Name: site-directed immobilization of bone morphogenetic protein 2 to solid surfaces by click chemistry
Uploaded: 2018-03-29T13:00:00
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लेखकों ने डॉ॰ एम Rubini (Konstanz, जर्मनी) को प्लाज्मिड एंकोडिंग pyrrolysyl-tRNA प्रदान करने के लिए और pRSFduet-pyrtRNAsynth एन्कोडिंग प्रदान करने के लिए इसी aminoacyl-tRNA synthetase का धन्यवाद किया ।

1. BMP2 वैरिएंट का उत्पादन BMP2-K3Plk
<ol><li>BMP2 की क्लोनिंग-साइट द्वारा K3Plk-निर्देशित mutagenesis का उपयोग करते हुए पीसीआर 12<ol>
<li>बढ़ाना मानव परिपक्व BMP2 (hmBMP2) से एक p25N-hmBMP2 सदिश ( सामग्री की तालिकादेखें) एक आगे प्?...

<ol>
	<li>Giannoudis, P. V., Dinopoulos, H., Tsiridis, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+substitutes:+An+update.">Bone substitutes: An update.</a> Injury. 36, S20-S27 (2005).</li><li>Oryan, A., Alidadi, S., Moshiri, A., Bigham-Sadegh, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+morphogenetic+proteins:+A+powerful+osteoinductive+compound+with+non-negligible+side+effects+and+limitations.">Bone morphogenetic proteins: A powerful osteoinductive compound with non-negligible side effects and limitations.</a> Biofactors. 40 (5), 459-481 (2014).</li><li>Luginbuehl, V., Meinel, L., Merkle, H. P., Gander, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localized+delivery+of+growth+factors+for+bone+repair.">Localized delivery of growth factors for bone repair.</a> Eur J Pharm Biopharm. 58 (2), 197-208 (2004).</li><li>Haidar, Z. S., Hamdy, R. C., Tabrizian, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Delivery+of+recombinant+bone+morphogenetic+proteins+for+bone+regeneration+and+repair.+Part+A:+Current+challenges+in+BMP+delivery.">Delivery of recombinant bone morphogenetic proteins for bone regeneration and repair. Part A: Current challenges in BMP delivery.</a> Biotechnol Lett. 31 (12), 1817-1824 (2009).</li><li>Hollinger, J. O., Uludag, H., Winn, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sustained+release+emphasizing+recombinant+human+bone+morphogenetic+protein-2.">Sustained release emphasizing recombinant human bone morphogenetic protein-2.</a> Adv Drug Deliv Rev. 31 (3), 303-318 (1998).</li><li>Uludag, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Implantation+of+recombinant+human+bone+morphogenetic+proteins+with+biomaterial+carriers:+A+correlation+between+protein+pharmacokinetics+and+osteoinduction+in+the+rat+ectopic+model.">Implantation of recombinant human bone morphogenetic proteins with biomaterial carriers: A correlation between protein pharmacokinetics and osteoinduction in the rat ectopic model.</a> J Biomed Mater Res. 50 (2), 227-238 (2000).</li><li>Uludag, H., Golden, J., Palmer, R., Wozney, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biotinated+bone+morphogenetic+protein-2:+In+vivo+and+in+vitro+activity.">Biotinated bone morphogenetic protein-2: In vivo and in vitro activity.</a> Biotechnol Bioeng. 65 (6), 668-672 (1999).</li><li>Aono, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potent+ectopic+bone-inducing+activity+of+bone+morphogenetic+protein-4/7+heterodimer.">Potent ectopic bone-inducing activity of bone morphogenetic protein-4/7 heterodimer.</a> Biochem Biophys Res Commun. 210 (3), 670-677 (1995).</li><li>Suzuki, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alginate+hydrogel+linked+with+synthetic+oligopeptide+derived+from+BMP-2+allows+ectopic+osteoinduction+in+vivo.">Alginate hydrogel linked with synthetic oligopeptide derived from BMP-2 allows ectopic osteoinduction in vivo.</a> J Biomed Mater Res. 50 (3), 405-409 (2000).</li><li>Knaus, P., Sebald, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cooperativity+of+binding+epitopes+and+receptor+chains+in+the+BMP/TGFbeta+superfamily.">Cooperativity of binding epitopes and receptor chains in the BMP/TGFbeta superfamily.</a> Biol Chem. 382 (8), 1189-1195 (2001).</li><li>Wang, L., Xie, J., Schultz, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expanding+the+genetic+code.">Expanding the genetic code.</a> Annu Rev Biophys Biomol Struct. 35, 225-249 (2006).</li><li>Costa, G. L., Weiner, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+PCR+site-directed+mutagenesis.">Rapid PCR site-directed mutagenesis.</a> CSH Protoc. 2006 (1), (2006).</li><li>Kirsch, T., Nickel, J., Sebald, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+recombinant+BMP+receptor+IA+ectodomain+and+its+2:1+complex+with+BMP-2.">Isolation of recombinant BMP receptor IA ectodomain and its 2:1 complex with BMP-2.</a> FEBS Lett. 468 (2-3), 215-219 (2000).</li><li>Tabisz, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Site-directed+immobilization+of+BMP-2:+Two+approaches+for+the+production+of+innovative+osteoinductive+scaffolds.">Site-directed immobilization of BMP-2: Two approaches for the production of innovative osteoinductive scaffolds.</a> Biomacromolecules. 18 (3), 695-708 (2017).</li><li>Duong-Ly, K. C., Gabelli, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+ion+exchange+chromatography+to+purify+a+recombinantly+expressed+protein.">Using ion exchange chromatography to purify a recombinantly expressed protein.</a> Methods Enzymol. 541, 95-103 (2014).</li><li>Brunelle, J. L., Green, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=One-dimensional+SDS-polyacrylamide+gel+electrophoresis+(1D+SDS-PAGE).">One-dimensional SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (1D SDS-PAGE).</a> Methods Enzymol. 541, 151-159 (2014).</li><li>Brunelle, J. L., Green, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coomassie+blue+staining.">Coomassie blue staining.</a> Methods Enzymol. 541, 161-167 (2014).</li><li>Kirsch, T., Nickel, J., Sebald, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=BMP-2+antagonists+emerge+from+alterations+in+the+low-affinity+binding+epitope+for+receptor+BMPR-II.">BMP-2 antagonists emerge from alterations in the low-affinity binding epitope for receptor BMPR-II.</a> EMBO J. 19 (13), 3314-3324 (2000).</li><li>Hein, J. E., Fokin, V. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Copper-catalyzed+azide-alkyne+cycloaddition+(CuAAC)+and+beyond:+new+reactivity+of+copper(I)+acetylides.">Copper-catalyzed azide-alkyne cycloaddition (CuAAC) and beyond: new reactivity of copper(I) acetylides.</a> Chem Soc Rev. 39 (4), 1302-1315 (2010).</li><li>Alborzinia, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+kinetics+analysis+of+BMP2+uptake+into+cells+and+its+modulation+by+BMP+antagonists.">Quantitative kinetics analysis of BMP2 uptake into cells and its modulation by BMP antagonists.</a> J Cell Sci. 126 (Pt 1), 117-127 (2013).</li><li>Paarmann, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamin-dependent+endocytosis+of+Bone+Morphogenetic+Protein2+(BMP2)+and+its+receptors+is+dispensable+for+the+initiation+of+Smad+signaling.">Dynamin-dependent endocytosis of Bone Morphogenetic Protein2 (BMP2) and its receptors is dispensable for the initiation of Smad signaling.</a> Int J Biochem Cell Biol. 76, 51-63 (2016).</li><li>Pohl, T. L., Boergermann, J. H., Schwaerzer, G. K., Knaus, P., Cavalcanti-Adam, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surface+immobilization+of+bone+morphogenetic+protein+2+via+a+self-assembled+monolayer+formation+induces+cell+differentiation.">Surface immobilization of bone morphogenetic protein 2 via a self-assembled monolayer formation induces cell differentiation.</a> Acta Biomater. 8 (2), 772-780 (2012).</li></ol>

आनुवंशिक codon विस्तार द्वारा टैग प्रोटीन वेरिएंट उत्पादन प्राथमिक प्रोटीन अनुक्रम के किसी भी स्थिति में मुख्य रूप से विभिन्न गैर प्राकृतिक एमिनो एसिड अनुरूप के परिचय की अनुमति देता है. BMP2 जैसे BMPs के मामल...

अस्थि ऊतक इंजीनियरिंग और अस्थि पुनर्जनन के अंतिम लक्ष्य गैर संघ भंग के आम उपचार के दौरान होने वाले नुकसान और सीमाओं को दूर करने के लिए है । ऑटो या एलो-ट्रांसप्लांटेशन मुख्य रूप से वर्तमान चिकित्सा रणनीतियों के रूप में इस्तेमाल कर रहे हैं, भले ही वे दोनों कई कमियां है । आदर्श हड्डी भ्रष्टाचार osteoinduction के रूप में के रूप में अच्छी तरह से osteoconduction, हड्डी में भ्रष्टाचार के osteointegration के लिए अग्रणी द्वारा आस्टियोजेनेसिस प्रेरित करना चाहिए । आजकल, केवल ऑटो प्रत्यारोपण "सोने के मानक के रूप में माना जाता है" के बाद से यह एक आदर्श हड्डी भ्रष्टाचार के सभी विशेषताओं प्रदान करता है । दुर्भाग्य से, यह भी इस तरह के लंबे समय सर्जरी के रूप में महत्वपूर्ण नकारात्मक पहलुओं, प्रस्तुत करता है, और एक दूसरा आघात साइट है कि आम तौर पर अधिक जटिलताओं (जैसे, पुराने दर्द, रक्तगुल्म संरचनाओं, संक्रमण, कॉस्मेटिक दोष, आदि) जरूरत पर जोर देता । Allogenic भ्रष्टाचार, दूसरी ओर सभी सामांय पहलुओं के लिए उपइष्टतम विशेषताएं है1। वैकल्पिक अस्थि भ्रष्टाचार प्रौद्योगिकियों पिछले कुछ वर्षों में सुधार किया गया है, उद्देश्य पाड़ों कि osteoinductive, osteoconductive, संगत कर रहे है उत्पादन के साथ, और bioresorbable । के बाद से कई सामग्री इन osteogenic विशेषताओं के सभी नहीं दिखा है, विभिंन विकास कारकों, मुख्य रूप से BMP2 और BMP7, आदेश में विशेष पाड़2की osteogenic क्षमता में सुधार करने के लिए शामिल किया गया है ।
एक आवश्यक कसौटी के रूप में, इस तरह के विकास कारक वितरण प्रणाली समय के साथ एक नियंत्रित खुराक रिहाई प्रदान करना चाहिए ताकि सेल भर्ती और लगाव, सेल के विकास, और angiogenesis जैसे आवश्यक घटनाओं की सुविधा के लिए । हालांकि, BMPs के साथ-साथ अन्य osteogenic ग्रोथ फैक्टर्स को सामान्यतः मैटीरियल नॉन-covalently3किया गया है । फंसाने और सोखना तकनीक एक प्रारंभिक फट जारी है, जो vivo में गंभीर नुकसान की ओर जाता है के कारण प्रोटीन के ऊपर अर्थ का उपसर्ग शारीरिक मात्रा के उपयोग की आवश्यकता होती है, आम तौर पर हड्डी के विकास उत्प्रेरण द्वारा आसपास के ऊतकों को प्रभावित, osteolysis, सूजन, और सूजन4. इस प्रकार, समय की लंबी अवधि के लिए वितरण स्थल पर विकास कारकों की अवधारण आबंध स्थिरीकरण तरीकों से प्राप्त किया जा सकता है । रासायनिक संशोधित BMP2 (succinylated5, acetylated6 या biotinylated7), इंजीनियर heterodimers8, या BMP2 व्युत्पंन oligopeptides9 डिजाइन किया गया है और से संबंधित सीमाओं को दूर करने के लिए इस्तेमाल किया अवशोषण. हालांकि, इन के निर्माण की जैव गतिविधि पूर्वानुमान के बाद से व्यवस्था संभावित सेलुलर रिसेप्टर्स के लिए मैटीरियल ligand के बंधन को रोकता नहीं है । जैसा कि पहले दिखाया गया है, यह आवश्यक है कि सभी चार रिसेप्टर चेन सक्रिय ligand रिसेप्टर कॉम्प्लेक्स के गठन में शामिल मैटीरियल BMP2 के साथ बातचीत के क्रम में पूरी तरह से सभी बहाव संकेतन कैस्केडिंग10को सक्रिय करने के लिए ।
जैव सक्रियता, स्थिरता के संदर्भ में सीमाओं के साथ एक सजातीय उत्पाद परिणाम की समस्याओं को दूर करने के लिए, और स्थिर कारक के गैर-उपलब्धता, हम एक बीएमपी covalently एक साइट निर्देशित तरीके से बाध्यकारी मचान में सक्षम संस्करण बनाया है । इस संस्करण, BMP2-K3Plk, एक कृत्रिम एमिनो एसिड जो आनुवंशिक codon विस्तार द्वारा शुरू की गई थी शामिल है11। इस संस्करण सफलतापूर्वक पाड़ एक आबंध युग्मन रणनीति का उपयोग करते हुए अपनी जैविक गतिविधि को बनाए रखने के लिए जोड़ा गया है ।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1137px;" width="1138">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:396px;">Material</td>
			<td style="width:203px;"></td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td style="width:403px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">1-Step NBT/BCIP</td>
			<td style="width:203px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:136px;">34042</td>
			<td style="width:403px;">Add solution to cells</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">3-Azido-7-hydroxycoumarin</td>
			<td style="width:203px;">BaseClick</td>
			<td style="width:136px;">BCFA-047-1</td>
			<td style="width:403px;">Chemical used for click reaction</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:396px;">Agarose low melting point</td>
			<td style="width:203px;">Biozym</td>
			<td style="width:136px;">840101</td>
			<td>Agarose for ALP assay&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:396px;">Azide agarose beads</td>
			<td style="width:203px;">Jena Bioscience</td>
			<td style="width:136px;">CLK-1038-2</td>
			<td style="width:403px;">Beads used for reaction</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">BamHI (Fast Digest enzyme)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>FD0054</td>
			<td>Restriction enzyme</td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:396px;">BMP receptor IA (BMPR-IAEC)</td>
			<td>--</td>
			<td>--</td>
			<td>Produced in our lab</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:396px;">Coomassie Brilliant Blue G-250 Dye</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:136px;">20279</td>
			<td>Chemical used for Coomassie Brilliant blue staining of SDS PAGE</td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:396px;">Copper (II) sulfate anhydrous (CuSO4)</td>
			<td style="width:203px;">Alfa Aesar</td>
			<td style="width:136px;">A13986</td>
			<td style="width:403px;">Chemical used for click reaction</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:396px;">DNA Polymerase and reaction buffer&#160;</td>
			<td>Kapabiosystems</td>
			<td>KK2102</td>
			<td>KAPA HiFi PCR Kit</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:396px;">Dulbecco&#8217;s modified Eagle&#8217;s medium (DMEM) GlutaMAX</td>
			<td style="width:203px;">Gibco</td>
			<td style="width:136px;">61965-026</td>
			<td style="width:403px;">Cell culture media</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:396px;">ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)</td>
			<td style="width:203px;">Sigma Aldrich GmbH</td>
			<td style="width:136px;">E5134-1kg</td>
			<td style="width:403px;">Chemical used to stop click reaction</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:396px;">Isopropyl &#223;-D-1-thiogalactopyranoside (IPTG)</td>
			<td style="width:203px;">Carl Roth GmbH</td>
			<td style="width:136px;">2316.5</td>
			<td>Bacteria induction (1mM final concentration)&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">NdeI (Fast Digest enzyme)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>ER0581</td>
			<td>Restriction enzyme</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:396px;">NHS-activated Texas Red</td>
			<td style="width:203px;">Life technologies</td>
			<td style="width:136px;">T6134</td>
			<td style="width:403px;">Coupled to receptor</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:396px;">P- Nitrophenyl Phosphate</td>
			<td style="width:203px;">Sigma Aldrich GmbH</td>
			<td style="width:136px;">N4645-1G</td>
			<td style="width:403px;">Alkaline Phosphatase</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:396px;">p25N-hmBMP2&#160;</td>
			<td>--</td>
			<td>--</td>
			<td>Plasmid kindly provided from Walter Sebald to J. Nickel</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">pET11a-pyrtRNA</td>
			<td>--</td>
			<td>--</td>
			<td>Provided by the Chair for Pharmaceutics and Biopharmacy, University Wuerzburg</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">propargyl-L-lysine (Plk)</td>
			<td>--</td>
			<td>--</td>
			<td>Provided by the Chair for Pharmaceutics and Biopharmacy, University Wuerzburg</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">pSRFduet-pyrtRNAsynth</td>
			<td>--</td>
			<td>--</td>
			<td>Provided by the Chair for Pharmaceutics and Biopharmacy, University Wuerzburg</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:396px;">Qiagen Gel Extraction Kit</td>
			<td style="width:203px;">Qiagen</td>
			<td style="width:136px;">28704</td>
			<td>Gel Purification</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:396px;">Qiagen PCR purification Kit</td>
			<td style="width:203px;">Qiagen</td>
			<td>28104</td>
			<td style="width:403px;">PCR Purification&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:396px;">Sodium L-ascorbate</td>
			<td style="width:203px;">Sigma Aldrich GmbH</td>
			<td style="width:136px;">A7631-100G</td>
			<td style="width:403px;">Chemical used for click reaction</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:396px;">T4 DNA Ligase</td>
			<td style="width:203px;">ThermoScientific</td>
			<td style="width:136px;">EL0011</td>
			<td>Ligation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:396px;">tris(3-hydroxypropyltriazolylmethyl)amine (THPTA)</td>
			<td style="width:203px;">BaseClick</td>
			<td style="width:136px;">BCMI-006-100</td>
			<td style="width:403px;">Chemical used for click reaction</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">4-(1,1,3,3-Tetramethylbutyl)phenyl-polyethylene glycol</td>
			<td style="width:203px;">Sigma Aldrich GmbH</td>
			<td>X100-1L</td>
			<td style="width:403px;">Triton X 100&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:396px;">Name</td>
			<td style="width:203px;">Company</td>
			<td style="width:136px;">Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:396px;">Equipment</td>
			<td style="width:203px;"></td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:396px;">Amicon concentrating cell 400 ml&#160;</td>
			<td style="width:203px;">Merck KGaA</td>
			<td style="width:136px;">UFSC40001</td>
			<td style="width:403px;">Concentrating unit</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Amicon Ultra-15 Centrifugal Filter Units</td>
			<td style="width:203px;">Merck KGaA</td>
			<td style="width:136px;">UFC901024</td>
			<td style="width:403px;">Concentrating centrifugal unit</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">&#196;KTA avant FPLC</td>
			<td>&#196;KTA</td>
			<td>--</td>
			<td>FPLC machine</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:396px;">Avanti J-26XP</td>
			<td style="width:203px;">Beckman Coulter&#160;</td>
			<td style="width:136px;">393124</td>
			<td>Centrifuge for bacterial culture</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:396px;">Bacterial Shaking Incubator</td>
			<td style="width:203px;">Infors HT</td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td>Shaking incubator for bacterial culture</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:396px;">FluorChem Q system</td>
			<td style="width:203px;">proteinsimple</td>
			<td style="width:136px;">--</td>
			<td>Imaging and analysis system for SDS-PAGE</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:396px;">Fluorescent miscroscope</td>
			<td style="width:203px;">Keyence</td>
			<td style="width:136px;">BZ-9000 (BIOREVO)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fractogel&#174; EMD SO3- (M)</td>
			<td style="width:203px;">Merck KGaA</td>
			<td style="width:136px;">116882</td>
			<td style="width:403px;">Ion Exchange Chromatography column material</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:396px;">Greiner CELLSTAR&#174;&#160;96 well plates</td>
			<td style="width:203px;">Sigma</td>
			<td>M5811-40EA</td>
			<td>96 well plates for cell culture (ALP Assay)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:396px;">Heraeus Multifuge X1R</td>
			<td style="width:203px;">ThermoScientific</td>
			<td style="width:136px;">--</td>
			<td>Centrifuge</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:396px;">M-20 Microplate Swinging Bucket Rotor</td>
			<td>ThermoScientific</td>
			<td style="width:136px;">75003624</td>
			<td>Rotor for Microcentrifuge for plate during ALP staining</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:396px;">Microcentrifuge - 5417R</td>
			<td style="width:203px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:136px;">--</td>
			<td>Centrifuge</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">OriginPro 9.1 G&#160;</td>
			<td style="width:203px;">OriginLab</td>
			<td style="width:136px;">--</td>
			<td>software for stastic analysis of ALP assay data</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Polysine Slides</td>
			<td>ThermoScientific</td>
			<td>10143265</td>
			<td>microscope slides</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:396px;">Rotor JA-10</td>
			<td style="width:203px;">Beckman Coulter&#160;</td>
			<td style="width:136px;">--</td>
			<td>rotor for Avanti J-26XP centrifuge</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:396px;">Rotor JLA 8.1</td>
			<td style="width:203px;">Beckman Coulter&#160;</td>
			<td style="width:136px;">--</td>
			<td>rotor for Avanti J-26XP centrifuge</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:396px;">Rotor JA 25.50</td>
			<td style="width:203px;">Beckman Coulter&#160;</td>
			<td style="width:136px;">--</td>
			<td>rotor for Avanti J-26XP centrifuge</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tecan infinite M200 multiplate reader</td>
			<td style="width:203px;">Tecan Deutschland GmbH</td>
			<td style="width:136px;">--</td>
			<td>Multiplate reader for ALP assay</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:396px;">Thermocycler - Labcycler Gradient</td>
			<td style="width:203px;">SensoQuest GmbH</td>
			<td style="width:136px;">--</td>
			<td>PCR</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:396px;">TxRed - microscope filter</td>
			<td style="width:203px;">Keyence</td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td>Filter for fluorescent microscope&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:396px;">Ultrafiltration regenerated cellulose discs 3 kDa</td>
			<td style="width:203px;">Merck KGaA</td>
			<td style="width:136px;">PLBC04310</td>
			<td style="width:403px;">used with amicon concentrating cell 400ml</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:396px;">Ultrafiltration regenerated cellulose discs 10 kDa</td>
			<td style="width:203px;">Merck KGaA</td>
			<td style="width:136px;">PLGC04310</td>
			<td style="width:403px;">used with amicon concentrating cell 400ml</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

site-directed immobilization of bone morphogenetic protein 2 to solid surfaces by click chemistry

गैर चिकित्सा लंबी अस्थि दोषों के उपचार के लिए अलग चिकित्सीय रणनीतियों की गहन जांच की गई है । वर्तमान में इस्तेमाल किया उपचार कई सीमाएं है कि osteogenic वृद्धि कारकों, जैसे अस्थि morphogenetic प्रोटीन (BMPs) के साथ संयोजन में करने के लिए उपयोग के लिए नेतृत्व किया है मौजूद । आमतौर पर इस्तेमाल किया अवशोषण या encapsulation तरीकों BMP2 के ऊपर अर्थ का उपसर्ग शारीरिक मात्रा की आवश्यकता, आम तौर पर एक तथाकथित प्रारंभिक फट रिलीज प्रभाव है कि कई गंभीर प्रतिकूल दुष्प्रभाव भड़काती में जिसके परिणामस्वरूप । इन समस्याओं को दूर करने के लिए एक संभव रणनीति covalently जोड़ी को प्रोटीन पाड़ करने के लिए किया जाएगा । इसके अलावा, युग्मन एक साइट विशेष तरीके से किया जाना चाहिए ताकि एक reproducible उत्पाद परिणाम की गारंटी । इसलिए, हमने एक BMP2 वैरिएंट बनाया, जिसमें एक कृत्रिम अमीनो अम्ल (propargyl-L-lysine) को BMP2 प्रोटीन के परिपक्व भाग में codon उपयोग विस्तार (BMP2-K3Plk) द्वारा पेश किया गया । BMP2-K3Plk तांबे catalyzed azide-alkyne cycloaddition (CuAAC) के माध्यम से कार्यात्मक मोती के लिए युग्मित किया गया था । युग्मित BMP2-K3Plk की जैविक गतिविधि इन विट्रो में सिद्ध हुई और BMP2-K3Plk-कार्यात्मक मोतियों की osteogenic गतिविधि कोशिका आधारित परख में सिद्ध हुई । C2C12 कोशिकाओं के साथ संपर्क में कार्यात्मक मोती, मनका के स्थानीय रूप से प्रतिबंधित निकटता में alkaline फॉस्फेट (ALP) अभिव्यक्ति प्रेरित करने में सक्षम थे । इस प्रकार, इस तकनीक द्वारा, कार्यात्मक पाड़ों का उत्पादन किया जा सकता है कि एक osteogenic वंश की ओर कोशिका भेदभाव को ट्रिगर कर सकते हैं । इसके अतिरिक्त, कम BMP2 खुराक साइट के नियंत्रित उन्मुखीकरण के कारण पर्याप्त हैं-युग्मित BMP2 निर्देशित. इस विधि के साथ, BMPs हमेशा उपयुक्त अभिविंयास में सेल की सतह पर उनके रिसेप्टर्स के संपर्क में हैं, जो मामला नहीं है अगर कारक गैर के माध्यम से युग्मित कर रहे है साइट-युग्मन तकनीक का निर्देशन किया । उत्पाद परिणाम अत्यधिक नियंत्रणीय है और, इस प्रकार, सजातीय गुणों के साथ सामग्री में परिणाम, महत्वपूर्ण आकार अस्थि दोषों की मरंमत के लिए अपनी प्रयोज्यता में सुधार ।

इस अनुच्छेद में, हम एक विधि का वर्णन करने के लिए covalently जोड़ी एक नया BMP2 संस्करण, BMP2-K3Plk, वाणिज्यिक उपलब्ध azide कार्यात्मक agarose मोतियों (चित्रा 1) के लिए । उत्पादित BMP2-K3Plk संस्करण की प्रतिक्रिया...

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Site-Directed Immobilization of Bone Morphogenetic Protein 2 to Solid Surfaces by Click Chemistry

अस्थि Morphogenetic प्रोटीन 2 (BMP2) के साथ मैगनीज भौतिक गैर संघ हड्डी भंग चंगा करने के लिए एक नई चिकित्सीय रणनीति के रूप में इस्तेमाल किया गया है । साइड कारक के एक बेकाबू रिलीज से उत्पंन प्रभाव को दूर करने के लिए, हम साइट के लिए एक नई रणनीति का प्रस्ताव-सीधे कारक मैटीरियल, इस प्रकार बेहतर osteogenic क्षमताओं के साथ सामग्री बनाने ।

साइट-अस्थि Morphogenetic प्रोटीन 2 के निर्देश के स्थिरीकरण के लिए क्लिक करें रसायन विज्ञान से ठोस सतहों

Different therapeutic strategies for the treatment of non-healing long bone defects have been intensively investigated. Currently used treatments present ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Micropatterned Surfaces to Study Hyaluronic Acid Interactions with Cancer Cells

Micropatterned सतहों Hyaluronic एसिड कैंसर कोशिकाओं के साथ संबंधों का अध्ययन करने के लिए

Cancer invasion and progression involves a motile cell phenotype, which is under complex regulation by growth factors/cytokines and extracellular matrix ...

Thermodynamics of Membrane Protein Folding Measured by Fluorescence Spectroscopy

झिल्ली प्रोटीन तह के ऊष्मप्रवैगिकी प्रतिदीप्ति स्पेक्ट्रोस्कोपी द्वारा मापा

Membrane protein folding is an emerging topic with both fundamental and health-related significance.  The abundance of membrane proteins in cells ...

Bacterial Immobilization for Imaging by Atomic Force Microscopy

परमाणु शक्ति माइक्रोस्कोपी इमेजिंग के लिए बैक्टीरियल स्थिरीकरण

AFM is a high-resolution (nm scale) imaging tool that mechanically probes a surface.  It has the ability to image cells and biomolecules, in a liquid ...

Fluorescence detection methods for microfluidic droplet platforms

Microfluidic छोटी बूंद प्लेटफार्मों के लिए प्रतिदीप्ति तरीकों का पता लगाने

The development of microfluidic platforms for performing chemistry and biology has in large part been driven by a range of potential benefits that ...

Monitoring Protein Adsorption with Solid-state Nanopores

ठोस राज्य nanopores के साथ निगरानी प्रोटीन सोखना

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Hydrophobic Salt-modified Nafion for Enzyme Immobilization and Stabilization

एनजाइम स्थिरीकरण और स्थिरीकरण के लिए hydrophobic Nafion नमक संशोधित

Over the last decade, there has been a wealth of application for immobilized and stabilized enzymes including biocatalysis, biosensors, and biofuel ...

Preparation of Thermoresponsive Nanostructured Surfaces for Tissue Engineering

ऊतक इंजीनियरिंग के लिए Thermoresponsive Nanostructured सतहों की तैयारी

Thermoresponsive poly(N-isopropylacrylamide) (PIPAAm)-immobilized surfaces for controlling cell adhesion and detachment were fabricated by the ...

Wet Chemistry and Peptide Immobilization on Polytetrafluoroethylene for Improved Cell-adhesion

बेहतर सेल-आसंजन के लिए गीले रसायन विज्ञान और पेप्टाइड स्थिरीकरण Polytetrafluoroethylene पर

Endowing materials surface with cell-adhesive properties is a common strategy in biomaterial research and tissue engineering. This is particularly ...

Engineering 'Golden' Fluorescence by Selective Pressure Incorporation of Non-canonical Amino Acids and Protein Analysis by Mass Spectrometry and Fluorescence

गैर-विहित अमीनो अम्ल और प्रोटीन विश्लेषण का जन स्पेक्ट्रोमेट्री और प्रतिदीप्ति द्वारा चयनात्मक दबाव निगमन द्वारा इंजीनियरिंग ' गोल्डन ' प्रतिदीप्ति

Fluorescent proteins are fundamental tools for the life sciences, in particular for fluorescence microscopy of living cells. While wild-type and ...

Making Conjugation-induced Fluorescent PEGylated Virus-like Particles by Dibromomaleimide-disulfide Chemistry

Dibromomaleimide-डाइसल्फ़ाइड रसायन विज्ञान द्वारा विकार-प्रेरित फ्लोरोसेंट PEGylated वायरस-कणों की तरह बनाना

The recent rise in virus-like particles (VLPs) in biomedical and materials research can be attributed to their ease of biosynthesis, discrete size, ...