterin, die primäre und sekundäre Vorfälle im Zusammenhang mit Arteriosklerose kardiovaskuläre Nebenwirkungen1,2,3,4,5verhindert. Statine, eine Gruppe von HMG-CoA-Reduktase-Enzym-Inhibitoren, blockieren die körpereigene Cholesterinsynthese in der Leber, dass wiederum führen zu niedrigeren Niveaus von LDL-Cholesterin im Blut6,7im Umlauf. Ebenso ist die Senkung der Wirkung von Niacin Lipid durch seine direkte und nichtkompetitiv Hemmung der Hepatozyten Diacylglycerol Acyltransferase-2, ein Schlüsselenzym Leber beteiligt Triglycerid-Synthese8vermittelt. Vergleichsweise, reduziert Ezetimib Plasmaspiegel von LDL durch die Absorption der exogene Cholesterin durch die Bindung an Niemann-Pick-C1-Like-1 (NPC1L1) Protein befindet sich in den Epithelzellen des Dünndarms9Begrenzung. Fenofibrate, einem anderen Lipid-senkenden Medikament, reduziert deutlich die Plasmakonzentrationen von Triglyceriden und LDL-Cholesterin durch das Peroxisom davon aktiviert Rezeptoren Weg10auch mäßig verringert. Außerdem ist Omega-3-Fettsäure berichtet, um die Anti-atherosklerotische Wirkung wegen seiner Fähigkeit, die Plasmaspiegel von LDL11zu senken.
Lipidsenker, neben ihrer primären Effekt auf die Senkung des LDL-Cholesterins, haben eine Reihe von vorteilhaften pleiotrope Effekte einschließlich Erhöhung der HDL, Verbesserung der endotheliale Funktionen, Verringerung der Entzündung und Hemmung der Thrombozyten Aggregationen12,13,14. Aber der zugrunde liegende Mechanismus dieser Medikamente bei Erhöhung der HDL-Cholesterin-Partikel und ändern ihre strukturellen Merkmale sind nicht vollständig geklärt. Da diese Medikamente häufig zur Behandlung von Atherosklerose-Herz-Kreislauf-Erkrankungen (CVDs) vorgeschrieben sind, gilt es weiter zu untersuchen, ihre mögliche Rolle bei der Bestimmung der morphologischen Merkmale und Verteilung der Lipid-Partikel. Die menschlichen Plasma-Lipidome besteht aus etwa 600 verschiedene Lipide und 22 verschiedenen molekularen Arten von Lipoproteinen, die in verschiedenen Größen, Formen, dichten und Kompositionen15,16,17 . Analytische Methoden wie Ultra-Zentrifugation, NMR und Gradienten Gelelektrophorese werden verwendet, um LDL und HDL-Partikel und ihre Unterfraktionen18,19charakterisieren. Jedoch beschränkt sich die Anwendung dieser Methoden auf Studien zur Bestimmung der Wirkung von Drogen in der modulierenden Morphologie und Montage der Lipid-Partikel. Flow Cytometer basierend Plaque Array ist eine funktionelle biochemischen Assays entwickelt, für die Erkennung und Visualisierung von Serum Lipid und Amyloid Plakette Partikel20abgeleitet. Die Vorteile von in-vitro- bildgebendes Verfahren, die in dieser Studie beschriebenen ermöglicht die Identifizierung von Lipid-modulierende Drogenwirkungen Morphologie und Verteilung von Cholesterin-Partikel im Puffer und Serumproben zu ändern.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>TopFluor fluorescent cholesterol</td>
			<td>Avanti Polar lipids</td>
			<td></td>
			<td>store 100 &#181;l aliquots at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>simvastatin (pro-drug)</td>
			<td>Cayman Chemicals</td>
			<td></td>
			<td>store 100 &#181;l aliquots at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>lovastatin (pro-drug)</td>
			<td>Cayman Chemicals</td>
			<td></td>
			<td>store 100 &#181;l aliquots at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rosuvastatin</td>
			<td>Cayman Chemicals</td>
			<td></td>
			<td>store 100 &#181;l aliquots at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>atorvastatin</td>
			<td>Cayman Chemicals</td>
			<td></td>
			<td>store 100 &#181;l aliquots at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fluvastatin</td>
			<td>Cayman Chemicals</td>
			<td></td>
			<td>store 100 &#181;l aliquots at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ezetimibe (pro-drug)</td>
			<td>Cayman Chemicals</td>
			<td></td>
			<td>store 100 &#181;l aliquots at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Niacin</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td></td>
			<td>store 100 &#181;l aliquots at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fibrate</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td></td>
			<td>store 100 &#181;l aliquots at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>omega-3 fatty acid</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td></td>
			<td>store 100 &#181;l aliquots at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>purified VLDL proteins/particles</td>
			<td>Lee Bio</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>purified LDL proteins/particles</td>
			<td>Lee Bio</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>purified HDL proteins/particles</td>
			<td>Lee Bio</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human age-matched serum</td>
			<td>Dx Biosamples</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human atherosclerosis serum</td>
			<td>Bioserve</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human normal serum</td>
			<td>Stanford Blood center</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LDL measurement reagent pack</td>
			<td>Roche Diangostics</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HDL measurement reagent pack</td>
			<td>Roche Diangostics</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Total cholesterol measurment</td>
			<td>Roche Diangostics</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well microtitre plates</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triglycerides measrument</td>
			<td>Roche Diangostics</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amnis Imaging Flow cytometer</td>
			<td>Amnis Inc</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IDEAS image analysing software</td>
			<td>Amnis Inc</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemistry Analyzer-1, ChemWel 2902</td>
			<td>Awarness Technology</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemistry Analyzer-2, Intergra 400</td>
			<td>Roche Diangostics</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

differential effects of lipid-lowering drugs in modulating morphology of cholesterol particles

Behandlung von Dyslipidämie Patienten mit lipidsenkenden Medikamenten führt zu einem deutlichen Rückgang der Low-Density-Lipoproteine (LDL) Ebene und eine geringe bis mäßige Niveau der Anstieg des High-density-Lipoprotein (HDL) Cholesterins im Plasma. Allerdings ist eine mögliche Rolle dieser Medikamente bei Veränderung der Morphologie und Verteilung von Cholesterin-Partikel schlecht verstanden. Hier beschreiben wir die in-vitro- Bewertung der lipidsenkenden Drogenwirkungen Modulation morphologischen Merkmale der Cholesterin-Partikel mit der Plaque-Array-Methode in Kombination mit bildgebenden Durchflusszytometrie. Bild-Analysen der Cholesterin-Partikel angedeutet, dass Lovastatin, Simvastatin, Ezetimib und Atorvastatin die Bildung von Kugelsternhaufen und linearen Strang geformt Partikel induzieren, veranlaßt Niacin, Fibrate, Fluvastatin und Rosuvastatin das Bildung von nur kugelig geformten Partikeln. Nächste, gereinigte sehr Low density Lipoprotein (VLDL) und LDL-Partikel, die mit diesen Medikamenten inkubiert zeigten Veränderungen in der Morphologie und Image Textur des Cholesterins Partikel Subpopulationen. Screening von 50 Serumproben ergab darüber hinaus die Anwesenheit von ein höheres Maß an lineare geformte HDL-Cholesterin-Partikel bei Patienten mit Dyslipidämie (Mittelwert von 18,3 %) im Vergleich zu den Beispielen Alter abgestimmt Normal (Mittelwert von 11,1 %). Wir beobachten auch, dass erhebliche Unterschiede in Lipid-senkenden Medikament Auswirkungen auf die Verringerung der linearen LDL und HDL Cholesterin-Partikel-Bildung in Serumproben geformt. Diese Ergebnisse zeigen, dass Lipidsenker, neben ihrer Zell-vermittelten lipidsenkende Wirkung, Morphologie der Cholesterin-Partikel direkt von einem nicht-enzymatische Wirkmechanismus modulieren können. Die Ergebnisse dieser Ergebnisse haben Potenzial, Diagnose der Atherosklerose zu informieren und optimalen lipidsenkenden Therapie vorherzusagen.

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Differential Effects of Lipid-lowering Drugs in Modulating Morphology of Cholesterol Particles

Differentielle Effekte von lipidsenkenden Medikamenten Modulation Morphologie der Cholesterin-Partikel

Das Ziel dieser Studie war es, in-vitro- Lipid-senkenden Medikament Auswirkungen Modulation der Morphologie der Cholesterin-Partikel zu bewerten. Vergleich der Lipidsenker ergab Variationen in ihrer Wirkung Modulation der morphologischen Merkmale der Cholesterin-Partikel.

Treatment of dyslipidemia patients with lipid-lowering drugs leads to a significant reduction in low-density lipoproteins (LDL) level and a low to ...

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