Name: adherence of bacteria to plant surfaces measured in the laboratory
Uploaded: 2018-06-19T12:30:00
Duration: 7 min 7 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Adherence of Bacteria to Plant Surfaces Measured in the Laboratory at JoVE.com

De auteur Bedankt Susan Whitfield voor de voorbereiding van de cijfers en Camille Martin en Hillary Samagaio voor hulp met een aantal van de experimenten.

<ol>
	<li>Heaton, J. C., Jones, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbial+contamination+of+fruit+and+vegetables+and+the+behaviour+of+enteropathogens+in+the+phyllosphere:+a+review.">Microbial contamination of fruit and vegetables and the behaviour of enteropathogens in the phyllosphere: a review.</a> J. Appl. Microbiol. 104, 613-626 (2008).</li><li>Beuchat, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ecological+factors+influencing+survival+and+growth+of+human+pathogens+on+raw+fruit+and+vegetables.">Ecological factors influencing survival and growth of human pathogens on raw fruit and vegetables.</a> Microbes Infect. 4, 413-423 (2002).</li><li>Berger, C. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fresh+fruit+and+vegetables+as+vehicles+for+the+transmission+of+human+pathogens.">Fresh fruit and vegetables as vehicles for the transmission of human pathogens.</a> Environ. Microbiol. 12, 2385-2397 (2010).</li><li>Lugtenberg, B. J., Chin, A. W. T., Bloemberg, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbe-plant+interactions:+principles+and+mechanisms.">Microbe-plant interactions: principles and mechanisms.</a> Antonie Van Leeuwenhoek. 81, 373-383 (2002).</li><li>Preston, G. M., Haubold, B., Rainey, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+genomics+and+adaptation+to+life+on+plants:+implications+for+the+evolution+of+pathogenicity+and+symbiosis.">Bacterial genomics and adaptation to life on plants: implications for the evolution of pathogenicity and symbiosis.</a> Curr. Opin. Microbiol. 1, 589-597 (1998).</li><li>Compant, S., Duffy, B., Nowak, J., Clement, C., Barka, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+Plant+Growth-Promoting+Bacteria+for+Biocontrol+of+Plant+Diseases:+Principles,+Mechanisms+of+Action,+and+Future+Prospects.">Use of Plant Growth-Promoting Bacteria for Biocontrol of Plant Diseases: Principles, Mechanisms of Action, and Future Prospects.</a> Appl. Environ. Microbiol. 71, 4951-4959 (2005).</li><li>Mathews, S. L., Smith, R. B., Matthysse, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparison+of+the+retention+of+pathogenic+Escherichia+coli.+O157+by+sprouts,+leaves+and+fruits.">A comparison of the retention of pathogenic Escherichia coli. O157 by sprouts, leaves and fruits.</a> Microb. Biotechnol. 7, 570-579 (2014).</li><li>Fuqua, C., Matthysse, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+studying+bacterial+biofilms+associated+with+plants.">Methods for studying bacterial biofilms associated with plants.</a> Methods Enzymol. 337, 3-18 (2001).</li><li>Torres, A. G., Jeter, C., Langley, W., Matthysse, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+binding+of+Escherchia+coli.O157:H7+to+alfalfa,+human+epithelial+cells,+and+plastic+is+mediated+by+a+variety+of+surface+structures.">Differential binding of Escherchia coli.O157:H7 to alfalfa, human epithelial cells, and plastic is mediated by a variety of surface structures.</a> Appl. Environ. Microbiol. 71, 8008-8015 (2005).</li><li>Matthysse, A. G., Deora, R., Mishra, M., Torres, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polysaccharides+cellulose,+poly-beta-1,6-n-acetyl-D-glucosamine,+and+colanic+acid+are+required+for+optimal+binding+of+Escherichia+coli+O157:H7+strains+to+alfalfa+sprouts+and+K-12+strains+to+plastic+but+not+for+binding+to+epithelial+cells.">Polysaccharides cellulose, poly-beta-1,6-n-acetyl-D-glucosamine, and colanic acid are required for optimal binding of Escherichia coli O157:H7 strains to alfalfa sprouts and K-12 strains to plastic but not for binding to epithelial cells.</a> Appl. Environ. Microbiol. 74, 2384-2390 (2008).</li><li>Matthysse, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+cellulose+overproduction+on+binding+and+biofilm+formation+on+roots+by+Agrobacterium+tumefaciens.">The effect of cellulose overproduction on binding and biofilm formation on roots by Agrobacterium tumefaciens.</a> Mol. Plant Microbe Interact. 18, 1002-1010 (2005).</li><li>Matthysse, A. G., Kijne, J. W., Spaink, H. P., Kondorosi, A., Hooykaas, P. J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Attachment+of+Rhizobiaceae+to+plant+cells.">Attachment of Rhizobiaceae to plant cells.</a> The Rhizobiaceae. , 235-249 (1998).</li><li>Matthysse, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditioned+medium+promotes+the+attachment+of+Agrobacterium+tumefaciens.strain+NT1+to+carrot+cells.">Conditioned medium promotes the attachment of Agrobacterium tumefaciens.strain NT1 to carrot cells.</a> Protoplasma. 183, 131-136 (1994).</li><li>Matthysse, A. G., McMahan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+the+Agrobacterium+tumefaciens.+attR+mutation+on+attachment+and+root+colonization+differs+between+legumes+and+other+dicots.">The effect of the Agrobacterium tumefaciens. attR mutation on attachment and root colonization differs between legumes and other dicots.</a> Appl. Environ. Microbiol. 67, 1070-1075 (2001).</li><li>Jeter, C., Matthysse, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+the+binding+of+diarrheagenic+strains+of+E.+coli.to+plant+surfaces+and+the+role+of+curli+in+the+interaction+of+the+bacteria+with+alfalfa+sprouts.">Characterization of the binding of diarrheagenic strains of E. coli.to plant surfaces and the role of curli in the interaction of the bacteria with alfalfa sprouts.</a> Mol. Plant Microbe Interact. 18, 1235-1242 (2005).</li><li>Matthysse, A. G., McMahan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Root+colonization+by+Agrobacterium+tumefaciens+is+reduced+in+cel,+attB,+attD,+and+attR+mutants.">Root colonization by Agrobacterium tumefaciens is reduced in cel, attB, attD, and attR mutants.</a> Appl. Environ. Microbiol. 64, 2341-2345 (1998).</li><li>Morton, E. R., Fuqua, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenotypic+analyses+of+Agrobacterium.">Phenotypic analyses of Agrobacterium.</a> Curr. Protoc. Microbiol. , (2012).</li><li>Brandl, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plant+lesions+promote+the+rapid+multiplication+of+Escherichia+coli+O157:H7+on+postharvest+lettuce.">Plant lesions promote the rapid multiplication of Escherichia coli O157:H7 on postharvest lettuce.</a> Appl. Environ. Microbiol. 74, 5285-5289 (2008).</li><li>Franz, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+contamination+of+lettuce+by+GFP-expressing+Escherichia+coli+O157:H7+and+Salmonella+enterica+serovar+Typhimurium.">Quantification of contamination of lettuce by GFP-expressing Escherichia coli O157:H7 and Salmonella enterica serovar Typhimurium.</a> Food Microbiol. 24, 106-112 (2007).</li><li>Morton, E. R., Fuqua, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laboratory+maintenance+of+Agrobacterium.">Laboratory maintenance of Agrobacterium.</a> Curr. Protoc. Microbiol. , (2012).</li><li>Lugtenberg, B. J., Kravchenko, L. V., Simons, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tomato+seed+and+root+exudate+sugars:+composition,+utilization+by+Pseudomonas+biocontrol+strains+and+role+in+rhizosphere+colonization.">Tomato seed and root exudate sugars: composition, utilization by Pseudomonas biocontrol strains and role in rhizosphere colonization.</a> Environ. Microbiol. 1, 439-446 (1999).</li><li>Murashige, T., Skoog, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Revised+Medium+for+Rapid+Growth+and+Bio+Assays+with+Tobacco+Tissue+Cultures.">A Revised Medium for Rapid Growth and Bio Assays with Tobacco Tissue Cultures.</a> Physiologia Plantarum. 15, 473-497 (1962).</li><li>Danhorn, T., Fuqua, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biofilm+formation+by+plant-associated+bacteria.">Biofilm formation by plant-associated bacteria.</a> Annu. Rev. Microbiol. 61, 401-422 (2007).</li><li>Branda, S. S., Vik, S., Friedman, L., Kolter, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biofilms:+the+matrix+revisited.">Biofilms: the matrix revisited.</a> Trends Microbiol. 13, 20-26 (2005).</li><li>O'Toole, G., Kaplan, H. B., Kolter, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biofilm+formation+as+microbial+development.">Biofilm formation as microbial development.</a> Annu. Rev. Microbiol. 54, 49-79 (2000).</li><li>Charkowski, A. O., Barak, J. D., Sarreal, C. Z., Mandrell, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differences+in+growth+of+Salmonella+enterica+and+Escherichia+coli+O157:H7+on+alfalfa+sprouts.">Differences in growth of Salmonella enterica and Escherichia coli O157:H7 on alfalfa sprouts.</a> Appl. Environ. Microbiol. 68, 3114-3120 (2002).</li><li>Loper, J., Suslow, T., Schroth, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lognormal+distribution+of+bacterial+populations+in+the+rhizosphere.">Lognormal distribution of bacterial populations in the rhizosphere.</a> Phytopathology. 74, 1454-1460 (1984).</li><li>Matthysse, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Attachment+of+Agrobacterium+to+plant+surfaces.">Attachment of Agrobacterium to plant surfaces.</a> Front Plant Sci. 5, 252 (2014).</li><li>Douglas, C. J., Halperin, W., Nester, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Agrobacterium+tumefaciens+mutants+affected+in+attachment+to+plant+cells.">Agrobacterium tumefaciens mutants affected in attachment to plant cells.</a> J. Bacteriol. 152, 1265-1275 (1982).</li><li>Tomlinson, A. D., Fuqua, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+and+regulation+of+polar+surface+attachment+in+Agrobacterium+tumefaciens.">Mechanisms and regulation of polar surface attachment in Agrobacterium tumefaciens.</a> Curr. Opin. Microbiol. 12, 708-714 (2009).</li><li>Matthysse, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Attachment+of+Agrobacterium+to+plant+surfaces.">Attachment of Agrobacterium to plant surfaces.</a> Front Plant Sci. 5, (2014).</li><li>Wright, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+endophytic+lifestyle+of+Escherichia+coli+O157:H7:+quantification+and+internal+localization+in+roots.">The endophytic lifestyle of Escherichia coli O157:H7: quantification and internal localization in roots.</a> Phytopathology. 103, 333-340 (2013).</li><li>Berger, C. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fresh+fruit+and+vegetables+as+vehicles+for+the+transmission+of+human+pathogens.">Fresh fruit and vegetables as vehicles for the transmission of human pathogens.</a> Environ. Microbiol. 12, 2385-2397 (2010).</li><li>Erickson, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Internalization+and+Fate+of+Escherichia+coli+O157:H7+in+Leafy+Green+Phyllosphere+Tissue+Using+Various+Spray+Conditions.">Internalization and Fate of Escherichia coli O157:H7 in Leafy Green Phyllosphere Tissue Using Various Spray Conditions.</a> J. Food Prot. 77, 713-721 (2014).</li><li>McKellar, R. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+different+approaches+for+modeling+Escherichia+coli+O157:H7+survival+on+field+lettuce.">Evaluation of different approaches for modeling Escherichia coli O157:H7 survival on field lettuce.</a> Int. J. Food Microbiol. 184, 75-85 (2014).</li><li>Wu, F. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+influencing+the+detection+and+enumeration+of+Escherichia+coli+O157:H7+on+alfalfa+seeds.">Factors influencing the detection and enumeration of Escherichia coli O157:H7 on alfalfa seeds.</a> Int. J. Food Microbiol. 71, 93-99 (2001).</li></ol>

De auteur verklaart dat ze geen concurrerende financiële belangen heeft.

Het is belangrijk om zich bewust zijn van alle van de oppervlakken die bacteriën kunnen zich tijdens het experiment. Dus bacteriën die kunnen binden aan glas kunnen worden onderschat als levensvatbare cellen worden gedaan met behulp van glazen buizen en pipetten. Als planten worden geteeld in agar of bodem en een aantal van de agar of bodem op de planten blijft kunnen vervolgens de bacteriën binden aan de daaraan vastzittende materiaal in plaats van de planten. Aan de andere kant, het oppervlak van de plant, met name in het geval van wortels, wassen kan verwijderen natuurlijke oppervlaktecoatings zoals slijm en dus het veranderen van de resultaten van tests van de hechting.
Het is belangrijk om er zeker van zijn dat de bacteriën toegevoegd aan het mengsel van incubatie levend tijdens het experiment blijven. Levensvatbare cellen graven van zowel de gratis als de bijgevoegde bacteriën moeten dus regelmatig plaatsvinden. Sommige behandelingen of bacteriële mutaties kunnen verminderen van de bacteriële groei of daadwerkelijk leiden tot de dood van een breuk van de bacteriële bevolking. Levende en dode bacteriën mogelijk niet te onderscheiden in de Microscoop tenzij speciale vlekken worden gebruikt. Er is een nuttig vlek kit voor wonen/dode bacteriën, die afhangt van de uitsluiting van kleurstoffen uit de levende bacteriën. Echter, als een gemengde bevolking van bacteriesoorten aanwezig is dan levensvatbare cellen graven van de soorten van belang is waarschijnlijk de gemakkelijkste manier om te bepalen of de incubatie heeft geresulteerd in de bacteriële dood.
Middellange samenstelling zal beïnvloeden bacteriën overleven en groeien. Root afgescheiden en materialen vrijgelaten uit de wond en snijd sites bieden substraat om bescheiden bacteriële groei te ondersteunen. Ijzer, fosfaat en stikstof de neiging om in deze omstandigheden worden beperkt. Hechting kunnen van invloed zijn divalente kationen, zoals calcium en magnesium. In sommige gevallen kan koolstofbron hechting beïnvloeden. pH ook belangrijk. In het algemeen is de pH van de rhizosfeer tussen 5,5 en 6,5.
Er moet worden voorzichtig bij het gebruik van bacteriën die zijn gemarkeerd met resistentie tegen antibiotica. De meest gebruikte antibiotica zijn rifampicine en nalidixic zuur. Resistentie tegen deze antibiotica is over het algemeen als gevolg van mutaties in chromosomale genen (RNA polymerase en gyrase, respectievelijk) en dus niet gemakkelijk overdraagbaar aan een andere spanning tijdens de incubatie. Dit soort weerstand ook niet leidt tot de afbraak of de wijziging van het antibioticum. Markering van bacteriën met een marker gene plasmide-gedragen wordt niet aanbevolen tenzij het plasmide kan niet worden overgebracht naar een andere bacteriën. De resistentie tegen antibiotica moet niet als gevolg van aantasting of chemische modificatie van het antibioticum zoals antibiotica gevoelige bacteriën vervolgens kundig op antibiotica platen groeien zitten zal als zij zich dicht bij de resistente bacteriën bevinden.
De in dit document beschreven methoden zijn handig voor kleine steekproeven en/of experimenten waar de monsters moeten worden opgenomen (bijvoorbeeld experimenten met menselijke pathogenen). Bij grote steekproeven (boven 100 g materiaal of meer dan 50 planten) zou andere methoden of drastische wijziging van deze methoden nodig10,19,32,19,33, 34 , 35 , 36. de aanwezigheid van grote aantallen micro-organismen dan de soorten bestudeerd kan ook aanzienlijke problemen opleveren. Mogelijke oplossingen omvatten het gebruik van bacteriën die zijn gemarkeerd met een fluorescente proteïne of antibiotica-resistentie, zoals beschreven in stappen 6.1.2 en 7.3. Echter wanneer de bacteriën van belang zeldzame individuen in een grote populatie van andere micro-organismen zijn kunnen deze markers niet toereikend zijn om ondubbelzinnige eenbeoordeling van de nummers van de bacteriën wordt bestudeerd.
Al de hier beschreven methoden zijn op basis van laboratoriumtechnieken. Kleine wijzigingen nodig zou zijn voor broeikasgassen studies. Meer belangrijke wijzigingen dreigen te worden vereist voor veldstudies waar protozoa, insecten en andere dieren predatie en klimaat variatie bemoeilijken de levering van bepaalde voorwaarden voor de experimenten. Deze methoden kunnen in de toekomst worden uitgebreid tot de interactie van twee of meer micro-organismen op het oppervlak van de plant.

De meting van de bacteriële binding aan oppervlakken plant is belangrijk in drie verschillende situaties geworden. De eerste situatie is het onderzoek van de overdracht van ziekteverwekkers van de mens op plant oppervlakken,1,,2,3. Het doel hier is om te voorkomen dat de bacteriële binding of te verwijderen of afhankelijke bacteriën te doden en dus om de overdracht van ziekten door plantaardig materiaal. De tweede situatie is het onderzoek naar de binding van plant ziekteverwekkers aan oppervlakken4planten. Nogmaals het doel hier is om te voorkomen dat bindende of te verwijderen of afhankelijke bacteriën te doden en daarmee aan het verminderen van de ziekte. De derde situatie is het onderzoek naar de binding van de symbiotische of plant-groeibevorderende bacteriën5,6. Het doel hier is om bacteriële bindend en dus aan verhoging van de gezondheid van planten en gewassen oplevert.
De technieken voor het meten van de bacteriële binding aan planten van oppervlakken die in dit artikel beschreven zijn goedkope en relatief gemakkelijk uit te voeren. De enige vereisten zijn een microscoop en materialen vindt u meestal in een laboratorium voor bacteriologie. Voor sommige technieken is een ultrasoonapparaat Bad handig. De beschreven technieken zijn ontworpen voor het binden van experimenten uitgevoerd met behulp van relatief kleine steekproeven. Metingen van bindend worden gemaakt in het laboratorium, hoewel het mogelijk is dat sommige van deze technieken voor het gebruik in de serre of in het veld wijzigen.
Deze technieken zijn gebruikt voor het meten van de bacteriële binding aan de wortels, spruiten, gesneden bladeren, gesneden fruit en intact cherry tomaten in het laboratorium7,8,9,10,11, 12,13,14,15. Ze zijn ook gebruikt om te meten wortel kolonisatie van planten die groeien in de bodem of in het laboratorium16zand. De technieken zijn gebruikt met veel bacteriesoorten en Agrobacterium tumefaciens Sinorhizobium meliloti, Escherichia coli, Salmonella enterica, Pseudomonas fluorescens. Een nuttige beschrijving van methoden voor de beoordeling van de interactie van A. tumefaciens met oppervlakken kan worden gevonden in Morton en Fuqua (2012)17. In alle gevallen is de omvang van de steekproeven betrokken waren klein, over het algemeen minder dan 25-50 planten. De beschreven technieken zijn geschikt voor gebruik met menselijke pathogenen die moeten worden staande gehouden tijdens de experimenten.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:731px;" width="731">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="56">
			<td height="56" style="height:56px;width:143px;">light microscope</td>
			<td style="width:164px;">any</td>
			<td style="width:125px;">N/A</td>
			<td style="width:299px;">phase contrast or Nomarski optics are helpful, for studies using fluorescent markers a fluorescence microscope is required.</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:143px;">seeds</td>
			<td style="width:164px;">any&#160;</td>
			<td style="width:125px;">N/A</td>
			<td style="width:299px;">make a note of the seed lot number and the cultivar</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:143px;">bleach</td>
			<td style="width:164px;">any</td>
			<td style="width:125px;">N/A</td>
			<td style="width:299px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:143px;">bath sonicator</td>
			<td style="width:164px;">any scientific supply company</td>
			<td style="width:125px;">N/A</td>
			<td style="width:299px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:143px;">Triton X-100</td>
			<td style="width:164px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:125px;">T9284</td>
			<td style="width:299px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:143px;">nutrient agar&#160;</td>
			<td style="width:164px;">Difco&#160;</td>
			<td style="width:125px;">001-01-8</td>
			<td style="width:299px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:143px;">soytone</td>
			<td style="width:164px;">Difco&#160;</td>
			<td style="width:125px;">24360</td>
			<td style="width:299px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:143px;">Sand</td>
			<td style="width:164px;">sea sand Fisher Scientific</td>
			<td style="width:125px;">S25</td>
			<td style="width:299px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:143px;">sand</td>
			<td style="width:164px;">&#160;Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:125px;">S9887</td>
			<td style="width:299px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:143px;">conetainers</td>
			<td style="width:164px;">Stuewe &#38; Sons, Inc.</td>
			<td style="width:125px;">Ray-Leach cone-tainers</td>
			<td style="width:299px;">many different sizes are available to suit the type of plant you wish to grow</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:143px;">parafilm</td>
			<td style="width:164px;">any scientific supply company</td>
			<td style="width:125px;">N/A</td>
			<td style="width:299px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:143px;">MS salts</td>
			<td style="width:164px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:125px;">M5524</td>
			<td style="width:299px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:143px;">parrafin</td>
			<td style="width:164px;">any</td>
			<td style="width:125px;">N/A</td>
			<td style="width:299px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:143px;">centrigfuge</td>
			<td style="width:164px;">any scientific company</td>
			<td style="width:125px;">N/A</td>
			<td style="width:299px;">to pellet most bacteri only a small centrifuge with a max force of 10,000 XG is needed</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:143px;">vortex mixer</td>
			<td style="width:164px;">any scientific company</td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:299px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:143px;">micrometer</td>
			<td style="width:164px;">ACCU-SCOPE Accessories</td>
			<td style="width:125px;">A3145</td>
			<td style="width:299px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:143px;">Sedgwick-rafter counting cell</td>
			<td style="width:164px;">Hauser Scientific</td>
			<td style="width:125px;">HS3800</td>
			<td style="width:299px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:143px;">probe-clip press-seal incubatin chamber</td>
			<td style="width:164px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:125px;">Z359483</td>
			<td style="width:299px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:143px;">rifampicin</td>
			<td style="width:164px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:125px;">R3501</td>
			<td style="width:299px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:143px;">naladixic acid</td>
			<td style="width:164px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:125px;">n8878</td>
			<td style="width:299px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:143px;">Live/dead stain</td>
			<td style="width:164px;">In Vitrogen Molecular Bioprobes</td>
			<td style="width:125px;">L7007</td>
			<td style="width:299px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

adherence of bacteria to plant surfaces measured in the laboratory

Dit manuscript beschrijft een methode voor het meten van de bacteriële binding aan een plant oppervlakken in de lichte Microscoop en door het gebruik van levensvatbare cellen. Plantaardig materiaal gebruikt bevatten spruiten, wortels, bladeren en fruit snijden. De beschreven methoden zijn goedkoop, eenvoudig en geschikt voor kleine steekproeven. Bindende wordt gemeten in het laboratorium en een verscheidenheid van incubatie media en voorwaarden kan worden gebruikt. Het effect van remmers kan worden bepaald. Situaties die bevorderen en remmen binding kunnen ook worden beoordeeld. In sommige gevallen is het mogelijk om te onderscheiden of verschillende omstandigheden bindende voornamelijk te wijten aan hun effecten op de plant of op de bacteriën veranderen.

A. tumefaciens koloniseert wortel oppervlakken. Om te bepalen of bacteriële productie van cellulose een rol bij de kolonisatie van de wortel speelt, de effecten van bacteriële mutaties waardoor cellulose synthese waren onderzocht16. De technieken beschreven in stap 1.3 en 7.1 werden gebruikt. Tomaat zaden waren oppervlak gesteriliseerd en ontkiemd in steriel water. Wanneer de wortels ongeveer 2 cm lang waren waren ze ondergedompeld in een suspensie van 105 bacteriën per mL en geplant in gepasteuriseerde bodem in containers. De planten werden gekweekt voor 14 dagen bij 25 ° C op een 12 h licht/12 h donker cyclus. Na de aangegeven tijden de planten werden verwijderd uit de containers. De wortels werden gewassen en sonicated in een bad ultrasoonapparaat afhankelijke bacteriën te verwijderen. Bacteriële aantallen werden vastgesteld met behulp van levensvatbare cellen. Figuur 2 toont het effect van twee verschillende cellulose-minus mutaties op het vermogen van de bacteriën te koloniseren tomaat wortels. Hoewel de standaarddeviaties van sommige metingen waren zo hoog als 0.9 log10 (een veelvoorkomend probleem bij dit soort meting) de afname van de binding van de cellulose-minus mutanten is duidelijk en kunnen we concluderen dat de bacteriële productie van cellulose helpt de bacteriën in de kolonisatie van de wortels van de tomaat.
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56599/56599fig2.jpg"> Figuur 2 : Root kolonisatie door wild type en cellulose-minus mutanten van A. tumefaciens. Log10 totaal aantal bacteriën per cm wortel lengte verhaald tomaat wortels geënt met wild type A. tumefaciens stam C58 en cellulose-minus mutanten C58:1 en C58:A60. De getallen zijn de middelen van een minimum van vier afzonderlijke experimenten. Staven geven de standaarddeviaties van de middelen. Wortels waren geënt door dompelen hen in een suspensie van 105 bacteriën per mL voor één min. De planten zijn geteeld in containers en de losjes aanhangend bacteriën werden verwijderd door het wassen van de wortels in de buffer in een glazen ampul wassen. Strak aanhangend bacteriën werden verwijderd met behulp van een bad ultrasoonapparaat en de resulterende schorsing verguld en controleer of levensvatbare cellen telt16. Dit cijfer is gewijzigd van Matthysse en McMahan. <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56599/56599fig2large.jpg" target="_blank">Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.</a>
De rol van exopolysaccharides in de binding van E. coli en andere bacteriën alfalfa spruiten werd onderzocht. Verontreinigde alfalfa spruiten hebben sommige uitbraken van diarree ziekte als gevolg van E. coli O157:H7 zijn opgespoord. Binding van de wild-type bacteriën en mutanten niet in staat om verschillende exopolysaccharides werd gemeten met behulp van de methoden in stap 1.1, 5.1 en 7.2 beschreven. Alfalfa spruiten waren oppervlak gesteriliseerd en ontkiemd voor één dag in steriel water bij 25 ° C in het donker. Vier spruiten met bijgevoegde zaad jassen werden geplaatst in steriele kunststof gerechten met 5 mL water. Bacteriën gekweekt in Luria Bouillon werden toegevoegd aan een eindconcentratie van ongeveer 5 x 103 per mL. De geënte spruiten werden geïncubeerd bij 25 ° C in het donker voor 3 dagen. De spruiten waren tweemaal met 5 mL steriel water in een flesje gewassen door krachtige inversie en gehomogeniseerd in wassen buffer met behulp van een motoraangedreven Teflon glas homogenizer. Eerdere experimenten met behulp van bacteriën zijn voorzien van een plasmide die het GFP-gen toonde geen verinnerlijkte bacteriën Hoewel oppervlak bacteriën werden gemakkelijk waargenomen. De resultaten worden weergegeven in tabel 1. Twee stammen van E. coli O157:H7 werden onderzocht. In beide stammen verscheen de productie van poly-β-1,6-glucuronic acid(PGA) de grootste bijdrage te leveren aan de binding van de pathogene E. coli te planten oppervlakken. Colon zuur speelde ook een belangrijke rol in bindende. Terwijl de afname van de binding in cellulose-minus mutanten aanzienlijk was was het niet zo groot als die voor de andere twee polysacchariden.
<table fo:keep-together.within-page="1"><tbody>
<tr>
<td colspan="4">Effecten van mutaties in Exopolysaccharide productie genen op bindende van E. coli O157:H7 spruiten en open zaad jassen</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Bacteriële stam</td>
			<td rowspan="2">Mutatie of genotype (relevante fenotype)</td>
			<td colspan="2">Log10 aantal bacteriën gebonden per stronk of zaad jas</td>
		</tr>
<tr>
<td>Alfalfa spruitenb
</td>
			<td>Open zaad jassen</td>
		</tr>
<tr>
<td>86-24</td>
			<td>Geen (wild type)</td>
			<td>4.7 ± 0,6</td>
			<td>5.6 ± 0,2</td>
		</tr>
<tr>
<td>8624N</td>
			<td>
yhjN (cellulose-minus)</td>
			<td>2.9 ± 0,7c
</td>
			<td>3,5 ± 0,6c
</td>
		</tr>
<tr>
<td>8624C</td>
			<td>
wcaD (Colon zuur-minus)</td>
			<td>1.8 ± 0,7c
</td>
			<td>2.4 ± 0,5c
</td>
		</tr>
<tr>
<td>8624P</td>
			<td>
pgaC (PGA-minus)</td>
			<td>< 1.0c
</td>
			<td>1,0 ± 1.0c
</td>
		</tr>
<tr>
<td>DEC4A</td>
			<td>Geen (wild type)</td>
			<td>5.6 ± 0,2</td>
			<td>6.1 ± 0,3</td>
		</tr>
<tr>
<td>DEC4AN</td>
			<td>
yhjN (cellulose-minus)</td>
			<td>4,8 ± 0.8d
</td>
			<td>4.1 ± 0.8d
</td>
		</tr>
<tr>
<td>DEC4AC</td>
			<td>
wcaD (Colon zuur-minus)</td>
			<td>3.9 ± 0,5c
</td>
			<td>4,8 ± 0.8d
</td>
		</tr>
<tr>
<td>DEC4AP</td>
			<td>
pgaC (PGA-minus)</td>
			<td>< 1.0c
</td>
			<td>1.2 ± 0,7c
</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="4">een gemiddelde ± standaardafwijking van ten minste drie metingen van het aantal (log10) voor bacteriën gebonden na 3 dagen.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="4">b spruiten werden gewassen voor meting.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="4">c wijkt sterk af van het wilde type: P < 0,01.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="4">d wijkt sterk af van het wilde type: P < 0.05.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="4">Deze tabel is gewijzigd van Matthysse, Deora Mishra en Torres10.</td>
		</tr>
</tbody></table>Tabel 1: gevolgen van mutaties in exopolysaccharide productie genen voor de binding van E. coli O157:H7 aan spruiten. Om te bepalen van de rol van verschillende exopolysaccharides en lipopolysaccharide in de binding van pathogene E. coli stammen van de O157:H7 aan alfalfa spruiten, de binding van een aantal mutanten aan de spruiten en open zaad jassen werd onderzocht met behulp van de methoden beschreven in stap 6. De resultaten toonden aan dat poly-ß-1, 6 -N-acetyl-D-glucosamine (PGA) lijkt te zijn essentieel voor binding met spruiten en dat zowel cellulose en colanic zuur zijn vereist voor maximale binding van E. coli O157. Deze tabel is gewijzigd van Matthysse, Deora Mishra en Torres10.
Om te bepalen als de productie van PGA voldoende om te leiden tot bacteriële binding is aan planten oppervlakken, een plasmide (pMM11) uitvoering van de gekloonde operon codering van de genen die nodig is voor de PGA werd productie geïntroduceerd in twee verschillende bacteriën die niet zou gewoonlijk kunnen binden aan tomaat wortels10. A. tumefaciens A1045 is een mutant van de wild type stam C58 die er niet in slaagt te maken van cyclische-β-1,2-glucaan en ook niet lukt om te binden aan de plant oppervlakken29. Sinorhizobium meliloti 1021 die wortel knobbeltjes vormen op alfalfa niet binden aan niet-peulvruchten zoals tomaat12. De technieken beschreven in stap 1.1, 5.1, 6.3 en 7.1 werden gebruikt om te bepalen als de mogelijkheid om PGA over het algemeen bacteriële binding aan wortel oppervlakken toegenomen. Tomaat zaden waren oppervlak gesteriliseerd en ontkiemd in steriel water. Wortels waren in segmenten 1 cm in de lengte gesneden en geplaatst in steriel water en de bacteriën zijn geënt. Aangezien deze twee soorten bacteriën tegen verschillende tarieven groeien, werd bindende gemeten op verschillende tijdstippen te voorzien in ongeveer gelijke hoeveelheden van bacteriële groei. De aanwezigheid van de plasmide-pMM11 veroorzaakt een soortgelijk aanzienlijke toename in het aantal afhankelijke bacteriën van beide soorten (tabel 2)10. Een aanzienlijke toename van de bindende werd ook gezien in de lichte Microscoop maar de binding was heel anders voor de twee soorten (Figuur 3). A. tumefaciens A1045 gebonden als afzonderlijke bacteriën op het oppervlak van de wortel. S. meliloti gebonden in grote clusters waarin slechts een paar van de bacteriën rechtstreeks zijn met de wortel verbonden en de meerderheid van de bacteriën waren gekoppeld aan andere bacteriën. Dit voorbeeld laat zien dat het simpelweg het analyseren van het aantal bacteriën gebonden zonder met inbegrip van microscopische opmerkingen een misleidende indruk van de resultaten van een experiment geven kan. Hoewel beide methoden (levensvatbare cellen en microscopische opmerkingen) dat pMM11 verhoogd bacteriële binding aan tomaat wortels tonen, was het soort bindende veroorzaakt door de productie van PGA verschillend voor de twee bacteriesoorten10.
<table fo:keep-together.within-page="1"><tbody>
<tr>
<td colspan="3">Het Effect van de plasmide-pMM11 op de Binding van bacteriën naar de wortels van de tomaat</td>
		</tr>
<tr>
<td>Bacteriële stam</td>
			<td>Plasmide</td>
			<td>Afhankelijk van het aantal bacteriën per mm wortel lengte</td>
		</tr>
<tr>
<td>A. tumefaciens A1045een
</td>
			<td>geen</td>
			<td>0.25 x 103 ± 0,25 x 103
</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>pBBR1mcs (vector)</td>
			<td>0.25 x 103 ± 0,25 x 103
</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>pMM11 (PGA synthese)</td>
			<td>10 x 103 ± 0,25 x 103
</td>
		</tr>
<tr>
<td>S. meliloti 1021b
</td>
			<td>geen</td>
			<td>geen gevonden</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>pBBR1mcs (vector)</td>
			<td>geen gevonden</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>pMM11 (PGA synthese)</td>
			<td>50 x 103 ± 5 x 103
</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="3">een bacteriële binding werd gemeten na 2 uur</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="3">b bacteriële bindende was maatregel na 18 uur</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="3">Deze tabel is gewijzigd van Matthysse, Deora Mishra en Torres10.</td>
		</tr>
</tbody></table>Tabel 2: het effect van een plasmide die binding van genen voor de synthese van PGA A. tumefaciens A1045 en S. meliloti 1021 tomaat wortel segmenten. Om na te gaan van het vermogen van poly-ß-1, 6 -N-acetyl-D-glucosamine (PGA) ter bevordering van de binding van bacteriën te planten wortels, het effect van een plasmide toekenning van de mogelijkheid om PGA (pMM11) op de binding van twee stammen van bacteriën plant-geassocieerde wortels van de tomaat werd onderzocht. Noch spanning van bacteriën toonde significante binding met tomaat wortels in de afwezigheid van de plasmide of in aanwezigheid van de plasmide zonder de genen coderend voor PGA synthese (pBBR1mcs). De toevoeging van de plasmide uitvoering PGA synthese genen verhoogd bindende door beide soorten bacteriën. Omdat A. tumefaciens sneller groeit dan S. meliloti bindend Na incubatie gedurende A. tumefaciens per 2 uur en na 18 h voor S. melilotiwerd gemeten. De gebruikte technieken zijn die beschreven in stap 7. Deze tabel is gewijzigd van Matthysse, Deora Mishra en Torres10.
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56599/56599fig3.jpg"> Figuur 3 : Het effect van de plasmide pMM11 uitvoering van de PGA biosynthese genen op de binding van A. tumefaciens A1045 en S. meliloti 1021 aan tomaat wortel haren. Binding met tomaat wortel haren van A) A. tumefaciens A1045, B) A. tumefaciens A1045 pMM11, C) S. meliloti 1021, en D) S. meliloti 1021 pMM11. Hoewel de toename van de binding van de twee bacteriesoorten ruwweg gelijkaardig is zijn de details van de binding zoals gezien in het licht van de Microscoop heel verschillend. De gebruikte technieken zijn die beschreven in stap 6. Dit cijfer is gewijzigd van Matthysse, Deora Mishra en Torres10. <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56599/56599fig3large.jpg" target="_blank">Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.</a>
Het is soms mogelijk om te binden aan niet-biologische oppervlakken gebruiken om te helpen bij het onderscheiden van de bijdrage van de bacteriën en de plant in een specifieke interactie. De unipolaire polysaccharide(UPP) van A. tumefaciens is aangetoond te kunnen bemiddelen bacteriële binding aan een verscheidenheid van beide oppervlakken van biologische en niet-biologische30. Calcium werd waargenomen voor de remming van de binding van A. tumefaciens te planten oppervlakken gemedieerd door de UPP28. Om te bepalen dat of de remming door calciumionen van bacteriële binding aan oppervlakken plant te wijten aan een effect op de bacteriën of op het oppervlak van de plant is, de binding van de bacteriën op nylon draden werd onderzocht. De technieken worden beschreven in stap 8.2 werden gebruikt. Tomaat zaden waren oppervlak gesteriliseerd en ontkiemd in water zoals beschreven in stap 1. De bacteriën werden gekweekt in minimaal medium met sacharose en toegevoegd aan de tomaat wortels of nylon draden op een eindconcentratie van ongeveer 105/mL zoals beschreven in stap 5.1. Het effect van toegevoegde CaCl2 op bacteriële binding aan tomaat wortels en nylon draden werd in de microscoop onderzocht. Figuur 4 toont een soortgelijke remming van bindende door calcium met behulp van beide oppervlakte suggereren dat het effect van calcium voornamelijk op de bacteriën10 is.
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56599/56599fig4.jpg"> Figuur 4 : Het effect van calcium op de binding van A. tumefaciens aan tomaat wortel haren en nylon draden. A. tumefaciens was geïncubeerd met tomaat wortels (A en B) of nylon draden (C en D) gedurende 24 uur in een 1:10 verdunning van MS zouten en een 1:20 verdunning van AB minimaal medium, 0,4% sucrose (A en C) of in een 1:10 verdunning van MS zouten en 1:20 verdunning van AB minimaal medium , 0,4% sacharose met 60 mM CaCl2 (B en D)31. De toegevoegde CaCl2 geremd bacteriële binding aan zowel de wortels als de nylon draden wat suggereert dat de remming voornamelijk te wijten aan een effect op de bacteriën in plaats van op het oppervlak van de plant was. <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56599/56599fig4large.jpg" target="_blank">Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Adherence of Bacteria to Plant Surfaces Measured in the Laboratory at JoVE.com

Adherence of Bacteria to Plant Surfaces Measured in the Laboratory

Een eenvoudige methode voor het meten en karakteriseren van bacteriële hechting op planten, met name wortels en spruiten, wordt in dit artikel beschreven.

Hechting van bacteriën te planten oppervlakken gemeten in het laboratorium

This manuscript describes a method to measure bacterial binding to axenic plant surfaces in the light microscope and through the use of viable cell ...

Research

JoVE Journal

Environment

A New Application of the Electrical Penetration Graph (EPG) for Acquiring and Measuring Electrical Signals in Phloem Sieve Elements

A New Application of the Electrical Penetration Graph EPG for Acquiring and Measuring Electrical Signals in Phloem Sieve Elements

Een nieuwe toepassing van de elektrische Penetration Graph (EPG) voor het verwerven en het meten van elektrische signalen in Floëem Sieve Elements

Electrophysiological properties of cells are often studied in vitro, after dissociating them from their native environments. However, the study of ...

Laboratory Simulation of an Iron(II)-rich Precambrian Marine Upwelling System to Explore the Growth of Photosynthetic Bacteria

Laboratory Simulation of an IronII-rich Precambrian Marine Upwelling System to Explore the Growth of Photosynthetic Bacteria

Laboratorium Simulatie van een ijzer (II) -rijke Precambrium Marine Upwelling Systeem om Ontdek de groei van de fotosynthetische bacteriën

A conventional concept for the deposition of some Precambrian Banded Iron Formations (BIF) proceeds on the assumption that ferrous iron [Fe(II)] upwelling ...

Procedures of Laboratory Fumigation for Pest Control with Nitric Oxide Gas

Procedures van laboratorium fumigatie voor ongediertebestrijding met stikstofmonoxide Gas

Nitric oxide (NO) is a newly discovered fumigant for postharvest pest control. This paper provides detailed protocols for conducting NO fumigation on ...

Experimental Methods of Dust Charging and Mobilization on Surfaces with Exposure to Ultraviolet Radiation or Plasmas

Experimentele methoden van stof opladen en mobilisatie op oppervlakken met blootstelling aan ultraviolette straling of plasma 's

Electrostatic dust transport has been hypothesized to explain a number of observations of unusual planetary phenomena. Here, it is demonstrated using ...

Ecosystem Fabrication (EcoFAB) Protocols for The Construction of Laboratory Ecosystems Designed to Study Plant-microbe Interactions

Ecosystem Fabrication EcoFAB Protocols for The Construction of Laboratory Ecosystems Designed to Study Plant-microbe Interactions

Ecosysteem fabricage (EcoFAB) protocollen voor de bouw van laboratorium ecosystemen ontworpen om te bestuderen van de Plant-microbe interacties

Beneficial plant-microbe interactions offer a sustainable biological solution with the potential to boost low-input food and bioenergy production. A ...

Double-stranded RNA Oral Delivery Methods to Induce RNA Interference in Phloem and Plant-sap-feeding Hemipteran Insects

Double-stranded RNA orale afleveringsmethoden voor het opwekken van RNA-interferentie in het floëem en Hemipteran insecten Plant-sap-voeding

Phloem and plant sap feeding insects invade the integrity of crops and fruits to retrieve nutrients, in the process damaging food crops. Hemipteran ...

Self-standing Electrochemical Set-up to Enrich Anode-respiring Bacteria On-site

Zichzelf staande elektrochemische Set-up te verrijken Anode-respiring bacteriën ter plaatse

Anaerobic respiration coupled with electron transport to insoluble minerals (referred to as extracellular electron transport [EET]) is thought to be ...

The Plant Infection Test: Spray and Wound-Mediated Inoculation with the Plant Pathogen Magnaporthe Grisea

The Plant Infection Test: Spray and Wound-Mediated Inoculation with the Plant Pathogen Magnaporthe Grisea

De Plant infectie Test: Spray en wond-gemedieerde inoculatie met de Plant Pathogen Magnaporthe Grisea

Plants possess a powerful system to defend themselves against potential threats by pathogenic fungi. For agriculturally important plants, however, current ...

A Flexible Low Cost Hydroponic System for Assessing Plant Responses to Small Molecules in Sterile Conditions

Een flexibele goedkope hydrocultuur systeem voor de beoordeling van de Plant reacties op kleine moleculen onder steriele omstandigheden

A wide range of studies in plant biology are performed using hydroponic cultures. In this work, an in vitro hydroponic growth system designed for ...

An Optimized Rhizobox Protocol to Visualize Root Growth and Responsiveness to Localized Nutrients

Een geoptimaliseerde Rhizobox Protocol bij het visualiseren van de wortelgroei en responsiviteit gelokaliseerde nutriënten

Roots are notoriously difficult to study. Soil is both a visual and mechanical barrier, making it difficult to track roots in situ without destructive ...